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慢病毒介导的miRNA-197-3p-siRNA对喉癌细胞系Hep-2生物学行为的影响
目的 通过构建慢病毒介导(lentivirus,LV)的miRNA-197-3 p-siRNA,探讨下调miRNA-197-3p对喉癌细胞系Hep-2生物学行为的影响.方法 针对目标序列合成特异性siRNA干扰片段并克隆入慢病毒载体,将重组miRNA-197-3 p-RNAi-LV3转染喉鳞状细胞癌Hep-2.Hep-2细胞设为干扰组(miRNA-197-3p-siRNA,MI组)、阴性对照组(negative control,NC组)和空白对照组(blank,B组);分别采用聚合酶链反应方法检测miRNA-197-3p的表达情况;用CCK8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭情况.结果 miRNA-197-3 p-RNAi-LV3可显著降低miRNA-197-3p的表达.CCK8实验显示细胞增殖能力显著降低(P＜0.05).Transwell实验显示细胞侵袭能力明显减弱(P＜0.05).流式细胞仪检测表明转染后对Hep-2细胞周期及细胞凋亡均无明显影响(P＞0.05).结论 miRNA-197-3p-siRNA通过下调miRNA-197-3p的表达,可以抑制Hep-2细胞增殖,并降低其侵袭能力.
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MicroRNA-197调控上皮-间充质转化对乳腺癌侵袭和迁移的影响
目的:探讨微小RNA-197(miR-197)抑制乳腺癌细胞迁移和侵袭的能力,以及阻断上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程的机制.方法:构建miR-197过表达载体(miR-197 mimics),分别转染MDA-MB-231和MCF-7细胞,并设对照组;Real-time PCR分别检测以上各组细胞miR-197的表达水平变化;利用Transwell实验和划痕实验对乳腺癌细胞侵袭和迁移能力进行检测;Western印迹法检测过表达miR-197后对EMT相关标志物E-cadherin,snail和vimentin表达的影响.结果:MiR-197可以抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的迁移和侵袭能力;转染miR-197mimics后,E-cadherin表达降低,snail和vimentin表达增加.结论:MiR-197有可能作为乳腺癌临床治疗的新靶点.
