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AMPA受体亚单位GluR2在大鼠局灶性脑缺血不同时期表达及其机制研究
目的通过研究大鼠局灶性脑缺血不同时期缺血中心区与半暗带α-氨基羟甲基异恶唑丙酸(AMPA)受体亚单位GluR2蛋白表达,并同时观察凋亡指数,以进一步阐述GluR2在缺血性脑卒中的作用机制.方法采用免疫组化和Tunnel染色分别检测大脑中动脉梗塞(MCAO)2 h再灌后1 h、1 d、3 d、7 d、15 d、30d大鼠GluR2蛋白和凋亡细胞的表达.结果再灌1 h,缺血侧中心区(ischemia core IC)与缺血半暗带区(ischemia penumbra,Ip)GluR2蛋白表达与对照组无差异.在缺血中心区,再灌后1dGluR2蛋白表达开始减少(F=1.104,P＜0.05),3 d表达达到低(F=3.252,P＜0.01),7、15 d表达回升(F=1.878,P＜0.01;F=1.185,P＜0.05),30 d基本上与对照组相同.在缺血半暗带,GluR2蛋白表达在再灌后1、3、7d与健侧无明显差异,但在15 d可见表达明显增强(F=27.166,P＜0.01),在30 d表达呈更强(F=28.515,P＜0.01),且阳性细胞数目也稍有所增多.在缺血中心区,再灌1h即检测到表达非常弱但数目较多的凋亡细胞,再灌1 d后更为明显,3 d和7 d凋亡细胞在数量上和表达程度上达到高峰,15 d凋亡细胞减少,1个月后只见中心区少许凋亡细胞.在半暗带区,MCAO再灌后3d,7 d和15 d仅见少许TUNNEL阳性细胞.结论再灌后细胞凋亡出现时间先于GluR2蛋白表达下调时间提示GluR2不是早期凋亡的启动因子.再灌后1～30d,GluR2蛋白表达变化与凋亡阳性细胞几乎平行,提示GluR2虽不启动早期凋亡,但可能导致神经元进一步凋亡,或参与迟发性神经元死亡.缺血侧半暗带区GluR2蛋白在再灌后15～30 d表达明显增强,且数目也稍有增多,提示GluR2与突触的可塑性有关.
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大鼠吗啡条件性位置偏爱期间前额叶皮质和伏隔核中GluR1、GluR2阳性神经元的变化
目的:研究吗啡依赖期间大鼠前额叶皮质和伏隔核中GluR1、GluR2 阳性神经元的变化.方法:采用免疫组织化学实验方法观察吗啡条件性位置偏爱模型大鼠前额叶皮质和伏隔核中GluR1和GluR2 阳性神经元的形态及数目变化.结果:与空白对照组比较,吗啡模型组 GluR1和GluR2的阳性神经元数均明显升高(P<0.01).结论:大鼠条件性位置偏爱期间前额叶皮质和伏隔核中GluR1和GluR2的阳性神经元增多,提示AMPA受体GluR1和 GluR2两个亚基参与了吗啡精神依赖的形成.
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左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症海马NVU神经元的调控作用及其机制
目的 探讨糖尿病并发抑郁症(DD)状态下谷氨酸(Glu)失衡对海马神经血管单元(neuro-vascular unit,NVU)中神经元GluR2、Beclin-1蛋白表达的影响,及左归降糖解郁方对其干预作用.方法 原代分离、纯化和培养SD大鼠海马神经元、星形胶质细胞及脑微血管内皮细胞,构建海马NVU体外共培养体系,采用免疫细胞化学染色法进行细胞鉴定;采用高糖(150 mmol/L)联合皮质酮(200μmol/L)干预构建海马NVU细胞模型;将培养的细胞随机分组,未造模细胞分为正常组、空白血清对照组,造模细胞分为模型组、左归降糖解郁方(32.82 g/kg)含药血清组和阳性药(氟西汀0.18 g/kg+二甲双胍1.8 mg/kg)含药血清组,除正常组与模型组给予等量培养液,其余组给予相应体积分数10％的含药血清或空白血清;采用酶联免疫吸附法检测各组海马NVU神经元培养液上清中Glu含量;采用免疫荧光染色与高内涵细胞成像分析技术(HCA)检测各组海马神经元内GluR2、Beclin-1蛋白表达情况;采用Tunel染色检测各组海马神经元凋亡情况.结果 与正常组及空白血清对照组比较,模型组海马NVU培养液上清中Glu含量显著升高(P<0.01),GluR2表达明显减少(P<0.01),Beclin-1表达明显增加(P<0.01),细胞凋亡明显增多;与模型组比较,阳性药含药血清组与左归降糖解郁方含药血清组Glu含量显著降低(P<0.01),GluR2表达上调(P<0.01),Beclin-1表达下调(P<0.01或P<0.05),细胞凋亡显著减少.结论 左归降糖解郁方对海马NVU细胞模型中神经元GluR2、Beclin-1蛋白表达具有明显的调控作用,该作用可能与改善谷氨酸失衡有关,这可能是其抑制细胞自噬继而抗DD海马神经元凋亡的重要机制.
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基于海马CA1区微量注射AMPA对肝郁脾虚证模型大鼠杏仁核BLA区阳性细胞的影响探讨逍遥散的调节机制
目的 运用免疫组化方法,对比海马CA1区微量注射α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)对肝郁脾虚证模型大鼠杏仁核BLA区AMPA受体亚基阳性细胞的影响,探讨逍遥散调节肝郁脾虚证的机制.方法 25只SD雄性大鼠随机等分为5组,正常组、模型组、假手术组、AMPA组和逍遥散组.以21 d慢性束缚应激方法造肝郁脾虚证模型,于模型大鼠双侧海马CA1区,埋管微量注射AMPA受体的激动剂AMPA,逍遥散组造模方法和AMPA组尽可能相似,突出逍遥散和AMPA干预的可比性.运用免疫组化方法检测杏仁核基底外侧区(BLA区)AMPA受体的2个重要亚基谷氨酸受体1(GluR1)和谷氨酸受体2(GluR2)的阳性细胞数变化情况,比较逍遥散组和AMPA组上述指标的变化趋势是否一致.结果 造模21 d后,在杏仁核BLA区,与正常组比较,AMPA组和逍遥散组GluR1和GluR2阳性细胞数表达差异均无统计学意义(均P＞0.05)；与模型组比较,AMPA组和逍遥散组GluR1和GluR2阳性细胞数表达差异均有统计学意义(均P＜0.01),且2组GluR1阳性细胞数表达均较模型组增高,GluR2阳性细胞数表达均较模型组降低,2组阳性细胞数表达升降趋势一致.各组阳性细胞积分光密度结果与阳性细胞数结果一致.结论 结合前期实验,从免疫组化角度进一步推断逍遥散通过纠正杏仁核和海马AMPA受体的“兴奋-抑制”失衡,重建稳态,从而治疗肝郁脾虚证.
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血小板活化因子及相关因子在机械性颅脑损伤中的表达和意义
[目的]研究机械性颅脑损伤后PAFR、COX-2和GluR2之间的相互关系以及与脑损伤时序性变化的相关性.[方法]采用SD大鼠复制Marmarou's闭合性颅脑损伤模型,于损伤后4、8、12、24和48 h用RT-PCR检测大鼠大脑海马中PAFR、COX-2和GIuR2的基因表达情况.[结果]脑损伤后,PAFR和GluR2表达减弱,12 h达低,损伤后各组与对照组相比差别均有显著性(P<0.01);COX-2表达增强,8 h达高值,损伤后4、8、12和24 h组与对照组相比差别有显著性(P<0.01).[结论]PAFR、COX-2和GluR2三者在闭合性颅脑损伤中表达的时序性变化特点基本一致,关系密切,共同参与脑损伤病理生理过程.
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抑黑素对癫痫模型大鼠海马区GluR2表达及认知功能的影响
背景：目前研究数据显示癫痫患者常伴有认知障碍等并发症，近年来研究表明抑黑素对癫痫起抑制作用，但其机制不明。目的：探讨抑黑素对癫痫模型大鼠认知功能及海马区GluR2表达的影响，进而研究抑黑素抗癫痫的作用机制。方法：采用氯化锂-皮罗卡品诱导构建慢性癫痫大鼠模型，分别腹腔注射适量的生理盐水和抑黑素进行对比观察，并设置对照组。结果与结论：造模后第4，6周，癫痫+抑黑素组大鼠海马区GluR2表达量高于癫痫组(P <0.05)；造模后第4，6周，对照组及癫痫+抑黑素组大鼠海马CA1区突触膜蛋白中GluR2的表达量高于癫痫组(P <0.05)；造模5 d后，与癫痫组和癫痫+生理盐水组相比，癫痫+抑黑素组大鼠的逃避潜伏期、运行时间、主动回避潜伏期、被动回避潜伏期都显著降低(P <0.05)，正确率和主动回避次数显著增高(P <0.05)。结果证实，抑黑素能够通过上调癫痫模型大鼠海马CA1区突触膜上GluR2的表达来改善其认知功能损害。
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AMPA受体GluR2亚基研究进展
GluR2亚基由于其mRNA Q/R位点编辑,使得它在AMPA受体中的相对含量决定了AMPA受体的钙离子不通透性.在多种神经性损伤或退行性疾病中,神经元GluR2表达下调,Ca2+内流增加.但是目前关于GluR2下调机制,GluR2在神经元死亡或耐受中的作用及机制尚未完全阐明.本文就AMPA受体GluR2亚基调控及其与神经元损伤关系的研究进展作一综述.
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全脑缺血再灌模型大鼠皮层神经元GluR2表达的变化
目的:采用免疫组化技术,研究全脑缺血后再灌不同时点大鼠皮层神经元AMPA受体亚单位GluR2表达的变化,探讨GluR2在缺血性神经元损伤中的作用.方法:将36只SD大鼠随机分为6组,即正常组、缺血再灌注后2h、12h、24h、48h、72h 5个时间点组.参照改良的Pulsinelli四血管闭塞法制备全脑缺血大鼠模型,缺血再灌后的大鼠分别在存活2h、12h、24h、48h及72h后采用免疫组化法测定皮层神经元GluR2的表达量.结果:模型再灌5个时点之间SD大鼠皮层神经元GluR2表达量没有统计学差异(P＞0.05),但与正常组相比,各组的的表达量明显降低(P＜0.05).结论:脑缺血再灌后皮层神经元AMPA受体亚单位GluR2表达减少,介导胞外Ca2+内流,引起神经细胞死亡.
关键词： 全脑缺血再灌模型大鼠 再灌不同时点 大脑皮层神经元 GluR2 -
意向性运动疗法对大鼠脑缺血再灌注损伤后GluR2和GRASP-1表达的影响
目的 了解意向性运动疗法干预后对于大鼠行为学变化,观察对GluR-2以及GRASP-1的影响,揭示意向性运动疗法的可能作用机制.方法 利用线栓法制备大脑中动脉栓塞模型(MCAO),再灌后24h后随机分为两大组:第一组用于TTC染色；第二组用于免疫组化,每组再分为4个小组:即大脑中动脉梗死模型组(MCAO)组、意向性运动疗法(WM)组、饲养环境改变(EM)组、一般康复(CR)组,各组大鼠再分成再灌后3d、7d、15d、30d 4个小组.结果 (1)再灌后7d、15d、30d,WM组大鼠爬梯频率次数明显多于CR组及EM组；再灌后15d、30d,WM组大鼠前肢抓握功能改善明显；再灌后30d,WM组大鼠神经缺损评分明显低于MCAO组.(2)TTC染色发现再灌后15d、30d,WM组、CR组、EM组较MCAO组梗死体积增大,以WM组增大明显,有统计学意义.(3)免疫组化结果显示在再灌后30d,WM组缺血半暗带区GluR2、GRASP-1蛋白表达明显增加,与MCAO组相比具有统计学意义.(4)相关性分析显示,大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织GluR2与GRASP-1的表达呈明显正相关(r=0.678,P＜0.01).结论 意向性运动疗法可能通过诱导大鼠脑缺血再灌注损伤后缺血半暗带区GRASP-1表达上调,增加GluR2表达,增强突触传递效能,提高突触可塑性.
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AMPA受体棕榈酰化在亚慢性铝染毒大鼠海马长时程增强中的作用
[目的]研究α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)受体棕榈酰化修饰在亚慢性铝染毒在大鼠海马长时程增强(LTP)中的作用.[方法]健康成年雄性SD大鼠24只,按体重相近者随机分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组6只,采用腹腔注射麦芽酚铝的方式对大鼠进行染毒,对照组给予生理盐水,低、中、高剂量组的铝染毒剂量分别为10、20、40μmol/kg,隔天染毒,共染毒12周.染毒结束后采用在体海马CA1区LTP记录技术,记录兴奋性突触后电位,然后断头取海马,采用酰基生物素置换法测定AMPA受体棕榈酰化水平.[结果] LTP检测结果显示,高频刺激后1min和60 min时,各剂量组的标准化幅值(后简称“幅值”)差异有统计学意义(P＜0.05);30min时差异无统计学意义.1min时,中、高剂量组的幅值低于对照组和低剂量组,差异均有统计学意义(P＜0.05).60 min时,低、中、高剂量组的幅值均低于对照组,且高剂量组的幅值低于低、中剂量组,差异均有统计学意义(P＜0.05).酰基生物素置换法结果显示,中、高剂量组的离子型谷氨酸受体1(GluR1)低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);中剂量组的离子型谷氨酸受体2(GluR2)棕榈酰化水平低于对照组,高剂量组的GluR2棕榈酰化水平低于对照组及低、中剂量组,差异均有统计学意义(P＜0.05).[结论]亚慢性铝染毒后,大鼠海马LTP受到抑制,AMPA受体棕榈酰化水平降低,这提示AMPA受体棕榈酰化降低可能是LTP损害的机制之一.
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不同糖浓度对新生鼠海马神经元GIuR2和PTEN表达的影响
目的:观察不同糖浓度对新生大鼠海马神经元细胞谷氨酸代谢型受体GluR2和PTEN表达的影响.方法:建立原代新生大鼠海马神经元细胞培养方法,培养至第10天时,给予不同浓度右旋葡萄糖刺激.通过RT-PCR检测GluR2、PTEN mRNA表达变化,通过免疫细胞化学检测海马神经元细胞GluR2、巢蛋白表达变化.结果:新生大鼠海马神经元细胞培养至第10天时,在不同糖浓度刺激后,GluR2 mRNA表达明显下调;在糖刺激下PTEN mRNA表达先上调,随着糖浓度升高,表达呈现下降趋势.免疫细胞显色显示海马神经元细胞GluR2蛋白表达下调,巢蛋白表达也呈现下调趋势,PTEN蛋白表达与mRNA表达趋势相同.结论:糖浓度升高引起海马神经元细胞GluR2和巢蛋白表达下调,以及PTEN表达上调,与高糖对海马神经元的变性、凋亡等损伤性变化,可能是糖尿病脑病的发生机制之一.
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三七总皂甙对脑出血大鼠前脑兴奋性氨基酸受体GluR2表达的作用
目的:研究三七总皂甙对脑出血大鼠前脑兴奋性氨基酸受体AMPA受体亚基GluR2表达的作用.方法:用免疫组织化学法观察胶原酶诱导的脑出血大鼠前脑内GluR2在给药组和对照组的表达变化.结果:脑出血后大鼠前脑病灶内部GluR2表达呈阴性,海马很少表达,但病灶周围和同侧皮质神经元的表达增强.给药组在皮层、病灶周围阳性细胞增多,反应强度增强.结论:三七总皂甙对GluR2阳性表达有增强作用,从而发挥对受损神经元的保护作用.
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GluR2在大鼠蜗核的年龄依赖性表达及与突触发育的关系
目的 检测α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)受体亚型GluR2和突触小泡蛋白(SYP)在不同年龄大鼠蜗核中的表达,探讨GluR2的表达规律及与突触发育的关系.方法 选取2、3、4、6、8和10周SD大鼠,应用免疫荧光组化方法观察各年龄大鼠GluR2及SYP在蜗核中的表达及其相互关系.结果 GluR2在不同年龄大鼠蜗核神经元中均有表达,生后2、3周时表达较弱,4周时逐渐增强,6周达高峰,之后急剧下降,10周表达弱.GluR2在大鼠耳蜗背侧核颗粒细胞层表达较强,在分子层和多极细胞层表达较弱.SYP在不同年龄大鼠蜗核神经元中均有表达,生后2周表达弱,4周显著增强,6周为高峰,8周时骤然降低并稳定表达.结论 大鼠生后发育过程中蜗核GluR2及SYP的表达呈现基本一致的年龄依赖性规律,GluR2在蜗核的表达可能与蜗核突触成熟及功能发育有关,其年龄依赖性表达现象可能是中枢神经系统感觉功能发育及可塑性的重要机制.
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miR-124抑制GluR2参与甲基苯丙胺PC12细胞成瘾
目的 探讨miR-124表达在甲基苯丙胺成瘾PC12细胞模型中的变化及其可能参与的调控机制.方法 培养PC12细胞,随机分为6组:① 正常对照组;② 甲基苯丙胺组;③ agomir Negative Control组;④ miR-124 agomir组;⑤ agomir Negative Control+甲基苯丙胺组;⑥ miR-124 agomir+甲基苯丙胺组.处理结束后,提取细胞总RNA和蛋白,Realtime PCR检测miR-124表达,Western blot检测谷氨酸受体2亚单位(ionotropic glutamate receptor AMPA alpha 2,GluR2)蛋白表达.结果 与正常对照组相比,甲基苯丙胺处理组PC12细胞中miR-124表达明显降低,GluR2蛋白表达明显升高;与agomir Negative Control+甲基苯丙胺组相比,miR-124 agomir+甲基苯丙胺组PC12细胞中miR-124表达明显升高,GluR2蛋白表达明显降低.结论 miR-124可能通过抑制GluR2参与了甲基苯丙胺诱导的PC12细胞成瘾.
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三七超临界CO2萃取物对谷氨酸损伤PC12细胞的保护作用
目的 研究三七超临界CO 2萃取物(SFE)对谷氨酸损伤PC12细胞的保护作用,并探讨其可能作用机制.方法 以谷氨酸损伤PC12细胞为模型,采用MTT法检测细胞存活率,LDH法检测乳酸脱氢酶的漏出率,Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡,Fluo-3/AM荧光染色法检测细胞内钙离子浓度,Western blot法检测PICK1、GluR2蛋白的表达.结果 谷氨酸对PC12细胞具有兴奋性毒性作用,其半数抑制浓度(IC50)为25 mmol·L-1.不同浓度三七SFE(25、50、100 mg·L-1)、PICK1抑制剂FSC231(100μmol·L-1)、三七SFE(100 mg·L-1)+FSC231(100μmol·L-1)预处理可明显提高细胞存活率,减少LDH的释放,降低PC12细胞的凋亡率,减少钙离子内流,降低PICK1蛋白表达,增加GluR2蛋白表达.结论 三七超临界CO 2萃取物对谷氨酸损伤后的PC12细胞具有保护作用,机制可能与抑制PICK1、增加GluR2蛋白表达有关.
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外周组织损伤对脊髓AMPA受体突触表达的影响及其机制
目的 研究外周组织损伤对脊髓背角AMPA受体突触表达的影响及其分子调节机制.方法 小鼠足底皮下注射完全弗氏佐剂(CFA),建立炎性疼痛模型;24 h后分离L4～L5脊髓背角,提取"富含突触后致密质(PSD)"的亚细胞结构,免疫印迹法检测AMPA受体GluR2亚基突触表达的变化,并观察cAMP依赖性蛋白激酶(PKA)在调节GluR2突触含量中的作用.结果 CFA在引发痛觉超敏的同时,脊髓背角GluR2的突触含量明显升高.虽然PKA抑制剂H-89并不影响正常小鼠的痛阈及GluR2的突触含量,但H-89却能有效缓解炎性痛觉超敏,同时完全翻转CFA诱发的GluR2亚基在突触中的过量表达.结论 外周组织损伤通过激活脊髓PKA,明显提高AMPA受体GluR2亚基在脊髓突触中的含量,可能是慢性炎性疼痛形成的重要机制.
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片仔癀对局灶性脑缺血/再灌注大鼠皮质中NMDAR1和GluR2表达的影响
目的 研究片仔癀对局灶性脑缺血/再灌注大鼠皮质中NMDAR1、GluR2 mRNA及蛋白表达的影响.方法 健康成年♂SD大鼠40只,随机分为假手术组、模型对照组、片仔癀给药组,用线栓法建立局灶性脑缺血/再灌注大鼠模型(MCAO).Zea-Longa标准评分法评价大鼠神经功能损伤;TTC染色法评价脑梗死体积变化;qPCR法和Western blot法分别检测大鼠缺血侧脑组织皮质中NMDAR1、GluR2 mRNA及蛋白的表达.结果 与MCAO组比较,片仔癀能明显改善大鼠的神经功能损伤,降低大鼠脑梗死体积,促进NMDAR1、GluR2 mRNA及蛋白的表达.结论 片仔癀可能通过抑制局灶性脑缺血/再灌注大鼠皮质NMDAR1、GluR2 mRNA及蛋白的下调而发挥脑保护作用.
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电磁辐射对PC12细胞GluR2蛋白质表达及磷酸化的影响
目的 探讨电磁辐射对PC12 细胞GluR2蛋白质表达及蛋白质磷酸化水平的影响.方法 对离体培养的PC12细胞给予平均功率密度为90 mW/cm2的电磁波持续辐照20 min,采用western blot方法检测辐照后0h、3h、12h、24h四个时相点GluR2蛋白质表达及蛋白质磷酸化水平的变化.结果 电磁波辐照后0h和3h GluR2的蛋白质表达水平降低(P＜0.05),其余各时相点无显著变化;辐照后0h GluR2的蛋白质磷酸化水平显著降低(P＜0.01),3h后逐渐恢复至正常水平.结论 平均功率密度为90 mW/cm2的电磁波持续辐照20 min能够降低PC12细胞GluR2的蛋白质表达和蛋白质磷酸化水平.
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大鼠GluR2基因启动子控制的萤火虫荧光素酶表达载体的构建
目的 构建大鼠GluR2基因启动子控制的萤火虫荧光素酶表达载体,并检测其在神经元中的表达.方法 采用PCR方法获得GluR2基因启动子区目的 片段(-298～﹢283),双酶切后插入到pGL3-Basic载体中构成重组表达载体,使萤火虫荧光素酶报告基因的表达受GluR2启动子控制.将构建的重组表达载体或pGL3-Basic载体分别与内参质粒pRL-CMV(表达海肾荧光素酶)共转染原代培养皮质神经元,24 h后用双荧光检测试剂盒测定萤火虫荧光素酶及海肾荧光素酶活性.结果 重组表达载体经双酶切及测序鉴定证明构建正确,该重组表达载体在神经元中特异性高表达萤火虫荧光素酶.结论 成功构建大鼠GluR2基因启动子控制的萤火虫荧光素酶表达载体,并检测到该载体在神经元中的特异性表达.
关键词： GluR2 神经元 pGL3-Basic 基因表达构建 萤火虫荧光素酶 -
AMPA受体GluR2在糖尿病大鼠海马中的表达
目的检测糖尿病大鼠海马中GluR的表达,观察海马的病理变化.方法将24只Wistar大鼠随机分成两组,对照组与糖尿病组各12只.糖尿病组用STZ制模,12周后,取脑应用免疫组化及图像分析技术检测海马中GluR2的表达.结果糖尿病组大鼠海马CA3区GluR2的表达较正常组减少(P＜0.01).结论钙离子可能在糖尿病大鼠海马的病理改变中发挥了重要作用.
