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紫草素对HGF诱导的人肺癌细胞上皮-间充质转化的逆转作用
目的:探讨紫草素(shikonin)对肝细胞生长因子(HGF)诱导的人非小细胞肺癌PC9细胞迁移、侵袭及上皮-间充质转化(EMT)的影响.方法:用HGF诱导PC9细胞建立EMT模型,采用不同剂量的shikonin干预24 h后,MTT法检测细胞活力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力;Wes-tern blot法检测细胞中上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的蛋白表达水平.结果:Shikonin可显著抑制PC9细胞的活力(P<0.01),随着给药剂量的增加,shikonin对细胞的生长抑制率显著上升,并呈一定的剂量依赖关系,IC50为9.364μmol/L.HGF可诱导PC9细胞发生迁移和侵袭;划痕愈合实验和Transwell小室实验显示,shikonin能明显抑制由HGF诱导的肺癌PC9细胞迁移和侵袭(P<0.01).Western blot检测结果显示HGF可诱导PC9细胞的EMT标志物E-cadherin蛋白表达下调,N-cadherin和vimentin蛋白表达上调,使其发生EMT;shikonin则可逆转由HGF诱导的PC9细胞E-cadherin蛋白表达下调及N-cadherin和vimentin蛋白表达上调(P<0.01).结论:Shikonin能逆转由HGF诱导的肺癌PC9细胞EMT,同时抑制其迁移和侵袭.
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SATB1高表达通过促进上皮-间充质转化而介导鼻咽癌细胞侵袭和转移
目的:探讨鼻咽癌(NPC)中特殊富含AT序列结合蛋白1(SATB1)的表达及其与肿瘤侵袭和转移的关系.方法:免疫组化检测76例临床NPC及61例对照鼻咽黏膜慢性炎症(NPI)组织样本中SATB1、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达,并分析NPC中SATB1与患者临床参数、E-cadherin和vimentin表达的相关性.体外培养不同分化状态的NPC细胞系CNE1、CNE2Z及C666-1,筛选出SATB1高表达细胞系,采用小干扰RNA(siRNA)沉默SATB1表达后,分析上皮-间充质转化(EMT)相关分子的表达及细胞侵袭能力的改变.结果:临床鼻咽组织中SATB1表达定位于胞质和胞核,NPC组中SATB1阳性表达率显著高于对照NPI组(P<0.01);E-cadherin在NPI黏膜上皮中呈膜阳性表达,NPC中膜表达水平下降,但出现胞质阳性.NPI中E-cadherin膜阳性率为100％,显著高于NPC的32.89％(P<0.01).Vimentin呈胞质阳性,NPI上皮细胞中均阴性,但NPC中阳性率为51.32％(P<0.01).NPC中SATB1高表达与患者性别、年龄及N分期无关,但与T分期和M分期均呈正相关(P<0.05);SATB1高表达与vimentin呈正相关(r=0.358,P=0.009).NPC细胞系中SATB1表达与细胞分化水平呈负相关.采用siRNA敲减C666-1细胞中SATB1表达后,E-cadherin表达上升,vimentin表达下降,且细胞侵袭能力下降.结论:SATB1高表达通过促进EMT而介导NPC临床进展.
关键词： 鼻咽癌 特殊富含AT序列结合蛋白1 上皮-间充质转化 侵袭 转移 -
X线电离辐射诱导人鼻咽癌CNE-2细胞发生上皮-间充质转化及其潜在机制
目的:探讨X线电离辐射诱导鼻咽癌CNE-2细胞发生上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及其可能的信号通路.方法:分别采用0 Gy、2 Gy、4 Gy和8 Gy的X线照射鼻咽癌CNE-2细胞,通过倒置显微镜观察照射24 h后细胞形态的改变;应用细胞划痕实验和Transwell实验观察细胞迁移和侵袭能力的变化;分别采用real-time PCR和Western blot法检测EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cad-herin)和波形蛋白(vimentin)mRNA及蛋白水平的变化,并采用Western blot法检测Akt和p-Akt蛋白水平的变化.结果:经X线照射后鼻咽癌CNE-2细胞呈典型的"鹅卵石"样或纺锤形,且伸出伪足,细胞间隙增大,细胞的侵袭和迁移能力增强(P<0.01);real-time PCR和Western blot法检测结果显示,与未照射组相比,各照射组细胞中E-cad-herin mRNA和蛋白的表达水平均显著下调(P<0.01),而N-cadherin和vimentin mRNA和蛋白的表达水平明显上调(P<0.05);PI3K/Akt信号通路中p-Akt蛋白的水平显著升高(P<0.01),而Akt的表达无明显变化.结论:X线电离辐射能够诱导鼻咽癌CNE-2细胞发生EMT,其机制可能与PI3K/Akt信号通路的激活有关.
关键词： 鼻咽癌 电离辐射 上皮-间充质转化 PI3K/Akt信号通路 -
miR-125a-5p通过GSK-3β/Snail信号通路抑制乳腺癌细胞的上皮-间充质转化
目的:探讨微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)通过GSK-3β/Snail信号通路对乳腺癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响.方法:RT-qPCR检测人正常乳腺上皮细胞与乳腺癌细胞中miR-125a-5p的表达量,同时检测miR-125a-5p质粒在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中的转染效率;趋化运动实验与Transwell侵袭实验检测趋化运动能力和侵袭能力;Western blot检测EMT相关标志物的变化,同时检测磷酸化糖原合成酶激酶3β( p-GSK-3β)的蛋白水平及Snail的转核情况.结果:乳腺癌细胞中 miR-125a-5p的表达量明显低于人正常乳腺上皮细胞( P<0.05);miR-125a-5p在转染miR-125a-5p质粒的MDA-MB-231细胞中表达水平明显增高;MDA-MB-231细胞的趋化运动能力在表皮生长因子( EGF)浓度为10 μg/L时强;在EGF刺激下,与MDA-MB-231/NC细胞组相比,MDA-MB-231/miR-125a-5p细胞组的侵袭能力明显降低,上皮钙黏着蛋白( E-cadherin)表达量升高,波形蛋白( vimentin)和p-GSK-3β的蛋白水平明显降低,同时Snail转核受到明显抑制;与MDA-MB-231/miR-125a-5p+Con细胞组相比, MDA-MB-231/miR-125a-5p+GAB2细胞组的侵袭能力明显增强,E-cadherin表达量降低,vimentin和p-GSK-3β的蛋白水平明显升高,同时促进Snail转核.结论:miR-125a-5p可通过GSK-3β/Snail信号通路抑制乳腺癌细胞的EMT,进而抑制乳腺癌细胞的侵袭能力.
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lncRNA PCAT1表达下调抑制口腔鳞状细胞癌细胞的增殖、生长、侵袭、迁移及上皮-间充质转化
目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)PCAT1对口腔鳞状细胞癌(oral squa-mous cell carcinoma,OSCC)细胞的增殖、生长、侵袭及迁移的影响,并探讨其可能机制.方法:采用Lipofectamine 200将PCAT1 siRNA转染入OSCC细胞分别利用RT-qPCR和Western blot检测相关基因的mRNA及蛋白表达;分别利用CCK-8实验和集落形成实验检测OSCC细胞的增殖及生长能力;利用细胞侵袭实验和细胞迁移实验检测OSCC细胞的侵袭及迁移能力.结果:PCAT1在OSCC组织和细胞中的表达与癌旁正常组织和正常口腔细胞黏膜角质细胞相比显著上调(P<0.05).转染PCAT1 siRNA可以显著降低PCAT1在Tca8113和TSCCa细胞中的表达(P<0.05).PCAT1的低表达可以显著抑制Tca8133和TSCCa细胞的增殖、生长、侵袭及迁移(P<0.05).PCAT1在Tca8113和TSCCa细胞中的低表达可以抑制ZEB1、N-cadherin和vimentin的mRNA及蛋白表达,同时增加E-cadher-in的mRNA及蛋白表达(P<0.05).结论:沉默PCAT1能够抑制OSCC细胞的增殖、生长及转移,该作用可能与调控上皮-间充质转化有关.
关键词： 长链非编码RNAPCAT1 口腔鳞状细胞癌 细胞增殖 细胞迁移 上皮-间充质转化 -
IL-9通过TGF-β/Smad通路诱导胃癌MKN-45细胞上皮-间充质转化
目的:研究白细胞介素9(IL-9)通过激活转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号通路促进人胃癌MKN-45细胞上皮-间充质转化(EMT)的机制.方法:将常规培养的MKN-45细胞分为对照组和IL-9刺激组,利用CCK-8检测细胞活力;光镜下观察细胞形态的变化;RT-qPCR和Western blot检测EMT相关蛋白、TGF-β、Smad3和Smad5 mRNA和蛋白表达的变化;Transwell法检测细胞侵袭能力;免疫荧光染色检测细胞中波形蛋白(vimentin)的表达.结果:IL-9可以提高MKN-45细胞的存活率,且具有时间依赖性;IL-9刺激组关键转录因子Snail与Slug的表达上调,EMT相关蛋白N-cadherin、fibronectin、collagen I和vimentin表达上调,E-cadherin表达下调(P<0.05).Tr-answell结果显示IL-9组细胞侵袭能力增强,镜下观察迁移运动的细胞形态呈长梭形,RT-qPCR和Western blot结果显示TGF-β、Smad3和Smad5表达升高(P<0.05).结论:IL-9可以促进MKN-45细胞EMT,其作用与TGF-β/Smad信号的激活有关.
关键词： 白细胞介素9 TGF-β/Smad信号通路 上皮-间充质转化 胃癌 -
Akt/GSK-3β/Snail通路在TGF-β1诱导A549/DDP细胞上皮间质转化中的作用
目的:通过观察转化生长因子β1(TGF-β1)诱导前后Akt/GSK-3β/Snail信号通路相关分子的表达情况,探讨A549/DDP细胞发生上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的分子机制.方法:TGF-β1(5 μg/L)作用48 h,观察A549/DDP细胞的形态变化,并测定EMT标志物上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和神经型钙黏蛋白(N-cadherin)的表达情况,评估TGF-β1是否成功诱导A549/DDP细胞发生EMT.进一步将A549/DDP细胞分为TGF-β1(+) 组、TGF-β1(-) 组和LY294002组,应用Western blot法检测各组Akt/GSK-3β/Snail通路相关分子Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3βSer9和Snail的蛋白水平.结果:形态学观察可见TGF-β1( +) 组的细胞变得更加狭长,呈纺锤形,细胞间较为疏散,形态与间充质细胞相似.与TGF-β1( -) 组比较,TGF-β1( +)组E-cadherin蛋白表达下调, N-cadherin蛋白表达上调(P<0.05);各组间 Akt 和 GSK-3β 的蛋白表达水平并无明显差别,TGF-β1( +) 组的p-Akt、p-GSK-3βSer9和Snail蛋白水平较TGF-β1( -) 组明显增强(P<0.05);PI3K抑制剂LY294002与TGF-β1同时刺激细胞后,p-Akt、p-GSK-3βSer9和Snail的蛋白水平较TGF-β1( +) 组下调(P<0.05).结论:TGF-β1干预Akt/GSK-3β/Snail信号通路,促进Akt和GSK-3β的磷酸化,提高Snail的表达水平,诱导A549/DDP细胞发生EMT.
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Calreticulin 通过诱导细胞EMT促进鼻咽癌迁移和侵袭
目的:观察钙网蛋白(calreticulin,CRT)在鼻咽癌组织中的表达并分析其临床病理学意义,揭示其对鼻咽癌CNE2细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响.方法:S-P免疫组化法检测CRT在52例鼻咽癌组织和57例鼻咽部良性病变组织中的表达情况,并分析其临床病理学意义;构建特异性干扰CRT基因的小干扰RNA干扰载体,瞬时转染鼻咽癌CNE2细胞,观察CRT低表达对CNE2细胞形态的影响;Transwell迁移和侵袭实验检测CRT低表达对CNE2细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot检测CRT低表达对上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、转化生长因子-β(TGF-β)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)等EMT相关蛋白表达的影响.结果:CRT在鼻咽癌组织中的阳性表达率为82.69 %(43/52),在鼻咽部良性病变组织的阳性表达率为19.29%(11/57),CRT在鼻咽癌组织中表达显著增高(P<0.05);CRT的阳性表达率与鼻咽癌分期及淋巴结转移呈正相关(P<0.05).敲降CRT呈低表达后,CNE2细胞由梭形演变为扁平和鹅卵石样,且细胞排列紧密,细胞的迁移侵袭能力减弱(P<0.05).敲降CRT呈低表达后,E-cadherin表达显著增高,vimentin、TGF-β以及MMP-9蛋白的表达降低(P<0.05).结论:Calreticulin在鼻咽癌组织中表达显著增高,且与鼻咽癌临床分期及淋巴结转移呈正相关.Calreticulin 可诱导鼻咽癌CNE2细胞发生EMT,进而促进鼻咽癌的迁移和侵袭.
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胡桃醌通过调节W nt/β-catenin/Snail通路抑制前列腺癌细胞上皮-间充质转化
目的:探讨胡桃醌对人前列腺癌细胞上皮-间充质转化的抑制作用及其机制.方法:培养人前列腺癌LNCaP细胞,实验设置对照组(无胡桃醌)、12.5μmol/L胡桃醌组和25μmol/L胡桃醌组,后2组用胡桃醌作用LNCaP细胞24 h.采用Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western blot实验检测上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、β-连环蛋白(β-catenin)和Snail的蛋白表达水平;使用LiCl和胡桃醌联合作用LNCaP细胞后,Western blot实验检测Snail和E-cadherin的蛋白表达.结果:Transwell实验结果表明,与对照组相比,胡桃醌作用LNCaP细胞后侵袭能力下降(P<0.01).Western blot的结果表明,胡桃醌作用LNCaP细胞后E-cadherin的蛋白表达升高,vimentin和Snail及细胞核中β-catenin蛋白的表达降低(P<0.01).与胡桃醌组比较,胡桃醌与LiCl联合作用LNCaP细胞后Snail蛋白表达升高,E-cadherin蛋白表达降低(P<0.01).结论:胡桃醌可能通过抑制Wnt/β-catenin/Snail信号通路而抑制LNCaP细胞上皮-间充质转化.
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PTP4 A3基因对肿瘤生长及转移的影响
PTP4A3 is an oncogene,which encodes phosphatase of regenerating liver(PRL)-3 protein that is a metastasis-associated phosphorylase. At present,a number of studies have found that it promotes cell proliferation, cell motility,cell invasion,tumor metastasis and epithelial-mesenchymal transition. Therefore,it is inseparable with the occur-rence and development of cancer. Here,we summarize the relationship between PTP4A3 gene and the occurrence and de-velopment of cancer,the alteration of PTP4A3 gene expression and the functional role of PTP4A3 gene in a variety of canc-ers. This review will help us to understand the correlation between PTP4A3 gene and cancer as well as the mechanism of signaling pathway,providing new insights of PTP4A3 gene targeting strategy for treating cancer.
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Gli1调控口腔鳞状细胞癌上皮-间充质转化的研究进展
HH(hedgehog)信号通路轴由:hedgehoge配体(Shh、Ihh和Dhh)、Patch和Smo两个膜蛋白形成复合物以及下游锌指核转录因子Gli组成,HH信号通路中锌指核转录因子Gli家族以Gli1为主导并起到决定性作用.上皮-间充质转化与包括口腔鳞状细胞癌在内的多种肿瘤的侵袭和转移密切相关,关于口腔鳞状细胞癌与Shh/Gli1信号轴的作用研究报道较少见,现就口腔鳞状细胞癌发生上皮-间充质转化与Gli1的相关性研究进展作一综述.
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溶酶体组织蛋白酶L对人宫颈癌细胞HeLa迁移及侵袭能力的影响
目的 探讨溶酶体组织蛋白酶L(Cathepsin L)是否通过上皮-间充质转化(EMT)影响宫颈癌细胞的侵袭及迁移能力.方法 利用荧光定量PCR来检测人宫颈癌细胞HeLa、CaSki以及HeLa229中Cathepsin L的表达水平;设计并合成靶向Cathepsin L的特异性shRNA,通过脂质体转染法转染Cathepsin L表达高的宫颈癌细胞HeLa以构建稳定低表达Cathepsin L细胞株,通过Western blot和定量PCR来验证shRNA的干扰效率,拟将Cathepsin L-shRNA和空白对照载体转染HeLa细胞,并将构建好的稳定细胞株命名为HeLa/shRNA,空白组和对照组分别为HeLa和HeLa/Con.通过Transwell法检测干扰后细胞的迁移及侵袭能力,Western blot法检测EMT相关指标E-cadherin和N-cadherin以及其上游信号分子Snail、WNT-5a的变化.结果 Cathepsin L-shRNA转染后,能够有效抑制HeLa细胞中Cathepsin L的表达;Transwell法检测结果显示,Cathepsin L干扰组细胞侵袭及迁移能力显著低于阴性对照组(P ＜0.001).Western blot法检测结果发现,Cathepsin L干扰组细胞的E-cadherin表达增加,N-cadherin的表达降低;此外,Cathepsin L干扰组细胞的Snail、WNT-5a表达较对照组显著下降.结论 运用RNA干扰技术能够有效沉默HeLa细胞的Cathepsin L基因,并诱导其迁移侵袭能力的下降,其可能的机制是通过调节EMT的上游信号分子Snail、WNT-5a的表达来调控EMT,从而影响宫颈癌细胞的迁移及侵袭.提示Cathepsin L在宫颈癌的发生发展中起重要作用,抑制Cathepsin L的表达可能成为一种治疗宫颈癌的新方法.
关键词： Capthesin L 上皮-间充质转化 宫颈癌 -
Prefoldin 1对乳腺癌BT474细胞上皮-间充质转化的影响
目的 探讨Prefoldin 1(PFDN1)对乳腺癌BT474细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响.方法 将PFND1基因RNA干扰真核表达载体和空白对照基因表达载体导入BT474细胞,构建转染组及空白转染组,另设未转染组.通过Transwell侵袭实验和迁移实验检测细胞侵袭和迁移能力,采用real-time PCR和western blot检测EMT标志分子E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达水平.结果 转染组PFND1 mRNA和蛋白表达显著低于其他两组(P<0.05).转染组细胞侵袭和迁移能力低于其他两组(P<0.05).转染组E-cadherin表达明显强于其他两组(P<0.05),N-cadherin、Vimentin表达明显低于其他两组(P<0.05).结论 PFDN1能够促进乳腺癌BT474细胞EMT转化.
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microRNA-181b-3p对人胆囊癌细胞侵袭能力的影响
目的 探究miR-181b-3p对胆囊癌细胞侵袭转移能力的影响并初步探讨其机制.方法 采用real time PCR检测胆囊癌组织及正常组织中miR-181b-3p的含量;通过Transwell实验检测miR-181b-3p对胆囊癌细胞侵袭转移能力的影响;Western blot检测miR-181b-3p对E-钙黏蛋白、波形蛋白表达的影响,并探究miR-181b-3p与E-钙黏蛋白表达的相关关系.结果 PCR显示胆囊癌组织中miR-181b-3p表达量(9.22±5.74)明显高于正常组织(2.54±1.27)(t=3.213,P=0.0063).Transwell实验表明miR-181b-3p过表达组侵袭转移的细胞数量为(811.40±179.53)个,明显高于对照组的(231.00±61.22)个(LSD-t=8.357,P=0.0009);而miR-181b-3p下调组侵袭转移的细胞数量为(28.80±13.81)个,明显低于其对照组的(231.00±61.22)个(LSD-t=2.912,P=0.0012).Western blot实验表明上调miR-181b-3p使胆囊癌细胞E-钙黏蛋白表达减少,波形蛋白表达增加,下调则得到相反结果;通过统计学分析表明,胆囊癌组织中E-钙黏蛋白表达量与miR-181b-3p含量存在负相关关系.结论 miR-181b-3p通过促进胆囊癌细胞的上皮-间充质转化,增强了其侵袭转移能力,提示miR-181b-3p在胆囊癌侵袭转移过程中起着重要作用,有望成为胆囊癌治疗的潜在靶点.
关键词： 胆囊癌 miR-181b-3p 侵袭 转移 上皮-间充质转化 -
REGγ促进人乳腺癌MDA-MB-231细胞株发生上皮-间充质转化的研究
目的:研究REGγ基因促进人乳腺癌细胞株MDA-MB-231发生上皮-间充质转化的生物作用.方法:免疫组化检测乳腺癌组织、与癌旁组织REGγ的表达差异以及转移淋巴结中REGγ的表达水平.Western blot和RT-PCR检测不同人乳腺癌细胞系REGγ的表达差异.构建REGγ基因过表达和干扰载体并将其导入MDA-MB-231细胞中, 然后用RT-PCR和细胞免疫荧光分别从转录水平和蛋白质水平检测上皮-间充质转化细胞标记物的表达水平的变化.分别通过划痕实验和Transwell证实REGγ对细胞侵袭迁移能力的影响.结果:免疫组化提示REGγ在乳腺癌组织 (阳性表达率为88.57％) 和转移淋巴结 (阳性表达率为87.5％) 中较癌旁组织 (阳性表达率为0) 明显高表达 (χ2=25.390, P=0.000;χ2=12.440, P=0.000) .MDA-MB-231细胞过表达REGγ后促进细胞发生上皮-间充质转化, 使细胞侵袭能力增强 (t=22.974, P=0.000) ;干扰REGγ后抑制上皮-间充质转化, 使细胞侵袭能力减弱 (t=12.118, P=0.000) .结论:REGγ促进人乳腺癌MDA-MB-231细胞发生上皮-间充质转化, 并促进肿瘤细胞侵袭转移.
关键词： REGγ MDA-MB-231 上皮-间充质转化 -
幽门螺杆菌诱导胃癌细胞上皮-间充质转化的研究
目的 探讨幽门螺杆菌对胃癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的诱导作用.方法 设置空白对照组、实验组和阳性对照组,分别以幽门螺杆菌SS1菌株和转化生长因子-β(TGF-β)刺激胃黏膜上皮GES-1细胞、胃癌SGC-7901细胞.采用Transwell小室检测细胞纵向迁移能力;Western blot法测定EMT相关蛋白的表达变化规律;荧光共聚焦显微镜观察β-catenin的分布变化.结果 Transwell实验结果显示经幽门螺杆菌SS1菌株刺激后,GES-1细胞和SGC-7901细胞的迁移数目明显多于空由对照组,少于阳性对照组.Westernblot显示幽门螺杆菌SS1菌株能抑制GES-1细胞和SGC-7901细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达,上调SGC-7901细胞N-eadherin、Twist和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达,但对GES-1细胞N-cadherin和Vimentin的表达水平无明显影响.免疫荧光结果表明未接受刺激的两种细胞的β-catenin分布于胞质,而接受幽门螺杆菌SS1菌株刺激后β-catenin向细胞核移位.结论 幽门螺杆菌能诱导胃癌SGC-7901细胞发生EMT,促进胃癌细胞迁移.
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23kDa亚型肝再生增强因子在肾纤维化过程中表达水平检测及意义研究
目的 通过构建转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)上皮-间质转化(EMT)模型及单侧输尿管梗阻术(UUO)模型,观察内源性ALR表达情况.方法 体外培养HK-2细胞,给予不同浓度TGF-β1处理,以蛋白质印迹法(Western blotting)检测E-钙黏附蛋白、波形蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应、Western blotting、细胞免疫荧光检测ALR表达水平.构建UUO模型大鼠,以Western blotting检测不同组别ALR表达水平.结果 与对照组相比,TGF-β1处理HK-2细胞E-钙黏附蛋白表达水平降低、波形蛋白表达水平增加(P<0.05),内源性23 kDa ALR mRNA及蛋白表达水平增加(P<0.05),ALR免疫荧光增强.UUO模型大鼠中,与假手术组相比,UUO术后7 d内23 kDa ALR表达水平增加(P<0.05),术后14 d 23 kDa ALR表达水平较术后7 d下降(P<0.05).结论 TGF-β1处理HK-2细胞及UUO模型大鼠23 kDa ALR表达水平增加;ALR可能参与了线粒体的氧化应激及凋亡过程.
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TGF-β1通过EMT促进肝癌细胞株MHCC97L的转移
目的 构建TGF-β1真核表达载体,转染低转移MHCC97L肝癌细胞株,检测该肿瘤细胞的迁移、增殖能力,为阐明TGF-β1在肝癌细胞迁移中的作用奠定基础.方法 构建真核表达质粒,转染MHCC97L肝癌细胞株,荧光定量PCR和Westernblot检测其上皮-间充质转化(EMT)标志因子的表达,细胞划线和MTI增殖检测细胞的迁移和增殖.结果 MHCC97L-TGF-β1细胞比MHCC97L细胞E-cadherin的表达水平下降,而N-cadherin、Fibronectin和Vimentin的表达水平显著升高;MHCC97L-TGF-β1细胞的迁移能力增强,但细胞的增殖能力下降.结论 TGF-β1在低转移的肿瘤细胞株MHCC97L的表达,增强了细胞的迁移能力,为进一步体外和动物实验奠定了基础,也为肝癌转移的临床治疗提供了借鉴.
关键词： 肝癌 转化生长因子-β1 MHCC97肝癌细胞株 转移 上皮-间充质转化 -
CK2α通过PI3K/Akt/GSK-3β信号通路调控肺腺癌A549细胞的侵袭及迁移
背景与目的 肺癌已成为全球癌症死亡的首要原因,而侵袭和转移是导致肿瘤死亡的主要原因之一,蛋白激酶CK2是一种高度保守信使非依赖性丝氨酸苏氨酸蛋白激酶,其在各种肿瘤中高表达.本研究旨在探讨下调CK2α基因表达对肺腺癌A549细胞侵袭迁移的影响以及可能的机制.方法 构建pSilencerTM4.1-shCK2α-eGFP慢病毒表达载体,建立稳定干扰CK2α表达的A549细胞株.利用Transwell和Boyden小室实验检测干扰CK2α表达前后A549细胞的侵袭及迁移的能力.Western blot检测PI3K/Akt信号通路和上皮-间充质转化(mesenchymal-to-epithelial transition,EMT)相关蛋白的表达.结果 与对照组相比,干扰CK2α表达后肺腺癌A549细胞的侵袭及迁移能力明显下降,p-PTEN、Akt、p-Akt473、p-Akt308、p-PDK1、p-c-Raf、p-GSK-3p蛋白明显下调,PTEN蛋白表达水平显著上调.上皮-间充质转化的相关蛋白E-cadherin蛋白表达水平显著上调,而Vi-mentin、p-catenin、Snail蛋白表达水平显著下调,与侵袭转移相关蛋白的MMP2、MMP9表达水平显著下调.结论 CK2α可能通过PI3K/Akt/GSK-3p/Snail信号通路来调控上皮-间充质转化参与肺腺癌A549细胞的侵袭及迁移.
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上皮-间充质转化的生物学作用
上皮-间充质转化(EMT)描述的是上皮细胞在外界因素的作用下,获得某些间充质细胞特征(如极性丧失、细胞骨架蛋白的改变和成纤维细胞样外形等)的现象,其在许多生理和病理过程中都具有重要的作用.学者们近年来对EMT生物学作用的研究主要围绕胚胎发育、损伤修复、脏器纤维化以及癌症的发生和发展等几个方面展开.因此,本文拟从上述几个方面对EMT的生物学作用作一综述,以期为某些疾病的诊断和治疗提供新的视点和思路.
