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左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠HPA轴及海马糖皮质激素受体表达的影响
目的:探讨复方中药左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症(diabetes mellitus with depression,DD)大鼠HPA轴及糖皮质激素受体的调控作用,阐明其对海马组织的可能保护机制.方法:采用尾静脉注射STZ联合慢性应激建立DD大鼠模型,并按随机数字表法分为模型组、左归降糖解郁方低、中、高剂量组和阳性药组,同时以正常大鼠为对照组.末次给药后,测定各组大鼠血糖值及抑郁行为,病理切片染色观察大鼠海马组织损伤情况,ELISA试剂盒检测大鼠血浆促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropinreleasing hormone,CRH)、促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)、皮质酮(corticosterone,CORT)水平,蛋白免疫印迹法(Western-blotting)检测大鼠海马糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)表达.结果:左归降糖解郁方能显著降低模型大鼠的血糖值和抑郁样行为,海马病理损伤情况得以缓解,且血浆ACTH、CORT水平下降,海马GR蛋白表达上升.结论:左归降糖解郁方能明显改善DD大鼠血糖值和抑郁行为,保护海马神经元,其作用可能与上调GR表达密切相关.
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左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元凋亡的影响
目的：观察左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠学习记忆能力以及海马 JNK、Bcl-2、Bax 表达的影响，探讨其对糖尿病并发抑郁症大鼠海马损伤的保护机制。方法采用高脂饲料灌胃联合尾静脉注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型，继续给予28 d慢性应激建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型。实验大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组及左归降糖解郁方高、中、低剂量组。末次给药后，采用 Morris 水迷宫测试大鼠逃避潜伏期时间，Western blot检测海马JNK、Bcl-2、Bax蛋白表达；RT-PCR检测JNK、Bcl-2、Bax基因表达。结果与空白组比较，模型组大鼠逃避潜伏期明显延长（P＜0.01），JNK、Bax蛋白及基因表达明显上升， Bcl-2表达明显下降（P＜0.05，P＜0.01）；与模型组比较，左归降糖解郁方高剂量组大鼠逃避潜伏期明显缩短（P＜0.01），JNK、Bax 蛋白及基因表达均明显下降，Bcl-2表达明显升高（P＜0.05，P＜0.01）。结论左归降糖解郁方能明显改善糖尿病并发抑郁症大鼠的学习记忆能力，其作用机制可能与抑制海马神经元凋亡有关。
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左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马谷氨酸及N-甲基-D-天冬氨酸受体2A、2B的影响
目的：观察左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马谷氨酸、N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA receptor,NR)2A及NR2B表达的影响,探讨其对糖尿病并发抑郁症大鼠海马损伤的保护机制。方法建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型,随机分为模型组、阳性药组及左归降糖解郁方高、中、低剂量组,以正常大鼠为正常组,每组16只,各给药组给予相应药物灌胃,连续28 d。采用Open-field实验评价大鼠行为变化,ELISA检测海马谷氨酸含量,免疫荧光法检测海马NR2A、NR2B表达。结果与正常组比较,模型组大鼠自主活动次数明显减少(P＜0.01),海马谷氨酸含量明显升高(P＜0.01),NR2A、NR2B表达明显升高(P＜0.01)；与模型组比较,阳性药组和左归降糖解郁方高剂量组大鼠自主活动次数明显增加(P＜0.01),海马谷氨酸含量明显下降(P＜0.01), NR2A、NR2B表达降低(P＜0.05)。结论左归降糖解郁方可明显改善糖尿病并发抑郁症大鼠的抑郁行为,其药效作用可能与调控大鼠海马谷氨酸含量及NR2A、NR2B表达有关。
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左归降糖解郁方对模拟糖尿病并发抑郁症环境下模型大鼠海马神经元凋亡相关蛋白的影响
目的 探讨左归降糖解郁方对模拟糖尿病并发抑郁症(DD)环境下海马神经元凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-8的调控作用.方法 采用受孕18 d SD大鼠胎鼠进行海马神经元原代培养,葡萄糖联合皮质酮干预构建DD模拟环境.将培养的海马神经元随机分为正常组、空白血清组、模型组、阳性药(二甲双胍+氟西汀)药物血清组和待测药(左归降糖解郁方)药物血清组,正常组和模型组给予等量培养液,其余组给予相应体积分数10％药物血清或空白血清,造模干预18 h后,Hoechst荧光染色检测海马神经元凋亡;高内涵分析技术检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-8的表达.结果 与正常组比较,模型组大鼠海马神经元树突断裂或减少,神经网络连接降低,细胞存在明显的浓染、破碎、光点分布不均现象,Bcl-2蛋白表达显著下降(P<0.05),Bax和Caspase-8蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,阳性药药物血清组和待测药药物血清组大鼠海马神经元网络连接显著恢复,Hoechst荧光染色可见细胞核明显均匀化,局部亮点明显减少,Bcl-2蛋白表达水平显著上调(P<0.05,P<0.01),Bax和Caspase-8蛋白表达水平显著下调(P<0.05,P<0.01).结论 左归降糖解郁方对模型大鼠海马神经元凋亡的保护作用可能与调控海马神经元Bcl-2,Bax和Caspase-8的表达有关.
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左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马星形胶质细胞神经营养的影响
目的 研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症模型大鼠海马星形胶质细胞神经营养功能的保护作用.方法 采用复合方法建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型.实验大鼠随机分为模型组、阳性药组和左归降糖解郁方高、中、低剂量组,每组12只,另取12只SD大鼠作为正常组.各给药组给予相应药物灌胃,连续4周.旷场实验检测大鼠抑郁行为,免疫组化检测大鼠海马星形胶质细胞标记物特异性蛋白胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及神经元细胞标记物微管相关蛋白2(MAP2)的表达,Western blot和RT-PCR检测大鼠海马星形胶质细胞营养分泌物脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、神经生长因子(NGF)表达.结果 与正常组比较,模型组大鼠活动次数明显减少,海马GFAP表达明显增加,MAP2、BDNF、GDNF、NGF表达明显减少;左归降糖解郁方干预后,模型大鼠抑郁行为明显改善,大鼠海马BDNF、GDNF、NGF、MAP2表达增加,GFAP表达明显减少.结论 左归降糖解郁方可有效改善大鼠海马星形胶质细胞的分泌功能,其可能通过增强星形胶质细胞的营养作用保护神经元,从而发挥抗抑郁作用.
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左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马趋化因子CX3C受体1和炎症因子的影响
目的 探讨左归降糖解郁方治疗糖尿病并发抑郁症的可能作用机制.方法 40只SD大鼠随机分为正常组,模型组,西药组及中药高、低剂量组,每组8只.除正常组外,其余各组通过高脂乳剂灌胃、尾静脉注射链脲佐菌素和慢性应激建立糖尿病并发抑郁症模型.应激造模的同时西药组给予二甲双胍0.18g/(kg·d)+氟西汀1.8 mg/(kg·d)灌胃;中药高、低剂量组分别给予左归降糖解郁方20.53、10.26 g/(ks·d)灌胃,正常组和模型组给予等体积蒸馏水灌胃,均每日1次.灌胃28天后,检测大鼠海马中炎症因子白细胞介素1β (IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量,小胶质细胞的标记物离子钙接头蛋白分子1(Iba-1)、趋化因子CX3C受体1(CX3CR1)、核转录因子κB (NF-κB)及磷酸化核转录因子κB (pNF-κB)蛋白表达.结果 与正常组比较,模型组大鼠海马IL-1β、TNF-α表达及其小胶质细胞Iba-1、CX3CR1、pNF-κB表达均显著升高(P＜0.01).与模型组比较,西药组及中药高剂量组大鼠海马IL-1β和TNF-α表达及其小胶质细胞Iba-1、CX3CR1、pNF-κB表达均显著下降,中药低剂量组IL-1β、TNF-α、CX3CR1和pNF-κB表达亦下降(P＜0.05或P＜0.01).与中药高剂量组比较,中药低剂量组CX3CR1及pNF-κB表达显著升高(P＜0.05或P＜0.01).结论 左归降糖解郁方可显著降低糖尿病并发抑郁症大鼠的海马炎症水平,该作用可能与其抑制小胶质细胞激活并下调CX3CR1和NF-κB表达有关.
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左归降糖解郁方改善糖尿病并发抑郁症大鼠抑郁样行为的作用及其机制
目的 研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠抑郁样行为的作用及其对细胞外信号调节蛋白激酶信号通路调节的影响.方法 依次给予SD大鼠高脂乳剂灌胃与链脲佐菌素尾静脉注射和慢性不可预知应激的方法,建立糖尿病并发抑郁症动物模型.按照体重将大鼠随机分为5组:模型组、对照组(0.18g·kg-1二甲双胍+1.8 mg·kg-1氟西汀)、高中低3个剂量实验组(左归降糖解郁方:20.52,10.26,5.13 g·kg-1),给药体积均为10 mL·kg-1,连续给药4周;另设正常大鼠为正常组.用开野实验检测各组大鼠抑郁行为,用水迷宫实验检测大鼠的学习记忆功能,用蛋白质免疫印迹法检测大鼠海马小鸟苷酸三磷酸结合蛋白(Ras)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)及其磷酸化蛋白p-ERK1/2、环磷酸腺苷反应单元结合蛋白(CREB)及其磷酸化蛋白p-CREB的表达.结果 中药干预后,在开野实验中的活动次数:正常组、模型组和高剂量实验组分别是(47.50±15.81),(7.50±5.24),(21.88±14.47)次,与正常组比较,模型组差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较,高剂量实验组差异有统计学意义(P＜0.05).在水迷宫实验中大鼠逃避潜伏期回归直线方程:正常组、模型组和高剂量实验组分别为y=66.88-10.76x,y=63.56-5.964x,y=67.75-9.51x,与正常组比较,模型组差异有统计学意义(P＜0.05),与模型组比较,高剂量实验组差异有统计学意义(P＜0.05).这3组的探索时间分别为(36.63±13.39),(22.25±5.42),(30.75±7.92)s,与正常组比较,模型组差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,高剂量实验组大鼠差异有统计学意义(P＜0.05).正常组、模型组和高剂量实验组的Ras表达灰度值分别为0.70 ±0.06,0.08 ±0.03,0.52±0.08,这3组的p-ERK1/ERK1的比值分别为0.62±0.10,0.20±0.03,0.41±0.02,这3组的p-ERK2/ERK2的比值分别为0.40±0.09,0.29±0.09,0.32±0.10,这3组的p-CREB/CREB的比值分别为0.60±0.10,0.10±0.02,0.46 ±0.08.与正常组比较,模型组差异均有统计学意义(均P ＜0.01);与模型组比较,高剂量实验组差异均有统计学意义(均P＜0.01);中低2个剂量实验组仅p-CREB/CREB比值差异有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05).结论 左归降糖解郁方可能通过有效调控ERK信号通路、激活CREB,从而改善糖尿病并发抑郁症大鼠的抑郁样行为.
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左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马区星形胶质细胞谷氨酸转运体的影响
目的：研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠星形胶质细胞兴奋性氨基转运体3（EAAT 3）、囊泡谷氨酸转运体2（VGLUT 2）表达的影响。方法采用高脂乳剂灌胃、尾静脉注射链脲佐菌素、28天慢性应激联合的方法复制糖尿病并发抑郁症大鼠模型，SD大鼠随机分为5组：糖尿病并发抑郁症组，二甲双胍＋氟西汀组，左归降糖解郁方高、中、低剂量组，以正常大鼠为空白对照组，灌胃给药4周。药物干预后，采用 Morris水迷宫检测大鼠空间学习能力，免疫组化双标法检测星形胶质细胞中EAAT 3、VGLUT 2的表达情况。结果与空白对照组比较，糖尿病并发抑郁症组大鼠逃避潜伏期延长（P＜0．01），EAAT 3表达下降，VGLUT 2表达升高，差异有统计学意义（P＜0．05）；与糖尿病并发抑郁症组比较，二甲双胍＋氟西汀组和左归降糖解郁方高剂量组大鼠逃避潜伏期缩短，差异有显著统计学意义（P＜0．01），且二甲双胍＋氟西汀组和左归降糖解郁方高、中、低剂量组EAAT 3表达升高，二甲双胍＋氟西汀组和左归降糖解郁方高剂量组VGLUT 2表达下降，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论左归降糖解郁方可以改善糖尿病并发抑郁症大鼠海马区星形胶质细胞EAAT 3、VGLUT 2表达的紊乱状态。
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左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症海马NVU神经元的调控作用及其机制
目的 探讨糖尿病并发抑郁症(DD)状态下谷氨酸(Glu)失衡对海马神经血管单元(neuro-vascular unit,NVU)中神经元GluR2、Beclin-1蛋白表达的影响,及左归降糖解郁方对其干预作用.方法 原代分离、纯化和培养SD大鼠海马神经元、星形胶质细胞及脑微血管内皮细胞,构建海马NVU体外共培养体系,采用免疫细胞化学染色法进行细胞鉴定;采用高糖(150 mmol/L)联合皮质酮(200μmol/L)干预构建海马NVU细胞模型;将培养的细胞随机分组,未造模细胞分为正常组、空白血清对照组,造模细胞分为模型组、左归降糖解郁方(32.82 g/kg)含药血清组和阳性药(氟西汀0.18 g/kg+二甲双胍1.8 mg/kg)含药血清组,除正常组与模型组给予等量培养液,其余组给予相应体积分数10％的含药血清或空白血清;采用酶联免疫吸附法检测各组海马NVU神经元培养液上清中Glu含量;采用免疫荧光染色与高内涵细胞成像分析技术(HCA)检测各组海马神经元内GluR2、Beclin-1蛋白表达情况;采用Tunel染色检测各组海马神经元凋亡情况.结果 与正常组及空白血清对照组比较,模型组海马NVU培养液上清中Glu含量显著升高(P<0.01),GluR2表达明显减少(P<0.01),Beclin-1表达明显增加(P<0.01),细胞凋亡明显增多;与模型组比较,阳性药含药血清组与左归降糖解郁方含药血清组Glu含量显著降低(P<0.01),GluR2表达上调(P<0.01),Beclin-1表达下调(P<0.01或P<0.05),细胞凋亡显著减少.结论 左归降糖解郁方对海马NVU细胞模型中神经元GluR2、Beclin-1蛋白表达具有明显的调控作用,该作用可能与改善谷氨酸失衡有关,这可能是其抑制细胞自噬继而抗DD海马神经元凋亡的重要机制.
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左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症海马神经元CaMKⅡ及SynGap的调控作用
目的 探讨左归降糖解郁方对模拟糖尿病并发抑郁症(DD)大鼠海马神经元钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、磷酸化认知缺陷突触相关蛋白(SynGap)的影响.方法 原代分离、纯化和培养SD大鼠海马神经元,采用高糖联合皮质酮构建DD模型.将培养的海马神经元随机分为5组:正常组、模型组、左归降糖解郁方含药血清组、阳性药(氟西汀+二甲双胍)含药血清组和空白血清组.药物干预18 d后,采用尼氏染色检测各组神经元的损伤情况,免疫荧光染色与高内涵细胞成像分析技术(HCA)检测CaMKⅡ、SynGap的表达.结果 与正常组及空白血清组相比,模型组海马神经元内尼氏小体数量显著减少,神经网络、树突棘断裂或消失, CaMKⅡ、SynGap表达明显下调(P<0.01);与模型组相比,阳性药含药血清组与左归降糖解郁方含药血清组尼氏小体明显增加,神经网络、树突数量及突触连接均明显恢复,细胞内CaMKⅡ、SynGap蛋白表达增加(P<0.01或P<0.05).结论 左归降糖解郁方对DD大鼠模型海马神经元突触可塑性相关蛋白CaMKⅡ、SynGap具有明显的调控作用,这可能是其抗细胞损伤和神经变性的重要机制之一.
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左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠血糖血脂的影响
目的 研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠血糖、血脂的影响.方法 采用ig高脂乳剂、iv链脲佐菌素(STZ,38 mg/kg)和慢性应激联合的方法制备糖尿病并发抑郁症大鼠模型,并随机分为5组:模型组,阳性药(二甲双胍0.18 g/kg+百忧解1.8 mg/kg)组,左归降糖解郁方高、中、低剂量(20.53、10.26、5.13 g/kg)组,同时以正常大鼠为对照组.各组造模同时ig给药,共4周;生化法检测各组大鼠血糖、糖化血红蛋白水平、胰岛素抵抗及血脂水平,ELISA法测定大鼠血浆皮质酮水平,HE染色观察大鼠肾上腺的病理改变.结果 与对照组比较,模型组大鼠血糖、糖化血红蛋白、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)和血浆皮质酮水平显著升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平显著降低(P＜0.05),具有明显的胰岛素抵抗.给予左归降糖解郁方干预后,大鼠血糖、糖化血红蛋白、TC、TG、LDL-C水平显著降低,HDL-C水平显著升高,胰岛素抵抗程度减轻,血浆皮质酮水平明显降低(P＜0.05、0.01),肾上腺损伤程度减轻.结论 左归降糖解郁方可改善糖尿病并发抑郁症大鼠的血糖、血脂异常,该作用可能与其保护肾上腺,降低循环系统皮质酮水平有关.
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左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障紧密连接蛋白、Ⅳ型胶原蛋白和α-平滑肌肌动蛋白表达的影响
目的 研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症(DD)大鼠海马血脑屏障紧密连接蛋白(ZO-1)、Ⅳ型胶原蛋白(CoⅣ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.方法 采用ig高脂乳剂、尾iv链脲佐菌素(STZ,38 mg/kg)、28d慢性应激联合的方法建立DD大鼠模型并随机分为5组:模型组,阳性药(盐酸二甲双胍0.18 g/kg+百忧解1.8 mg/kg)组,左归降糖解郁方高、中、低剂量(32.82、16.41、8.20 g/kg)组,并以正常大鼠为对照组,每组10只.给药4周后,电镜下观察血脑屏障的形态变化,免疫组化法检测海马血脑屏障CoⅣ、ZO-1、α-SMA的表达情况.结果 与对照组比较,模型组大鼠ZO-1、α-SMA的表达下降,CoⅣ的表达升高,差异显著(P＜0.05);与模型组比较,阳性药组和左归降糖解郁方高剂量组大鼠ZO-1、α-SMA的表达升高,CoⅣ的表达下降,差异显著(P＜0.05、0.01).结论 左归降糖解郁方可以保护DD大鼠血脑屏障的损伤,其保护机制可能与升高血脑屏障ZO-1和α-SMA的表达,降低CoⅣ的表达有关.
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左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障精细结构AQP4、Cx43的影响
目的 研究左归降糖解郁方(黄芪、贯叶连翘、姜黄、熟地黄、山茱萸等)对糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障精细结构水通道蛋白AQP4和缝隙连接蛋白Cx43表达的影响.方法 采用高脂乳剂灌胃、尾静脉注射链脲佐菌素、28 d慢性应激联合的方法复制糖尿病并发抑郁症大鼠模型,并随机分为5组:模型组,阳性药(二甲双胍+盐酸氟西汀)组,左归降糖解郁方高、中、低剂量组,以正常大鼠为空白组,灌胃给药4周.给药后,采用Morris水迷宫测试大鼠空间学习能力,HE染色法观察海马组织病理学,免疫组化法检测海马血脑屏障精细结构AQP4和Cx43表达情况.结果 与空白组比较,模型组大鼠逃避潜伏期延长(P＜0.01),海马细胞存在明显损伤,AQP4和Cx43表达下降,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,阳性药组和左归降糖解郁方高剂量组大鼠逃避潜伏期缩短,差异有显著统计学意义(P＜0.01),海马细胞形态趋于正常,且AQP4和Cx43表达增多,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠的治疗作用可能与调控海马血脑屏障精细结构AQP4和Cx43表达有关.
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基于免疫激活研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马谷氨酸重摄取的干预作用
目的 研究糖尿病并发抑郁症模型大鼠海马内免疫状态对星形胶质细胞谷氨酸重摄取功能的影响,及左归降糖解郁方对其干预作用.方法 建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型,并随机分为模型组、阳性药组(0.18 g.kg-1二甲双胍+1.8 mg.kg-1氟西汀)、左归降糖解郁方高、中、低剂量组(20.53,10.26,5.13 g.kg-1),以正常大鼠为正常对照组,灌胃给药4周.分别采用ELISA法检测各组大鼠血清和海马中白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)及海马中谷氨酸含量,采用电镜观察各组大鼠海马血脑屏障结构,采用双重免疫组化技术检测各组大鼠海马星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及谷氨酸转运蛋白2(EAAT2)表达.结果 与正常对照组比较,模型组大鼠血清及海马匀浆液中各细胞因子表达均显著升高(P＜0.05或P＜0.01),电镜结果显示血脑屏障存在一定损伤;海马中GFAP表达显著增加(P＜0.05),而EAAT2表达显著减少(P＜0.01),海马匀浆液中谷氨酸含量异常增多(P＜0.01).高剂量左归降糖解郁方可显著减少模型大鼠血清中各细胞因子及海马匀浆液中IL-1、IL-6、IFN-γ和谷氨酸的含量(P＜0.05或P＜0.01),显著降低GFAP并增加EAAT2的表达(P＜0.05或P＜0.01),此外,其对大鼠海马血脑屏障也具有一定的保护作用.结论 左归降糖解郁方可通过增加糖尿病并发抑郁症大鼠海马星形胶质细胞表面EAAT2表达,减少谷氨酸造成的兴奋性毒性,该作用可能与其抑制模型大鼠脑内免疫激活有关.
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左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症模型大鼠海马神经元突触功能可塑性相关蛋白的影响
目的 针对NR受体亚型及其下游分子CaMKⅡ、SynGAP的表达情况,探索左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症模型大鼠海马神经元突触功能可塑性的影响.方法 复制糖尿病并发抑郁症大鼠模型并随机分为4组:模型组,阳性药组(二甲双胍0.18 g·kg-1+盐酸氟西汀1.8 mg·kg-1),左归降糖解郁方高、低剂量组(32.82,8.20 g·kg-1),以正常大鼠为空白对照组.采用Morris水迷宫检测大鼠的空间学习记忆能力,Western-blotting实验检测大鼠海马NR2A、NR2B、CaMKⅡ、SynGAP的表达情况.结果 与空白对照组比较,模型组大鼠逃避潜伏期延长,空间探索时间减少(P＜0.05),NR受体亚型NR2A、NR2B及CaMKⅡ、SynGAP的表达明显减少(P＜0.01);与模型组比较,阳性药组和左归降糖解郁方高剂量组逃避潜伏期显著缩短(P＜0.05),空间探索时间显著增加(P＜0.05),NR2A、NR2B、CaMKⅡ、SynGAP的表达明显增多(P＜0.05或0.叭).结论 左归降糖解郁方可以明显增强糖尿病并发抑郁症大鼠的学习记忆能力,改善认知功能障碍,缓解抑郁症状,该作用可能与调节海马NR受体亚型NR2A、NR2B及其下游分子CaMKⅡ、SynGAP的表达,保护海马神经元突触功能可塑性有关.
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左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠行为学及认知功能的影响
目的 研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠行为学及认知功能的影响.方法 建立糖尿病并发抑郁症动物模型并随机分为6组,模型组、二甲双胍(0.18 g·kg-1)+盐酸氟西汀(1.8 mg·kg-1)组(阳性药组)、左归降糖解郁方高、中、低剂量(20.53,10.26,5.13 g·kg-1)组,并设正常对照组.给药42 d后,进行开野和Morris水迷宫行为学评价,采用ELISA法测定各组大鼠血浆促肾上腺激素释放激素(corticotropin releasing hormone,CRH)、促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)含量.结果 与正常对照组比较,模型组大鼠开野实验中活动总数明显减少(P＜0.01),Morris水迷宫实验中逃避潜伏期明显延长(P＜0.05或P＜0.01),空间探索时间明显缩短(P＜0.05);血浆CRH、ACTH含量显著升高(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,给予左归降糖解郁方高剂量后,模型大鼠活动次数增多(P＜0.05),学习记忆能力得到一定程度恢复,血浆CRH、ACTH水平明显降低(P＜0.05).结论 左归降糖解郁方可改善糖尿病并发抑郁症模型大鼠的抑郁行为及认知障碍,可能与其降低CRH和ACTH水平,缓解HPA轴亢进有关.
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左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元JNK/Elk-1/c-fos通路的调控作用
目的:研究左归降糖解郁方保护糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元的可能作用机制.方法:随机将大鼠分为正常组和糖尿病组,糖尿病组大鼠采用尾静脉注射链脲佐菌素(STZ,38 mg/kg)的方法造模,造模成功后继续给与28 d慢性应激复制糖尿病并发抑郁症大鼠模型,并随机分为模型组,阳性药(二甲双胍0.18 g/kg+氟西汀1.8 mg/kg)组,左归降糖解郁方高、中、低剂量(32.82、16.41、8.20 g/kg)组.慢性应激第27、28天大鼠分别进行Open-field测试和强迫游泳实验,采用葡萄糖氧化酶法测定大鼠血糖值,Western-blotting法和RT-PCR法分别检测各组大鼠海马JNK、Elk-1、c-fos蛋白和基因表达.结果:模型组大鼠血糖值显著升高,自主活动能力下降,强迫游泳不动时间增加(P＜0.01),左归降糖解郁方能明显地改善其血糖值和抑郁行为(P＜0.01或P＜0.05).同时,JNK、Elk-1、c-fos蛋白及基因表达在模型组显著升高(P＜0.01),给与左归降糖解郁方干预后,模型大鼠海马JNK、Elk-1、c-fos蛋白及基因表达显著下降(P＜0.01或P＜0.05).结论:左归降糖解郁方能显著改善糖尿病并发抑郁症大鼠血糖值和抑郁行为,其作用可能与抑制JNK/Elk-1/c-fos通路,降低凋亡相关因子JNK、Elk-1、c-fos等的表达有关.
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左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元GR、NR2A及NR2B的影响
目的 研究左归降糖解郁方(ZGJTJYF)对模拟糖尿病并发抑郁症(diabetes mellitus with depression,DD)环境下大鼠胎鼠海马神经元糖皮质激素受体(Glucocorticoid Receptor,GR)、N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate,NR)亚基NR2A和NR2B的影响.方法 分离、纯化、培养并鉴定胎鼠海马神经元(neuron,NE),将培养的海马神经元随机分为5组:空白组、空白血清组、模型组、阳性药物(二甲双胍+氟西汀)合药血清组和ZGJTJYF含药血清组.模型组、阳性药物组、ZGJTJYF组分别给予葡萄糖(150 mmol·L-1)和皮质酮(200 μmol·L-1)用以构建模拟糖尿病并发抑郁症(DD)环境下海马神经元体外模型,阳性药物组和ZGJTJYF组分别给予10％相应含药血清,另空白血清组加入10％空白血清,干预18 h.采用高内涵细胞成像分析技术(High Content Analysis,HCA)检测GR、NR2A和NR2B蛋白的表达.结果 与空白血清组相比,模型组GR蛋白表达降低,NR2A、NR2B蛋白表达升高;与模型组相比,阳性药物组和ZGJTJYF 组GR表达上升,NR2A、NR2B蛋白的表达明显降低.结论 左归降糖解郁方对模拟DD环境下海马神经元GR、NR2A及NR2B蛋白的调控作用,可能是抗DD大鼠神经元损伤的保护机制之一.
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左归降糖解郁方对模拟DD环境致胎鼠海马神经元凋亡保护作用的研究
目的 研究左归降糖解郁方对模拟糖尿病并发抑郁症(diabetes mellitus with depression,DD)环境下海马神经元凋亡的保护作用.方法 从胎鼠海马组织中分离、纯化和培养海马神经元,采用神经元特异性烯醇化酶(NSE)鉴定海马神经元.采用高糖(150mM)联合皮质酮(200 μM)诱导复制模拟DD环境海马神经元损伤模型.实验分为空白对照组、空白血清组、高糖联合皮质酮组、二甲双胍0.18g/kg+氟西汀1.8mg/kg(M+F)组、左归降糖解郁方32.82g/kg (ZGJTJYF)组,造模及药物干预18h,采用MTT法,流式细胞术,高内涵成像分析系统检测各组海马神经元损伤及干预后活力及凋亡的变化情况.结果 与空白对照组比较,高糖联合皮质酮组海马神经元胞体破裂,神经网络断裂,细胞活力减小,凋亡显著(P＜0.05);ZGJTJYF组海马神经元胞体圆润,神经网络丰富,细胞活力较强,凋亡率小,与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).空白血清组细胞状态和细胞活力与正常对照组比较,无明显差异,与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).M+F组细胞状态和细胞活力与模型组比较有明显差异(P＜0.05),与ZGJTJYF组比较不具有统计学意义.结论 左归降糖解郁方能增强模拟DD环境下海马神经元的活力,减少其凋亡,对模拟DD环境下海马神经元具有保护作用.
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左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症模型大鼠海马NR不同亚型表达的影响
目的 探讨左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症模型大鼠海马NR不同亚型NR2A、NR2B表达的影响.方法 建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型,并随机分为5组:模型组,阳性药(二甲双胍0.18g/kg+盐酸氟西汀1.8mg/kg)组,左归降糖解郁方高、中、低剂量(32.82,16.41,8.20g/kg)组,以正常大鼠为空白对照组,每组10只,灌胃给药28天.给药后,采用Morris水迷宫实验评价大鼠行为学变化,Western-blotting和RT-PCR法定量检测各组大鼠海马NR2A、NR2B相关基因及蛋白的表达情况.结果 与空白对照组比较,模型组大鼠(P＜0.01)逃避潜伏期延长,空间探索时间减少,海马NR2A、NR2B表达明显升高(P＜0.01),差异有显著统计学意义;与模型组比较,阳性药组和左归降糖解郁方高剂量组大鼠逃避潜伏期明显缩短,空间探索时间增加(P＜0.01),海马NR2A、NR2B的表达减少(P＜0.05),差异有统计学意义.结论 左归降糖解郁方可通过调控DD大鼠海马NR2A、NR2B的表达,明显改善DD大鼠的抑郁样行为.
