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泌尿系恶性肿瘤患者手术联合 DC-CIK免疫细胞治疗安全性临床研究
目的：探讨泌尿系恶性肿瘤患者手术或粒子植入后联合DC-CIK免疫细胞治疗安全性、生活质量及不良反应。方法回顾分析了2014年11月至2015年4月收治的泌尿系恶性肿瘤患者16例，手术或者125I放射性粒子植入术后，联合DC-CIK免疫细胞治疗肿瘤技术3周期。3周期后评价肝肾功能、不良反应、生活质量。结果16例患者中2例出现发热，达39℃以上，1例出现困乏，6 h后缓解，1例出现下肢轻微水肿，2 d后消失。按WHO抗癌药物毒性反应分度标准，肾功、肝功均为0度，16例均未出现肝肾功能异常。结论手术或放射粒子植入术后联合DC-CIK免疫细胞治疗肿瘤技术治疗泌尿系肿瘤3周期后，患者肝肾功能无明显变化、耐受性良好、不良反应轻微、生活质量改善明显，该方法是治疗泌尿系恶性肿瘤较安全的方法。但是远期疗效及影响需进一步临床资料的积累与研究。治疗过程中出现发热、困乏、双下肢水肿需高度重视，早期发现、早期处理效果较好。
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树突状细胞/细胞因子诱导的杀伤细胞人体内逆转肺癌多药耐药的临床研究
目的：探讨树突状细胞/细胞因子诱导的杀伤细胞（DC/CIK）是否具有人体内逆转肺癌多药耐药（MDR）的作用。方法30例晚期非小细胞肺癌患者接受2个疗程DC/CIK细胞输注。输注前和完成2个疗程细胞输注后，流式细胞术测定 P-糖蛋白（P-gp）和多药耐药相关蛋白（MRP）阳性细胞百分率以及平均荧光强度。结果30例晚期非小细胞肺癌患者全部检测出P-gp和MRP阳性细胞。DC/CIK细胞输注前， P-gp 阳性细胞百分率为（38.67±8.76）%，平均荧光强度2.18±0.34；MRP 阳性细胞百分率为（1.14±0.49）%，平均荧光强度为2.14±0.437。DC/CIK细胞输注后，P-gp阳性细胞百分率为（34.96±6.9）%，平均荧光强度2.07±0.42；MRP阳性细胞百分率为（1.0±0.53）%，平均荧光强度为2.05±0.42。2个周期DC/CIK细胞输注前后，P-gp阳性细胞百分率的差异有统计学意义（t＝5.02，P＜0.001），平均荧光强度的差异有统计学意义（t＝2.18，P＜0.05）；MRP阳性细胞百分率的差异有统计学意义（t＝2.35，P＜0.05），其平均荧光强度的差异有统计学意义（t＝2.16，P＜0.05）。结论 DC/CIK细胞可以在人体内逆转肺癌MDR。
关键词： 树突细胞 杀伤细胞 肺肿瘤 P糖蛋白 多药耐药相关蛋白质类 -
高强度聚焦超声治疗胰腺癌的免疫机制研究
目的 探讨高强度聚焦超声(HIFU)治疗胰腺癌的免疫学效应.方法 选择30例诊断明确并接受HIFU治疗的胰腺癌患者,分离获得患者的自体癌细胞、树突状细胞(DC)和T淋巴细胞,对癌细胞抗原分别进行冻融(Ag1)和HIFU处理(Ag2)处理,比较两种抗原所诱导的DC-T对自身癌细胞的杀伤效应;同时记录患者HIFU治疗前后多种免疫学和临床疗效指标.结果 Ag2致敏的DC-T对癌细胞的杀伤率[(48.13±14.35)%]明显高于Ag1[(39.74±8.78)%];HIFU治疗后,患者的免疫学指标[淋巴细胞核仁区嗜银蛋白比值:4.65±1.32 vs.4.17±0.84;CD56阳性率:(4.34±0.94)% vs.(3.92±0.79)%;CD4/CD8:1.17±0.56 vs.0.95±0.43;IL-12:(61.72±18.83)pg/ml vs.(52.34±13.27)pg/ml;热休克蛋白70:(23.62±5.93)ng/ml vs.(18.28±4.27)ng/ml;TGF-β:(0.84±0.37)ng/ml vs.(1.42±0.54)ng/ml]、生活质量评分(2.19±0.92 vs.2.63±1.07)、疼痛评分(2.86±1.04 vs.4.23±1.76)、肿瘤标志物[CA199:(117.55±31.89)U/ml vs.(146.73±37.46)U/ml;CA242:(86.82±22.53)U/ml vs.(105.97±30.62)U/ml]等均优于治疗前(P均<0.05).结论 癌细胞抗原经HIFU处理后能增强DC-T对自身癌细胞的杀伤率;HIFU能有效治疗胰腺癌,同时能改善患者免疫状态,增强患者的抗肿瘤应答.
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人参皂苷Rg3促树突状细胞诱导作用的实验研究
目的 研究人参皂苷Rg3联合细胞因子对单核细胞来源树突状细胞(DC)的诱导及其免疫功能的影响.方法 选取8例健康志愿者分离外周血单核细胞,利用人参皂苷Rg3联合细胞因子(GM-CSF、IL-4、TNF-α)培养14 d诱导DC,光镜和电镜观察细胞形态,用流式细胞仪检测细胞免疫表型,同种异体混合淋巴细胞反应(MLR)检测其抗原呈递能力.结果 (1)单核细胞经人参皂苷Rg3联合细胞因子诱导均产生了不同比率的具有树突状细胞形态学特征的DC.这些细胞表达DC的表面分化抗原,能刺激产生MLR反应.(2)Rg3(5.0 μg/ml)联合细胞因子(GM-CSF 150 ng/ml,IL-4 50 ng/ml,TNF-α 40 ng/ml)使单核细胞-DC获得率(以CD80、CD86双阳性定义DC)由43.31%提高到59.75%,并提高了DC刺激淋巴细胞的增殖能力.结论 人参皂苷Rg3联合细胞因子可以将正常人单核细胞体外诱导成为形态、表型和功能符合DC特征的细胞,可使单核细胞诱导DC产率增加,并提高其抗原呈递功能.
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树突状细胞在鼻息肉组织中的浸润及其意义
目的 观察树突状细胞(DC)在鼻息肉组织中的分布特点,探讨DC在鼻息肉发病机制中的作用.方法 选择手术摘除鼻息肉30例、正常下鼻甲黏膜10例,采用免疫组织化学方法检测鼻息肉组织中S 100蛋白表达情况,免疫荧光双标记(CD1a/CD40)及低照度荧光显微镜图像分析检测方法,观察DC在鼻息肉组织及正常下鼻甲黏膜中的分布情况,并初步探讨鼻息肉组织中DC与T淋巴细胞之间的关系.结果 鼻息肉组织中S 100阳性细胞及CD1a/CD40双阳性细胞数量较下鼻甲黏膜明显增多,其差异有显著统计学意义(P<0.01);鼻息肉组织与下鼻甲黏膜中DC的密度分别为(7.125±2.575)个/cm2和(589±456)个/cm2,两者的差异有显著统计学意义(P<0.01).此外,鼻息肉组织中DC主要分布在黏膜下层,有从外向内递减的趋势,并且DC表面CD40分子为阳性.结论 鼻息肉组织中DC浸润显著,DC可通过CD40/CD40L共刺激因子与T细胞产生相互作用,在鼻息肉发病及疾病发展过程中发挥重要作用.进一步探讨DC在鼻息肉发病机制中的作用,将会拓宽鼻息肉的研究视野,为鼻息肉的防治提供新的干预靶点.
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自身抗原激活的树突状细胞联合细胞因子诱导杀伤细胞过继免疫治疗晚期前列腺癌的临床研究
目的 探讨自身癌细胞抗原(Ag)激活的树突状细胞(DC)联合细胞园子诱导杀伤细胞(CIK)在晚期前列腺癌免疫治疗中的临床疗效.方法 回顾性研究48例诊断明确且不再适宜手术或放化疗的晚期激素难治性前列腺癌(HRPC)患者,配对分成两组:对照组24例,接受内科保守治疗；免疫组24例,同时给予内科治疗和Ag-DC-CIK过继免疫,记录两组患者的临床疗效.结果 治疗后免疫组患者的细胞免疫功能[外周血淋巴细胞银染核仁区比值5.14±2.34,外周血IL-12含量(73.54±21.63)pg/ml]、生活质量(体力状况PS评分2.08±0.69)和生存时间(1年生存率66.66％,中位生存时间16.63个月,中位疾病进展时间12.31个月)等疗效指标均明显优于对照组[相应结果分别为4.02±1.93,(59.63±12.66)pg/ml,2.62±1.05,33.33％,9.85个月,7.24个月],两组之间差异有统计学意义(P<0.05).结论 Ag-DC-CIK过继免疫能使晚期HRPC患者获益,具有较好的临床应用价值.
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前列腺特异性抗原多肽致敏的树突状细胞体外激发特异性细胞毒性T淋巴细胞能力的研究
目的观察以前列腺特异性抗原（ PSA）负载的树突状细胞（ DC）体外诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）的能力。方法采集HLA-A2＋晚期前列腺癌患者外周血，分离单核细胞（Mo）与外周淋巴细胞（ PBL）；将Mo诱导成DC后负载PSA多肽，用其反复致敏PBL（三次）；ELISA法检测致敏细胞上清细胞因子分泌水平；MTT法检测致敏细胞杀伤靶细胞的能力。结果18例HLA-A2＋晚期前列腺癌患者DC平均得率为（9.86±0.75）×106（每100 ml外周血），CD11c＋HLA-DR＋率为（92.79±3.42）％，其中CD80＋率为（86.65±6.12）％，CD83＋率为（83.54±5.22）％，CD86＋率为（98.70±0.77）％。 PBLs致敏三次后，平均增殖（15.3±2.1）倍；致敏第21天上清液细胞因子水平分别为：IL-2（1897.8±143.9）pg/ml，IL-12（493.4±43.2）pg/ml，IFN-γ（2107.2±222.7）pg/ml，TNF-α（509.9±32.9）pg/ml，明显高于未致敏组（P＜0.05），IL-10（213.1±19.9）pg/ml与对照组比较无显著差异；对负载多肽PSA的T2细胞株杀伤率明显高于对照组（P＜0.05）。结论 PSA混合多肽负载的DC体外能有效地诱导特异性CTL，刺激Th1型细胞因子的分泌，为治疗型前列腺癌疫苗的研制提供科学依据。
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IL-4对小鼠骨髓树突状细胞表面分子CD11c、CD80、CD86表达的影响及其意义
目的：探讨IL-4对小鼠骨髓树突状细胞（DC细胞）表面分子CD11c、CD80、CD86表达的影响及其意义。方法对照组（n＝5只，30孔）应用20 ng/ml GM-CSF，实验组（n＝5只，30孔）应用20 ng/ml GM-CSF＋20 ng/ml IL-4分别刺激小鼠骨髓细胞生长，隔日进行细胞换液，观察并对比细胞形态学变化，流式细胞仪测定 DC 细胞表面相关分子表达。结果实验组诱导小鼠骨髓细胞第7日观察可见DC细胞形态，对照组第7日未发现明显DC细胞形态，流式细胞仪测定实验组 CD11c（0.546±0.289）、CD80（0.506±0.085）、CD86（0.562±0.260）表达分别较对照组CD11c（0.236±0.058）、CD80（0.279±0.096）、CD86（0.237±0.070）表达明显增高（P＜0.05）。结论 IL-4可以促进小鼠骨髓DC细胞表面分子CD11c、CD80、CD86表达，促进DC细胞分化成熟。
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IL-10、TGFβ1基因修饰树突状细胞对大鼠肝移植免疫耐受的影响
目的：探讨白细胞介素10（IL-10）和转化生长因子β1（TGFβ1）基因共修饰树突状细胞诱导大鼠肝移植免疫耐受情况。方法将IL-10和TGFβ1修饰的imDC在肝移植前输注入受体大鼠体内，观察移植后不同时间点的肝功能、IL-12水平，排斥反应情况等。结果联合转染组术后3 d和7 d血清IL-12水平低，显著低于mDC组和对照组（P＜0.01）；术后3、7、10 d联合转染组汇管区细胞凋亡明显，其次为IL-10转染组和TGFβ1转染组，均显著高于对照组以及mDC组、imDC组（P＜0.01）；联合转染组的急性排斥反应轻，其次为TGFβ1转染组和IL-10转染组，mDC组和对照组严重，组间比较差异有统计学意义（P＜0.01）。移植后3、7、10 d，mDC组和对照组的肝功能差，联合转染组的肝功能好，其次为IL-10转染组和TGFβ1转染组。结论采用IL-10和TGFβ1对树突状细胞进行基因修饰，能够诱导大鼠肝脏移植的免疫耐受。
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雌二醇对 NZB／wF1狼疮鼠脾脏树突状细胞雌激素受体表达的影响
目的通过检测系统性红斑狼疮（SLE）模型鼠脾脏树突状细胞（DC）中雌激素受体（ER）的表达及对体外雌激素的反应性是否异常，探索雌激素调控DC参与SLE发病的机制。方法红细胞裂解法收集SLE模型鼠---NZB/wF1雌鼠及BALB/c雌鼠的脾脏单个核细胞，抗小鼠CD11 c单抗标记磁珠纯化DC，以无酚红RPMI-1640及葡聚糖-活性炭处理的新生牛血清体外培养 DC，加入不同浓度10-8 mol/L，10-7 mol/L，10-6 mol/L的雌二醇（E2）体外处理24 h，RT-PCR检测DC胞内ER的mRNA水平。结果两种小鼠脾DC均表达ERα，但不表达ERβ；NZB/wF1雌鼠脾DC的ERα基础表达显著高于同周龄的BALB/c雌鼠（0 mol/L组P＜0.05）；低浓度10-8 mol/L E2显著增加两种鼠脾DC的ERα表达（NZB/wF1鼠P＜0.05， BALB/c鼠P＜0.05），中浓度10-7 mol/L （ NZB/wF1鼠P＜0.05， BALB/c鼠P＜0.05）和高浓度10-6 mol/L （NZB/wF1鼠P＜0.05，BALB/c鼠P＜0.05）E2显著降低两种鼠脾DC的ERα表达。结论 ER表达在狼疮鼠中存在明显异常，不同剂量雌激素对其受体调控作用不同，提示雌激素可能通过调控DC的ER参与SLE发病。
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MUC1-VNTRn核酸疫苗的优化构建及其抗胰腺癌的实验研究
目的：以MUC1-VNTRn作为胰腺癌免疫治疗的新靶点，通过体内外实验筛选出免疫原性强的pVAX1-MUC1-VNTRn核酸疫苗。方法构建pVAX1-MUC1-VNTRn质粒后转染未成熟树突状细胞，诱导成熟后与自体T细胞共培养，用ELISPOT检测活化分泌IFN-γ的特异性细胞毒性T细胞（CTL）数目， CytoTox?检测 MUC1-VNTRn 特异性的 CTL 对 Capan-2的杀伤效应，筛选出免疫原性较强的pVAX1-MUC1-VNTRn核酸疫苗。通过小鼠体内动物实验进一步证实核酸疫苗的防瘤及抗肿瘤效应。结果成功构建了 pVAX1-MUC1-VNTRn 质粒，并可在真核细胞表达目的蛋白。未成熟树突状细胞摄取pVAX1-MUC1-VNTRn质粒后可分化为成熟树突状细胞，经刺激后各处理组成熟的树突状细胞表达CD80、CD86、HLA-DR表面分子和分泌IL-12浓度较未经任何刺激各组的未成熟树突状细胞高（P＜0.01）。负载MUC1-VNTR6和 MUC1-VNTR9的树突状细胞激活自体T细胞，其分泌IFN-γ特异性T细胞数（103.0±8.5和94.3±7.7）要显著高于其他组（P＜0.001）。MUC1-VNTR6和MUC1-VNTR9特异性的CTL对Capan-2杀伤效应为（40.12±3.16）%和（37.31±3.95）%，较MUC1-VNTR1强、VNTR1弱、VNTR3、VNTR4和MUC1-cDNA各组高，差异具有统计学意义（ P＜0.001）。小鼠体内保护性和治疗性免疫应答实验证实pVAX1-MUC1-VNTR6核酸疫苗具有强的免疫原性，其抑制 panc02-MUC1肿瘤生长能力要显著优于pVAX1-MUC1-VNTR1强、VNTR3、VNTR9核酸疫苗（P＜0.01）。结论 pVAX1-MUC1-VNTRn 核酸疫苗可在真核细胞表达目的蛋白。通过体内外实验筛选出pVAX1-MUC1-VNTR6核酸疫苗具有更强杀伤效应。
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CLRs过表达/siRNA慢病毒载体的构建及其瞬时转染树突状细胞的研究
目的：构建C型凝集素受体（C-type lectin receptor，CLRs）过表达/siRNA慢病毒载体，并将其瞬时转染树突状细胞（dendritic cell，DC）。方法免疫磁珠分离、培养及鉴定胎盘和蜕膜来源的DC；构建CLRs过表达/siRNA慢病毒载体并转染DC；抽提转染CLRs过表达/siRNA慢病毒后的DC的总RNA；RT-PCR检测DC转染慢病毒前后CLRs基因mRNA表达量。结果从胎盘分别纯化得到的DC经流式细胞术检测DC纯度为（82.6±2.4）%；根据Genebank数据库成功构建了过表达CLRs基因慢病毒及CLRs基因siRNA慢病毒，病毒量为1×1010 Unit；将构建的两种慢病毒转染DC后，在荧光倒置显微镜下可观察到被转染的阳性细胞有绿色荧光蛋白（GTP）表达，通过流式细胞仪检测，转染效率分别为85%及82%左右；RT-PCR检测发现过表达CLRs基因慢病毒转染DC后mRNA相对含量为（14.26±0.47）%，较空白未转染的DC表达量[（1.67±0.19）%]明显上升（P＜0.01）；CLRs基因siRNA慢病毒转染DC后CLRs mRNA相对含量为（0.03±0.01）%，较空白未转染的 DC 表达量明显下降（P＜0.01）。结论成功构建了表达人CLRs-siRNA的慢病毒载体，它能有效沉默CLRs基因在胎盘DC中的表达并获得了其瞬时转染的DC；成功构建了过表达CLRs的慢病毒载体，它能有效地在体内发挥基因过表达效应并获得了其瞬时转染的DC。
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多发性骨髓瘤间充质干细胞对树突状细胞功能的影响
目的 探讨多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓来源的间充质干细胞(MSC)对树突状细胞(DC)分化、成熟和细胞因子分泌及其对DC辅助T细胞杀伤骨髓瘤细胞作用的影响.方法将从MM患者骨髓来源的MSC、正常供者外周血来源的DC及骨髓瘤细胞系U266细胞进行混合培养.流式细胞术测定DC的免疫表型,ELISA法测定上清液IL-12的含量,AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞术测定骨髓瘤细胞凋亡比例.结果 MSC能抑制rhTNF-α诱导的不成熟和成熟DC的CD1a、CD11c、CD80、CD86和HLA-DR表达(P<0.01),并显著减少成熟DC分泌IL-12(P<0.01).MSC可以下调成熟DC的CD83表达,使其趋于不成熟状态(P<0.01).与未加入MSC组相比,MSC混合培养组凋亡骨髓瘤细胞明显减少(P<0.01);比较MM患者与正常供者骨髓来源的MSC对DC辅助T细胞诱导骨髓瘤细胞凋亡的影响,前者U266细胞凋亡比例比后者明显减少(P<0.01).结论 MM患者骨髓来源的MSC可以抑制DC的分化、成熟和分泌细胞因子;无论是MM患者或正常供者骨髓来源MSC均可以抑制DC辅助T细胞对骨髓瘤细胞的凋亡诱导作用,且MM患者来源的MSC的作用更强.
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钙离子载体促进K562细胞诱导分化成DC样细胞的研究
目的 观察钙离子载体(CI)诱导慢性髓系白血病细胞株K562分化成DC样细胞的作用.方法 将细胞分三组培养:第1组加入GM-CSF 1 000 U/ml和IL-4 500 U/ml;第2组加入GM-CSF 1 000 U/ml、IL-4 500 U/ml 和CI 375 ng/ml;第3组为对照,不加细胞因子,也不加CI.流式细胞仪检测各组细胞表面免疫表型的表达,MTT 比色法检测其刺激同种异体T 细胞增殖的作用.结果 细胞因子加CI 组培养48 h后即可见细胞形态呈多形性,有些细胞可见突起;96 h后CD80、CD86、CD83的表达率较对照组、单用细胞因子明显提高,明显刺激同种异体T 淋巴细胞增殖.单用细胞因子组培养96 h后细胞形态无明显变化,CD80、CD86的阳性率明显高于对照组,CD83与对照组之间差异无统计学意义,不能明显刺激同种异体T 淋巴细胞增殖.结论 CI与GM -CSF和IL-4联合可迅速将K562细胞诱导成DC样细胞;CI与细胞因子可能有协同作用.
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高强度聚焦超声制备树突状细胞瘤苗对BALB/c小鼠肿瘤主动免疫的实验研究
目的 探讨采用高强度聚焦超声(HIFU)制备肿瘤抗原致敏树突状细胞(DC)对正常BALB/c小鼠肿瘤的主动免疫作用.方法 采用功率1000 W/cm2的HIFU辐照CT-26结肠癌细胞30 s,获取肿瘤抗原,与体外培养扩增第5天的DC共孵育,制备DC瘤苗.HIFU辐照法制备的DC瘤苗(HIFU组)一次性免疫正常BALB/c小鼠,7 d后再皮下接种活的CT-26结肠癌细胞,然后观察肿瘤发生时间、20 d时瘤体重量和体积、小鼠生存时间等.并设立反复冻融法致敏DC组(冻融组)和生理盐水对照组(对照组),比较各组瘤体重量和体积、小鼠生存时间是否有差异.结果 HIFU组、冻融组与对照组比较肿瘤发生时间、20 d瘤体重量和体积、小鼠中位生存时间等差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).HIFU组与冻融组比较瘤体重量、体积及小鼠中位生存时间差异亦有统计学意义(P＜0.05).结论 HIFU辐照法制备的DC瘤苗对小鼠肿瘤的发生有一定的主动免疫作用,并优于反复冻融法制备的DC瘤苗.
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原发性胆汁性肝硬化患者树突状细胞中细胞因子及其信号转导抑制分子变化的意义
目的 观察细胞因子信号转导抑制分子(SOCS)在原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者树突状细胞(DC)及其表型和分泌细胞因子的变化,以研究SOCS在PBC发病机制中的作用.方法 对10例PBC患者和8名健康人,用流式细胞术(FCM)分析其DC表型CD83、CD86和人类白细胞抗原DR(HLA-DR),用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测DC培养上清液中细胞因子白细胞介素-10(IL10)、IL-12和干扰素-γ(IFN－γ)含量,用免疫印迹法(WB)测定DC中SOCS1和SOCS3水平；并评价分析这些指标在2组中的变化特征.结果 PBC患者外周血中DC细胞表型CD83、CD86和HLA-DR 的表达率分别为(79.4±4.8)％、(86.5±6.3)％和(90.0±3.5)％,均高于健康对照组的表达率[(68.3±4.1)％、(74.2±6.3)％和(83.6±7.6)％,t值分别为5.340、4.120和2.514,P均＜0.05]；DC分泌的IL-12和IFN-γ含量分别为(53.5±11.1)、(32.0±9.0)ng/L,与健康对照组的细胞因子含量[(32.1±10.7)、(15.4±8.1)ng/L]相比,IL-12和IFN-γ均显著升高(t值分别为4.123和3.818,P均＜0.01)；IL-10含量为(7.0±4.6) ng/L,与健康对照组[(5.8±4.2) ng/L]相比,差异无统计学意义(t=0.563,P＞0.05)；WB检测PBC组DC中SOCS1和SOCS3的表达比健康对照组明显降低.结论 PBC患者体内DC更倾向于成熟状态,其抗原递呈能力明显增强,SOCS的低表达可能与免疫平衡紊乱和免疫耐受破坏有关.
关键词： 肝硬化 胆汁性 树突细胞 细胞因子类 细胞因子信号转导蛋白抑制因子 -
浆母细胞样树突细胞白血病的骨髓细胞形态学及临床分析
目的 探讨浆母细胞样树突细胞白血病(BPDCN)患者骨髓细胞形态学的诊断价值.方法 收集北京协和医院2011至2016年确诊的5例BPDCN白血病患者的临床资料.收集患者骨髓涂片标本,在油镜下观察肿瘤细胞的胞体、胞核、染色质,胞浆等方面的形态学特点.结果 5例(100％) BPDCN白血病患者均有皮肤受累,淋巴结肿大4例(80％),肝大3例(60％),脾大4例(80％);免疫表型提示CD4,CD56,CD123均阳性;典型BPDCN细胞具有明显的异质性,中等大小,核圆形或不规则形,染色质丝网状,胞浆灰蓝色,呈不均匀弱嗜碱性,浆内无颗粒,可具有特征性的伪足突出及沿胞膜下呈珍珠项链样排列的空泡,BPDCN细胞可类似3种形态,原始单核细胞样、原幼淋巴细胞样及淋巴瘤细胞样.结论 浆母细胞样树突细胞有特征的形态学表现,若患者有皮肤损害,可高度提示BPDCN白血病的诊断,确诊仍需流式细胞学检查及病理活检.
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浆细胞样树突状细胞对频繁复发的生殖器疱疹的免疫作用
目的 探索浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cells,pDCs)对频繁复发的生殖器疱疹的免疫作用.方法 选取确诊复发性生殖器疱疹患者10例,于静息期、复发早期及后期抽取外周血,通过梯度离心法分离白细胞,流式细胞术检测pDCs百分比,白细胞体外原代培养,ELISA法检测血清以及白细胞培养上清液干扰素(interferon,IFN)α和IFNγ,并与对照组比较.结果 生殖器疱疹复发后期外周血pDCs百分比相较对照组、静息期及复发早期显著减低(P均＜0.05);患者血清IFNα水平高于对照组,复发早期显著升高,后期降低(P均＜0.05);患者IFNγ水平在疾病各期呈依次升高,差异均有统计学意义,静息期略低于正常参考值,发病早期和后期均高于正常参考值.IFN α、单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)-2和寡聚脱氧核苷酸(CpG-oligodeoxynueleotide,CpG ODN)均可诱导外周血白细胞产生IFN γ,患者IFNγ水平显著低于对照组(P均＜0.05).BDCA-2抗体可抑制HSV-2和CpG ODN的诱导作用.结论 pDCs参与了复发性生殖器疱疹的免疫反应,频繁复发的生殖器疱疹存在Th1淋巴细胞对pDCs介导的免疫反应减低.
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树突状细胞疫苗在肝病治疗中的研究进展
树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗疗法是很有前景的一种生物疗法.目前对DC疫苗用于黑色素瘤、恶性淋巴瘤和肝癌等恶性肿瘤已进行了大量的临床研究,其中一些研究结果令人鼓舞.此外,对DC疫苗用于慢性HBV和HIV感染也进行了初步临床研究,并显示出一定的疗效.本文对DC疫苗在肝癌和慢性乙型肝炎治疗中的研究进展进行综述.
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胞质转导肽-HBcAg18-27-Tapasin体外诱导HBV转基因小鼠髓源性树突状细胞成熟及在T淋巴细胞增殖中的作用
目的:观察融合蛋白胞质转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)-HBcAg18-27-Tapasin 体外诱导HBV转基因小鼠髓源性树突状细胞(dendritic cell,DC)成熟和对T淋巴细胞增殖的作用.方法:体外分离、培养HBV转基因小鼠及近交系C57BL/6小鼠髓源性DC,加入重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白介素(interleukin,IL)-4培养5 d,再加入实验组10μg/mL CTP-HBcAg18-27-Tapasin、对照组10 μg/mLCTP-HBcAg18-27、10 μg/mL HBcAg18-27-Tapasin 及空白组RPMI 1640完全培养液.流式细胞术测定DC表面分子CD80、CD83、MHC-1的表达,ELISA法测定DC培养上清液中的IL-12p70的水平,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测T淋巴细胞增殖反应,流式细胞仪检测增殖的T淋巴细胞内的细胞因子.结果:体外成功诱导小鼠髓源性DC；CTP-HBcAg18-27-Tapasin能明显上调DC表面分子CD80、CD83、MHC-1的表达;并且CTP-HBcAg18-27-Tapasin组诱导DC分泌的IL-12p70水平及诱导DC增殖T淋巴细胞增殖能力明显高于对照组及空白组[IL-12p70转基因小鼠(F=205.85,P=0.000); C57BL/6小鼠(F=406.20,P=0.000)]；流式细胞仪检测实验组融合蛋白诱导的CTL水平也高于对照组[转基因小鼠(F=155.45,P=0.000); C57BL/6小鼠(F=392.90,P=0.000)],同时HBV转基因小鼠DC表面分子及在T淋巴细胞增殖中的作用要比C57BL/6小鼠低.结论:分子伴侣Tapasin修饰胞内化抗原肽能促进HBV转基因小鼠髓源性DC的分化、成熟,并能增强DC刺激T淋巴细胞增殖能力及诱导CTL的产生.
关键词： 胞质转导肽 HBcAg18-27 Tapasin 树突细胞 T淋巴细胞
