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丹参调节肾组织AQP2效应与其“活血利尿”关系
通过丹参对外伤血瘀模型大鼠肾组织AQP2的调节效应,初步阐明丹参“活血利尿”的部分本质,为其临床调配用药提供指导.该文将30只SD大鼠随机分为正常组10只、血瘀证组20只,采用“定量化打击法”制备外伤血瘀证模型,再将造模动物随机分为模型组、丹参组各10只.治疗7d后,免疫组化法、Western blot法检测大鼠肾组织AQP2蛋白表达、对比尿液AQP2含量,观察损伤局部肌肉、肾组织病理改变.结果,模型大鼠损伤局部肌肉炎性细胞浸润、血瘀并水肿,肾组织亦见瘀血肿胀且AQP2表达上调、尿AQP2含量增高,尿量减少,与正常组比较差异显著(P＜0.05);而丹参组肾组织AQP2表达下调、尿AQP2含量减低,尿量增加,与模型组比较显著降低(P＜0.05),肾组织肿胀明显减轻.表明丹参降低血瘀证大鼠尿液AQP2含量,下调肾组织AQP2蛋白表达,从而使肾小管对原尿中水的重吸收减少而增加尿量,丹参“活血”体现损伤局部组织消肿、也体现于肾脏的“利尿”,减轻瘀肿.这一疗效与丹参调节肾脏AQP2效应密切相关.验证了丹参“活血利尿”效应的部分本质.
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甘遂对水负荷小鼠排尿以及肾脏AQP2,IL-1β,TNF-α mRNA表达的影响
目的:观察甘遂醇提取物对水负荷小鼠利尿排水以及肾脏相关因子表达的作用,以探讨其对肾脏的影响.方法:利用腹腔注射生理盐水负荷小鼠模型和正常小鼠,分别观察甘遂灌胃给药后利尿以及肾脏相关组织细胞因子的变化.结果:甘遂醇提取物对水负荷小鼠具有促进利尿的作用.同时升高外周血清肌酐,组织切片观察未见到明显的病理变化.对下调肾集合管AQP2表达有一定的作用趋势,并能够促进表达TNF-α.结论:甘遂大剂量对肾脏具有确实的作用,并可能伴随有一定的病理反应,其中以1.2g· kg-1剂量明显.这种病理反应与血清肌酐升高和TNF-α表达变化相关.
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水通道蛋白AQP2翻译后修饰及表达调控
AQP2(aquaponn-2)是一种水通道蛋白,表达于集合管的主细胞,其活性主要受抗利尿激素(arginin vasopressin,AVP)调控.AVP调节的AQP2数量和细胞内定位在维持机体水代谢平衡和尿液浓缩中发挥着决定性的作用.AQP2受多种修饰,如磷酸化、泛素化、糖基化等.本文根据新的文献报道,着重介绍了AQP2翻译后修饰及调控机制.
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高温环境下力竭运动对大鼠肾脏水通道蛋白2表达的影响
目的:探讨高温环境下运动至力竭对大鼠肾脏水通道蛋白2(AQP2)的影响.方法:32只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(C)、常温力竭组(E)、高温暴露组(H)和高温力竭组(HE),每组8只.常温环境25℃,湿度50％；高温环境38℃,湿度50％.C组不进行任何处理,E组在常温环境下以20 m/min的速度运动到力竭,H组在高温环境下暴露1小时,HE组在高温环境下以20 m/min的速度运动到力竭,记录E、HE组大鼠运动到力竭的时间.实验前各组大鼠称量体重,E、HE组大鼠力竭后即刻称量体重,H组暴露1小时后称量体重；麻醉后取血和肾脏,测试血浆渗透压、血清抗利尿激素(AVP)浓度,RT-PCR法测定大鼠肾脏抗利尿激素V2受体(AVPV2R)和AQP2 mRNA表达,Western blot法测定肾脏AVPV2R蛋白表达,免疫荧光检测磷酸化的AQP2蛋白表达.结果:(1)E组大鼠力竭运动时间为( 163.00±26.04)min,HE组大鼠力竭运动时间(28.00±11.44 min)明显缩短(P＜0.01).(2)HE组大鼠体重丢失％明显低于E组(P＜0.05)；E组和HE组大鼠血浆渗透压和血清AVP浓度明显高于C组(P＜0.05).(3)E组、H组和HE组大鼠肾脏AVPV2R mRNA和AQP2 mRNA表达上调,显著高于C组(P＜0.01),AVPV2R蛋白表达无明显变化；E组、H组和HE组大鼠磷酸化的AQP2表达增强.结论:高温环境下大鼠运动能力降低,机体脱水明显,AVP起到了调节维持体液平衡的作用.高温环境下力竭运动后AQP2在转录水平发生改变,磷酸化的AQP2表达增强.
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姜黄素体外调控AQP2表达抑制MDCK囊泡生成的实验研究
目的:观察姜黄素(curcumin)体外通过调控AQP2表达对囊泡生成的抑制作用.方法:应用正常或过表达AQP2的MDCK囊泡模型,给予10μM的姜黄素,统计囊泡的数目与囊泡的直径,研究姜黄素对囊泡形成与生长的影响,并用Western法检测姜黄素对过表达AQP2的MDCK细胞内AQP2表达的影响.结果:过表达AQP2能够促进囊泡的生成,姜黄素能够下调AQP2的表达,姜黄素显著抑制囊泡的形成与生长,并能部分逆转AQP2促囊泡生成作用.结论:姜黄素体外抑制MDCK囊泡的生成,其机制除与MAPK信号通路、m-OR信号通路相关外,可能还与其对AQP2的作用相关.
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生长激素抑制内毒素对AQP2表达影响的实验研究
目的:研究内毒素对肾髓质水通道蛋白-2(AQP2)的影响及生长激素对AQP2表达的调控作用.方法:72只成年雄性Wistar大鼠随机分为内毒素组(予内毒素100 μg/100 g腹腔注射)、生长激素预处理组(予内毒素前3日每日予重组人生长激素0.1 IU/100 g皮下注射)和空白对照组(予生理盐水1 ml腹腔注射)各24只.分别于处理后4、8、12、24 h分批处死.取肾髓质石蜡切片采用免疫组化法测定AQP2表达情况.结果:与对照组相比,内毒素组AQP2表达在处理后4～8 h下降20.3%、8～12 h下降37.1%、12～24 h下降59.8%,差异显著(P<0.05);生长激素预处理组在同时间段的AQP2表达亦明显下降(P<0.05),但较内毒素组又显著升高(P<0.05).结论:内毒素可使肾髓质AQP2表达下调;而生长激素能够抑制内毒紊对AQP2表达的影响,使肾髓质AQP2表达升高,从而对内毒素致肾损伤有一定的保护作用.
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右归丸对慢性肾衰大鼠肾脏水通道蛋白2表达的影响
目的:探讨肾脏水通道蛋白2(AQP2)的表达与慢性肾衰大鼠水液代谢异常及右归丸防治作用的机制.方法:采用腺嘌呤灌胃法建立慢性肾衰大鼠模型,将实验动物随机分为正常对照组,模型组.右归丸组.采用免疫组化、western blot方法检测各组大鼠肾脏中AQP2的表达,并测定各组大鼠24h尿量、尿比重、血Scr及BUN水平.结果:与正常对照组相比,模型组大鼠尿量明显增加,尿比重下降,血Scr及BUN水平显著升高,肾脏AQP2的表达显著降低(P＜0.05);与模型组比较,右归九组大鼠尿量减少,尿比重增加,血Scr及BUN水平显著下降,肾脏AQP2的表达显著增加(P＜0.05).结论:模型组大鼠肾组织中AQP2表达下调可能参与慢性肾衰水液代谢紊乱的形成,右归丸对AQP2的表达有上调作用,其可能通过上调AQP2表达,纠正慢性肾衰水代谢紊乱,改善肾功能,延缓慢性肾裹的进展.
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先天性肾性尿崩症基因突变研究进展
先天性肾性尿崩症(congenital nephrogenic diabetes insipidus,CNDI)是以血浆精氨酸加压素(arginine vasopressin,AVP)水平正常或升高,但肾脏不能正常浓缩尿液为特征的疾病[1].CNDI常在出生后的第1年发病,临床特征包括多尿、多饮、呕吐、食欲减退、便秘、发热和生长发育迟滞等.AVP是调节肾脏重吸收功能的主要激素.它由垂体后叶分泌,在低血容量或高血钠时分泌增多,通过血液循环到达肾脏,与位于集合管细胞基底外侧的AVP受体(V2R)结合[2].激活的V2R通过刺激Gs蛋白和腺苷酸环化酶导致细胞内cAMP水平升高,使蛋白激酶A激活、水通道蛋白(aquaporin,AQP2)磷酸化.AQP2四聚体中的三个单体磷酸化就可以使AQP2同源四聚体重新分布,使AQP2从储存囊泡转运至顶膜,增加集合管主细胞对水的通透性[3].
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骨髓间充质干细胞不同途径输注对阿霉素肾病大鼠AQP1、AQP2表达的影响
目的 评估骨髓间充质干细胞(MSC)分别通过肾动脉和尾静脉移植方式对大鼠慢性肾病(CKD)模型肾损伤修复的疗效,比较不同移植方式对CKD大鼠水通道蛋白(AQP)1、AQP2表达差异的影响.方法 实验取50只大鼠,2只制备骨髓MSC;36只经尾静脉输注阿霉素构建CKD模型,随机分为阿霉素CKD(A-C)组(n=12)、骨髓MSC经肾动脉输注(M-A)组(n=12)、骨髓MSC经尾静脉输注(M-V)组(n=12);另12只为正常对照(N)组.末次骨髓MSC移植隔1周后检测大鼠24 h尿量、24 h尿蛋白定量、血清钠及血清白蛋白,免疫组化检测肾组织AQP1、AQP2表达.结果 与A-C组相比,M-V组、M-A组大鼠血清白蛋白及24 h尿量均增高(P＜0.05),24 h尿蛋白及血清钠水平均降低(P＜0.05),M-A组24 h尿蛋白较M-V组降低更明显(P＜0.05).M-V组、M-A组大鼠肾脏AQP1、AQP2表达均较A-C组降低(P＜0.05),M-V组、M-A组间差异无统计学意义(P＜0.05).结论 骨髓MSC移植可增加血清白蛋白,降低尿蛋白、血清钠和肾实质细胞内AQP1、AQP2表达,对修复阿霉素CKD大鼠肾损伤有作用.在一定时间内肾动脉途径移植效果优于外周静脉途径,但两种移植途径的效果差异与AQP1、AQP2表达无明显关联.
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中药促进宫颈柱状上皮异位物理治疗后创面修复的临床观察及基于AQP2的机制探讨
目的 观察我院国家级名老中医易修珍经验方——固气利湿汤对宫颈柱状上皮异位患者经物理治疗后创面修复的临床疗效,并且从AQP2角度探讨中药起效的作用机制.方法 62例中重度宫颈柱状上皮异位患者,随机分为对照组(n=30)和治疗组(n=32).均给予物理治疗的方法,对照组术后给予奥硝唑500mg bid口服1周预防感染,治疗组除外奥硝唑预防感染之外,同时给予中药固气利湿汤口服日一剂,持续2周.术后每2周随访一次,记录患者阴道排液持续时间、阴道排液量、阴道出血时间、创面愈合时间,同时观察术后的不良反应.两组治疗前均于阴道镜下取宫颈异位柱状上皮部位的组织活检,术后2周宫颈鳞柱交界处取材少量,测定AQP2蛋白表达量,探讨中药发挥作用的机制.结果 两组患者基本资料比较,未见统计学差异(P＞0.05).治疗组的阴道排液持续时间、阴道排液量、创面愈合时间,均显著低于对照组(P＜0.05),阴道出血时间未见差异(P＞0.05).总的治疗效果,治疗组优于对照组(P＜0.05).治疗后AQP2蛋白表达量,治疗组显著低于对照组(P＜0.05).结论 宫颈柱状上皮异位患者给予物理治疗是一种安全有效的治疗方法,术后给予中药固气利湿汤治疗,可显著降低患者术后阴道排液量、阴道排液时间,促进创面的愈合,提高治疗效果.减少阴道排液的作用机制可能与下调AQP2蛋白有关系.
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中医药对慢性心衰AQP2影响的研究进展
慢性心衰(chronic heart failure,CHF)是众多心血管疾病进展至严重阶段而引起的一种临床综合征,现已成为21世纪重要的心血管病症[1,2].水潴留是CHF重要的临床表现之一,现代研究表明,肾髓质水通道蛋白2(AQP2)是肾脏调节水代谢的主要结构蛋白,与CHF水钠潴留密切相关[3].CHF时每搏输出量下降,肾髓质AQP2蛋白及基因表达上调,引起水重吸收增加,终导致水潴留的发生.本文就CHF过程中AQP2表达的研究及中医药对CHF过程中AQP2的影响进行综述如下.
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三仁汤对脾胃湿热证、湿偏重证大鼠尿液中AQP2的影响
目的:探讨三仁汤对脾胃湿热证、湿偏重证大鼠模型尿液中AQP2的调控作用.方法:选用清洁级sD大鼠32只,将其随机分成4组,每组各8只;正常对照组:正常温度、湿度下予以普通饲料喂养;湿热组:在湿热环境下予以肥甘饮食饲料喂养;湿偏重组:在湿热组饲养的基础上灌服北京产二锅头;三仁汤组:在湿偏重组饲养的基础上予以三仁汤;采用Bradflord方法测定各组动物尿液中AQP2的含量.结果:AQP2含量湿热组、湿偏重组分别与正常对照组、三仁汤组比较均有非常显著性差异(P<0.01);湿偏重组与湿热组比较也有非常显著性差异(P<0.01);三仁汤组与正常对照组比较则无显著性差异(P>0.05).结论:三仁汤对湿热证、湿偏重证大鼠尿液中AQP2的降低有调节作用,能较好地恢复AQP2在机体内的含量至正常水平.
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商陆皂苷甲对水负荷大鼠肾脏AQP2及AQP4表达的影响
目的:观察商陆皂苷甲对水负荷大鼠肾脏水通道蛋白2(AQP2)及水通道蛋白4(AQP4)表达的调节作用,研究商陆皂苷甲利尿作用机制.方法:将50只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、氢氯噻嗪组及商陆皂苷甲高、中、低剂量组,腹腔注射给药,氢氯噻嗪组给予氢氯噻嗪0.4 mg/kg,商陆皂苷甲高、中、低剂量组分别给5.2、2.6、1.3 mg/kg商陆皂苷甲,收集并测量给药后6h内的尿量;水负荷实验结束后将大鼠麻醉处死,运用免疫组化及Real Time-PCR技术检测大鼠肾脏AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达的变化.结果:与空白对照组比较,商陆皂苷甲高剂量组大鼠尿量显著增多,肾脏AQP2、AQP4蛋白及mRNA的表达显著下调(P＜0.05);商陆皂苷甲中、低剂量组尿量及肾脏AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达差异无统计学意义.结论:商陆皂苷甲通过下调大鼠肾脏AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达,使水分重吸收降低,可能是其利尿作用的机制之一.
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清香散对脾胃湿热模型大鼠尿液中AQP2的影响
目的:探讨清香散对脾胃湿热模型大鼠尿液中AQP2的影响.方法:选用清洁级SD大鼠24只随机分成3组:正常对照组、脾胃湿热模型组、清香散组,每组8只.采用肥甘饮食、湿热环境及病原微生物等复合因素建立脾胃湿热证的动物模型.采用Bradford方法测定各组动物尿液中AQP2的含量.结果:脾胃湿热模型组AQP2含量明显低于正常对照组和清香散组,差异均有非常显著性意义(P＜0.01);清香散组与正常对照组比较,差异无显著性意义(P＞0.05).结论:清香散可以调节脾胃湿热模型大鼠尿液中AQP2的降低水平,能较好地恢复AQP2在机体内的含量至正常水平.
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附子汤对慢性心力衰竭大鼠NT-proBNP及 肾髓质AQP2表达的影响
目的:从肾髓质 AQP2 病理机制探讨附子汤对慢性心力衰竭大鼠水潴留、NT-proBNP、心功能的影响.方法:90只SD大鼠随机分为模型制备组75只和假手术组15只,采用腹主动脉缩窄法制作心衰大鼠模型,8周后将存活的63只模型制备组大鼠随机分为模型组,附子汤低、中、高剂量组,呋塞米组,分别予相应的药物灌胃治疗,假手术组和模型组以等体积蒸馏水灌胃,每日1次,连续8周.结果:与假手术组比较,模型组左室射血分数(LVEF)、每搏输出量(SV)降低,左室舒张末内径(LVEDd)、左室收缩末内径(LVESD)、B型脑钠肽前体(NT-proBNP)、肾髓质水通道蛋白2(AQP2)蛋白及mRNA表达增高,P<0.05;与模型组比较,附子汤低、中、高剂量组及呋塞米组LVEF、SV增加,LVEDd、LVESD、NT-proBNP和AQP2表达降低,P<0.05;与低剂量组比较,中、高剂量组及呋塞米组LVEF、SV增加,LVEDd、LVESD、NT-proBNP和AQP2表达降低,P<0.05;附子汤中、高剂量组,呋塞米组各项指标组间比较,P>0.05.结论:附子汤能下调NT-proBNP、肾髓质 AQP2表达水平,改善慢性心衰大鼠的心功能.
