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藤茶总黄酮和二氢杨梅素含药血清对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响
目的:探讨藤茶总黄酮和二氢杨梅素含药血清对人肝癌细胞株HepG2增殖的抑制及凋亡的影响.方法:采用血清药理学方法制备藤茶总黄酮、二氢杨梅素、环磷酰胺(CTX)含药血清以及对照血清,作用于肝癌HepG2细胞,MTT法检测各种血清对HepG2细胞增殖的影响;倒置相差显微镜观察各种含药血清作用后肝癌HepG2细胞的形态学变化;AnnexinV/7AAD双标记法流式细胞术检测早期细胞凋亡的情况.结果:MTT法和显微镜观察显示藤茶总黄酮和二氢杨梅素20%含药血清能不同程度抑制HepG2细胞增殖,可致细胞形态学改变;AnnexinV/7AAD双标记法检测显示藤茶总黄酮20%含药血清可促肝癌HepG2细胞早期凋亡,但二氢杨梅素20%含药血清对肝癌HepG2细胞早期凋亡没有影响.结论:藤茶总黄酮能抑制肝癌HepG2细胞的增殖,诱导其产生早期凋亡.
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HCV5'NCR片段调控荧光素酶表达质粒的构建及其在HepG2细胞中的表达
目的 构建HCV 5'NCR片段调控荧光素酶表达质粒,并在HepG2细胞中表达.方法 通过PCR扩增,获得中国人HCV基因组5'非编码区(noncoding region, NCR)完整序列与C区部分序列的目的基因片段(5'NCR-C片段).将此片段插入pGL3荧光素酶报告载体的荧光素酶基因起始密码上游,构建受5'NCR 片段调控的荧光素酶表达质粒.应用脂质体介导基因转染技术将8个质粒转染HepG2肝癌细胞.结果 经鉴定获得8个均为正向插入的阳性克隆.序列分析结果表明插入片段与中国人HCV(Ⅱ型)序列基本一致,其荧光素酶基因起始密码子已去除且未改变编码框.有一个质粒能够表达荧光素酶活性,其绝对值达1141.9±151.1 mV,是pGL3报告载体荧光素酶活性的20%.结论 当质粒1μg、Lipofectin 6μl,Lipofectin-质粒复合物与细胞孵育4小时时可获得佳转染效果.
关键词： 肝炎病毒 丙型 荧光素酶 pHCV-luc09 HepG2肝癌细胞 -
s腺苷蛋氨基酸通过抑制P13K/AKT/mTOR通路调控HepG2肝癌细胞自噬作用研究
目的 探讨s腺苷蛋氨基酸通过抑制P13K/AKT/mTOR通路调控HepG2肝癌细胞自噬作用.方法 选取上海生命科学研究院细胞资源中心的HepG2肝癌细胞作为研究标本,随机分为阴性对照组、阳性对照组和观察组,并比较三组间HepG2肝癌细胞的增殖、凋亡情况以及HepG2肝癌细胞自噬相关标记物记LC3B和Bclin1表达水平.结果 s腺苷蛋氨基酸作用24 h、48 h和72 h时抑制Hep G2细胞增殖的IC50分别为24.34μmol/L、10.26μmol/L、6.24μmol/L,与阴性对照组和阳性对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);10μmol/L、30μmol/L和100μmol/L不同浓度s腺苷蛋氨基酸作用于HepG2细胞48 h后出现的凋亡率分别为(26.28±1.34)%、(22.34±1.82)%和(11.18±0.60)%,而阴性对照组其HepG2细胞48 h后的凋亡率为(6.28±0.02)%,即观察组凋亡率随着药物浓度的增高而降低,且与阴性对照组比较,观察组各浓度s腺苷蛋氨基酸作用于HepG2细胞48 h后出现的凋亡率均明显较高,即s腺苷蛋氨基酸具有诱导HepG2细胞凋亡的作用(P<0.05);经流式细胞仪结果显示,不同浓度s腺苷蛋氨基酸作用于HepG2细胞48 h后其LC3B和Bclin1水平均呈逐渐降低(P<0.05).结论 s 腺苷蛋氨基酸可通过抑制 P13K/AKT/mTOR通路调控进一步增强 HepG2 肝癌细胞自噬作用.
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HepG2肝癌细胞行为的PCC实时检测研究
利用压电细胞芯片检测体系对HepG2肝癌细胞的行为进行24h实时监测,得出典型响应曲线,结合组织培养板进行的模拟对照实验和HepG2肝癌细胞的生长特性,将响应曲线分为游离期、黏附期、平台期3个行为时段,并分析和计算在各行为时段的基本特性和平均用时;还利用双胰酶法计算出电极表面的细胞平均贴壁率为76.8%.结果反映了PCC检测信号与细胞行为的对应性及利用PCC探索细胞行为及影响因子的可行性,并验证了PCC技术检测细胞行为的快速和灵敏性能.
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电离辐射对HepG2细胞系细胞周期的影响
目的:探讨放疗对人肝癌细胞系HepG2细胞细胞周期的影响.方法:以人肝癌细胞系HepG2细胞为研究对象:分别以2Gy、4Gy、6Gy、8Gy和10Gy吸收剂量的6MV-X线照射HepG2细胞,照射后培养24h;以4Gy吸收剂量的6MV-X线照射HepG2细胞,照射后分别培养6h、12h、24h和48h;以未予射线照射的同步培养细胞为对照.采用流式细胞技术检测不同照射剂量及照射后不同时间点HepG2细胞细胞周期的变化.结果:2Gy、4Gy、6Gy、8Gy和10Gy剂量6MV-X线照射后培养24h,HepG2细胞表现为随着照射剂量的增加,G1期细胞百分率下降;6Gy、8Gy和10Gy剂量组HepG2细胞表现为G2/M期阻滞.4GyX线照射后培养6h,即可观察到G2/M期阻滞,阻滞峰值为正常的56倍;然后细胞被释放,再度进入细胞周期或死亡.结论:不同剂量X线照射人肝癌细胞系HepG2细胞,大分割剂量组主要诱导G2/M期阻滞;4Gy剂量射线照射后,S期细胞阻滞明显,并与G2/M期阻滞同步解除,阻滞解除后启动增殖或进入凋亡.
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基于"单细胞移植-成瘤性验证"模式鉴定肝癌干细胞
背景:目前尚无较有效的肝癌干细胞的鉴定方法.目的:探索更为简单有效并适用于鉴定肝癌肿瘤细胞株中干细胞的方法.方法:首先利用单细胞分离技术获得单个细胞,逐个种入96孔板中,经筛选获得单细胞克隆(即成瘤性克隆)来源的细胞亚株,细胞亚株移植到裸鼠前肢腋下观察其成瘤作用.结果与结论:利用单细胞分离技术获得单细胞/孔的孔数为371个,成功率为96.4%;按照单细胞克隆的生长情况,筛选获得的来源于成瘤性克隆的细胞亚株移植到裸鼠前肢腋下,成瘤率为100%.结果证实"单细胞移植-成瘤性验证"具有鉴定肝癌干细胞的有效性,为后续的研究奠定技术和方法基础.
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增强型绿色荧光蛋白与单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶共表达质粒载体构建及在肝癌细胞株HepG2表达的研究
目的 构建增强型绿色荧光蛋白与单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因的真核共表达质粒载体pIRES2-EGFP-TK,并鉴定其在肝癌细胞株HepG2中转染和表达.为肝癌靶向基因治疗提供实验依据.方法 2008年6月重庆医科大学附属第二医院从含有目的 基因的质粒PORE-HSV1-TK中获得HSV1-TK基因片段,连接到增强型绿色荧光蛋白共表达载体pIRES2-EGFP,得到重组质粒pIRES2-EGFP-TK并进行鉴定、测序.将重组质粒用脂质体法转染肝癌细胞株HepG2,荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)在细胞内的表达,逆转录聚合酶链反应RT-PCR检测胸苷激酶TK的mRNA表达水平,免疫印迹Western blotting法检测TK蛋白表达情况,新霉素类似物G418筛选出阳性克隆.结果重组克隆载体内的TK序列与GeneBank报告的序列完全一致.肿瘤细胞转染后在荧光显微镜下可观察到有绿色荧光出现,G418筛选的佳浓度为600mg/L,TK的mRNA表达水平高,TK蛋白有明显表达.结论 实验成功构建EGFP和TK真核共表达载体,在肝癌细胞能有效的表达.
关键词： 肝癌 绿色荧光共表达载体 HepG2肝癌细胞 单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶 -
GnRH类似物对体外肝癌细胞Hsp90表达的影响及其意义
目的:探讨GnRH类似物阿拉瑞林对肝癌细胞Hsp90表达的影响及其意义.方法:用不同浓度GnRH类似物阿拉瑞林刺激HepG2肝癌细胞并观察其增殖阻抑作用;免疫组织化学方法检测HepG2肝癌细胞Hsp90表达的变化.结果:Hsp90在GnRH促进HepG2肝癌细胞凋亡的过程中表达减少并与时间呈正相关.结论:GnRH可能通过降调Hsp90发挥其对HepG2肝癌细胞的增殖阻抑作用.
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HCCR-2干扰对HepG2肝癌细胞生物学行为的影响
人子宫颈癌基因HCCR是韩国科学家Ko等[1]发现的一种与人类多种肿瘤有关的癌基因.HCCR可分为HCCR-1、HCCR-2两种亚型.HCCR-1基因由9个外显子构成,编码360个氨基酸,其蛋白相对分子质量为42000.
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光动力疗法对HepG2肝癌细胞增殖的抑制作用
目的 探讨photosan-光动力疗法(PDT)在不同实验条件下对人HepG2肝癌细胞增殖的抑制作用及其作用机制.方法 应用体外培养的人HepG2肝癌细胞,以photosan为光敏剂、半导体激光器(波长630 nm)为光源进行激光照射,在不同浓度光敏剂经不同剂量的光照后,用MTT法测定PDT后HepG2肝癌细胞的残存率,并用流式细胞分析检测PDT对肝癌细胞周期及凋亡的影响.结果 PDT对肝癌细胞株有明显的抑制作用,在一定范围条件下(光剂量小于12 J/cm2),随着光敏剂浓度的增加和激光剂量的增大,肝癌细胞的残存率明显下降.同时发现在相同的光剂量和光敏剂浓度、不同的激光强度下(30 mW/cm2、50 mW/cm2),疗效亦有差异.流式细胞分析显示,PDT后HepG2肝癌细胞复制周期被阻滞于G1期,且出现了明显的凋亡.结论 PDT对体外培养的人肝癌细胞具有明确的抑制作用,这种抑制作用可能由于PDT后正常的肝癌细胞复制周期被阻断,从而导致细胞凋亡.
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5-氟尿嘧啶对HepG2肝癌细胞系中膜联蛋白和血管内皮生长因子表达的影响
膜联蛋白-A2(ANX A2)是膜联蛋白家族中重要成员,在诸多肿瘤的侵袭转移机制中发挥重要作用[1,3];血管内皮生长因子(VEGF)是体内强的一种血管生成因子,直接参与诱导肿瘤血管生成.本文通过对5-氟尿嘧啶(5-FU)干预下ANX-A2、VEGF在HepG2肝癌细胞系表达的研究,探讨两者在肝细胞性肝癌中表达的相关性及意义.
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阻断血管内皮生长因子与表皮生长因子受体协同信号影响HepG2肝癌细胞生长的实验研究
目的 探讨阻断血管内皮生长因子(VEGF)与表皮生长因子受体(EGFR)协同信号对HepG2肝癌细胞生长的影响.方法 体外培养HepG2肝癌细胞株,分别将含不同浓度(10-2、10-3、10-4、10-5μg/μL)抗VEGF抗体与抗EGFR抗体的培养液与HepG2肝癌细胞共同培养12、24、48 h,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)比色法计算细胞生长抑制率.以抗体的不同浓度对HepG2肝癌细胞抑制率作图,得到剂量反应曲线.结果 抗VEGF抗体和抗EGFR抗体对HepG2肝癌细胞生长的抑制均呈浓度依赖性,并且有一定的量效关系.结论 阻断VEGF与EGFR协同信号可抑制HepG2抗体肝癌细胞的增殖,具有剂量依赖性,可诱导细胞凋亡.
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大蒜辣素对HepG2肝癌细胞增殖的抑制作用
目的: 研究大蒜辣素(Allicin)对肝癌HepG2细胞增殖的影响.方法: 采用高效液相色谱法提纯Allicin,运用细胞计数试剂盒(Cell counting kit-8,CCK-8)研究Allicin对HepG2细胞增殖的影响,运用流式细胞仪研究其对细胞凋亡、DNA代谢的影响,运用Western blot研究其对细胞凋亡基因表达的影响.结果: Allicin经HPLC法提纯后其纯度达到99%;Allicin能抑制HepG2细胞的增殖,导致细胞大量凋亡及死亡,凋亡率达到8.67%±3.2%,死亡率达到70.38%±1.8%;也导致细胞DNA代谢发生紊乱,使大部分细胞处于DNA合成的G0/G1期并使进入S期细胞含量减少,延缓细胞增殖.Western blot实验结果表明,Allicin能导致细胞凋亡相关蛋白大量表达.结论: Allicin能抑制肝癌细胞的增殖,导致细胞大量死亡并引发细胞凋亡,并引起细胞DNA代谢发生紊乱,细胞大部分被阻滞在DNA合成的G0/G1期,Western blot实验结果表明,细胞凋亡基因相关蛋白Bax大量表达,而Bcl-2表达降低.
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18氟-氟代脱氧葡萄糖对HepG2肝癌细胞凋亡及rad51基因表达的影响
目的 研究18F-FDG对HepG2肝癌细胞凋亡的影响,探讨其作用机制.方法 将处于对数生长期的肝癌细胞分为实验组和对照组,以不同浓度18F-FDG处理HepG2肝癌细胞,用MTT法、流式细胞术和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分别检测细胞增殖与凋亡、活性氧含量、rad51及p53基因表达的情况.结果 18F-FDG能诱导HepG2肝癌细胞凋亡,抑制其增殖,且随着18F-FDG浓度增大,凋亡细胞增加,活性氧产量增加,p53基因与rad51基因表达增强.结论 18F-FDG能诱导HepG2肝癌细胞凋亡,且凋亡率随药物活度浓度增大而增大.
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大蒜辣素致肝癌细胞HepG2凋亡研究
目的 研究大蒜辣素(Allicin)导致肝癌细胞HepG2凋亡的现象及其影响规律.方法 运用CCK-8试剂盒研究Al-licin对HepG2细胞增殖的影响,运用流式细胞仪检测其对细胞凋亡、DNA代谢的影响,运用免疫印迹(Western blot)研究肝癌细胞凋亡基因表达的影响.结果 Allicin能抑制HepG2细胞的增殖,细胞倍增时间延长为4 d,同时Allicin也能导致细胞出现大量凋亡,实验结果表明其凋亡率高为4.13%,死亡率达到70.38%.细胞周期实验结果表明Allicin能使大部分细胞处于DNA合成期的S期及G0/G1期,延缓细胞增殖.Western blot实验结果表明Allicin能激活细胞凋亡基因提高药物的治疗效果.结论 Allicin能抑制肝癌细胞的增殖可导致细胞大量死亡并引起细胞凋亡,并能引起细胞DNA代谢发生紊乱,细胞大部分被阻滞在DNA合成的G0/G1期,细胞分裂被抑制,Western blot实验结果表明细胞凋亡基因大量表达,细胞发生凋亡.
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p100蛋白表达抑制的 HepG2肝癌细胞稳定株的建立
目的 建立 p100 表达抑制的 HepG2 肝癌细胞稳定株,并初步探讨 p100 在 HepG2 肝癌细胞中的功能.方法 用脂质体将含有真核细胞筛选标记 Neo 和 GFP 的 p100 shRNA 表达质粒转染人 HepG2 细胞,检测 HepC2 细胞稳定株 HepG2(p1OOI) 中p100 表达的抑制效果;平板细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;MTS 检测细胞存活;划痕实验检测细胞迁移能力.结果 成功获得了p100 表达抑制的 HepG2 肝癌细胞稳定 HepG2(p100I),其中 p100 的表达明显降低.并且实验表明,该 plOO 表达抑制稳定的克隆形成能力,抵抗化疗药物 Cisplatin 诱导的细胞死亡的能力和迁移能力明显低于对照组细胞.结论 p100 表达抑制的 HepG2 肝癌细胞稳定株的建立为研究 p100 蛋白在肝癌中的作用提供了体外细胞系模,基于此稳定株的研究,发现 p100 能够影响 HepG2 肝癌细胞的多种细胞功能.
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预知子籽提取物抑制HepG2肝癌细胞增殖作用及对SEPP1等分子表达的影响
目的:观察中药预知子籽乙醇提取物(ATKS)对HepG2肝癌细胞增殖及对SEPP1等分子表达的影响.方法:将不同浓度ATKS作用于HepG2细胞24h、48h、72h,MTT法检测HepG2细胞的细胞存活率;相差倒置显微镜下观察药物作用72h后的细胞形态;RT-qPCR方法检测SEPP1等6个基因表达量的变化;Western Blot方法检测SEPP1蛋白水平变化.结果:ATKS作用后,HepG2细胞增殖被抑制,并存在量效和时效关系,其中72h 细胞半数抑制浓度为2.0mg/ml;较低浓度对细胞形态影响较小,随着浓度增加细胞数量逐渐减少,2.4 mg/ml以上细胞数量锐减,状态变差,药物细胞毒作用凸显;2.0 mg/ml 作用72h后,SEPP1基因表达被显著下调,其上游基因CAPNS1、ITGA2、ITGAV、ITGB1、ITGB5却一致上调;SEPP1蛋白表达量也出现显著下降.结论:ATKS 能抑制HepG2肝癌细胞增殖,并具有量效和时效关系;SEPP1等基因和蛋白表达量发生变化,可能与ATKS的抑制作用有关.
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白细胞介素－6对 HepG2细胞铁调素表达的影响
目的：研究白细胞介素－6（IL－6）对HepG2细胞铁调素（Hepcidin）表达的影响及其可能的分子机制。方法应用不同浓度的IL－6诱导HepG2细胞12 h，按IL－6的浓度分为对照组、实验A组、实验B组。对照组：仅加入1 mL细胞培养液。实验A组：加入0．85 mL细胞培养液及0．15 mL 1 g／mL IL－6培养液，IL－6总浓度为50μg／mL。实验B组：加入0．7 mL细胞培养液及0．3 mL IL－6培养液，IL－6总浓度为100μg／mL。逆转录聚合酶链反应（ RT－PCR）检测3组细胞Hepcidin mRNA表达，Western blot检测信号转导子与转录激活3（ STAT3）及磷酸化STAT3（ pSTAT3）蛋白的表达。比较3组HepG2细胞Hepcidin mRNA、STAT3及pSTAT3表达的差异。结果与对照组相比，实验A组和实验B组Hepcidin mRNA、pSTAT3表达均明显增加（ P＜0．05），实验B组Hep－cidin mRNA、pSTAT3表达比实验A组更高（ P＜0．05）。3组的STAT3蛋白表达差异无统计学意义（ P＞0．05）。结论 IL－6显著上调HepG2细胞Hepcidin mRNA表达，且HepG2细胞Hepcidin mRNA表达水平随IL－6浓度上升伴随性增高。其机制可能与IL－6刺激肝细胞内信号分子pSTAT3升高有关。
关键词： HepG2肝癌细胞 铁调素 白细胞介素-6 信号转导子与转录激活3 -
3种方法提取洋葱中的类黄酮物质对肝癌细胞株HepG2的作用
目的 研究3种方法提取洋葱中的类黄酮物质对肝癌细胞株HepG2的作用.方法 采用水煎煮法、50%乙醇回流法及50%乙醇冷浸法从洋葱中提取类黄酮物质,将其分别加入处于对数生长期的HepG2肝癌细胞中培养,以PBS为对照组,20、30、40、50、μg·ml-1的类黄酮物质为实验组,用MTT法分别测定给药前及给药72 h后各浓度组在490 nm处的吸光度.结果 水煎煮法、50%乙醇回流法及50%乙醇冷浸法提取的类黄酮物质抑制HepG2肝癌细胞生长的起始浓度分别为40、50、40μg·ml-,随着浓度的增加,抑制作用显著增强.结论 洋葱中类黄酮物质对体外培养的HepG2肝癌细胞表现出明显的抗肿瘤活性,50%乙醇冷浸法所提类黄酮物质的抗肿瘤活性强.
关键词： 类黄酮物质 洋葱 HepG2肝癌细胞 四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法 -
芍药苷对HepG2肝癌细胞凋亡的诱导作用
目的：探讨芍药苷(Paeoniflorin)对HepG2肝癌细胞凋亡的诱导作用，并考察其作用机制。方法：用不同浓度芍药苷(0.5，2 mg/mL)对HepG2肝癌细胞进行培养，采用MTT法检测细胞活力，酶标法检测Caspase 3活性，western blot法检测NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果：随着给药浓度的增加，芍药苷能逐渐降低HepG2肝癌细胞活力，在48小时抑制率高；并能提高Caspase 3活性，抑制细胞核内NF-κB p65磷酸化，IκBα磷酸化，从而促进细胞凋亡。结论：芍药苷可能通过NF-κB信号通路诱导HepG2肝癌细胞凋亡，达到抗肿瘤效果。
