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山楂叶总黄酮对FXR及其相关基因调控治疗NAFLD模型大鼠的机制研究
目的:探讨山楂叶总黄酮(TFHL)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型大鼠的治疗作用及其机制.方法:将SD大鼠随机分为正常组,模型组,TFHL高、中、低剂量组,共5组,高脂膳食建立NAFLD大鼠模型.HE染色、油红O染色观察肝脏病理变化;生化仪检测血清血脂等;RT-PCR法检测肝组织FXR、PPAR-α、PGC1 α、CYP7A1等的mRNA表达.Western Blot检测肝脏上述各项基因的蛋白表达.结果:与模型组比较,应用TFHL干预后,肝组织TG、CHOL含量显著降低,同时能增强肝脏FXR、PPAR-α、PGC1αmRNA和蛋白的表达,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论:TFHL可调节NAFLD大鼠肝脏的脂质代谢,改善炎性反应状态,其机制可能与调控FXR相关基因有关.
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PPAR-α激动剂Wy14643减轻肝细胞系氧化应激损伤
目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-α激动剂Wy14643对过氧化氢(H2O2)诱导HL7702肝细胞损伤的保护作用及其机制.方法 RT-PCR、Western blot分别检测H2O2损伤后HL7702肝细胞PPAR-α mRNA及蛋白表达.Wy14643预孵育细胞,观察其对H2O2损伤HL7702肝细胞活性、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及NF-κB活化的影响.结果 H2O2可诱导HL7702细胞PPAR-α mRNA及蛋白表达降低,200和300 μmol/L H2O2损伤后蛋白表达量由0.69±0.04分别降至0.48±0.05和0.38 ±0.03(P ＜0.01)；Wy14643能够抑制H2O2诱导的HL7702细胞活性降低、SOD、CAT活性下降及NF-κB的激活.结论 Wy14643减轻H2O2诱导的肝细胞损伤,并增强细胞的抗氧化能力,可能与抑制NF-κB的活化有关.
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刍议GLP-1类似物对糖尿病心肌病大鼠心脏组织PPAR-α、ET-1表达的影响
目的：探析GLP-1类似物对糖尿病心肌病大鼠心脏组织PPAR-α、ET-1表达的影响。方法选取45只注射链脲菌素的成年雄性大鼠为研究对象，将其随机分为小剂量治疗组、大剂量治疗组和糖尿病心肌病组，每组15只。回顾性分析GLP-1类似物对糖尿病心肌病大鼠心脏组织PPAR-α、ET-1表达的影响。结果小剂量治疗组和大剂量治疗组的心肌纤维化、血脂、血糖改善情况均优于糖尿病心肌病组，且PPAR-α增加、ET-1降低（P＜0.05）；大剂量治疗组的心脏组织情况及PPAR-α、ET-1表达情况均明显优于小剂量治疗组（P＜0.05）。结论 GLP-1类似物对糖尿病心肌病大鼠心脏组织PPAR-α、ET-1表达具有一定的影响性作用，且用药剂量越大，大鼠的心脏组织产生的变化则越大，在用药剂量的选择上具有一定的依赖性。
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PPAR-α激动作用及其抗动脉粥样硬化作用
动脉粥样硬化是一种严重危害人类健康的血管炎性疾病，根据目前普遍认可的“内皮损伤反应学说”研究发现激活的大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPAR-α）在动脉粥样硬化发生、发展的整个过程中，都发挥着重要拮抗作用。本文分别从PPAR-α与脂类代谢、局部细胞炎症以及斑块稳定和破裂的关系探讨PPAR-α对动脉粥样硬化的拮抗作用机制和原理，为临床实践和新药开发提供有效依据。
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GLP-1类似物对糖尿病心肌病大鼠心脏组织PPAR-α、ET-1表达的影响
目的 探讨GLP-1 类似物对PPAR-α、ET-1 在糖尿病心肌病大鼠心脏组织表达的影响.方法 30 只雄性SD 大鼠高糖高脂饲料喂养四周后腹腔注射链脲菌素(STZ)制备糖尿病模型,随机分为糖尿病心肌病组、小剂量治疗组、大剂量治疗组.给予不同剂量的Exendin-4治疗6 周后测各组血脂、血糖,同时采用HE 染色法、Masson 染色法观察心脏病理形态学改变.免疫组织化学法观察心脏组织PPAR-α、ET-1 的表达.结果 小剂量治疗组和大剂量治疗组与糖尿病心肌病组相比心肌纤维化以及血糖、血脂明显改善(P ＜ 0.05),PPAR-α表达明显上升,ET-1 表达明显下降(P ＜ 0.05).大剂量治疗组与小剂量治疗组相比,心肌纤维化、血糖、血脂、PPAR-α、ET-1 的表达变化更明显.结论 GLP-1 类似物对糖尿病心肌病大鼠心肌纤维化具有一定的改善作用,且具有剂量依赖性.
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PPAR-α对心肌肥大的调控作用及与PI3K/Akt/mTOR通路的关系
目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)对心肌细胞肥大的调控作用及其与PI3K/ Akt/mTOR通路的关系.方法:异丙肾上腺素(ISO)诱导心肌细胞肥大;Leica图像分析软件测量心肌细胞表面积;qRT-PCR方法检测心房钠尿肽(ANP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、PPAR-α mRNA表达;Western blot检测Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、P70S6K蛋白表达;PPAR-α RNAi抑制PPAR-α的表达.结果:①心肌细胞肥大时,PPAR-α表达显著下降;非诺贝特(Feno)可上调PPAR-α表达,抑制心肌细胞肥大;Feno对心肌细胞肥大的抑制效应可被PPAR-αRNAi所逆转;②Feno能明显抑制ISO诱导的心肌细胞p-Akt、p-mTOR和p-p70S6K蛋白表达的增加;Feno的上述作用可被PPAR-α RNAi所逆转;③PI3K抑制剂LY294002(LY)或mTOR抑制剂雷帕霉素(RAPA)均能明显抑制心肌细胞肥大,LY或RAPA抑制心肌细胞肥大的效应均可被PPAR-α RNAi所取消.结论:PPAR-α通过负性调控抑制心肌细胞肥大.PPAR-α抑制心肌细胞肥大的作用可能与其抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关.
关键词： PPAR-α PI3K/AKT/mTOR通路 心肌细胞肥大 大鼠 -
PPAR-α及其配体与糖尿病肾病
过氧化物酶体增殖物活化受体(PPARs)是一类甾体激素受体,包括PPAR-α、PPAR-β/δ、PPAR-γ 3种类型,均不同程度在肾脏表达.研究显示,PPAR-α及其配体在肾脏脂毒性、胰岛素敏感性、炎性反应介导的细胞增殖和肥大、细胞外基质沉积、血管张力改变导致的血流动力学异常等方面发挥蕈要的调节作用,现就其与糖尿病肾病的关系作一综述.
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清肝化痰活血方对非酒精性脂肪性肝炎模型大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α基因表达的影响
目的:观察清肝化痰活血方对非酒精性脂肪性肝炎模型大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)表达的影响.方法:采用高脂饮食复制非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)动物模型,干预组在造模的同时分别予清肝化痰活血方和胆宁片进行干预,造模12周后处死大鼠,检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、门冬氨酸氨基转氨酶(AST)和γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)活性及肝组织中甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)含量和PPAR-α的表达.结果:清肝化痰活血方能显著降低NASH大鼠体重、血清ALT、AST、γ-GT活性及肝组织中TG和FFA的含量,能明显肝脏PPAR-αmRNA的表达.结论:清肝化痰活血方对NASH模型大鼠有良好的防治作用,其作用机制可能是通过增加PPAR-α的表达而改善了肝脏的脂质代谢,起到抗脂肪变性和保护肝细胞的作用.
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老年肝源性糖尿病患者血清过氧化物酶体增殖物激活受体-α的水平变化
目的 探讨老年肝源性糖尿病(HD)患者过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)的血清水平.方法 选取老年HD患者106例,单纯2型糖尿病(T2DM)患者55例及50例健康体检者(正常组)为观察对象.根据肝硬化病因不同将HD分为酒精性肝硬化组(HD-a)52例、肝炎后肝硬化组(HD-b) 54例.采用ELISA法检测血清PPAR-α、胰岛素(FINS)水平,采用RIA检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-6水平,空腹血糖(FPG)采用自动生化仪测定.观察各组血清PPAR-α水平变化情况及其与胰岛素抵抗、TNF-α、IL-6水平相关性.结果 与正常组比较,糖尿病组各组患者血清PPAR-α水平下降,HD各组患者降低更为明显(P＜0.05);而血清TNF-α、IL-6水平均有不同程度升高,HD各组患者升高更为明显,以HD-b组中更为突出(P＜0.05,P＜0.0l);糖尿病组各组患者出现不同程度的胰岛素抵抗,组间比较无明显差异(P＞0.05).PPAR-α水平与胰岛素抵抗、TNF-α、IL-6水平呈负相关.结论 HD患者血清PPAR-α水平与胰岛素抵抗、炎性细胞因子关系密切,提示PPAR-α在HD发病机制中具有重要作用.
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黄芪多糖改善糖尿病仓鼠心肌糖脂代谢
探讨黄芪多糖对糖尿病仓鼠心肌糖脂代谢影响.观察糖尿病仓鼠血浆指标、脂肪和心肌病理、心肌超微结构、PPAR-α和葡萄糖转运蛋白(GLUT)4表达.黄芪多糖组糖脂代谢紊乱、心肌超微结构改善、PPAR-α和GLUT4的表达增高.黄芪多糖部分保护糖尿病心肌.
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吡格列酮和非诺贝特对高脂饮食大鼠胰岛细胞内信号分子的影响
目的 观察吡格列酮和非诺贝特对高脂饮食大鼠胰岛内PPAR-α、-γ和细胞内信号分子的影响.方法 40只雄性SD大鼠随机分为4组:空白对照组(NC)、单纯高脂饮食组(HF)、高脂+非诺贝特组(FF)、高脂+吡格列酮组(FP).HE染色测定胰岛面积;免疫组织化学方法检测胰岛中各种蛋白的表达.结果 HF组胰岛面积、胰岛素、PPAR-γ、PPAR-α、NF-кB、p38丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)、ERKl蛋白水平与对照组相比,差别有统计学意义(P<0.05);吡格列酮明显增加PPAR-γ蛋白水平,降低NF-кB、p38 MAPK、ERKl的表达水平;非诺贝特能使PPAR-α.表达水平明显升高,也能够降低NF-кB、p38MAPK的水平.结论 非诺贝特和吡格列酮在一定程度上可以纠正胰岛功能的异常和细胞内信号转导的紊乱,保护胰岛细胞.
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过氧化物酶体增殖物激活受体-γ mRNA在寻常性银屑病患者皮损中的表达
寻常性银屑病是一种以皮肤鳞屑性红斑为典型皮损的慢性复发性炎症性皮肤病,多项研究表明,其发病与炎症和角质形成细胞的异常凋亡相关[1],但其具体发病机制尚不清楚.过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferatoractivated receptor,PPAR)是一类配体激活的核转录因子超家族成员,包括PPAR-α、PPAR-β/δ和PPAR-γ三种表型.Pershadsingh[2]和Venkatraman等[3]报道PPAR-γ激动剂可以治疗银屑病,但其作用尚不清楚.本研究通过检测PPAR-γmRNA在寻常性银屑病患者的皮损、非皮损中的表达变化,探讨PPAR-γ在银屑病发病中的作用.
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油酰乙醇胺对脂多糖诱导的THP-1细胞炎症因子表达的影响
目的 探讨油酰乙醇胺( OEA)对细菌脂多糖(LPS)诱导的人急性白血病单核细胞(THP-1)中前炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达的影响,并初步探讨OEA作为过氧化物酶体增殖物激活受体-α( PPAR-α)激动剂参与对炎症调节的作用机制.方法 体外培养的THP-1细胞,分别加入不同浓度的OEA(10,20,40 μmoL/L)或非诺贝特(100 μmol/L)共同孵育1h后,用1μg/mL LPS分别诱导6或24h.采用RT-PCR、实时定量PCR和酶联免疫吸附检测测定细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA和蛋白的表达的变化,并使用实时定量PCR及Western blot方法检测PPAR-α及Toll样受体4(TLR4)的mRNA和蛋白的表达.结果 相对于正常THP-1细胞,LPS诱导后细胞中炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)表达明显增加.OEA对TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA和蛋白的表达有抑制作用,并呈现出一定的剂量依赖性.且OEA在激活PPAR-α表达的同时能够抑制TLR4的表达.结论 OEA对LPS诱导的炎症反应有抑制作用,其机制可能与激活PPAR-α,下调TLR4的表达有关.
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PPAR-α激动剂对PAN诱导肾小球足细胞损伤的保护作用
目的：探讨PPAR-α激动剂非诺贝特对氨基核苷嘌呤霉素( PAN )诱导肾小球足细胞损伤的作用及其机制。方法将18只8周龄SD ♀大鼠随机分为3组( n=6)。 PAN模型组和非诺贝特组1次尾静脉注射PAN 65 g·g-1,空白对照组注射生理盐水,PAN注射后d 1,非诺贝特组灌胃非诺贝特40 mg·kg-1·d-1),空白对照组和PAN模型组灌胃等体积溶剂。分别于d 0、6、10收集24 h尿样,采用Bradford法测定大鼠24 h尿蛋白含量。 PAN注射后10 d将大鼠安乐死,收集肾小球样本。利用Western blot和Real-Time PCR检测肾小球足细胞损伤标记物的表达和凋亡相关基因、骨架蛋白以及裂隙膜蛋白基因转录活性。结果注射 PAN 后 d 10,24 h 尿蛋白含量较 d 0明显上升,足细胞损伤标记物desmin基因水平和蛋白表达明显增加,线粒体凋亡通路、TGF-β/Smad通路和p38通路转录水平明显上调,足细胞骨架蛋白和裂隙膜蛋白的转录活性明显增加。非诺贝特处理能够明显降低PAN引起的尿蛋白,改善PAN对足细胞的损伤作用；明显抑制凋亡通路的转录活性；降低骨架蛋白和裂隙膜蛋白的转录活性。结论非诺贝特能够改善PAN诱导的肾小球足细胞损伤,其作用机制与抑制凋亡通路有关。
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基于报告基因的丹参PPAR-α受体激动效应研究
目的 研究丹参不同组分及部分单一成分的PPAR-α激动效应,探讨丹参抗动脉粥样硬化的作用机理.方法 设丹参提取物组:SM1、SM2、SM3、SM4,单一成分组:丹参素、丹酚酸B、丹参酮、隐丹参酮,非诺贝特阳性对照组及空白对照组,pcDNA-hPPAR-α、pGL3-PPRE-luc及pRL-CMV载体共转染293T细胞6h后,各组加相应试验溶液对转染细胞进行干预,试验液终浓度,提取物组为0.1、1、10、50μg·mL-1,单一成分及非诺贝特组为0.1、1、10、50μmoL·L-1,常规培养24h后测定萤光素强度,计算相对萤光素醇表达强度.每浓度点重复5个样本,所有数据皆采用算术平均教±标准偏差(x±s)表示,不同转染组之间的差异性比较,采用t检验和方差分析,P＜0.05认为有显著性差异.结果 丹参素、丹酚酸B、丹参酮、隐丹参酮、SM1、SM2、SM3、SM4对报告基因的相对诱导率均小于1.06,与空白组比较无显著差异,而浓度为0.1、1、10、50μm的非诺贝特阳性组相对诱导率分别为:0.82、1.29、1.72、1.94,表现有显著差异.结论 经筛药体系的体外研究,4种丹参主要活性成分丹参素、丹酚酸B、丹参酮、隐丹参酮无显著的体外PPAR-α激动活性,在确保筛药体系活性的给药浓度下丹参4种不同提取组分无显著的体外PPAR-α激动作用.
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重组hPPAR-α受体表达质粒的构建
目的：构建人PPAR-α受体的重组表达质粒。方法从基因库获取人PPAR-α基因蛋白编码区全长序列，依照引物设计原则及编码序列上已有酶切位点设计引物并添加酶切位点。从正常肝组织细胞提取总RNA，逆转录得cDNA，PCR扩增目的片段，克隆到pcDNA3.1真核表达载体，测序鉴定重组质粒目的基因蛋白编码区全长序列及开放阅读框的正确性，命名为 pcDNA-hPPAR-α。结果核酸测序结果表明所得 pcD-NA-hPPAR-α的蛋白编码全长序列与基因库一致，正向插入载体pcDNA3.1多克隆位点 NheⅠ和 KpnⅠ之间，开放阅读框正确。结论成功构建重组质粒pcDNA-hPPAR-α。
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过氧化物酶体增殖物活化受体-α启动子区甲基化:诱导肝内脂滴形成及加快非酒精性脂肪性肝病进程
目的 探讨过氧化物酶体增殖物活化受体-α(PPAR-α)甲基化与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的相关性.方法 收集15例NAFLD患者肝脏组织及11例正常对照组肝脏组织,HE染色明确病理分型,RT-PCR、Western blotting分别检测PPAR-α mRNA及蛋白的表达水平,选取其中的10对行焦磷酸测序检测PPAR-α启动子区甲基化水平.结果 与对照组比较,NAFLD组肝脏组织可见明显脂肪沉积,PPAR-α mRNA及蛋白表达均降低(P＜0.05),PPAR-α启动子区甲基化水平升高(P =0.025),启动子区甲基化发生率与PPAR-α蛋白表达量呈负相关(r=-0.878,P=0.009).结论 正常人肝脏发生脂肪变时,不仅有肝细胞内脂肪沉积,且伴有PPAR-α表达降低,降低原因之一是该基因启动子区发生甲基化,从而加快NAFLD的进程.
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PPAR-α激动剂增加脂肪酸氧化改善高脂诱导的胰岛素抵抗
目的研究过氧化物酶增殖体激活受体α(peroxisome proliferation activated receptor-α,PPAR-α)激动剂对脂肪酸氧化的影响及其改善高脂诱导的胰岛素抵抗(IR)的机制.方法雄性SD大鼠随机分为三组(每组各10只),A组为饱和脂肪酸(1ard)组,B组为不饱和脂肪酸(soy)组,C组为正常对照组.大鼠饲养四周后将高脂饮食组各分为两组,高脂未干预组和苯扎贝特干预组.包头两周后检测空腹血糖、胰岛素和甘油三酯水平,并取出肝脏、肌肉和脂肪组织,检测组织肉碱脂酰转移酶-1(CPT-1)和PPAR-αmR-NA的表达,mRNA表达采用RT-PCR的方法,以β-actin作为内参照.结果肌肉和脂肪CPT-1mRNA表达在高脂未干预组明显低于苯扎贝物干预组和正常对照组,而未干预组间无显著差异.PPAR-αmRNA表达在各组间均无显著性差异.结论高脂饮食可使肌肉和脂肪组织CPT-1mRNA表达减少,而PPAR-αmR-NA激动剂苯扎贝特则可使CPT-1mRNA表达明显增加,肝脏PPAR-αmRNA表达在各组均无明显改变.这说明高脂饮食可能通过抑制脂肪酸β氧化导致组织细胞内脂质蓄积,终造成IR,而用PPAR-α基因的抑制或促进作用,而是作为配体与PPAR-α受体结合对脂肪酸的氧化起调节作用.
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PPAR-α通过PI3K/Akt/FoxO1信号通路的负性调控心肌细胞肥大
目的 观察PPAR-α对心肌细胞肥大负性调控时,机体中PI3K/Akt/FoxO1信号通路的变化情况.方法 实验小鼠以异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大,使用实时定量聚合酶链式反应检测FoxO1 mRNA、PPAR-α表达水平,同时应用Feno预处理后观察FoxO1 mRNA、PPAR-α表达水平变化.结果 异丙肾上腺素诱导后,心肌细胞中的PPAR-αmRNA、FoxO1 mRNA水平降低.Feno能抑制心肌肥大细胞表面积增加,RNAi通过PPAR-αmRNA使心肌肥大细胞表面积增加,以PI3K抑制剂LY处理心肌细胞,FoxO1 mRNA表达增加.结论 PPAR-α对心肌细胞肥大负调控与PI3K/Akt通路抑制、 增加FoxO1表达有关.
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调脂积冲剂对脂肪肝大鼠过氧化物酶体活化物激活受体α及胰岛素抵抗的影响
目的 探讨调脂积冲剂对脂肪肝大鼠过氧化物酶体活化物激活受体α(PPAR-α)及胰岛素抵抗(IR)的影响.方法 将Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、易善复组、治疗(调脂积冲剂)组、中药(六味地黄丸)组.采用酒精合并高脂乳剂建立大鼠脂肪肝模型.以易善复和六味地黄丸组为阳性对照,检测大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、FBG,并采用酶联免疫法测定血清胰岛素含量,采用稳态模式评估法(HOMA)评价胰岛B细胞功能,采用免疫组化法观察对大鼠肝组织PPAR-α的影响.结果 与模型组比较,调脂积冲剂治疗组TC、TG、LDL-C、FBG、FINS、HOMA-IR、肝指数明显降低,HDL-c、PPAR-α明显增高.结论 调脂积冲剂能改善脂肪肝大鼠的血脂、肝功能及胰岛素抵抗.
