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CD146对获得性Erlotinib耐药肺腺癌细胞上皮-间充质转化的影响
目的 探讨CD146对获得性Erlotinib耐药肺腺癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的作用及机制.方法 采用不同浓度的Erlotinib作用于肺腺癌细胞株H1650,诱导其产生耐药(H1650ER);免疫荧光法及Western blot检测耐药前后上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、CD146的表达变化;小干扰RNA(siRNA)干扰H1650ER细胞中CD146的表达,利用Transwell侵袭小室及细胞计数试剂盒(CCK-8)实验分别评价肺腺癌细胞侵袭及增殖能力,Western blot 检测相关蛋白的表达变化.结果 获得性Erlotinib耐药肺腺癌细胞H1650ER中CD146及Vimentin 蛋白的表达量分别为0.474±0.013和0.465±0.012,显著高于耐药前(P＜0.05);而E-cadherin蛋白的表达量为0.180±0.011,明显低于耐药前(P＜0.05).CD146-siRNA干扰H1650ER细胞CD146的表达后可明显抑制其增殖能力,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);CD146-siRNA干扰后细胞侵袭力亦下降(P＜0.05).结论 获得性Erlotinib耐药肺腺癌产生EMT并CD146表达显著上调;抑制CD146的表达可下降其侵袭及增殖能力.
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Krüpple样转录因子12在结直肠癌组织表达及其与肿瘤上皮-间充质转化的关系
目的 探讨Krüpple样转录因子12(KLF12)参与结直肠癌上皮-间充质转化(EMT)的机制.方法 应用免疫组织化学技术检测85例结直肠癌手术患者肿瘤与癌旁肠黏膜组织中KLF12及E-钙黏素(E-cadherin)、N-钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Snail蛋白表达,患者均有完整的临床及随访资料.合成KLF12-小干扰RNA(siRNA)转染结肠癌细胞株HT29;噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;划痕实验和Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力;荧光实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测各基因的mRNA和蛋白表达.结果 免疫组织化学结果显示结直肠癌组织中KLF12、N-cadherin、Vimentin、Snail蛋白阳性率明显高于癌旁肠黏膜,而E-cadherin在肿瘤组织中的阳性率低于癌旁肠黏膜(x2=43.724、26.145、35.788、10.985、59.225,P =0.000).KLF12蛋白阳性表达的患者肿瘤浸润程度较深(x2=7.773,P=0.005).KLF12蛋白阳性表达的患者生存率低于阴性者(x2=8.724,P=0.003).各结肠癌细胞株中,HT29的KLF12蛋白表达强(P =0.000).抑制HT29细胞KLF12表达后细胞的活性及迁移和侵袭能力明显减弱(F=22.541、15.002、21.908,P=0.000);抑制HT29细胞KLF12表达后N-cadherin、Snail表达减弱,E-cadherin表达增强(P=0.000).结论 KLF12通过参与了肿瘤的EMT过程来促进结直肠癌的侵袭转移.
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肠癌SW620和SW480细胞高表达Smad4的作用及机制
目的 探讨SW620和SW480细胞株中高表达Smad4后迁移及侵袭力的变化及作用机制.方法 利用Western blot从肠癌细胞系SW620、SW480、RKO/ HCT-116、LoVo、HCT-8中筛选出符合实验要求的细胞株.慢病毒载体构建稳定表达Smad4的细胞株,并通过Western blot检验构建效果.利用Westem blot检测上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化Eph受体酪氨酸激酶A2(p-EphA2)表达,Transwell检测迁移和侵袭力的变化.结果 SW620和SW480低表达Smad4和高表达转化生长因子-β受体(TGF-βR)Ⅰ/Ⅱ,高表达EphA2,SW480和SW620细胞高表达Smad4后明显表现出上皮细胞的特性,E-cadherin表达明显升高,Vimentin表达降低,但MMP-9在SW620无明显改变,在转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激下,E-cadherin、Vimentin、MMP-9表达没有明显的改变;Smad4高表达阻止癌细胞迁移(SW480:V/S=75.00±15.90/38.60±11.80,P=0.001,SW620:V/S =71.20±17.56/32.80±8.90,P=0.002)和侵袭(SW480:V/S=102.20±8.90/43.20±8.80,P=0.001、SW620:V/S=101.40±11.60/43.00±6.73,P=0.004),但TGF-β1对迁移(SW480:S/TS=38.60±11.80/32.80±19.79,P=0.648、SW620:S/TS=32.20±8.90/28.60±15.90,P=0.0.529)和侵袭(SW480:S/TS=43.00±8.80/37.00±7.68,P=0.360、SW620:S/TS =43.60±6.73/40.40±8.52,P=0.679)无影响.结论 Smad4通过阻断磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/EphA2轴线,减弱癌细胞的迁移及侵袭力.
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结肠癌细胞上皮间质转化对β1整合素表达及裸鼠体内肝转移的影响
目的 观察结肠癌SW480细胞发生上皮-间充质转化(EMT)对β1整合素表达及裸鼠体内肝转移的影响.方法 用10 μg/L转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导72 h后检测SW480细胞发生EMT.实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测EMT前后SW480细胞β1整合素mRNA表达.裸鼠开腹于脾脏被膜下注射SW480细胞建立体内肝转移模型,30 d后处死裸鼠,计算肝转移癌的数量、大小及重量.结果 EMT后SW480细胞β1整合素mRNA表达较EMT前明显增强(t=3.764.P＜0.05);EMT后结肠癌细胞裸鼠体内肝转移的数量为(9.92±1.44)个/只、体积为(33.82±0.33) mm3/只、重量为(0.231 5 ±0.0046)g/只,均较EMT前[肝转移的数量为(4.44±0.96)个/只、体积为(16.64±0.61) mm3/只、重量为(0.118 3±0.003 7)g/只]明显增高(P＜0.05).结论 结肠癌细胞发生EMT后β1整合素表达升高,体内肝转移能力增强.
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结肠癌细胞上皮-间充质转化后β1整合素表达变化及意义
目的 观察SW480结肠癌细胞上皮-间充质转化(EMT)后β1整合素表达变化,探讨其对结肠癌细胞体外侵袭力的影响.方法 用10 μg/L转化生长因子-β1(TGF-β1)处理72 h后检测SW480结肠癌细胞发生EMT.实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot方法分别检测转化前后癌细胞β1整合素mRNA和蛋白的表达;体外侵袭实验检测转化前后SW480细胞的体外侵袭能力.结果 EMT后结肠癌细胞β1整合素mRNA表达较转化前明显增强(t=3.764,P＜0.05);EMT后结肠癌细胞β1整合素蛋白表达(0.430±0.021)较转化前(0.172 ±0.034)明显增强(P＜ 0.05);Transwell细胞侵袭实验显示EMT后结肠癌细胞的穿膜细胞数[(137±9)个]较转化前[(36±4)个]明显增多(P＜0.05).结论 结肠癌细胞EMT后β1整合素表达升高,其体外侵袭力增强.
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雌激素受体α和肿瘤转移相关基因3在胰腺癌组织的表达及临床意义
目的 探讨雌激素受体α(ERα)、肿瘤转移相关基因3(MTA3)在胰腺癌(PDAC)组织的表达以及其与胰腺癌上皮-间充质转化(EMT)的关系.方法 应用免疫组织化学,在人胰腺癌组织中检测ERα、MTA3以及EMT的关键因子:Snail、E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达,并在人胰腺癌细胞株中进行验证.结果 ERα大部分表达在胞质中,ERα的表达强度和患者的性别、肿瘤的分化等差异均无统计学意义.50％的胰腺癌患者中发现MTA3阳性,60％的胰腺癌患者中发现Snail阳性,E-cadherin在80％的胰腺癌病例中表达.MTA3但淋巴结阴性组的MTA3表达[阳性着色细胞数的百分比(PP):1.39分、免疫组织化学得分(IRS):2.67分]要高于淋巴结阳性组(PP:0.81分、IRS:2.06分),Snail表达在低分化组中的表达(PP:1.61分、IRS:3.50分)高于中-低分化(PP:1.54分、IRS:2.69分)和中分化组(PP:1.40分、IRS:2.67分).E-cadherin则随着分化差而表达越弱,差异有统计学意义(P=0.026).在MTA3表达阳性的患者中,仅有32％的病例Snail表达,低于Snail的平均表达;而在Snail表达阳性的病例中,E-cadherin表达的只有52％,也低于E-cadherin的平均表达.胰腺癌细胞株中的实验结果也验证了在人胰腺癌组织中的结果.结论 ERα、MTA3、Snail、E-cadherin信号通路各相关因子在人胰腺癌组织中均有表达,ERα可以作为一个靶点对此通路进行干预.ERα→MTA3→Snail→E-cadherin信号通路在部分PDAC细胞中存在.MTA3是EMT的抑制因子,MTA3高表达,EMT被抑制,肿瘤侵袭性低,分化较好.
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胰腺星状细胞促胰腺癌细胞上皮-间充质转化的机制
目的 探讨胰腺星状细胞(PSC)促胰腺癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的机制.方法 将PSC与胰腺癌PANC-1直接共培养,通过向共培养体系中加入信号通路抑制剂及转染Notch-3小干扰RNA(siRNA),观察共培养后PANC-1细胞形态的变化,双层小室迁移实验观察PANC-1运动能力,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测Notch-3、E-钙黏蛋白及波形蛋白表达变化,以判断细胞是否发生EMT.结果 PSC可诱导PANC-1细胞发生EMT;促进细胞迁移[单独培养比共培养,(16.4±2.6)/HP比(51.6±4.5)/HP,P=0.001];L1790(5μmol/L,Notch信号通路阻断剂)能显著抑制PSC导致PANC-1细胞迁移能力的增加,并抑制EMT现象的发生;Notch-3 siRNA可成功抑制Notch-3基因的表达,并阻断由PSC导致的PANC-1细胞迁移能力增加,扭转EMT现象.结论 Notch-3在PSC诱导的PANC-1EMT过程中发挥重要作用.
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多形性腺瘤基因样因子2在胃癌组织中的表达及其影响胃癌细胞侵袭、上皮-间充质转化的机制
目的 观察多形性腺瘤基因样因子2(PLAGL2)在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达,探讨其对胃癌细胞侵袭、上皮-间充质转化(EMT)的影响及分子机制.方法 采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot方法检测PLAGL2 mRNA和蛋白在胃癌及相应癌旁组织和人胃癌MKN-28、BGC-823、NCI-N87、SGC-7901细胞株中的表达.将PLAGL2小干扰RNA (siRNA)转染SGC-7901细胞,Real-time PCR、Western blot检测PLAGL2mRNA和蛋白表达,Transwell侵袭实验检测敲低PLAGL2对细胞侵袭的影响,Western blot检测敲低PLAGL2对EMT相关分子标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关分子表达的影响.分别采用Wnt/β-catenin信号通路激活剂SKL2001和抑制剂XAV939处理转染PLAGL2-siRNA的SGC-7901细胞,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭变化.结果 PLAGL2mRNA和蛋白在胃癌组织中的表达量(mRNA:1.11±0.27;蛋白:0.98±0.26)高于癌旁组织(mRNA:0.37±0.10;蛋白:0.28±0.11;t=-20.941,P＜0.01;t=-20.186,P＜0.01).PLAGL2mRNA和蛋白在胃癌细胞株MKN-28、BGC-823、NCI-N87、SGC-7901中的表达量高于人胃黏膜正常细胞GES-1(mRNA:t=-12.327,P＜ 0.01;t=-19.812,P＜ 0.01;t=-13.080,P＜ 0.01;t=-15.218,P＜0.01;蛋白:t=-11.816,P＜0.01;t=-21.162,P＜0.01;t=-14.517,P＜0.01;t=-15.899,P＜0.01).转染后,SGC-7901的PLAGL2 mRNA和蛋白表达(mRNA:2.10±0.29;蛋白:1.96±0.27)较Control siRNA组(mRNA:6.61±0.73;蛋白:6.46±0.71)显著降低(t=-1.000,P＜0.01;t=-1.000,P＜0.01).转染24、48、72 h后PLAGL2-siRNA组侵袭细胞数[(30.75±5.74)、(48.75±6.90)、(64.50±4.80)个]较Control siRNA组[(51.00±4.97)、(75.75±4.92)、(132.50±5.57)个]显著减少(t=-1.000,P＜ 0.05;t=-1.000,P＜ 0.01;t=-1.000,P＜ 0.01),同时N-cadherin、Vimentin、β-catenin、基质金属蛋白酶(MMP)-7、c-Myc蛋白表达显著降低,E-cadherin蛋白表达显著增高(t=-1.000,P＜0.01;t=-1.000,P＜0.01;t=-1.000,P＜0.01;t=-1.000,P＜0.01;t=-1.000,P＜ 0.01;t=-8.205,P＜ 0.01).此外,SKL2001能够逆转敲低PLAGL2对SGC-7901细胞侵袭的抑制作用,XAV939则能够进一步加强以上作用.结论 胃癌组织PLAGL2表达上调,siRNA干扰PLAGL2可通过抑制Wnt/β-cateninn信号通路的激活和EMT抑制胃癌侵袭.
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同源异型核基因1诱导乳腺癌细胞发生上皮-间充质转化对三苯氧胺耐药的研究
目的 观察同源异型核基因1 (Prrx1)过表达诱导乳腺癌细胞发生上皮-间充质转化(EMT)对三苯氧胺(TAM)耐药的影响.方法 脂质体转染法转染Prrx1低表达细胞株MCF-7细胞,实验组细胞为转染Prrx1基因的MCF-7细胞,空白对照组为转染空白载体的MCF-7细胞,阴性对照组为MCF-7细胞,倒置荧光显微镜观察转染效率,Western blot验证转染成功,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Prrx1对E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)及波形蛋白(Vimentin) mRNA表达水平的影响后,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测3组细胞对三苯氧胺的耐药性.结果 转染后荧光效率达80％以上,实验组Prrx1蛋白表达水平明显高于对照组,且差异有统计学意义(P=0.000),两对照组之间差异无统计学意义(P =0.326).Prrx1 mRNA在阴性对照组、空白对照组、实验组中CT值分别为13.502±0.360、13.770±0.642、5.203±0.231,实验组Prrx1 mRNA表达水平为阴性对照组的320倍;E-cad mRNA在阴性对照组、空白对照组、实验组CT值分别为18.471 ±0.076、18.611±0.108、19.394±0.400,实验组E-cad mRNA表达水平为阴性对照组的0.560倍;Vimentin mRNA在阴性对照组、空白对照组、实验组CT值分别为19.422±0.082、19.484 ±0.021、17.817 ±0.061,实验组Vimentin mRNA表达水平为阴性对照组的3.030倍.三苯氧胺作用24h后,实验组半数抑制浓度(IC50)明显高于阴性对照组(P =0.000)和空白对照组(P =0.000),差异有统计学意义,而阴性对照组和空白对照组之间差异无统计学意义(P=0.150).结论 Prrx1过表达可诱导MCF-7细胞发生EMT现象促进对三苯氧胺产生耐药.
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转化生长因子-β1通过诱导上皮-间充质转化促进乳腺癌细胞侵袭转移的研究
目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)通过诱导乳腺癌细胞上皮-间充质转化(EMT)影响细胞侵袭迁移能力及相关分子机制.方法 5μg/L TGF-β1作用于人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S,诱导细胞发生EMT后,应用脂质体2000瞬时转染小干扰RNA(siRNA)沉默Smad2的表达,观察乳腺癌细胞的形态学变化,并通过Western blot检测Smad2静默前后细胞角蛋白、E-钙黏素、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白、Smad2、磷酸化Smad2(p-Smad2)的表达变化;通过Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力的改变.结果 TGF-β1作用72h后,乳腺癌细胞株MDA-MB-435S部分细胞由多角形转变为成纤维样细胞形态,间充质细胞标志物α-SMA、波形蛋白表达分别上调了3.86倍和1.17倍(P＜0.01);上皮细胞标志物细胞角蛋白、E-钙黏素蛋白表达分别下降了63％和70％ (P ＜0.01),p-Smad2表达明显上调1.2倍(P＜0.01);侵袭的细胞数(79.20 ±7.35)明显多于空白组(48.93±5.43),差异有统计学意义(P＜0.05).沉默Smad2的表达后细胞角蛋白表达升高了44％(P＜0.01),波形蛋白表达下降了59％ (P ＜0.01),干扰组细胞侵袭数目(54.34 ±6.09)显著低于对照组(75.09 ±4.98),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 体外TGF-β1能够诱导乳腺癌细胞EMT,增强乳腺癌细胞侵袭转移能力;Smad2信号转导通路在乳腺癌细胞EMT中起重要作用.
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微小RNA-21通过调控上皮-间充质转化对胆管癌细胞侵袭与转移的影响
目的 观察微小RNA-21(miR-21)通过调控上皮-间充质(EMT)转化进程对胆管癌细胞的侵袭转移的影响.方法 构建合成无关序列、miR-21 mimics和miR-21 inhibitor并转染到胆管癌QBC939及RBE细胞中,实验设自然生长组(Cell组)、转染无关序列组(Cell-NC组)、转染miR-21mimics组(Cell-21M组)及转染miR-21 inhibitor组(Cell-21I组).通过实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-21在各组细胞中的表达;采用划痕实验、Transwell侵袭及迁移实验检测各组细胞侵袭力;RT-qPCR、Western blot检测EMT相关分子E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)的mRNA及蛋白表达.结果 在胆管癌QBC939和RBE细胞中,Cell组与Cell-NC组miR-21表达差异无统计学意义(P＞0.05),Cell-21M组较Cell组表达增高,而Cell-21I组表达降低(P＜0.05).Cell-21M组细胞侵袭迁移能力增加,Cell-21I组细胞侵袭迁移能力减弱(P＜0.05).同时,Cell组与Cell-NC组E-cadherin、N-cadherin及Vimentin mRNA及蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05),Cell-21M组较Cell组E-cadherin mRNA及蛋白表达降低,N-cadherin及Vimentin mRNA及蛋白表达增高,Cell-21I组E-cadherin mRNA及蛋白表达增高,N-cadherin及Vimentin mRNA及蛋白表达均降低(P＜0.05).结论 miR-21能够诱导胆管癌细胞发生EMT转化,促进胆管癌细胞的侵袭与转移.
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自噬对人胶质细胞瘤细胞上皮-间充质转化和侵袭力的影响
目的 观察自噬对人胶质细胞瘤上皮-间充质转化(EMT)的作用和对其侵袭力的影响.方法 以Hank's平衡盐缓冲液营养剥夺培养人胶质细胞瘤细胞株SHG-44,以诱导自噬,观察SHG-44细胞上皮间质标志表达和侵袭力变化.同时构建转染针对自噬基因Atg3的小干扰RNA(siRNA-Atg3),抑制营养剥夺条件下SHG-44细胞自噬,分析自噬抑制前后,SHG-44细胞上皮间质标志表达和侵袭力变化,探讨自噬对人胶质细胞瘤细胞EMT和侵袭力的影响.结果 平衡盐缓冲液显著诱导人胶质细胞瘤SHG-44细胞自噬,其上皮标志胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达下调,而间质标志波形蛋白(Vimentin)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达上调,细胞侵袭数显著增加[(18100±1500)个比(68750±3350)个,t=864.345,P=0.001].对SHG-44细胞转染siRNA-Atg3后,营养剥夺诱导的自噬活性明显受抑制,较对照组细胞,未出现明显上皮间质标志表达改变,细胞侵袭数也显著下降[(68750±3350)个比(25450±1450)个,t=565.441,P=0.001].结论 自噬可显著诱导人胶质细胞瘤细胞EMT和促进其侵袭.
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第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白的同源基因通过减少上皮-间充质转化来抑制胆管癌细胞QBC939的迁移能力
目的 探讨第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白的同源基因(PTEN)对胆管癌细胞株QBC939迁移能力的抑制作用及其机制.方法 取4μg PTEN质粒转染胆管癌细胞株QBC939,转染72 h后,采用Transwell迁移实验和Western blot检测上调PTEN对QBC939细胞迁移能力和上皮-间充质转化(EMT)中重要的分子标志物表达的影响.结果 人胆管癌细胞株QBC939经PTEN质粒转染72 h后,其通过基质膜细胞数目比较对照组数目减半(P＜0.01),迁移能力减弱,与EMT相关分子标志物Slug、Snail、波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平降低,磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路中的磷酸化Akt (p-Akt)蛋白表达也明显减少.结论 PTEN可以通过抑制EMT进而影响胆管癌细胞迁移,PTEN对EMT的抑制作用可能是由PI3K/Akt信号通路调节的.
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溶酶体组织蛋白酶L对人卵巢癌SKOV3细胞迁移及侵袭的作用
目的 探讨溶酶体组织蛋白酶L(Cathepsin L)是否通过上皮-间充质转化(EMT)影响卵巢癌细胞的侵袭及迁移能力.方法 荧光定量PCR法检测人卵巢癌细胞ES-2、SKOV3、OV1以及OV2中Cathepsin L的表达水平;设计并合成靶向Cathepsin L的特异性shRNA,通过脂质体转染法转染Cathepsin L表达高的卵巢癌细胞SKOV3以构建稳定低表达Cathepsin L细胞株,Western blot和定量PCR法验证shRNA的干扰效率;划痕实验及Transwell法检测干扰后细胞的迁移及侵袭能力,Western blot法检测EMT相关指标E-cadherin和N-cadherin以及其上游信号分子Snail、p-AKT的变化.结果 四株卵巢癌细胞中,SKOV3的Cathepsin L表达水平高(以此为参照),而ES-2、OV1以及OV2细胞的表达水平分别为0.72±0.04、0.34±0.03和0.55±0.05.Cathepsin L-shRNA转染SKOV3细胞后,SKOV3/shRNA中的Cathepsin L的表达水平较空白组和对照组显著下降;划痕12 h和24 h后,SKOV3/shRNA组的细胞迁移能力明显受到抑制;SKOV3、SKOV3/Con和SKOV3/shRNA组的穿膜细胞数分别为(93.67±8.62)、(90.33±12.22)、(35.67±4.73),与对照组相比,SKOV3/shRNA组细胞侵袭能力受到显著抑制(P＜0.01);Cathepsin L干扰组细胞的E-cadherin表达增加,N-cadherin的表达降低;此外,Cathepsin L干扰组细胞的Snail、p-AKT表达较对照组显著降.结论 Cathepsin L可以促进卵巢癌细胞的迁移和侵袭;其机制可能与调节EMT的上游信号分子Snail、p-AKT有关.提示Cathepsin L在卵巢癌的发生发展中起重要作用.
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HPIP基因siRNA对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞上皮-间充质转化及凋亡的影响
目的:探讨抑制HPIP基因表达对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及凋亡的影响.方法:10 ng/mL的TGF-β1刺激HK-2细胞24,48 h,Western印迹法检测HPIP蛋白表达.将HK-2细胞随机分为空白组、TGF-β1组和TGF-β1+si-HPIP组,处理24 h后,Western印迹法检测HPIP,E-cadherin,α-SMA,N-cadherin,Snail,Twist,t-AKT,p-AKT和Bax蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:TGF-β1刺激HK-2细胞24,48 h后HPIP蛋白表达均显著高于对照组(0 h)(P＜0.05).TGF-β1组E-cadherin蛋白表达显著低于空白组,α-SMA,N-cadherin,Snail,Twist,p-AKT和Bax蛋白表达及细胞凋亡率均显著高于空白组(P＜0.05),而TGF-β1+si-HPIP组E-cadherin蛋白表达显著高于TGF-β1组,α-SMA,N-cadherin,Snail,Twist,p-AKT和Bax蛋白表达及细胞凋亡率均显著低于TGF-β1组(P＜0.05).结论:抑制HPIP基因表达可延缓肾小管上皮细胞EMT进程和降低细胞凋亡率,机制可能与下调PI3K/AKT信号有关.
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MicroRNA-197调控上皮-间充质转化对乳腺癌侵袭和迁移的影响
目的:探讨微小RNA-197(miR-197)抑制乳腺癌细胞迁移和侵袭的能力,以及阻断上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程的机制.方法:构建miR-197过表达载体(miR-197 mimics),分别转染MDA-MB-231和MCF-7细胞,并设对照组;Real-time PCR分别检测以上各组细胞miR-197的表达水平变化;利用Transwell实验和划痕实验对乳腺癌细胞侵袭和迁移能力进行检测;Western印迹法检测过表达miR-197后对EMT相关标志物E-cadherin,snail和vimentin表达的影响.结果:MiR-197可以抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的迁移和侵袭能力;转染miR-197mimics后,E-cadherin表达降低,snail和vimentin表达增加.结论:MiR-197有可能作为乳腺癌临床治疗的新靶点.
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8-溴-7-甲氧基白杨素抑制小细胞肺癌细胞上皮-间充质转化作用及其机制探讨
目的 探讨8-溴-7-甲氧基白杨素(BrMChR)抑制人小细胞肺癌细胞(NCI-H446细胞)中上皮-间充质转化(EMT)的作用机制,为寻找特异性阻断人小细胞肺癌的新型靶向治疗药物提供实验依据.方法 ①体外培养NCI-H446细胞,倒置相差显微镜观察NCI-H446细胞形态;②细胞因子IL-6(0、0.5、1.0、5.0、10、20 ng·mL-1)诱导NCI-H446细胞发生EMT改变;③Western blot检测不同浓度BrMChR(0、0.5、1.0、5.0 μmol·mL-1)对STAT3、p-STAT3、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达.结果 ①IL-6诱导NCI-H446细胞发生EMT,形成伪足,从椭圆形或圆形上皮细胞形态转变成梭形、多边形.p-STAT3蛋白表达升高、E-cadherin蛋白表达降低、N-cadherin蛋白表达增高.②BrMChR降低STAT3、p-STAT3、N-cadherin蛋白表达,升高E-cadherin蛋白表达.结论 BrMChR能通过抑制IL-6/STAT3信号通路阻断EMT发生,其作用机制可能与降低STAT3、p-STAT3、N-cadherin蛋白表达、升高E-cadherin蛋白表达有关.
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IL-8对THP-1巨噬细胞共培养SKOV3细胞EMT和Twist1蛋白表达的影响
目的:研究白介素-8 (IL-8)对THP1巨噬细胞共培养卵巢癌SKOV3细胞上皮-间充质转化(EMT)和Twist1蛋白表达的作用.方法:建立THP-1巨噬细胞/SKOV3细胞Transwell共培养系统,并制备共培养条件培养基(Co-CM).完全培养基、Co-CM、添加重组人IL-8(rhIL-8:10ng/mL)完全培养基或抗-IL-8中和抗体免疫耗竭Co-CM处理SKOV3细胞.蛋白质印迹分析细胞E-cadherin、N-cadherin和Twist1蛋白表达.结果:与完全培养基处理细胞相比,添加重组人IL-8 (rhIL-8:10ng/mL)完全培养基或Co-CM处理上调SKOV3细胞N-cadherin和Twist1蛋白表达,并下调E-cadherin蛋白表达.与Co-CM处理细胞相比,抗-IL-8中和抗体免疫耗竭Co-CM处理增高SKOV3细胞E-cadherin蛋白表达水平,与此同时,显著的降低细胞N-cadherin和Twist1蛋白表达水平.结论:IL-8促成THP-1巨噬细胞共培养SKOV3细胞EMT与调控Twist1蛋白表达有关.
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5，7-二甲氧基黄酮下调FoxMl基因表达对胰腺癌细胞上皮-间充质转化的影响
目的：探讨5，7二甲氧基黄酮（5，7-DMF）对胰腺癌细胞上皮-间充质转化的影响及分子机制。方法：用不同浓度DMF处理人胰腺癌Panc-1细胞，利用划痕法检测5，7-DMF干预后Panc-1细胞侵袭转移能力变化；用Western blot检测5，7-DMF干预后FoxM1蛋白表达情况；FoxM1siRNA转染人胰腺癌Panc-1细胞后，用Western blot进而检测 EMT相关上皮标志分子E-cadherin、间质标志分子N-cadherin蛋白水平的表达变化。结果：5，7-DMF以浓度依赖方式显著抑制Panc-1细胞侵袭转移能力。5，7-DMF干预胰腺癌细胞后显著下调FoxM1表达水平；FoxM1 siRNA转染胰腺癌细胞，EMT相关分子E-cadherin表达升高，而N-cadherin表达降低，且与对照组相比均有统计学意义。结论：5，7二甲氧基黄酮可逆转胰腺癌细胞上皮-间充质转化，可能通过下调FoxM1水平是其重要机制之一，但其内在的分子机制尚需进一步探讨。
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除痰解毒方通过EMT途径逆转肺癌吉非替尼耐药
目的:从上皮-间充质转化(EMT)途径探讨除痰解毒方逆转肺癌分子靶向耐药的机制.方法:建立人肺腺癌耐药细胞株H1975裸鼠模型(n=60),随机分为:模型组,吉非替尼(0.04 g/kg)组,除痰解毒方低、中、高剂量(13.52 g/kg、27.04 g/kg和54.08 g/kg)组,除痰解毒方中剂量(27.04 g/kg)联合吉非替尼(0.04 g/kg)组,每组10只.治疗2周,检测瘤体积和瘤质量,计算抑瘤率,采用免疫组织化学法、Western blot法和real-time PCR法检测各组肿瘤组织中E-cadherin、Snail和vimentin蛋白及mRNA的变化.结果:与模型组及吉非替尼组比较,除痰解毒方中、高剂量组及联合用药组瘤体积和瘤质量显著降低(P<0.05).免疫组织化学法、Western blot法及real-time PCR法结果均显示除痰解毒方中剂量组和联合用药组E-cadherin蛋白及mRNA的表达水平显著上调,Snail和vimentin蛋白及mRNA表达水平较模型组与吉非替尼组显著下调(P<0.05).结论:除痰解毒方可抑制H1975细胞裸鼠移植瘤的生长,逆转肺癌对吉非替尼的耐药,其作用机制可能与调控EMT相关标志蛋白的表达有关.
