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白香丹胶囊对PMDD肝气逆证模型大鼠海马NMDAR1亚基蛋白分布及表达的影响
目的:以PMDD肝气逆证模型大鼠为载体,研究PMDD肝气逆证的病机以及白香丹胶囊对本病的干预机制.方法:改进情志刺激为主多因素分段刺激造模法,复制PMDD肝气逆证大鼠模型;用白香丹胶囊和氟西汀分散片予以干预,后进行旷场实验评价模型;免疫荧光技术和蛋白印迹技术检测大鼠海马CA1、CA3区NMDAR1受体亚基分布情况及表达水平.结果:模型组大鼠与正常组相比较,其旷场实验的运动总距离明显增加(P<0.001)、中央区域的进入次数及停留在中央区域的时间显著减少(P<0.01),海马CA1、CA3区细胞呈现稀疏杂乱的分布状态,且同氟西汀组一样,其NMDAR1蛋白表达量明显降低;白香丹组大鼠与模型组相比较,其旷场实验的运动总距离明显降低(P<0.05)、中央区域的进入次数和停留在中央区域的时间明显增多(P<0.05),而氟西汀组与之相比,除了运动总距离明显降低(P<0.05),其它指标不存在显著性差异,同氟西汀组一样,白香丹组大鼠海马CA1、CA3区细胞分布、排列无显著异常,但其NMDAR1蛋白表达量显著升高(P<0.000 1);氟西汀组大鼠与白香丹组相比较,其NMDAR1蛋白表达量明显降低(P<0.05).结论:情志刺激为主多因素分段刺激造模法对大鼠学习记忆能力的损伤机制可能与大鼠海马CA1、CA3区神经细胞的减少和NMDAR1亚基的表达量降低有关,白香丹胶囊通过调整NMDAR1蛋白表达量纠正上述异常改变,从而改善大鼠的学习记忆能力.
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丹参酮ⅡA对复苏后大鼠脑NMDAR1表达的影响及保护作用
目的 探讨丹参酮ⅡA对大鼠心肺复苏后脑NMDAR1蛋白表达的影响及对脑组织的保护作用.方法 将78只SD雄性大鼠随机(随机数字法)分为3组:A组(假手术组,n=6),B组(对照组,n=36),C组(丹参酮ⅡA干预组,n=36),通过制备窒息致大鼠心脏骤停动物模型,C组复苏即刻予以丹参酮ⅡA 15 mg/kg静脉推注,B组予以等量生理盐水静脉推注,在自主循环恢复后(ROSC)1、6、12、24、48、72 h断头取脑,应用免疫组织化学染色法检测脑组织NMDAR1和Caspases-3的表达,干湿质量法测脑组织含水量.实验结果组间比较采用单因素方差分析.结果 ①B组在ROSC后1h脑NMDAR1蛋白表达明显增高,6h达到高峰,12 h逐渐降低,24 h仍高于正常,在48 h表达低于正常,72 h更低,与A组比较差异具有统计学意义(P＜0.05);C组1、6、12 h NMDAR1蛋白的表达与同时间点B组比明显降低(P＜0.01),但24、48、72 h NMDAR1蛋白的表达差异无统计学意义(P＞0.05).②B组Caspases-3蛋白表达在ROSC后呈上升趋势,48 h达高峰,后逐渐降低,但72 h仍高于正常,与A组比较差异具有统计学意义(P＜0.01);C组在1、6、12、24 h明显低于B组(P＜0.01),48 h、72 h表达仍低于B组(P＜0.05).③B组大鼠脑组织含水量在ROSC后1h就开始升高,24 h达高峰,48 h逐渐降低,但72 h 仍高于正常,与A组比较差异具有统计学意义(P ＜0.01或P＜0.05);与B组比较,C组含水量明显降低(P＜0.01).结论 丹参酮ⅡA对大鼠心肺复苏后早期NMDAR1的表达有下调作用,能明显减少复苏后脑Caspases-3的表达及脑水肿.
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MgSO4对急性胎兔宫内窘迫脑损伤NMDAr1表达影响的病理学研究
目的 建立孕兔宫内窘迫模型,探讨硫酸镁(MgSO4)胎兔脑损伤后NMDAr1表达的影响.方法 新西兰大白兔孕兔39只,随机分为空白对照组(n=12)、假手术组(n=9)、缺血缺氧脑病组(n=9)和MgSO4保护组(n=9),缺血缺氧组和MgSO4保护组建立孕兔开腹子宫动脉结扎胎兔宫内窘迫缺血缺氧模型,并且MgSO4保护组在建立模型前给予腹腔注射MgSO4(100mg/kg),分别开腹取各组胎兔脑组织做病理及NMDAr1表达检测.结果 与空白对照组和假手术比较,缺血缺氧脑病组和MgSO4保护组NMDAr1表达强阳性,脑组织结构层次被破坏,神经细胞变性坏死,间质出血;MgSO4保护组NMDAr1免疫反应强度低于缺血缺氧脑病组,而脑组织结构层次完整性优于缺血缺氧脑病组.结论 MgSO4在一定程度上能减轻NMDAr1导致的胎儿宫内窘迫缺血缺氧病理性脑损伤,对NMDA脑损伤具有一定的保护作用.
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火炮打击兔应激防护模型肠组织病理及NMDAr1表达的形态学研究
目的 探讨实弹演习火炮打击后,不同位置掩体保护下兔肠组织病理及NMDAr1表达的变化.方法 闽南山地团进攻演习,按照模拟战地士兵隐蔽情况,将30只实验兔随机分为远离火炮打击的空白对照组及火炮打击区域的反角隐蔽组和迎面隐蔽组.火炮打击6h后,各组存活兔取肠组织,观察其病理损伤形态学及NMDAr1表达的变化.结果 与空白对照组比较,反角隐蔽组和迎面隐蔽组NMDAr1表达强阳性,肠组织结构层紊乱,间质出血,炎症细胞浸润;迎面隐蔽组肠组织结构损伤程度及NMDAr1免疫反应强度均高于反角隐蔽组.结论 火炮打击后兔肠组织应激损伤反应强烈,反角掩体保护能够减轻肠组织损伤,NMDAr1参与肠组织损伤病理过程.
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急性胎兔宫内窘迫模型脑组织病理及NMDAr1表达实验研究
目的：建立孕兔宫内窘迫模型，观察胎兔脑组织病理及NMDAr1表达情况。方法新西兰大白兔孕兔30只，随机分为缺血模型组（n=9）、假手术组（n=9）和空白组（n=12）。缺血模型组孕兔行开腹子宫动脉结扎术，建立急性胎兔宫内窘迫模型；假手术组行开腹术，不结扎子宫动脉；空白组不行任何手术处理。除空白组胎兔直接断头取脑外，其他组胎兔都在术后6h断头取脑，观察各组胎兔脑组织病理形态及NMDAr1表达情况。结果与空白组及假手术组比较，缺血模型组胎兔脑组织NMDAr1表达呈强阳性，病理形态学为明显的脑组织细胞损伤表现；空白组和假手术组胎兔脑组织NMDAr1表达基本相同，均为少量表达，病理形态学均无脑组织细胞损伤表现。结论急性宫内窘迫可致胎兔脑组织NMDAr1表达增加，可能是造成其脑组织病理损伤的重要机制。
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慢性低O2高CO2对大鼠空间学习记忆及脑内NMDA R1亚基表达的影响
目的:探讨慢性低O2高CO2诱导大鼠空间学习记忆改变及其可能机制.方法:将清洁级雄性SD大鼠58只,随机分为三组:正常对照组(NC组,n=18),低O2高CO2 2周组(2HH组,n=20),低O2高CO2 4周组(4HH组,n=20).Morris水迷宫观察动物空间学习记忆的变化,采用原位杂交法观察大鼠海马及皮层区N-甲基-D-门冬氨酸受体R1亚单位(NMDAR1 mRNA)的表达情况.结果:与NC组比较,模型组大鼠寻找障台的平均逃避潜伏期延长:2HH组(38.59±8.35)s,4HH组(60.59±17.28)s;游泳总距离增加:2HH组(9893.45±1958.16)mm,4HH组(18077.57±6878.85)mm.模型组大鼠海马皮层区NMDAR1mRNA表达的平均光密度较NC组相比均有减少,其中4HH组海马CA1区减少了21.4%(P＜0.01).结论:慢性低O2高CO2可导致大鼠空间学习记忆能力下降,可能与海马CA1区的NMDAR1mRNA表达下调有关.
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黄芪多糖对血管性痴呆大鼠空间记忆和海马NMDAR1表达的影响
目的:探讨黄芪多糖对血管性痴呆大鼠空间记忆和海马NMDAR1表达的影响.方法:选择血管性痴呆大鼠60只为研究对象,分成对照组和观察组,各30只.对照组:尼莫地平灌胃给药.观察组:黄芪多糖灌胃给药.灌胃给药4周后,通过Morris实验比较两组大鼠上台潜伏期、上台总路程、站台象限停留时间、穿越站台次数的水平.比较灌胃时、灌胃后4周两组大鼠Ach、AchE水平的变化.比较两组大鼠海马CA1区NMDA基因表达.结果:观察组大鼠上台总路程、大鼠上台潜伏期、大鼠站台象限停留时间、都少于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).观察组大鼠穿越站台的次数多于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).观察组大鼠的Ach水平低于对照组,而观察组大鼠的AchE水平则高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).观察组大鼠海马CA1区NMDAR1蛋白表达水平都高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:黄芪多糖能够改善血管性痴呆大鼠的空间记忆,促进大鼠海马CA1区受损神经元的恢复.
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复方氯胺酮口服液对大鼠胃NMDAR1、GABAA R表达的影响
目的 通过动物实验,观察复方氯胺酮口服液(Compound ketaminc oral solution,CKOS)对大鼠胃NMDAR1、GABAA受体的影响,探讨其对胃肠动力的调节机制,井进一步评价其临床应用的安全性.方法 选择雄性、健康SD大鼠50只,随机分10个时间点,每个时间点5只大鼠.0点为对照组,经灌胃器注2μL/g生理盐水,其他各点将CKOS[含氯胺酮(Ketamine,KET)100 mg/kg,咪达唑仑(Midazulum,MID)10 mg/kg]灌入胃内.采用免疫组化和原位杂交的方法 ,观察服药后10个点大鼠胃NMDAR1、GABAA受体的变化.显微(荧光)图像分析系统对切片进行采集分析.结果 用CKOS后10 min,NMDAR1表迭开始减少,15～120 min NMDAR1明显减少,240 min时开始恢复,但仍然低于对照组.360 min时仍未恢复到正常水平.用CKOS后30 min,GABAAR表达开始增加,60～90 min GABAAR表达明显增加,240 min时开始恢复,360 min时恢复到正常水平.结论 CKOS抑制胃排空可能与其能够抑制胃NMDAR1受体的表达、增强GABAA受体的表达有关.
关键词： 鼠 咪达唑仑-氯胺酮口服液 NMDAR1 GABAAR 胃肠转运 -
孤啡肽对脑缺血损伤后N-甲基-D-天门冬氨酸受体表达的影响
目的 研究孤啡肽(OFQ)对脑缺血损伤后N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR1)表达的影响.方法 成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠40只,应用Longa线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,侧脑室微量注射OFQ干预,原位TUNEL检测细胞凋亡,免疫组织化学法检测NMDAR1受体表达.结果 脑缺血后脑组织凋亡细胞增多,NMDAR1表达增强(P＜0.05).应用OFQ后凋亡细胞增多,NMDAR1表达较缺血组显著增强(P＜0.05),而且与剂量呈正比例关系.结论 OFQ可能通过上调NMDAR1表达,加重脑缺血引起的氧化损伤.
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抗痫灵对癫痫大鼠脑电图及海马NMDAR1表达的影响
目的:观察中药复方抗痫灵对戊四氮点燃癫痫大鼠模型脑电图及海马NMDAR1表达的影响.方法:Wistar雄性大鼠60只,体质量180 ～220g,随机分成空白组、模型组、抗痫灵高、中、低剂量组、丙戊酸钠(VPA)组各10只.点燃后各组大鼠描记脑电图,低温条件下迅速断头取脑,用免疫印迹(Western blot)方法观察各实验组大鼠海马的NMDAR1活性变化.结果:抗痫灵组、丙戊酸钠组、模型组阳性细胞表达与空白组相比有显著性差异(P＜0.05),抗痫灵组显著低于模型组(P＜0.01).结论:抗痫灵对戊四氮点燃大鼠癫痫发作有显著对抗作用,其作用机制可能与其降低模型大鼠海马NMDAR1活性有关.
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亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤后COX2和NMDAR1表达的影响
目的 研究大脑中动脉缺血(MCAO)模型给予亚低温干预后COX2、NMDAR1变化,探讨亚低温对其影响的部分机制.方法 65只大鼠随机分为假手术组、常温缺血组及亚低温缺血组.建立大鼠局灶脑缺血再灌注损伤模型,缺血后病变侧给予亚低温4h.分别于缺血2h再灌注0h、2h、6h、24h、48h、72h后取脑,HE染色及COX2、NMDAR1免疫组化染色.结果 亚低温组与常温组相应时间点相比COX2蛋白表达明显减少(P＜0.05);再灌注早期(24h以内)NMDAR1蛋白表达明显减少.结论 亚低温可通过降低COX2表达途径抵抗脑缺血损伤,早期通过抑制NMDAR1蛋白的表达减轻Glu对神经细胞毒性作用.
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水溶性脂质体运载siRNA对神经病理性疼痛大鼠脊髓NMDA受体1的影响
目的 探讨水溶性脂质体(WSLP)运载N甲基-D天冬氨酸受体1(N-methyl D-aspar tate receptor 1,NMDAR1)利用小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)治疗神经病理性疼痛的可行性.方法 采用坐骨神经分支选择结扎切断(spared nerve injury model,SNI)制作神经病理性疼痛大鼠模型,选取鞘内置管成功SD大鼠24只,随机均分为四组:S组,仅暴露坐骨神经,不结扎；C组,SNI+鞘内注射生理盐水；W组,SNI+鞘内注射WSLP/siRNA混合物；L组,SNI+鞘内注射乱序siRNA与WSLP混合物.通过实时定量PCR和western-blot技术分别检测各组大鼠脊髓背角NMDAR1 mRNA相对表达和NMDAR1蛋白表达水平的变化.结果 C组和L组第4天脊髓背角NMDAR1 mRNA相对表达和NMDAR1蛋白表达水平显著高于S、W组(P＜0.05).结论 WS-LP可有效运载siRNA抑制神经病理性疼痛大鼠NMDAR1的过度表达.
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片仔癀对局灶性脑缺血/再灌注大鼠皮质中NMDAR1和GluR2表达的影响
目的 研究片仔癀对局灶性脑缺血/再灌注大鼠皮质中NMDAR1、GluR2 mRNA及蛋白表达的影响.方法 健康成年♂SD大鼠40只,随机分为假手术组、模型对照组、片仔癀给药组,用线栓法建立局灶性脑缺血/再灌注大鼠模型(MCAO).Zea-Longa标准评分法评价大鼠神经功能损伤;TTC染色法评价脑梗死体积变化;qPCR法和Western blot法分别检测大鼠缺血侧脑组织皮质中NMDAR1、GluR2 mRNA及蛋白的表达.结果 与MCAO组比较,片仔癀能明显改善大鼠的神经功能损伤,降低大鼠脑梗死体积,促进NMDAR1、GluR2 mRNA及蛋白的表达.结论 片仔癀可能通过抑制局灶性脑缺血/再灌注大鼠皮质NMDAR1、GluR2 mRNA及蛋白的下调而发挥脑保护作用.
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右归饮对去卵巢血管钙化大鼠NMDAR1蛋白表达的影响
目的:观察右归饮对去卵巢血管钙化中谷氨酸受体变化的影响.方法:将40只远交群雌性大鼠(sprague dawley,SD)随机分为假手术组、模型组、低剂量组、高剂量组和辛伐他汀组,采用皮下注射华法令加维生素D3制备血管钙化模型,造模后,低剂量组、高剂量组分别给予右归饮浓缩液5.35 g/(kg·d)和16.05 g/(kg·d)灌胃,辛伐他汀组给予辛伐他汀混悬水溶液5.25 mg/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组给予等量生理盐水,共12周;实验结束时采集血浆标本测定雌二醇及血脂四项,采用苏木精-伊红染色法(HE染色)观察动脉钙化的情况,并采用免疫印迹试验检测N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR,NR)1蛋白的表达.结果:模型组大鼠雌二醇、甘油三酯含量和NR1蛋白表达降低,P＜0.05,低密度脂蛋白升高,P＜0.05;高剂量组和低剂量组雌二醇、甘油三酯含量升高,NR1蛋白表达增加,P＜0.05;高剂量组、低剂量组和辛伐他汀组低密度脂蛋白的含量降低,P＜ 0.05;辛伐他汀组雌二醇无变化,P＞0.05.结论:右归饮可抑制大鼠去卵巢血管钙化的形成,可能与提高雌激素水平和NR1蛋白的表达有关.
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肝郁证大鼠外侧膝状体NMDAR1基因表达的实验研究
目的:分析肝郁证大鼠外侧膝状体N-甲基-D-天冬氨酸受体亚型1(NMDAR1)基因表达的变化,探讨视路疾病肝郁证的微观机制.方法:慢性不可预知温和应激法(CUMS)建立肝郁证大鼠模型,利用体质量测量、旷场实验、糖水偏好实验评价模型造模成功后,运用原位杂交法检测实验大鼠外侧膝状体中NMDAR1基因表达情况.结果:与正常对照组比较,肝郁证模型组大鼠外侧膝状体中NMDAR1基因表达面积、平均光密度、积分光密度均显著增高(P＜0.05).结论:肝郁是导致外侧膝状体损伤的重要因素,其作用机制可能是通过过度激活NMDAR1受体,介导细胞兴奋性毒性作用来实现的,这为从肝论治视路疾病提供了理论依据.
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托吡酯对大鼠脑缺血再灌注后氨基酸释放的影响
目的 研究鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织兴奋性氨基酸(EAA)的变化及托吡酯的影响,探讨托吡酯的神经保护作用机制.方法 用线栓法制备SD大鼠大脑中动脉阻塞再灌注(MCAO)模型,托吡酯100mg/kg灌胃,1次/d,通过免疫组化染色变化观察不同组NMDAR1及GABA染色变化.结果 单纯缺血再灌注组与假手术组相比大鼠脑缺血侧脑组织GABAa明显降低,托吡酯治疗组较单纯缺血组GABAa增高.托吡酯预防组GABAa含量较单纯缺血再灌注组明显增高.单纯缺血组与假手术组相比大鼠脑缺血侧脑组织NMDAR1明显降低, 托吡酯治疗组较单纯缺血组NMDAR1受体量降低,托吡酯预防组NMDAR1受体量与单纯缺血再灌注组相比明显降低.结论 托吡酯保护大鼠脑缺血的重要机制之一可能是通过抑制兴奋性氨基酸释放,提高抑制性氨基酸释放及改变其受体表达实现的.
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N-甲基-D-天门冬氨酸受体1在脊髓缺血性损伤的表达变化
本研究旨在观察N-甲基-D-天门冬氨酸受体1(NMDAR1)在脊髓缺血后不同缺血时间的表达,从而为临床治疗提供实验基础.
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慢性脑缺血大鼠海马区NMIDAR1表达的实验研究
目的观察慢性脑缺血时认知相关分子N-甲基-D-天门冬氨酸受体NMDAR1)mRNA表达的变化.方法采用双侧颈总动脉永久性结扎2-VO)制作慢性脑缺血模型.12只雄性大鼠随机分为正常对照组6只)和手术组6只).术后2个月处死动物,取大鼠海马组织,RT-PCR检测NMDAR1的mRNA水平.结果手术组较正常对照组NMDAR1水平下降P＜0.05).结论大鼠海马区NMDAR1表达下调可能是慢性脑缺血所致血管性认知功能障碍的分子机制之一.
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NMDAR1、Caspase-3在脊髓缺血性损伤的表达特点及相关性研究
目的 探讨脊髓缺血后N-甲基-D-天门冬氨酸受体1(N-methyl-D-aspartateroceptor,NMDAR1)、Caspase-3的表达变化规律及意义.方法 40只新西兰大白兔采用结扎腰动脉建立脊髓缺血模型,于缺血后6h、12h、24h、48h、72h取缺血脊髓标本,运用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印记技术在基因和蛋白水平检测NMDAR1、Caspase-3在不同缺血时间的表达变化规律,同时运用免疫组织化学技术观察NMDAR1、Caspase-3在细胞中的表达定位情况;用SPSS统计分析.结果 RT-PER、蛋白印记显示缺血组与对照组比较NMDAR1、Caspase-3表达增加,并且有随缺血时间的延长表达逐渐增高的趋势,相关性分析显示NMDAR1、Caspase-3在mRNA(r=0.947,P<0.005)、蛋白(r=0.984,P<0.005)水平呈正相关;免疫组化结果发现,NMDAR1、Caspase-3主要在细胞浆中表达.结论 脊髓缺血时NMDAR1、Caspase-3随缺血时间延长表达增加,NMDAR1、Caspase-3共同参与脊髓缺血性损伤过程,其表达与缺血时间有关.
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NMDAR1和GABAA受体的α1及α3亚单位在成年猴小脑的定位分布
目的:探讨NMDAR1和GABAA受体的α1及α3亚单位在成年恒河猴小脑皮质及小脑核的定位分布.方法:用免疫组织化学染色技术及尼氏染色技术.结果:NMDAR1免疫反应产物主要分布在Purkinje细胞胞质和分子层的树突,分子层的星形细胞以及颗粒细胞层的颗粒细胞呈免疫反应产物弱阳性,胶质细胞呈中等强度的染色,小脑核的神经元胞质和部分突起染色明显.GABAA受体的α1亚单位免疫反应产物主要分布在Purkinje细胞胞质和树突,分子层的星形细胞和胶质细胞呈中等强度的染色,小脑核的神经元染色明显.GABAA受体的α3亚单位免疫反应产物主要分布在Purkinje细胞胞质和树突,胶质细胞及小脑核神经元染色明显.在Purkinje细胞层NMDAR1,GABAA受体α1及α3亚单位免疫阳性神经元分别占总Purkinje细胞数的(90.0±2.1)%,(83.0±2.3)%,及(78.0±1.8)%.结论:NMDAR1,GABAA受体的α1及α3亚单位在成年恒河猴小脑具有广泛的分布.这些受体在介导小脑复杂的功能中可能发挥了重要的作用.
