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白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株4龄幼虫cDNA文库的构建
目的:构建白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株4龄幼虫cDNA文库.方法:抽提、纯化白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株4龄幼虫总RNA,进行反转录合成第1链cDNA;用C1ontech公司SMARTTM cDNA文库构建试剂盒进行长距离PCR,合成全长双链cDNA;PCR产物经蛋白酶K消化、提纯后,进行Sfi I酶切;用Chroma Spin-400柱将酶切产物进行分级分离,然后经1.1%琼脂糖凝胶电泳鉴定,回收400bp以上的组分,并与λTriplEx2载体连接;连接产物经体外蛋白包装,产生未扩增文库;检测未扩增文库滴度和重组效率后,进行文库的扩增,并测定扩增文库的滴度;随机挑取9个噬菌体,用载体克隆位点两端的引物进行PCR扩增,以检测所构建的cDNA文库的质量.结果:经检测,未扩增文库滴度达2.0×107pfu/mL,重组效率在10-4稀释度时每块平板约210～255个噬菌斑中均未发现任何蓝色噬斑,扩增文库滴度达1.75×109pfu/mL;用载体克隆位点两端的引物进行PCR鉴定,结果显示:所选9个噬菌体中均含有重组的cDNA,并且均在500bp以上,其中1kb以上的有2个、700bp的有5个、500bp的有2个.结论:已成功地获得一高质量的白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株4龄幼虫cDNA文库.
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中国尖音库蚊复合组蚊虫的抗性动态和遗传多样性研究
本文通过采用生物测定、蛋白质电泳和等位酶分析等方法对4个地理种群尖音库蚊复合组蚊虫(Culex pipiens comples)的抗性水平、群体中酯酶基因表型分布和种群遗传多样性进行了研究.抗性检测结果表明,4个库蚊种群对敌敌畏、对硫磷、氯菊酯和溴氰菊酯的抗性较高,对残杀威、巴沙和胺菊酯的抗性较低.4个种群抗性大小是:山东淄川>湖北沙市>广东茂名>北京沙河,淄川种群蚊虫对敌敌畏抗性为66.7倍.酯酶电泳结果中,沙市和茂名2个库蚊种群酯酶表型多态性高,淄川库蚊种群多态性低,过量表达的B1比率占100%.种群遗传多样性研究表明,每位点平均等位基因数(A)为1.92,平均多态位点百分率(P)为52.78%,平均预期杂合度(He)为0.130,群体间遗传分化系数(Fst)值为0.368,平均基因流Nm=1.52,说明4个种群有较丰富的遗传多样性,群体之间存在相当多的遗传多样性,种群间的基因交流较低,遗传分化较大,表明与地理位置存在一定对应关系.
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国内微生物灭蚊剂的应用研究
自50年代 DDT、马拉硫磷和DDV等化学杀虫剂引入我国,在广大疟疾和丝虫病流行区,为蚊媒的控制提供了相当简单和廉价的方法.然而,由于媒介蚊虫对化学杀虫剂抗性的出现和扩散、化学杀虫剂污染环境和对非靶生物的毒害以及开发新化学杀虫剂的高投入,使化学杀虫剂的应用受到了限制.70年代末,生物防治开始引起科学家的关注.在中国,蚊媒的微生物控制尤其受到重视.其中对苏云金杆菌以色列变种(Bti)和球形芽孢杆菌(Bs)的研究深入,并投入到大面积现场应用中.Bti-1897和Bs-2362分别于1979年和1985年从美国引进。浇
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媒介按蚊抗疟原虫感染的免疫相关基因研究进展
疟疾仍然是严重危害人类健康的传染性疾病之一,每年有300～500万人感染疟疾并导致100多万人死亡.按蚊是疟疾的传播媒介,由于按蚊对杀虫剂抗性的产生和扩散,目前尚无有效的防制措施.随着分子生物学技术的发展和疟疾防治的需要,世界卫生组织于20世纪 90 年代初提出一项基因操纵控制蚊媒新策略,即通过转基因手段,把蚊虫抵抗疟原虫感染的相关基因转入蚊基因组, 使其稳定遗传并在自然种群中扩散, 以期减少甚至阻断疟疾的传播.研究疟原虫感染引起蚊媒体内的生物学改变,特别是对按蚊中抑制疟原虫感染免疫相关基因的研究, 是实现这一策略的重要研究课题.目前的研究热点主要集中于三类基因:按蚊的模式识别受体、抗疟原虫感染的基因和效应调节基因.本文就这一方面的研究进展作一综述.
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北京市朝阳区德国小蠊对杀虫剂抗性分布情况调查
目的 了解朝阳区不同区域德国小蠊对杀虫剂的抗性水平及分布情况.方法 按行政区划选定8个取样点,采集每个取样点的德国小蠊自然种群,带回实验室繁育,用药膜接触法测定其对7种杀虫剂的抗性系数.比较德国小蠊对7种杀虫剂的抗性程度差别;比较8个取样点德国小蠊种群的抗性差别,并以类平均法做聚类分析.结果 德国小蠊对7种杀虫剂的抗性程度差异具有统计学意义(X~2=26.880,P=0.000),对有机磷类杀虫剂的抗性高(X~2=20.494,P=0.000);8个取样点德国小蠊种群对杀虫剂抗性水平差异亦有统计学意义(X~2=29.143,P=0.000),根据聚类分析结果和专业知识可将其划分为4类.结论 朝阳区德国小蠊对杀虫剂存在地理位置差别,抗性监测和指导用药时"以点代面"做法不可取.
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中华预防医学会媒介生物学及控制分会蝇类防制学组扩大会议纪要
2001年9月23～25日,由天津市卫生防病中心承办的2001年中华预防医学会媒介生物学及控制分会蝇类防治学组扩大会议在天津市南市旅馆街隆重举行.与会人员来自全国12个省、22个市,70余名活跃在我国卫生防疫、卫生检疫、公共卫生监督及爱卫系统的专家和技术人员,其中包括3个教学科研单位,21个防疫站或疾病控制中心,5个爱卫办及卫生局,10余个知名消杀专业厂家及公司.会议由蝇类防治学组副组长高兰英所长主持,组长安志儒主任医师致开幕词.天津市卫生局、天津市卫生防病中心、媒介生物学及控制分会领导亲自到会指导并讲话.会议结束时,由蝇类防治学组副组长孙晨熹主任小结.本次学术会议交流内容涉及多学科多领域,有基础学科的蝇类生态学、生理学、分子毒理学;有应用领域的防制技术开发、调研、新药应用效果探查、国内外先进杀虫药械展示.郭念恭教授首先对蝇类生态学的重要地位做了阐述,指出分类学在生态学中占有重要地位;广东江门农药厂的李永才厂长对卫生用药环境保护做了精彩的发言;王美秀教授、高兰英所长、辛宏业主任分别介绍了蝇类防治进展、三氟氯氰菊酯的特性、利安乳油的安全杀虫效果.孙晨熹主任将一种新型昆虫生长调节剂--灭蝇胺对阻止家蝇繁殖的效果报告给大家;冷培恩副主任报告的对餐饮行业防蝇设施的大量实地调查,对基层工作具有很好的指导意义;天津市卫生防病中心的曹晓梅做了家蝇对拟除虫菊酯类杀虫剂抗性的分子毒理机制的报告--para基因上的选择性剪接和位点突变,涉及了拟除虫菊酯类杀虫剂抗性的本质.另外利高曼(广州)有限公司、新加坡傧杰公司、德国拜耳公司、天庆化工有限公司对各自的公司形象及品牌宣传令人耳目一新.会后代表们做了充分的交流,所有这些研究成果、实践总结、学术讨论不仅使与会代表受益匪浅,更让大家预见到卫生杀虫领域生机勃勃的发展前景.会议代表特别感谢天津市卫生局、天津市卫生防病中心、天津市爱卫办以及利高曼(广州)有限公司、德国拜耳公司、广东江门农药厂、天津市天庆化工有限公司、广州开达药械有限公司、天津麦特化学公司、上海特菱卫生保健品有限公司的支持,愿我们携手来为除害灭病事业做出新的贡献.
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大连市家蝇对常用杀虫剂抗性的实验研究
化学防制方法具有快速、方便等特点,在家蝇的防制实践中是受欢迎的手段和措施.但随之而来的家蝇抗性问题也日益突出,使杀虫剂的使用和效果受到一定影响.为此,作者着重研究了大连市家蝇对3种常用杀虫剂的抗性状况,从而为如何克服抗性、延长现有药剂的使用寿命和降低环境危害提供科学依据.1 材料与方法1.1 试虫采集野栖家蝇,于饲养室内繁殖1代,取羽化第4 d雌虫供试,敏感品系家蝇为本站昆虫饲养室饲养.1.2 药品 2.5%溴氰菊酯系法国罗素*优克福公司生产,5%氯氰菊酯系英国壳牌公司生产,均由大连鼠药厂分装;80%敌敌畏乳油系天津农药股份有限公司出品.1.3 试验方法采用常规点滴法.每种药设7个剂量组,用丙酮做为稀释液,用微量进样器将药液点滴于家蝇的中胸背板上,1 μl/虫.设丙酮溶液为对照组.将受药后的家蝇移入清洁容器饲养,24 h后观察记录死亡数,每组试验重复3次.对照组死亡率低于20%为有效,死亡率大于5%时应用Abbott公式校正.采用简化概率单位法计算LD50及95%可信限和回归方程.
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蚊虫抗药性机制研究进展
所谓抗药性，是指昆虫具有耐受杀死正常种群大部分个体的药量的能力在群体中发展起来的 现象〔1〕。其特点是受遗传物质所控制，可以遗传。 抗药性的产生是连年大量使用杀虫剂，长期选择的结果。蚊虫对不同的杀虫剂产生抗性的机 制不同，由单因子的作用，也有多因子的联合作用，一般可分为生化抗性、生理抗性和行为 抗性3种类型。生理生化机理的改变是产生抗性的直接原因，各种抗性基因控制生理生化机 理的改变。1 生化抗性 生化抗性主要是由于解毒作用增强、代谢加速而引起的，又称代谢抗性。代谢抗性涉及的 解毒酶主要有酯酶、多功能氧化酶和谷胱甘肽-S-转移酶等。1.1 酯酶 蚊虫体内酯酶是对杀虫剂解毒的重要水 解酶之一，它普遍存在于蚊虫体内各种组织中，参与酯类杀虫剂的解毒作用。酯酶在对有机 磷的抗性中起着极为重要的作用，在对氨基甲酸酯和拟除虫菊酯的抗性中也起一定作用。 酯酶在抗性机理中具有两重作用，即通过结合和/或水解杀虫剂发挥解毒作用。对二甲基磷 酸酯（如马拉硫磷）和杀灭菊酯来讲，水解是主要的，结合是次要的；对其他有机磷的氧类 似物和氨基甲酸酯来讲，作为一种结合蛋白，结合是主要的，水解是次要的。水解作用的结 果产生无毒的离子，结合作用的结果酯酶被杀虫剂磷酰化或氨基甲酰化，使杀虫剂不能到达 靶标。而两者均能起到保护体内靶标--乙酰胆碱酯酶免受抑制。羧酸酯酶对有机磷的亲和 力远远大于乙酰胆碱酯酶，有机磷对羧酸酯酶抑制程度比对乙酰胆碱酯酶强烈，羧酸酯酶虽 被抑制，但蚊虫却没有中毒症状，而乙酰胆碱酯酶的抑制是致命的。 国内外研究证明了蚊虫体内酯酶活力与对杀虫剂抗性的关系。蚊虫对有机磷的抗性增加往往 伴随着羧酸酯酶活力增加。如淡色库蚊对马拉硫磷和敌百虫的抗性程度与羧酸酯酶活力呈 平行关系〔2〕；环跗库蚊、斯氏按蚊对马拉硫磷的抗性与其羧酸酯酶活力增加有关 〔3〕。酯酶活力增加在淡色库蚊对氨基甲酸酯和拟除虫菊酯的抗性中 起一定的作
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蚊虫杀虫剂抗性检测方法概述
及时、准确地掌握蚊虫的抗药性信息对于了解蚊虫抗性现况、研究抗性机制、成功治理抗药性、延长新药使用寿命、改善环境等都具有重要意义.目前已有多种方法从不同水平检测蚊虫的抗药性,现对这些方法做一介绍.
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蚊虫杀虫药剂的抗性及防治策略
蚊虫在长期的化学杀虫剂选择压力下,已从多个生理途径进化出抵抗这种选择压的能力,给我们有效控制一些蚊媒传播的疾病带来困难.该文对蚊虫抗药性的主要分子机制和抗性基因的适合度代价进行剖析,并评述目前国内外防治蚊虫传播疾病的各种策略,以期为我国媒介蚊虫的防治工作提供借鉴.
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昌平区养殖业家蝇对2种杀虫剂抗性测定结果
多年来昌平区广泛使用各种杀虫剂对家蝇(Musca domestica)进行防制,致使其对杀虫剂产生不同程度的抗药性,导致防制效果逐年下降.为此我们开展了家蝇抗药性测定,为科学合理地使用杀虫药剂提供依据.
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大连市家蝇对常用杀虫剂抗性及趋势研究
目前,化学防治已成为防制蝇类等害虫的一种重要和常用手段之一,由于长期、广泛使用化学杀虫剂,致使蝇类的抗性问题日益突出.为有效利用现有杀虫剂资源,延缓抗性产生,本研究将采自大连市的家蝇对3种常用杀虫剂的抗性进行了测定,为延长现有药剂的使用寿命和降低环境危害提供科学依据.
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丽水市家蝇对5种卫生杀虫剂抗性现状调查
80年代初,根据浙江省家蝇对杀虫剂抗性现状,果断提出停用(除敌敌畏外)有机磷、有机氯类杀虫剂灭蝇.近10年来,在开展灭蝇达标、创建卫生城市等爱国卫生活动中,除了清除蝇类滋生地(物)等综合防制措施外,使用大量以溴氰菊酯、敌敌畏、二氯苯醚菊酯等为主复配杀虫剂,作环境滞留喷洒剂和室内空间喷雾剂灭蝇.普遍反映,目前配制浓度越来越高,且杀灭效果越来越差,认为家蝇对常用的卫生杀虫剂已产生一定的抗性,但缺乏科学依据.为了掌握家蝇对常用卫生杀虫剂的抗性发展趋势,确保杀灭效果,杜绝浪费和保障人体健康,选择丽水市城关镇家蝇对5种杀虫剂的抗性作现场试验.
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淡色库蚊幼虫对杀虫剂抗性及其防制对策
随着杀虫剂的长期和大量使用,特别是防治农业害虫的广泛应用.蚊虫的抗药性(insecticide resistance)愈来愈严重,杀虫剂对污染环境及其对自然生态平衡的影响,也有增无减,它们都成为现代蚊虫防治中的突出问题.尽管化学灭蚊不仅在目前,甚至在近一二十年内,仍然是防治蚊虫的重要手段,就化学防治本身而论,需要寻找克服抗药性和减少污染环境的新药越来越引起人们的高度重视[2],为掌握我市蚊虫抗性现状;我们于2002年6～9月采集本市各区、县不同地区蚊类幼虫进行各类不同机制杀虫剂的药效测定,其目的是加强杀虫剂的合理使用,为政府宏观决策提供科学依据.
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淡色库蚊对溴氰菊酯抗药性和敏感性相关基因克隆和序列分析
目的获取淡色库蚊对溴氰菊酯抗药性和敏感性相关基因. 方法通过正、反向抑制性差减杂交获取对溴氰菊酯抗药性和敏感性淡色库蚊的差异表达基因,并以基因芯片和逆Northern对所获基因进行杂交鉴定. 结果正、反向抑制性差减杂交各获得523和286个克隆,经芯片鉴定后在抗性品系高表达的基因分别有 155个(2～3倍)和42个(3倍以上),在敏感品系中高表达的基因分别有15个(2～3倍)和9个(3倍以上).对3 倍以上差异表达和特异表达基因进行单向测序,根据高同源性比对结果,线粒体rRNA基因、60S核糖体蛋白基因、40S核糖体蛋白S4基因、胰蛋白酶前体基因、糜蛋白酶A前体基因、视蛋白基因等在抗性品系中高表达;而40S核糖体蛋白S29基因和肌球蛋白调控轻链2在敏感品系中高表达;另外,1,4-α-葡聚糖分支酶和核糖体蛋白46基因在抗性品系中特异表达. 结论所获得的13个差异表达基因和2个特异表达基因与淡色库蚊对溴氰菊酯的抗药性和敏感性相关.
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淡色库蚊细胞色素P450抗性相关基因克隆与初步鉴定
[目的]探讨淡色库蚊细胞色素P450与溴氰菊酯抗药性的关系.[方法]采用一对昆虫细胞色素P450简并引物,以反转录-聚合酶链反应从淡色库蚊扩增特异片段,T/A直接克隆法筛选阳性克隆,对新序列进行cDNA芯片和逆Northern分析.[结果]从淡色库蚊对溴氰菊酯敏感品系和抗性品系获得112个阳性克隆,其中24个阳性克隆测序后显示为细胞色素P450新序列,由GenBank登录上网;经国际细胞色素P450命名委员会鉴定分别属CYP4家族CYP4C、CYP4D、CYP4H和CYP4J等4个亚家族;24个CYP4 cDNA片段中,来自敏感品系的2个片段(NYDS3和NYDS5)和来自抗性品系的4个片段(NYDR6、NYDR9、NYDR15和NYDR17)在两品系间存在差别,cDNA芯片信号亮度值均是抗性品系大于敏感品系,倍数在3.1～9.7范围内;NYDR17仅与抗性探针杂交;逆Northern再鉴定,获得了与cDNA芯片一致的结果.[结论]淡色库蚊CYP4与溴氰菊酯抗性相关;在淡色库蚊溴氰菊酯抗性机理中,可能存在P450基因点突变而导致的特异表达.
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杀虫剂的科学复配与综合评价
1卫生杀虫剂品种与抗性问题蚊蝇和蟑螂等卫生害虫抗药性不仅普遍而且日趋严重.往往是活性越高,抗性发展越快.如我国自1980年用溴氰菊酯灭蝇,1982年家蝇LD50范围为0.000 07～0.000 7μg/只,之后3年抗性种群LD50值分别增加46.7,504,2 265倍[1].并与其它菊酯类卫生杀虫剂存在的交互抗性,并且保持同步抗性水平.菊酯类卫生杀虫剂抗性的特点是程度高(常见卫生害虫处于高抗性以上水平)、范围广(昆虫、药剂)、速度快.
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嗜人按蚊溴氰菊酯抗性分子机理研究Ⅱ嗜人按蚊CYP4基因cDNA片段的克隆与序列分析
目的获得嗜人按蚊CYP4基因家族成员的cDNA片段.方法采用简并引物对嗜人按蚊溴氰菊酯敏感和抗性品系总RNA进行RT-PCR扩增,得到的特异性片段采用T/A克隆法克隆并进行序列测定和分析.结果敏感品系和抗性品系嗜人按蚊均能扩增得到450 bp和530 bp左右的2个片段.经克隆测序后,得到6个基因序列,其中4个来自敏感品系,2个来自抗性品系.其中1个来自敏感品系的序列和1个来自抗性品系的序列完全相同.所得的5个不同基因序列已被GenBank收录(登录号:AY208141～AY208145),并递交国际细胞色素P450命名委员会,经鉴定确认均为细胞色素P450超家族中的CYP4家族成员,其中4个为新基因,另1个为等位基因,分别属于CYP4家族的CYP4C、CYP4H和CYP4J 3个亚家族.结论得到的5个cDNA新序列为CYP4家族新成员的基因片段.
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蚊虫的杀虫剂代谢抗性分子基础
由于化学杀虫剂广泛应用和剂量增加,必然导致昆虫抗药性上升,增加对环境的破坏和人类健康威胁,成为控制医学和农业重要节肢动物的主要障碍之一.抗性表型的昆虫是能够抵抗一个剂量杀虫剂的昆虫,在正常情况下,这个剂量的杀虫剂已将昆虫杀死,但抗性表型的昆虫能生存下来.然而,抗性表型应答的分子机制仍不清楚.大多数昆虫的抗性机制被分为二个主要方面,一方面是靶位点即通过改变昆虫神经系统对杀虫剂靶位点(钠通道、乙酰胆碱酯酶、GABA受体基因)敏感性,另一方面是代谢变化即通过杀虫到达靶位点之前,更改解毒蛋白水平或活性),介导昆虫对杀虫剂抗性,单独或二组结合机制使蚊虫产生抗性.除此外,许多杀虫剂如DDT或苄氯菊酯也影响昆虫行为改变,如增加蚊虫角皮厚度或改变角皮,减少对杀虫剂渗透性.代谢通道在杀虫剂抗性方面起着重要角色,代谢抗性机制涉及酶类主要为羧酸酯酶,谷胱甘肽-S-转移酶,细胞色素p450等.现就蚊虫的杀虫剂代谢抗性分子基础综述如下.
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嘉兴市蚊蝇蟑螂对常用卫生杀虫剂抗性监测结果
为掌握嘉兴市卫生害虫对几种常用卫生杀虫剂的抗性程度,以便筛选敏感药物,指导合理选择药物品种、剂型、使用浓度,1996～1998年选择有机磷类、有机氯类、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类的几种代表药物对蚊、蝇、蟑螂进行抗性监测.
