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干扰素γ抑制转化生长因子β1诱导的A549细胞上皮-间充质转化及对ERK1/2和STAT3的作用
目的 探讨干扰素γ(IFN-γ)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的A549细胞上皮-间充质转化(EMT)过程的作用及对胞外调节激酶1/2(ERK1/2)和信号转导和转录激活因子3(STAT3)的作用.方法 ①体外培养A549细胞,分为TGF-β1处理组(5 μg/L)、IFN-γ处理组(200 μg/L)和TGF-β1(5 μg/L)+ IFN-γ(10、100、200 μg/L)联合处理组.处理时间48 h,免疫荧光及Western blot方法检测各组细胞E-钙黏素( E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)和纤维连接蛋白(fibronectin)的蛋白表达.②处理不同时间(5、30和60 min),Western blot方法检测各组细胞STAT3、p-STAT3和ERK1/2、p-ERK1/2的蛋白表达.结果 ①与TGF-β1单独处理组相比,IFN-γ(200 μg/L)+TGF-β1联合处理组vimentin和fibronectin的蛋白表达减低(P＜0.05),而α-SMA和E-cadherin蛋白表达无显著变化.②作用后5、30和60 min,IFN-γ(200 μg/L)+ TGF-β1联合处理组STAT3磷酸化水平显著升高(P＜0.01).作用后5、60 min,IFN-γ(200 μg/L) +TGF-β1联合处理组ERK1/2磷酸化水平升高(P＜0.05).结论 IFN-γ可在体外抑制TGF-β1诱导的A549细胞发生EMT,其机制可能与上调ERK1/2和STAT3信号通路有关.
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CXCR4抑制剂AMD3100对宫颈癌Siha细胞侵袭及上皮-间充质转化相关蛋白表达的影响
目的 研究CXCR4抑制剂AMD3100对宫颈癌Siha细胞侵袭及上皮-间充质相关蛋白表达的影响.方法 用不同浓度AMD3100干预体外培养宫颈癌Siha细胞,实验分为0 ng/ml(对照组)、10 ng/ml、100 ng/ml、1000 ng/ml四组,Western blot检测CXCR4、Twist、E-cadherin蛋白的表达,MTT检测AMD3100对细胞增殖能力的影响,Transwell及划痕愈合实验观察细胞侵袭迁徙能力.结果 MTT结果显示AMD3100呈浓度和时间依赖性抑制Siha细胞增殖,与对照组相比,AMD3100浓度为100 ng/ml及1000 ng/ml组Siha细胞穿膜数量显著下降(P<0.05),划痕愈合面积显著增高(P<0.05).与对照组细胞相比,AMD3100浓度100 ng/ml及1000 ng/ml组Siha细胞CXCR4及Twist蛋白表达显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白显著增高(P<0.05).结论 CXCR4抑制剂AMD3100可能通过影响上皮-间充质相关蛋白的表达降低细胞增殖及侵袭能力.
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上皮-间充质转化与肺纤维化的研究进展
在现代医学和生物学领域,肺纤维化是一种致死率较高的疾病,人们对它的研究从未停止.随着肺纤维化研究的深入,越来越多的相关因子和机制渐渐被人们发现,其中上皮细胞间充质转化是研究较为深入的机制之一.但由于肺纤维化成因复杂,所涉内容十分广泛,其致病机制尚不清楚,仍有许多问题等待我们解决.故本文试图在众多纷繁的研究中,理出一条相对明晰的线索以阐述肺纤维化的成因及机制作为参考.
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影响E-钙黏蛋白表达下调因素与上皮-间充质转化关系的研究进展
钙黏蛋白(E-cadherin，E-Cad)是参与形成和维持正常细胞与细胞之间互相黏附、相互连接的一类跨膜糖蛋白，上皮细胞之间的紧密相连主要依赖E-Cad。近年研究发现，E-Cad的表达下调与恶性肿瘤的侵袭性及转移性有较大关系，其中主要的原因是E-Cad可诱导上皮细胞发生上皮-间充质转化(EMT)。本文就E-钙黏蛋白在恶性肿瘤细胞中的表达的影响因素与上皮-间充质转化的关系研究作一综述。
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流体剪切力诱导喉鳞癌Hep2细胞上皮-间充质转化
目的 探究流体剪切力(fluid shear stress,FSS)对喉鳞癌Hep2细胞发生上皮-间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的影响.方法 对Hep2细胞加载140 mPa的FSS,观察不同时间点细胞的形态学变化;划痕实验检测力学加载后Hep2细胞迁移能力的变化;共聚焦显微镜下观察细胞骨架蛋白F-actin的分布;Western blotting检测EMT相关蛋白的表达.结果 FSS力学加载后,Hep2细胞形态由多边形向梭形转变,撤销FSS后,细胞恢复初始的多边形;Hep2细胞迁移能力的增加依赖于FSS加载时间.FSS促使细胞骨架蛋白F-actin重排,从而增强Hep2细胞的迁移行为.FSS使Hep2细胞EMT标志蛋白发生了时序性变化.结论 FSS是诱导Hep2细胞发生EMT的一个重要物理因素.
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MicroRNA-21调控乳腺癌对吉西他滨耐药的机制
背景与目的：以吉西他滨为基础的联合用药在转移性乳腺癌中展示出很好的临床疗效和安全性，但耐药的出现导致治疗失败。MicroRNA是一类非编码小分子RNA，起到类似癌基因或抑癌基因的作用。虽然肿瘤中关于化疗药物耐药的机制报道很多，但microRNA异常表达与耐药之间的关系及机制还不十分清楚。本研究旨在探讨microRNA-21在乳腺癌吉西他滨耐药中的作用及其可能机制。方法：采用低浓度持续诱导MDA-MB-231细胞的方式构建人乳腺癌耐吉西他滨细胞株，药物敏感性差异达10倍以上，继而通过实时荧光定量PCR(real-time PCR，RT-PCR)、CCK-8、蛋白[质]印迹法(Western blot)、转染、划痕和Transwell等实验分别检测microRNA-21对药物的敏感性及上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)标志物的影响。结果：在乳腺癌吉西他滨耐药细胞株中存在EMT现象，相比亲代细胞，microRNA-21呈高表达，并与吉西他滨敏感性呈负相关。转染microRNA-21的抑制剂和mimic可以分别下调和上调microRNA-21表达，同时EMT现象和药物敏感性也发生了相应的变化。结论：MicroRNA-21可能通过诱导肿瘤细胞的EMT发生而介导乳腺癌对吉西他滨的耐药。
关键词： MicroRNA-21 乳腺癌 吉西他滨耐药 上皮-间充质转化 -
胃癌中miR-130a的表达及其在上皮间充质转化中的作用
目的:探讨胃癌中微小RNA-130a(microRNA-130a,miR-130a)的表达水平及其在上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用.方法:应用实时荧光定量-PCR法检测78例胃癌组织及其相应癌旁组织、胃癌细胞和正常胃黏膜细胞中miR-130a的表达水平.将miR-130a模拟物(miR-130a mimics)和miR-130a抑制剂(miR-130a inhibitor)转染至胃癌AGS细胞,应用蛋白质印迹法检测转染后细胞中波形蛋白、N-钙黏蛋白、E-钙黏蛋白和SNAIL蛋白的表达水平,Transwell法检测转染后AGS细胞的侵袭和迁移能力.结果:胃癌组织中miR-130a的表达水平明显高于相应的癌旁组织(P＜0.05),已发生转移的胃癌组织中miR-130a的表达水平明显高于未转移的胃癌组织(P＜0.05);胃癌细胞中miR-130a的表达水平明显高于正常胃黏膜细胞(P＜0.01).miR-130a mimics转染后,AGS细胞中波形蛋白、N-钙黏蛋白和SNAIL蛋白的表达水平明显上调,而E-钙黏蛋白的表达水平明显下调,细胞的侵袭和迁移能力明显增强(P均＜ 0.05);miR-130a inhibitor转染后AGS细胞中波形蛋白、N-钙黏蛋白和SNAIL蛋白的表达水平明显下调,而E-钙黏蛋白的表达水平明显上调,细胞的侵袭和迁移能力明显下降(P均＜ 0.05).结论:人胃癌组织中miR-130a呈高表达.miR-130a可能通过促进胃癌细胞的EMT而增强胃癌细胞的侵袭和迁移能力.
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沙利霉素对舌鳞癌细胞体外增殖、侵袭和迁移能力的影响
目的:探讨沙利霉素对口腔舌鳞癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响,并初步分析其影响机制.方法:CCK8法检测沙利霉素和顺铂分别作用于CAL-27细胞和EA.hy926细胞后,对细胞增殖的影响;Transwell小室法检测沙利霉素对CAL-27细胞侵袭和迁移能力的作用;Western免疫印迹检测沙利霉素对CAL-27细胞中E钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和β连环蛋白(β-catenin)表达的影响.采用SPSS20.0软件包对数据进行统计学分析.结果:沙利霉素抑制CAL-27细胞的增殖,呈时间、剂量依赖性,且其增殖抑制作用强于顺铂(P＜0.05);经过沙利霉素(4μmol/L)处理过的CAL-27细胞,其侵袭和迁移能力均显著低于空白对照组(P＜0.05);沙利霉素上调CAL-27细胞中E-cadherin蛋白的表达水平,并且下调vimentin和β-catenin蛋白的表达水平.结论:沙利霉素能够明显抑制CAL-27细胞的增殖能力,显著减弱CAL-27细胞的侵袭和迁移能力,其机制可能与抑制癌细胞发生上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)有关.
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胚胎干细胞上清液诱导Tca8113细胞发生上皮-间充质转化的实验研究
目的:采用胚胎干细胞培养上清液诱导口腔鳞癌细胞发生上皮-间充质转化,初步探讨其意义.方法:应用129小鼠胚胎干细胞培养上清液诱导培养舌鳞癌Tca8113细胞.分别在1周和2周后,采用免疫荧光和免疫细胞化学检测诱导前、后Tca8113细胞中Oct4、角蛋白(CK)和波形丝蛋白(vimentin)的表达情况.半定量反转录PCR检测snail、slug、E-cadherin和CD44、Bmi-1、hTERT表达随诱导时间的变化情况.结果:Tca8113细胞经条件培养基诱导后,细胞形状逐渐由铺路石样变为长梭形;Oct4集中表达在细胞核中,vimentin转变为阳性表达,CK表达无明显变化;上皮-间充质转化标记snail mRNA表达上调,E-cadherin下调,slug无明显变化.同时,癌干细胞标记CD44、Bmi-1和hTERT mRNA表达上调.结论:口腔鳞癌细胞经胚胎干细胞培养上清液诱导后,可发生上皮-间充质转化,从而可能具备部分干细胞特性.
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细胞凋亡及上皮-间充质转化在腭胚突融合过程中的作用探讨
目的:探讨细胞凋亡及上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)在腭胚突融合中的作用.方法:选用8周龄C57BL/6J近交系小鼠作为研究对象.于E13.5、E14.0、E14.5、E15.5及E17.5 d获取胎鼠腭胚突组织,在腭胚突融合的关键阶段,应用免疫组织化学和TUNEL方法检测EMT过程中蛋白变化和细胞凋亡率.每个时间点选择3张图片,应用image J软件进行图片灰度分析,采用SPSS12.0软件包进行统计学分析.结果:免疫组织化学和TUNEL法检测发现在腭融合的关键阶段(E14.5),腭中嵴上皮(medial edge epithelium,MEE)中出现纤连蛋白和波形蛋白表达和细胞凋亡,前中后腭部MEE细胞也出现细胞凋亡,中后部细胞凋亡率显著高于前部.结论:在体内腭胚突融合的关键阶段,EMT过程和细胞凋亡均参与了腭中嵴上皮带的退化消失,且前中后腭部的融合机制基本一致.
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miR-181a抑制舌鳞癌细胞上皮-间充质转化及化疗耐药机制的研究
目的:探讨miR-181a调控上皮-间充质转化(EMT)促进舌鳞状细胞癌细胞顺铂耐药的机制.方法:分别在CAL27/CDDP、CAL27中转染miR-181a mimics、miR-181a LNA,免疫印迹及免疫荧光检测E-cadherin、Vimentin的表达;免疫印迹检测Twist1、Slug的表达;Transwell及划痕实验检测细胞的侵袭、迁移能力;MTT法检测细胞对顺铂的半抑制率.利用生物信息学方法预测Twist1可能为miR-181a的靶基因.构建包含Twist1结合序列片段的荧光素酶报告基因质粒,进行双荧光素酶报告基因实验.采用SPSS17.0软件包对结果进行单因素方差分析.结果:转染miR-181a mimics可逆转CAL27/CDDP的EMT表型,E-cadherin表达增强,Vimentin、Twist1及Slug表达降低,细胞的侵袭、迁移能力显著降低,IC50下降47.57％±6.23％ (P＜0.05).转染miR-181a LNA可诱导CAL27细胞发生EMT,Ecadherin表达降低,Vimentin、Twist1及Slug表达增强,细胞侵袭、迁移能力显著增强,IC50升高55.61％±7.20％(P＜0.05).双荧光素酶报告基因实验证实,Twist1是miR-181a的靶基因.结论:miR-181a靶向调控Twist1,从而抑制舌鳞癌细胞上皮-间充质转化与顺铂耐药.
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Wdpcp基因调控心脏冠状动脉发育的机制
Wdpcp作为平面细胞极性的效应基因,在胚胎时期主要通过影响细胞运动和初级纤毛生长参与多种器官和组织的发生和发育过程.WDPCP突变与临床上Bardet-Biedl综合征和Meckel-Gruber综合征相关.该文主要揭示了Wdpcp基因调节小鼠冠状动脉发育的新功能和机制,丰富了该基因的致病类型,为临床上诊断冠状动脉疾病的发病原因提供了重要的遗传学依据.
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转化生长因子β1通过Smad3调控补体应答基因32转录的分子机制
目的:前期工作发现补体应答基因32(RGC-32)是转化生长因子β(TGF-β)诱导的肾小管上皮细胞-间充质转化(EMT)过程中Smad信号下游的关键调控分子.本研究拟进一步明确TGF-β诱导肾小管EMT过程中RGC-32的转录调控机制. 方法:体外培养NRK-52E细胞,利用荧光素酶报告基因实验检测RGC-32启动子活性以确定Smad结合元件(SBE)是否为TGF-β诱导的RGC-32转录调控位点;通过凝胶迁移率实验(EMSA)明确与之结合的转录调控分子. 结果:(1)转染野生型SBE片段的NRK-52E细胞荧光素酶活性明显增高,而转染突变的SBE片段的细胞无此表现,表明SBE是调控TGF-β诱导的RGC-32转录启动的关键位点.(2)合成32P标记的包含SBE的寡核苷酸探针行EMSA可见TGF-β诱导的核蛋白与探针复合物生成,且加入包含SBE序列的竞争片段可以抑制此核蛋白-探针复合物的形成,表明有蛋白与SBE结合并调控RGC-32的转录.(3)当加入不同的Smad抗体行超迁移实验发现Smad2和Smad3抗体可以和复合物相互作用,表明Smad2和Smad3可能是TGF-β诱导的转录复合物的组成部分.(4)将Smad2和Smad3分别与p-1500RGCluc共同转染NRK-52E细胞,Smad3可以显著增加RGC-32启动子活性,表明Smad3是TGF-β诱导的转录复合物的组成部分,而不是Smad2. 结论:在TGF-β诱导肾小管EMT过程中,Smad3通过与RGC-32启动子区SBE结合,从而调控肾小管EMT过程.
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IL-33/TLR4信号通路在A549细胞上皮-间质转化中的作用
目的:探讨IL-33/TLR4信号通路在上皮来源的A549细胞上皮-间质转化中的作用.方法:培养A549细胞,用5 ng/mL的转化生长因子β1(TGF-ββ1)刺激A549细胞;在不同时间点(0,12,24,48 h)MTT法检测TGF-ββ1对A549细胞增殖的影响;荧光定量PCR方法检测IL-33信号通路中关键因子IL-33,Toll样受体4(TLR4)基因的表达改变;蛋白质印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cad)、磷酸化蛋白激酶(p-AKT)的动态表达.结果:TGF-ββ1刺激A549细胞后,细胞增殖无明显变化(P＞0.05),IL-33表达量先升高,后下降(P ＜0.05);E-钙黏蛋白表达量逐渐下降,α-SMA表达量逐渐升高,TLR4先升高后下降(P ＜0.05);p-AKT表达量逐渐升高(P＜0.05).结论:IL-33/TLR4信号通路在A549细胞的上皮-间质转化中发挥了重要作用.
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褪黑素抑制缺氧引起的SGC-7901人胃癌细胞上皮-间充质转化
目的:研究褪黑素对缺氧引起的SGC-7901人胃癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的作用,并初步揭示其分子机制.方法:在建立缺氧诱导SGC-7901人胃癌细胞发生EMT的基础上,通过免疫印迹方法检测蛋白表达水平、免疫荧光的方法检测蛋白在细胞中的分布和表达,研究褪黑素对EMT过程的作用.结果:缺氧使SGC-7901人胃癌细胞发生EMT,表现为形态发生改变,上皮标志物表达量减少、间充质标志物表达增加,褪黑素可抑制缺氧条件下活性氧簇(ROS)的产生和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达及EMT.结论:在缺氧条件下SGC-7901人胃癌细胞可发生EMT,褪黑素可抑制该过程.这些结果揭示了褪黑素在缺氧引起的肿瘤细胞EMT过程中发挥的抑制作用,为褪黑素的临床应用提供了重要的理论依据.
关键词： 缺氧 SGC-7901人胃癌细胞 上皮-间充质转化 褪黑素 -
EMT介导膀胱癌耐药的机制及相关分子
化疗是治疗膀胱癌的重要手段,但是随着化疗的进行,肿瘤细胞往往对单药或多药化疗产生耐药,严重影响患者的预后.近年来研究表明,膀胱癌耐药性的产生受肿瘤微环境中多种信号分子的调节,上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)在其中发挥着关键性作用,多种分子通过不同的信号通路参与到EMT介导的膀胱癌耐药机制中.全文就EMT相关耐药机制进行探讨,旨在为EMT介导的耐药膀胱癌患者寻找新的治疗策略.
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鼻咽癌组织中梭形癌细胞具有上皮-间充质转化及肿瘤干细胞特性
目的 探讨鼻咽癌组织中梭形癌细胞是否具有上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)特性.方法 以33例鼻咽慢性炎组织作为正常对照,采用免疫组化SP法检测98例鼻咽癌组织梭形癌细胞中E-cadherin、N-cadherin、vimentin、OCT4、SOX2和ALDH1的表达.结果 与鼻咽慢性炎组织相比,鼻咽癌组织中梭形癌细胞上皮标志物蛋白E-cadherin明显下调(P<0.001),而间叶标志物蛋白N-cadherin和vimentin明显上调(P均＜0.001).梭形癌细胞中E-cadherin与N-cadherin(P=0.020)和vimentin(P=0.001)的表达呈明显负相关.与鼻咽慢性炎组织相比,鼻咽癌组织中梭形癌细胞中CSCs标志物OCT4、SOX2和ALDH1蛋白明显升高(P均＜0.001),二者差异有统计学意义.此外,梭形癌细胞中E-cadherin与OCT4(P=0.029)及ALDH1(P=0.000)的表达均呈负相关.结论 鼻咽癌组织中梭形癌细胞具有EMT及CSCs特性,可作为判断转移性鼻咽癌的形态学指标.
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上皮-间充质转化对肝纤维化作用的研究进展
上皮-间充质转化在许多生理和病理过程中都具有重要作用,近年研究证明,肝纤维化过程中同样存在上皮-间充质转化现象.本文综合国内外研究成果,阐述发生上皮-间充质转化的肝源细胞(肝细胞、胆管上皮细胞、肝祖细胞、肝星状细胞)以及肝纤维化发生发展过程中上皮-间充质转化涉及的信号通路及调节机制,并探讨了以上皮-间充质转化为靶标的抗肝纤维治疗策略的可行性及研究进展.
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TGF-β诱导肿瘤细胞上皮-间充质转化的调节及信号转导机制研究进展
上皮-间充质转化( EMT)是源于上皮细胞的恶性肿瘤细胞获得迁徙和侵袭能力的重要生物学过程。恶性上皮性肿瘤细胞和基质细胞分泌的转化生长因子β( TGF-β)诱导和促进了肿瘤细胞的EMT过程。有研究表明TGF-β借助于Smad依赖性或非Smad依赖性信号转导通路，诱导或抑制EMT过程关键基因的表达；细胞外及细胞膜的多种因子则对上述信号转导过程产生调节作用。结果提示，在TGF-β诱导的肿瘤细胞的EMT过程，涉及一个复杂而精细的信号转导调控网络。
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阻断Wnt信号通路对人绒毛膜癌细胞株JEG-3迁移及侵袭能力的影响
目的 观察阻断Wnt信号通路后,人绒毛膜癌细胞株JEG-3细胞迁移及侵袭能力的影响.方法 将人绒毛膜癌细胞株JEG-3细胞传代后,按完全随机法分为实验组和对照组,每组6孔.实验组在常规细胞培养基础上,给予外源性Wnt 信号通路阻断剂DKK-1(100 ng/mL),对照组加入同体积细胞培养基.运用蛋白印迹法(Western blot法)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测两组细胞中β-catenin、Wnt、E-cadherin、Vimentin 等蛋白及mRNA的表达;采用划痕实验、Transwell实验观测两组细胞迁移及侵袭能力的变化.结果 与对照组相比,实验组β-catenin、Wnt、Vimentin蛋白及mRNA的表达均降低,E-cadherin蛋白及mRNA的表达增高,差异均有统计学意义(P<0.05);实验组肿瘤细胞迁移及穿膜细胞数较对照组均降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 阻断Wnt信号通路可抑制肿瘤细胞上皮-间充质转化过程,进而降低人绒毛膜癌细胞株JEG-3细胞的迁移及侵袭能力.
