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生长激素对SD大鼠子宫内膜容受性的影响
目的 观察生长激素对着床期SD大鼠子宫内膜整合素αvβ3(Itgαvβ3)及骨桥蛋白(OPN)表达的影响,以探讨改善子宫内膜容受性的方法.方法 随机将50只雌性SD大鼠平均分成两组,对照组为生理盐水(NS)组,实验组为生长激素(GH)组.取发现阴栓后第4天子宫内膜,用免疫组织化学技术检测子宫内膜Itgαvβ3及OPN的表达,同时首次通过SYBR Green嵌合荧光实时定量PCR技术检测子宫内膜上述两种因子mRNA的表达.结果 GH组子宫内膜Itgαvβ3及OPN的表达呈强阳性,对照组表达弱于GH组,两组差异有统计学意义(Itgαvβ3:77.33±4.23比92.56±16.80,0PN:71.75±8.77比80.73± 13.00,均P＜0.05).实时荧光定量PCR结果与免疫组织化学结果相符.结论 生长激素可以增强着床期子宫内膜Itgαvβ3及OPN的表达,可能可改善子宫内膜容受性,提高临床妊娠率.
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化疗对骨肉瘤整合素αv、PCNA表达的影响
目的探讨化疗对骨肉瘤整合素αv、增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.方法免疫组化法检测20例化疗前和31例化疗后骨肉瘤整合素αv、PCNA的表达情况.结果骨肉瘤细胞整合素αv、PCNA均呈阳性表达,化疗后整合素αv表达较化疗前下降(P＜0.05),PCNA表达没有变化(P＞0.05),两者表达互成正相关(P＜0.05).化疗后整合素αv表达与骨肉瘤的Enneking分期、侵袭、复发呈正相关(P＜0.05).结论整合素αv和PCNA可能成为骨肉瘤诊断有益的辅助指标.化疗可能通过下调骨肉瘤细胞整合素αv表达从而影响其生物学活性.化疗后整合素αv表达情况有望成为判断骨肉瘤恶性程度、侵袭、复发的指标,其与PCNA表达成正相关,二者可能在化疗后肿瘤细胞的增殖、修复中存在某种协同作用.
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整合素αv和β3反义基因治疗裸鼠种植性肝癌的实验研究
目的:探讨整合素αv、β3反义基因对肝细胞癌的治疗作用及对肿瘤血管生成及细胞凋亡的影响.方法:裸鼠皮下种植肝癌细胞-HepG2,建立肝癌模型,将αvβ3反义基因表达载体AlphaV/pcDNA3、Beta3/pcDNA3分别以αv、β3及αv、β3联合形式瘤内转染,同时设载体空壳组对照,观察肿瘤生长抑制情况并检测整合素αv、β3蛋白及CD31、VEGF的表达及细胞凋亡改变.结果:αvβ3联合组、αv、β3及空壳对照组肿瘤体积大小依次为(0.92±0.19)、(1.27±0.14)、(1.34±0.21)和(1.75±0.10)cm3,试验组与对照组比较及αvβ3组与αv组和β3组比较差异有统计学意义,P＜0.05;各实验组与对照组瘤质量比较差异有统计学意义,P＜0.05;αvβ3联合组、αv、β3组的抑瘤率分别为21.41%、6.87%和5.71%.实验组αv、β3蛋白表达与对照组比较被明显下调,P＜0.05;αvβ3组与αv组和β3组之间及实验组与对照组间微血管密度差异有统计学意义,P＜0.05;各实验组细胞凋亡指数显著高于对照组,P＜0.01;αvβ3组与αv组和β3组比较差异也有统计学意义,P＜0.05.结论:αv、β3反义基因可以通过抑制肿瘤血管生成及促进肿瘤细胞凋亡抑制肿瘤生长,联合应用αv和β3反义基因抑瘤效果更好.
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αV整合素在鼻咽癌放疗群集耐受中的作用
目的:探讨黏附分子αV整合素在鼻咽癌放疗群集耐受中的作用和机制.方法:采用liquid overlay技术进行CNE-2Z多细胞球(multicellular spheroids,MCSs)培养,同时进行单层细胞(monolayer cells,MCs)培养;免疫荧光流式细胞术、MTT比色法及血球计数器计数法比较2种培养条件下CNE-2Z细胞αV整合素表达情况、阻断αV整合素作用前后CNE-2Z细胞的放射敏感性变化;AnnexinV/PI双标流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法分别检测X射线处理、阻断αV整合素前后MCSs中SAPK/JNK信号通道的活性.结果:与MCs相比,MCSs的αV整合素表达增高[(11.64±0.35)%vs(30.15±0.64)%,t=4.947,P＜0.05],放射敏感性降低;阻断αV整合素作用后,MCSs放射敏感性增强、凋亡率上调[(14.16±0.24)%vs(33.04±1.12)%,t=2.783,P＜0.05];X射线照射后MCSs中SAPK/JNK信号通道表现动态磷酸化过程,其中2 h磷酸化水平高(0.690 6±0.023 58);阻断αV整合素作用X射线照射2 h后,MCSs中SAPK/JNK信号通道磷酸化水平明显低于未阻断组[(0.289 1±0.020 58)vs(0.663 1±0.051 85),t=6.662,P＜0.01].结论:黏附分子αV整合素在鼻咽癌放疗群集耐受中发挥重要作用,可能与其抑制凋亡相关;其发挥作用的机制可能涉及SAPK/JNK信号通道的激活.
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化疗对骨肉瘤αv和β3整合素表达影响的研究
目的:探讨化疗对骨肉瘤αv、β3整合素表达的影响.方法:免疫组化法检测20例化疗前和31例化疗后骨肉瘤αv、β3整合素的表达情况.结果:αv、β3整合素在骨肉瘤细胞呈强阳性表达,而正常骨细胞均呈阴性表达.P=0.000;化疗后两者表达明显下降,P=0.000.秩和检验表明,化疗后αv整合素与肿瘤Enneking分期(P=0.014)、侵袭(P=0.007)、复发(P=0.021)明显相关;β3整合素表达与肿瘤复发明显相关,P=0.003.多因素分析显示,化疗后αv整合素表达水平是影响骨肉瘤侵袭独立因素,化疗后β3整合素是影响骨肉瘤复发独立因素.结论:αv、β3整合素可能成为骨肉瘤诊断的辅助指标;化疗可能通过下调骨肉瘤细胞αv、β3整合素表达而改变其相应的生物学活性;αv、β3整合素可能分别是影响骨肉瘤侵袭、复发的独立因素;αv、β3整合素可能作为判断骨肉瘤化疗预后的指标及化疗药物作用的靶分子.
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靶向性自杀基因治疗系统联合放射线治疗前列腺癌移植瘤的实验研究
目的 初步判断针对整合素αv的靶向性自杀基因治疗系统(RGD-4C AAVP HSV-TK/GCV)是否能提高前列腺癌细胞株DU145移植瘤的放射效应.方法 建立移植性前列腺癌细胞株DU145的裸鼠肿瘤模型48只.当位于每只裸鼠右大腿的肿瘤直径达6.0 mm(5.8～6.3 mm)时,开始实验.实验共分成6组(每组8只),分别为对照组、单纯放射组、单纯RGD-4C AAVP HSV-TK/GCV组(RGD-4C组)、单纯AAVP HSV-TK/GCV组(无RGD-4C组)、RGD-4C AAVP HSV-TK/GCV联合放射组(XRT+RGD-4C组)和AAVP HSV-TK/GCV联合放射组(XRT+无RGD-4C组).观察指标为肿瘤生长延迟时间(肿瘤从6.0 mm生长至12.0 mm所需时间)和肿瘤治愈情况.结果 除5只在实验过程中死亡外,单纯放射组、RGD-4C组、无RGD-4C组各有1只和XRT+RGD-4C组3只肿瘤被治愈.统计分析余下37只肿瘤生长情况发现,RGD-4C组、无RGD-4C组和单纯放射组的绝对延迟时间分别为(24.4±9.0)、(22.6±11.3)和(28.3±5.5)d;当RGD-4C AAVP HSV-TK/GCV和AAVP HSV-TK/GCV分别联合放射时,其绝对延迟时间分别为(64.7±23.8)和(35.4±9.6)d,而标准化的延迟时间则分别为(40.3±23.8)和(12.8±9.6)d,它们对放射的增益因子分别为1.42和0.45.结论 针对整合素αv的靶向性自杀基因治疗系统RGD-4C AAVP HSV-TK/GCV能显著提高前列腺癌细胞株DU145移植瘤的放射效应,值得进一步研究.
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αv整合素沉默对结肠癌多细胞球药物敏感性的影响
目的 应用反转录病毒介导的shRNA沉默αv整合素,探讨后者在结肠癌多细胞球(MCSs)对奥沙利铂耐药中的作用.方法 构建针对αv整合素的反转录病毒质粒,脂质体转染质粒至结肠癌细胞株HT29.采用改良liquid overlay技术培养MCSs;Western blotting检测MCSs中αv整合素蛋白的表达;Cell Counting Kit-8检测梯度浓度(0、5、50、500、5 000μg/L)的奥沙利铂处理后MCSs的存活率.结果测序证实质粒构建成功.Western blotting结果 显示反转录病毒质粒介导的shRNA能有效、特异、稳定地沉默αv整合素基因.沉默αv整合素基因后,MCSs对奥沙利铂的药物敏感性显著增加.奥沙利铂50、500μg/L处理48h后,MCSs的存活率为0.86%±0.05%和0.43%±0.04%,转染反转录病毒的MCSs则下降为0.77%±0.06%和0.30%±0.04%(P<0.05).结论 反转录病毒介导的shRNA能有效沉默αv整合素基因.沉默αv整合素能有效提高结肠癌MCSs对化疗药物奥沙利铂的敏感性.
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前列腺素E2促进RL95-2细胞中整合素αv、β3的表达
目的:探讨外源性前列腺素E2(PGE2)通过影响整合素αv、β3对胚胎黏附率的改变及可能的机制.方法:使用实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)、蛋白质印迹(Western blotting)检测外源性给予PGE2后,RL95-2细胞的整合素αv、β3 mRNA及蛋白表达水平的变化.利用BeWo滋养层细胞和RL95-2上皮细胞株建立子宫内膜-滋养细胞相互作用的体外模型,观察BeWo细胞球在经过不同浓度PGE2预处理的RL95-2上皮细胞单层的黏附效率.结果:200 nmol/L PGE2预处理RL95-2细胞单层后促使整合素αv的mRNA及蛋白表达量比0 nmol/L组增加(均P＜0.05);100 nmol/L PGE2预处理RL95-2细胞单层后促使整合素β3的mRNA及蛋白表达量比0 nmol/组增加(均P＜0.05).200 nmol/LPGE2预处理后BeWo细胞球黏附到RL95-2细胞单层的效率明显提高.结论:适当浓度的PGE2可上调整合素αv、β3的表达,促进胚胎黏附效率.提供了在植入期间促进整合素αv、β3表达的进一步证据,这将有助于阐明通过改善子宫内膜容受性促进胚胎黏附的分子机制.
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反义寡核苷酸抑制整合素αv亚基表达对喉癌细胞侵袭和增殖的影响
目的 应用反义寡核苷酸体外细胞转染技术抑制喉癌细胞整合素αv (integrin αv,ITGAV) 表达,探讨ITGAV表达抑制对喉鳞癌Hep-2细胞侵袭和增殖能力的影响.方法 设计合成特异性靶向整合素αv的反义寡核苷酸序列(antisense oligonucleotides sequence,ASONs),用阳离子脂质体包被并转染喉鳞癌Hep-2细胞,免疫荧光技术检测转染前后整合素αv亚基的蛋白表达,MTT法检测转染后Hep-2细胞的增殖情况,Boyden小室法检测转染前后喉癌细胞的侵袭能力.结果 靶向整合素αv的ASONs对喉鳞癌细胞株的侵袭和增殖能力具有明显的抑制作用,并具有剂量-时间依从性.结论 靶向整合素αv的ASONs能够抑制喉鳞癌细胞株生长,并使其侵袭能力减弱,整合素αv可能成为喉鳞癌基因治疗的新靶点.
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整合素αv、α4在小鼠胚泡植入中的作用
目的:探讨整合素αv、α4在小鼠胚泡植入中的作用.方法:在体外培养的人蜕膜细胞中分别加入整合素αv、α4抗体,与小鼠胚泡共培养,观察整合素αv、α4抗体对小鼠胚泡在体外培养的人蜕膜细胞上的粘附和铺展的影响.结果:整合素αv抗体组,胚泡的粘附受到暂时抑制,48 h时大部分胚泡才粘附并开始铺展;整合素α4抗体组,胚泡的粘附率不受影响,但铺展率及滋养层细胞的扩展面积以剂量依赖的方式受到抑制.结论:整合素αv、α4能够调节胚泡在人蜕膜细胞上的植入,其中整合素αv可能与胚泡的粘附有关,而整合素α4可能与胚泡侵入和滋养层细胞的进一步生长相关.
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αv整联蛋白拮抗剂RGD肽对乳腺癌细胞增殖侵袭能力影响的研究
目的:研究αv整联蛋白拮抗剂RGD肽对乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7增殖侵袭能力的影响,探讨其在肿瘤靶向性治疗中的作用机制.方法:化学合成RGD肽,免疫细胞荧光技术检测RGD肽与MDA-MB-231、MCF-7细胞结合能力;MTT法检测不同浓度RGD肽对细胞增殖能力的影响;流式细胞学检测RGD肽处理对细胞周期和凋亡的影响;Boyden小室体外侵袭实验测定RGD肽处理后细胞迁移与侵袭能力的改变.结果:RGD肽与MDA-MB-231、MCF-7细胞均有特异性结合作用,15 pmol/L及更高浓度的RGD肽作用24 h后细胞增殖能力显著降低(P＜0.01),细胞凋亡明显增加,细胞阻滞于G0/G1期,且RGD肽对细胞体外侵袭能力有不同程度的抑制作用.结论:RGD肽作为αv整联蛋白的一种拮抗剂,不仅具有药物、基因治疗载体的导向运输功能,更具有肿瘤的直接杀伤效应,是一种理想的肿瘤靶向性治疗药物.
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骨桥蛋白和整合素αV表达与喉和下咽鳞状细胞癌侵袭转移的相关性
目的:探讨骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及其受体整合素αV(integrin αV,ITGA V)在喉和下咽鳞状细胞癌(larynge-al and hypopharyngeal squamous cell carcinoma,LHSCC)中的表达及其对肿瘤侵袭转移等生物学行为的影响.方法:设计并制作喉和下咽鳞状细胞癌组织芯片,应用免疫组织化学技术在组织芯片上检测OPN和ITGA V蛋白表达,应用专业级病理图像处理软件(Image Pro Plus 5.02,IPP 5.02)对免疫组织化学染色结果进行相对定量,分析OPN和ITGA V的表达量与喉和下咽鳞状细胞癌临床病理分期的相关性.结果:原发癌及转移癌中OPN和ITGA V的表达量均明显高于正常黏膜,差异有统计学意义(P(0.001);高分化组的OPN和ITGA V表达量明显低于中分化组和低分化组,差异均有统计学意义(P<0.001);有淋巴结转移组的OPN和ITGAV表达量明显高于无淋巴结转移组(P<0.001);2者的表达量与肿瘤的原发部位、浸润范围以及患者的年龄、性别等因素均无相关性.结论:OPN和ITGAV的表达与喉和下咽鳞状细胞癌的侵袭转移相关,OPN和ITGAV的过表达可能是促成喉癌和下咽癌侵袭转移的重要因素之一.
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整合素αV基因多态位点rs11902171与肺癌易感性的关联研究
目的：探究整合素αV ( integrin αV , ITGAV )基因3’ UT R 区的单核苷酸多态位点( single nucleotide polymorphism, SNP) rs11902171(G/C)与中国人群肺癌遗传易感性的关系。方法：采用病例-对照研究设计，随机选取481例肺癌患者和560例健康人群对照，收集外周血样本后抽提基因组DNA，用高分辨率熔解曲线(high resolution melting, HRM)方法对rs11902171(G/C)位点进行基因分型，采用SPSS 19.0软件对分型数据进行统计分析。结果：rs11902171位点分型后得到GG和GC两种基因型。在对照组中的分布频率分别为GG基因型89.8%、GC基因型10.2%，在病例组中的分布频率分别为GG基因型80.2%、GC基因型19.8%，两组间的基因型分布频率差异有统计学意义(P＜0.001)，且GC基因型相对于GG基因型能显著增加中国人群的肺癌遗传易感性(OR=2.18，95%CI：1.53～3.12)。根据吸烟及饮酒等因素分层分析显示，GC基因型除了饮酒组外，在其他组(＞或≤60岁年龄组；男性或女性组；非饮酒组；吸烟或非吸烟组)均能显著增加肺癌易感性(均P＜0.05)。结论：ITGAV基因的SNP位点rs11902171(G/C)与中国人群肺癌遗传易感性具有显著的相关性。
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整合素αV、β3反义基因抑制裸鼠种植性肝癌血管生成的实验研究
目的:探讨整合素α V、β 3反义基因对种植性肝癌血管生成的阻抑作用.方法:建立裸鼠肝癌模型,将反义基因表达载体α V/pcDNA3、β 3/pcDNA3分别以α V、β 3及α V β3联合形式瘤内转染,同时设载体空壳组对照,检测整合素α V、β 3蛋白及肿瘤组织微血管密度(MVD)的改变.结果:(1)实验组较对照组α V、β 3蛋白表达显著降低(P＜0.05);实验组之间差异无统计学意义(P＞0.05).(2)对照组、α V组、β3组、αVβ 3组MVD分别为(17.53±1.88)、(16.06±1.92)、(15.83±2.00)、(14.86±1.69)条,αVβ 3组与α V组、β 3组及实验组与对照组之间MVD差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:整合素α V、β 3反义基因可明显下调整合素α V、β 3蛋白表达,抑制肿瘤血管生成,联合应用效果更加显著.
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胰岛素样生长因子1对大鼠正畸牙牙周膜细胞整合素αV、β3表达的影响
目的 研究重组人胰岛素样生长因子1(recombinant human insulin-like growth factor,rhIGF-1)对大鼠正畸牙牙周膜细胞整合素αV、β3表达的影响,探讨胰岛素样生长因子1在正畸牙移动过程中的作用机制.方法 将30只雄性SD大鼠按rhIGF-1注射浓度不同分为6组:对照组(0 μg/mL)、1μg/mL、2μg/nL、4μg/mL、8 μg/mL、16 μg/mL组,每组5只,隔日局部注射不同浓度的rhIGF-1 0.1 mL于正畸牙颊侧牙龈黏膜下,第10天处死大鼠,用原位杂交方法检测整合素αV、β3在牙周组织中的表达变化.结果 压力侧对照组整合素αV、β3表达较低；2、4 μg/mL组整合素αV、β3表达高于对照组(P＜0.01),8、16 μg/mL组整合素αV、β3表达逐渐减弱,但仍高于对照组(P＜0.05).8 μg/mL组张力侧牙周膜细胞整合素αV、β3表达达到峰值,高于对照组(P＜0.01),16 μg/mL组表达略有下降,但仍高于对照组(P＜0.01).结论 外源性rhIGF-1通过增强牙周膜细胞整合素αV、β3的表达,促进细胞功能,加速正畸牙周组织的改建.
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中和血小板源性生长因子对A549人肺癌细胞生长及迁移的影响
目的 探讨中和血小板源性生长因子(platelet-derived growth factors,PDGFs)对A549人肺癌细胞生长和迁移的影响.方法 PDGF中和性抗体作用A549细胞后,MTT法及乳酸脱氢酶释放试验检测细胞增殖;丹单酰磺尸胺及吖啶橙染色检测细胞自噬;DAPI染色及caspase 3活性试验检测细胞凋亡;划痕试验及Transwell试验分析细胞迁移;免疫印迹及酶联免疫吸附试验检测整合素αv和基质金属蛋白酶9的表达.结果 PDGFs抗体明显抑制A549细胞体外增殖,诱导细胞发生自噬和凋亡,但同时增强肿瘤细胞迁移能力及整合素αv和MMP9的表达水平,整合素抑制剂西仑吉肽可部分逆转该现象.结论 中和PDGFs可抑制A549肿瘤细胞体外生长但促进其迁移.
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骨桥蛋白和整合素αv表达与鼻咽癌侵袭转移的相关性
目的 探讨骨桥蛋白(OPN)及其受体整合素αv(integrin αv,ITGA V)在鼻咽癌组织中的表达及其与鼻咽癌侵袭、转移的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测88例鼻咽癌组织、18例鼻咽黏膜慢性炎症组织中OPN及其受体整合素αv的表达,从临床分期、淋巴结转移和远处转移等方面分别进行对比分析. 结果88例鼻咽癌组织中OPN与ITGA V蛋白的阳性表达率分别为53.4%(47/88)、59.1%(52/88),明显高于鼻咽黏膜慢性炎症组织中的表达(P＜0.01).OPN与ITGA V的表达与肿瘤临床分期、淋巴结转移和远处转移有关(P＜0.05),与患者性别无关(P＞0.05),且二者表达呈正相关(r=0.335,P＜0.01). 结论OPN和ITGA V基因蛋白在鼻咽癌的侵袭转移过程中可能起着协同、调控作用,有可能成为反映鼻咽癌生物学特性及评价预后的重要分子生物学指标.
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不同条件下小鼠围着床期子宫内膜整合素αv和Ley寡糖的表达
目的:探讨促排卵药、胚胎本身及孕后激素等条件对小鼠子宫内膜整合素αv和Le y寡糖的表达及对着床窗开放的影响.方法:将成年雌鼠分为对照和实验两大组.对照组为自然受孕;实验组为用促排卵药后受孕,其中一部分为假孕,另一部分为事先行一侧输卵管结扎.各组分别于孕2-7 d取子宫标本2份,一份石蜡包埋行HE染色和免疫组化染色测定Ley寡糖,另一份于-80℃保存,冰冻切片行免疫组化染色测定整合素αv结果:①对照组于孕7 d,大部分小鼠子宫外观即见明显胚胎着床,显微镜下从孕5 d起出现子宫内膜间质的蜕膜反应,但实验组无1例有此变化.②整合素αv在小鼠子宫内膜腺上皮细胞胞浆内表达.对照组的表达于孕4 d达高峰,而各实验组的表达高峰均推迟1-2 d,且表达水平较对照组明显减弱(P＜0.05).结扎侧和未结扎侧子宫内膜整合素αv的表达高峰无明显差异.③Ley寡糖在小鼠着床期表达于子宫内膜腔上皮和腺上皮表面,其表达两组间无明显差异,不同妊娠天数之间的表达亦无明显差异.在对照组,于孕4 d开始Ley寡糖在子宫内膜间质有表达,孕6 d达高峰,而实验组未见一定的规律.结论:①小鼠子宫内膜腺上皮细胞胞浆内整合素αv的表达与子宫内膜着床窗的开放一致.②促排卵药能抑制小鼠子宫内膜着床窗期整合素αv的表达,延迟着床窗的开放;孕后激素对着床窗期整合素αv表达的影响比胚胎本身更重要.③Ley寡糖在小鼠子宫内膜腔上皮和腺上皮细胞表面的表达是小鼠胚泡着床所必需的,但其在子宫内膜间质的表达是否与内膜限制胚胎滋养层的过度生长有关,有待进一步研究证实.
