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基于Nrf2/HO-1信号通路探讨豨莶草对尿酸钠诱导的滑膜细胞作用机制
目的:探讨Nrf2/HO-1信号通路介导豨莶草对尿酸钠诱导的滑膜细胞氧化应激作用的影响.方法:取SD大鼠滑膜组织剪碎进行自然沉降贴壁培养滑膜细胞,采用不同种浓度的稀莶草含药血清处理尿酸钠诱导的滑膜细胞,采用酶联免疫法测定各组滑膜细胞中ROS、SOD和MDA的含量;采用RT -PCR法测定滑膜细胞中Nrf2、HO-1表达.结果:ELISA测定结果发现与对照组比较,模型组滑膜细胞中ROS和MDA含量明显增加,SOD含量明显降低;与模型组比较豨莶草高、中、低组都能够明显降低滑膜细胞中ROS和MDA含量,增加SOD含量;RT -PCR结果显示模型组滑膜组织中Nrf2、HO - 1 mRNA表达明显增加,不同浓度豨莶草组能够明显提高滑膜细胞Nrf2、HO-1 mRNA表达.结论:豨莶草可能通过Nrf2/HO-1调节滑膜细胞促进Nrf2合成和核转位,从而促进下游抗氧化基因HO-1的表达有关,进而抑制氧化应激反应.
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MicroRNA-140在乳腺癌细胞中对Nrf2及其下游抗氧化基因的表达调控
目的 本研究旨在揭示microRNA在乳腺癌细胞中对Nrf2表达的影响.方法 利用生物信息学方法预测miR-140与Nrf2的结合位点,然后采用双荧光报告系统检测miR-140对Nrf2 3′UTR及启动子上的8×ARE区域活性的影响；同时以实时荧光定量PCR法和Western bloting法检测过表达miR-140和加药刺激前后细胞中Nrf2及其下游基因的mRNA和蛋白的表达变化；后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染miR-140后,对于不同浓度H2O2处理的细胞,观察其生长能力及对氧化应激敏感性的变化.结果 过表达miR-140能够显著抑制Nrf2 3′UTR区域的表达(P =0.007)和启动子上ARE区域的活性(P=0.01)；在过表达miR-140的对照组和加药组细胞中,Nrf2及其下游基因mRNA和蛋白水平均被明显抑制(均P＜0.05)；MTT实验结果显示转染miR-140细胞活力受到抑制,同时再使用不同浓度的H2 02刺激细胞后,细胞对氧化应激的敏感性增加(P＜0.01).结论 Nrf2可能作为miR-140的一个新型靶基因,miR-140能够通过抑制Nrf2,进而影响其下游一系列抗氧化基因的表达.
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胶原蛋白肽经由Nrf2信号通路对H2O2诱导的肝细胞氧化损伤的保护作用
目的:氧化应激在肝脏疾病中扮演着重要的角色.胶原蛋白肽是天然的抗氧化剂,其在动物实验中已经被证实有抑制氧化应激的作用.新研究证实胶原蛋白肽将有可能被应用在肝脏疾病的预防中,但是很少有研究报道其分子作用机制.因此本研究在胶原蛋白肽是对H2O2诱导的正常人的肝细胞系HL7702氧化损伤有保护作用的基础上,并探索其分子作用机制.方法:实验设空白对照组,H2O2模型组,胶原蛋白肽低、中、高剂量组(10,100,200μg/ml).胶原蛋白肽各组加入相应浓度的药物预处理12h后,与模型组一起加入300 μMH2O2的H2O2共同培养12h,空白对照组正常培养.细胞毒性是由CCK8和乳酸脱氢酶(LDH)的释放检测.抗氧化试剂盒检测细胞内活性氧的水平,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量的变化.Western blot检测细胞内Nrf2蛋白的表达水平.结果:胶原蛋白肽对H2O2诱导的正常人的肝细胞系HL7702氧化损伤有保护作用.胶原蛋白肽能够及时清除细胞内的活性氧,增加Nrf2的蛋白表达水平,提高超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性,减轻脂质过氧化反应,从而保护正常人的肝细胞系HL7702.结论:总之,胶原蛋白肽通过增加Nrf2的蛋白表达水平,提高抗氧化活性,对H2O2诱导损伤的肝细胞发挥保护作用.本研究为胶原蛋白肽的分子作用机制提供了新的证据,将有助于预防氧化应激所致的肝损伤.
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雌激素膜受体GPER1通过调节Nrf2减轻心肌氧化损伤
目的:观察雌激素膜受体GPER1对心肌细胞氧化损伤的保护作用,并探讨其通过PI3K/Akt信号通路上调Nrf2,减轻心肌氧化损伤的机制.方法:H2O2处理原代培养的新生大鼠心肌细胞建立氧化损伤模型,分为对照组、H2O2处理组,GPER1受体激动剂G1预处理+H2O2处理组和GPER1拮抗剂G15+G1预处理+H2O2处理组,MTT检测细胞活性,Hoechst33342染色和cleaved caspase-3免疫荧光染色观察细胞凋亡,并检测细胞内氧自由基,总抗氧化能力,超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平.Western blot测定细胞中p-Akt和细胞核内Nrf2的水平.结果:G1显著抑制H2O2导致细胞活性下降和细胞凋亡,并降低细胞内氧自由基水平,提高总抗氧化能力,增加SOD活性,减少MDA含量,但G15能拮抗G1的上述效应.同时G1能增加细胞内Akt磷酸化水平和细胞核内Nrf2的表达,这些效应可被G15和LY-294002阻断.结论:GPER1通过PI3K/Akt信号通路,调节Nrf2的表达,抑制氧化应激导致的心肌细胞损伤.GPER1可以作为开发心肌缺血损伤保护剂的一个潜在靶点.
关键词： GPER1 PI3K/Akt信号通路 Nrf2 抗氧化作用 -
tBHQ和SFN在创伤性脑损伤小鼠中的疗效比较性分析
目的:探讨叔丁基对苯二酚(tBHQ)和莱菔硫烷(SEN)在患有创伤性脑损伤大鼠的疗效差异性.方法:80只健康成年的雄性SD大鼠分为假手术组、常规损伤组、tBHQ治疗组和SFN治疗组,使用电子颅脑损伤仪(eCCI)制备TBI模型.其中tBHQ治疗组在伤前24 h大鼠腹腔注射三次tBHQ(50 mg/kg),每8h一次;SFN治疗组在伤后15 min给予腹腔注射SFN(5 mg/kg).给药24h后,采用mNSS方法评价各组大鼠神经功能缺损状况,利用干湿称量法计算脑含水量,Western blot和ELISA方法分别测定大鼠脑组织的NOX2和Nrf2的表达水平.结果:损伤发生后第24 h,tBHQ治疗组和SFN治疗组在mNSS评分((4.5±0.71)vs(9.2±0.79),(6.0± 0.82) vs (9.2± 0.79))、脑水肿(79.4％ vs 85.6％,80.3％ vs 85.6％)、NOX2和Nrf2(0.93 ng/mL vs 0.81 ng/mL,0.87 ng/mLvs 0.81 ng/mL)表达上与常规损伤组差异明显,而tBHQ治疗组和SFN治疗组间在mNSS评分((4.5±0.71)vs(6.0±0.82))、NOX2和Nrf2(0.93 ng/mL vs 0.87 ng/mL)表达上差异显著.结论:在大鼠TBI模型中,tBHQ和SFN均可以有效的降低机体自身的氧化应激作用,并改善神经功能,但tBHQ的疗效要好于SFN.
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敲除Nrf2促进高脂饮食诱导小鼠肝脏NF-kB的活化
目的:氧化应激和炎症反应是NASH进展的关键因素,同时二者之间存在着密切关系,而转录因子Nrf2和NF-kB分别是氧化应激和炎症信号通路的关键调控靶点,因此,研究Nrf2对高脂饮食诱导小鼠肝脏NF-kB信号通路的影响,对探讨NASH进展具有重要的意义.方法:雄性野生型(WT)和Nrf2基因敲除(Nrf2-/-)ICR小鼠各10只,随机分为WT对照组(Control)、Nrf2-/-对照组(KO)、WT高脂饮食组(HFD)和Nrf2-/-高脂饮食组(KOHFD)(n=5).喂养8周后,观察肝脏光镜下改变,检测肝脏GSH、MDA、TNFα和IL-6水平.Western-Blot检测肝脏NF-kB蛋白表达水平,观察敲除Nrf2对肝脏NF-kB活性作用的影响.结果:1.光镜下观察,Control组与KO组小鼠肝脏结构无明显变化,HFD组小鼠肝脏呈现大片脂肪沉积和炎症细胞浸润,KOHFD组小鼠肝脏则呈现明显的大泡性变性,且炎症细胞浸润较HFD组明显加重;2.与Control组相比,KO组小鼠肝脏MDA轻度升高,GSH轻度降低,但无明显差异,而HFD组和KOHFD组小鼠肝脏MDA显著升高(P＜ 0.05),GSH显著降低(P＜0.05),且KOHFD组MDA明显高于HFD组(P＜0.05),GSH明显低于HFD组(P＜0.05).3.ELISA结果显示,与Control组相比,KO组小鼠肝脏TNFα和IL-6分泌轻度增加,而HFD组和KOHFD组小鼠肝脏TNFα与IL-6水平显著升高(P＜0.05),且KOHFD组小鼠肝脏TNFα与IL-6显著高于HFD组(P＜0.05); 4.Western-Blot结果显示,Control组和KO组之间无明显差异,而KOHFD组和HFD组小鼠肝脏胞核NF-kB蛋白表达水平显著升高,且KOHFD组高于HFD组.结论:敲除Nrf2可以显著加重高脂饮食诱导的小鼠肝脏氧化应激水平,进而促进NF-kB的活化,从而为通过以Nrf2为靶点治疗NASH提供重要的实验依据.
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姜黄素诱导Nrf2核转位对脂多糖引起库普弗细胞分泌炎症细胞因子的影响
目的:研究姜黄素诱导大鼠Kupffer细胞Nrf2核转位对脂多糖(LPS)引起的炎症细胞因子分泌的影响.方法:分别用10μM、20μM和30μ M干预Kupffer细胞8h,诱导Nrf2核转位水平；将Kupffer细胞随机分为对照组、LPS组和干预组,对照组正常培养未加姜黄素和LPS,LPS组用10μ g/mL的LPS加入Kupffer细胞培养液共同培养2h;干预组用30μ M姜黄素干预8h后,余处理同LPS组.Western blot检测Nrf2核转位水平,分光光度法检测细胞MDA、GSH水平,ELISA法检测上清液TNF-α和IL-6,放免法检测IL-1β.结果:①姜黄素诱导Kupffer细胞Nrf2核转位,核转位水平随浓度增加而增高.②LPS组MDA水平较对照组显著升高(P＜0.01),干预组MDA水平较LPS组显著降低(P＜0.01),仍显著高于对照组(P＜0.01).LPS姐GSH水平较对照组显著降低(P＜0.01),干预组GSH水平较LPS组显著升高(P＜0.01),仍显著低于对照组(P＜001).③LPS组上清液TNF-α,IL-1β和IL-6显著高于对照组(P＜0.01),干预组均显著低于模型组(P＜0.01),但显著高于对照组(P＜0.01).结论:姜黄素通过诱导Kupffer细胞Nrf2核转位,降低LPS诱导的氧化应激损伤,抑制Kupffer细胞分泌炎症细胞因子.
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基于模式生物斑马鱼Nrf2的相关研究进展
Nrf2/ARE信号通路是大多数生物体内抗氧化应激反应、抵抗内外界刺激的关键通路,在抗炎症、免疫、抗肿瘤、抗凋亡、神经保护等方面起着重要的作用.斑马鱼作为一种常见的模式动物,广泛地应用于发育生物学、遗传学和毒理学等研究领域.研究表明转录因子NF_E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)不仅在哺乳动物体内存在,也在斑马鱼体内存在并且高度保守,并在抗氧化应激反应中发挥着重要作用.本文通过对斑马鱼Nrf2的结构、生物学功能及其信号通路等方面的新研究进行阐述,以期为Nrf2及其信号通路引发的相关疾病的预防和治疗提供新的思路.
关键词： 斑马鱼 Nrf2 胚胎发育 氧化应激 Nrf2/ARE信号通路 -
Nrf2在脓毒症大鼠免疫器官中的表达及姜黄素的干预作用
目的 探讨Nrf2在脓毒症大鼠免疫器官中的表达规律及姜黄素的干预作用,为临床防治脓毒症提供理论依据.方法 将72只Sprague-Dawley (SD)雄性大鼠随机平分为对照组、实验组、干预组,各组按术后6、12、24和48 h时间点分成不同亚组.实验组与干预组用盲肠结扎穿孔法(CLP法)制备脓毒症急性肝脾损伤大鼠模型.干预组大鼠制模后1 h按100 mg/kg剂量腹腔内注射姜黄素,实验组和对照组同时间点予以等量生理盐水,各组大鼠于各时间点活杀取材.采用心脏采血测定肝功能天门冬氨酸氨基转移酶(AST);免疫印记(Western blot)法测定肝脾组织中Nrf2蛋白的表达情况;肝组织匀浆测定总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA).结果 ①各时间点对照组AST值基本正常,随着脓毒症严重程度增加,实验组较对照组AST值明显升高(P<0.05),干预组较实验组明显改善(P<0.05).②对照组大鼠肝脾组织中均可检测到Nrf2,各时间点实验组较对照组Nrf2蛋白水平明显下降(P<0.05),干预组较实验组明显升高(P<0.05).③T-AOC在实验组表达较对照组明显降低(P<0.05),并随时间推移先升高后降低,姜黄素干预后上调(P<0.05).④MDA在实验组较对照组肝组织中表达明显上升(P<0.05),并随时间推移逐渐升高;与实验组比较,干预组肝组织中MDA表达均明显降低(P<0.05).结论 ①正常大鼠肝脾组织中均含有Nrf2,且Nrf2直接参与了脓毒症的发生和发展过程,严重感染的打击损害了机体内源性保护系统,Nrf2表达下降,导致机体抗氧化应激反应和自然免疫反应抑制,加重了脓毒症氧化应激引起的急性肝脾损伤.②姜黄素可增加脓毒症时肝脾组织Nrf2表达水平及抗氧化能力,对脓毒症大鼠急性肝脾损伤具有保护作用.
关键词： 脓毒症 Nrf2 姜黄素 总抗氧化能力(T-AOC) 丙二醛(MDA) -
Nrf2对肿瘤作用的两面性
核转录因子红细胞系-2p45(NF-E2）相关因子-2(nuclear factor erythroid-2p45-related factor2,Nrf2）介导的细胞适应性氧化应激反应是人体重要的抗氧化防御系统,对于抗致癌物的氧化损伤起重要作用。然而,该信号通路的持续激活又促进了肿瘤发生及耐药性的增加。 Nrf2在肿瘤发生过程中发挥的这种“相互矛盾”的作用在肿瘤防治领域也越来越受关注。文章综述了Nrf2在肿瘤形成过程中的正反两方面作用及其在肿瘤防治中的应用。
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Nrf2在大鼠骨骼肌挫伤愈合中表达及分布的研究
目的 研究红系衍生的核因子2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)在大鼠骨骼肌挫伤愈合中的表达及分布,探讨骨骼肌挫伤愈合的可能机制.方法 建立大鼠骨骼肌挫伤模型,健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠45只,体重280～320 g,随机分为9组,其中骨骼肌挫伤分为8个时间段组,另一组为正常对照组,各组5只大鼠的肌肉样本用于石蜡切片进行HE染色、免疫组织化学染色和免疫荧光染色.结果 对照组大鼠骨骼肌细胞浆显示了Nrf2的弱阳性反应.骨骼肌挫伤后6～12h,大部分多形核细胞(polymorphonuclear cells,PMNs)和少量单个核细胞(mononuclear cells,MNCs)的胞浆中呈Nrf2阳性表达.伤后1～3d,Nrf2主要表达于MNCs的胞浆中.伤后5～14 d,Nrf2阳性反应主要见于成纤维细胞(fibroblastic cells,FBCs)的胞浆中.此外,伤后5～14 d,多核肌管和新生的毛细血管内皮细胞的胞浆也显示Nrf2阳性反应.双重免疫荧光显示在大鼠骨骼肌挫伤愈合的过程中,Nrf2时序性表达于中性粒细胞、巨噬细胞、肌成纤维细胞.结论 大鼠骨骼肌挫伤愈合过程中,Nrf2表达在中性粒细胞、巨噬细胞、肌成纤维细胞、再生多核肌管的胞浆中,未在细胞核中表达,提示Nrf2可能不参与骨骼肌挫伤愈合.
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活血降脂保肝汤对非酒精性脂肪肝大鼠肝组织Nrf2、PKB表达的影响
目的 探讨活血降脂保肝汤对非酒精性脂肪肝大鼠的保肝降脂作用及该药方在治疗过程中可能的作用机制.方法 将健康雄性SD大鼠60只随机分为6组,即正常组,模型组,活血降脂保肝汤低、中、高剂量组,强肝片组.除正常组外,其余各组给予高脂饮食.于第12周末采集血清标本检测各组大鼠天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(A LT)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)水平,以及观察大鼠肝组织病理变化、核因子相关因子-2(Ⅳrf2)、蛋白激酶B (PKB)的表达情况.结果 与正常组比较,模型组TC、TG、ALT、AST均显著增高,差异有统计学意义(P＜0.01).与模型组比较,中药各剂量组及强肝片组TC、TG、ALT、AST水平显著降低,差异有统计学意义(P＜0.01);免疫组化检测结果显示:与正常组比较,模型组Nrf2表达水平升高,PKB表达水平降低,差异无统计学意义;与模型组比较,中药各剂量组及强肝片组Ⅳrf2、PKB表达显著增强,差异有统计学意义(P＜0.01),并以中药高剂量组尤为明显.大鼠肝脏病理切片显示活血降脂保肝汤可明显减轻肝细胞肿胀、脂肪变性及炎症细胞浸润.结论 活血降脂保肝汤具有调节脂质代谢紊乱,有效逆转非酒精性脂肪肝模型大鼠肝组织脂肪变性的程度,改善大鼠血脂、肝功能,并上调组织中Ⅳrf2、PKB表达的作用.这可能是其防治非酒精性脂肪肝病的作用机制之一.
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Nrf2和自噬对非酒精性脂肪性肝病的作用机制
非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是常见的慢性肝脏疾病之一,目前其发病率呈上升趋势.NAFLD的发生、发展是一个复杂的过程,与多种因素有关,其发病机制目前仍未完全阐明.此文就核转录相关因子2(Nrf2)和自噬对NAFLD的作用机制研究作一综述,以期为NAFLD的治疗提供新的方法和治疗靶点.
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TLR 介导的 Nrf2抗氧化通路在对乙酰氨基酚药物性肝损伤中的保护作用
目的：研究内毒素（LPS）及 Toll 样受体（TLR）在对乙酰氨基酚（APAP）药物性肝损伤中的保护作用及其相关机制。方法雄性 C57BL／6小鼠40只，分为4组，每组10只。空白对照组腹腔注射0．9％氯化钠溶液，LPS 组腹腔注射 LPS 10μg／kg，APAP 组腹腔注射 APAP 300 mg／kg，LPS＋APAP 组在 APAP 造模前16 h 给予 LPS 10μg／kg 预处理。通过比较各组血清 ALT 和 AST 水平，并通过 HE 染色评价肝组织损伤程度，观察 LPS 对小鼠肝损伤的保护作用。测定相应时间点的肝脏组织丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）的变化以及肝组织 DHE 染色，评价小鼠氧化应激水平。应用 Western 印迹及 RT-PCR 检测肝脏 Nrf2，Gclc 及 HO-1的表达水平。结果 LPS 预处理可明显减轻 APAP 所致的肝脏氧化应激反应及肝损伤程度。LPS 预处理组的小鼠血清 ALT（518．3±142．3对4542±498．4 U／L）、AST（643．3±105．6对5432．1±569．2 U／L）水平及肝组织 MDA（78．0±14．5对141．7±26．4 mmoL／mg）水平与模型组相比明显降低，而GSH （6．2±1．7对3．5±1．0μmol／g）水平明显升高（P ＜0．05），肝组织病理损伤明显减轻。同时，LPS 预处理可明显促进Nrf2及其下游抗氧化基因的表达。结论 LPS 在小鼠 APAP 肝损伤中起到保护作用，作用机制与 Nrf2抗氧化通路的激活相关，可能成为药物性肝损伤的新的治疗策略。
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加巴喷丁对糖尿病神经病理痛大鼠背根神经节Nrf2表达的影响
目的 研究糖尿病神经病理痛大鼠背根神经节(DRG)Nrf2表达的变化,探讨加巴喷丁(gabapentin,GBP)减轻大鼠糖尿病神经病理痛的机制.方法 雄性SD大鼠60只,随机分为4组:对照组(C组)、模型组(DNP组)、生理盐水+DNP组(SC+DNP组)和加巴喷丁+DNP组(GBP+DNP组,n=15).观察STZ注射前1 d及注射后3、7、10、14、21、28 d测定缩足反射机械刺激阈值(PWMT)和缩足反射热辐射潜伏期(PWTL),SC+DNP组和GBP+DNP组于STZ注射15 d起分别腹腔注射生理盐水或加巴喷丁50 mg/kg,1次/d,连续7 d,并于21、28 d测定缩足反射机械刺激阈值和缩足反射热辐射潜伏期.行为学测试完成后选择21 d大鼠用免疫荧光和Western印迹方法检测大鼠DRG中Nrf2的表达.结果 与C组比较,DNP组和SC+DNP组出现PWMT降低,PWTL缩短,DRG中Nrf2的表达减少(P<0.05);与DNP组比较,GBP+DNP组PWMT升高,PWTL延长,DRG中Nrf2的表达明显增加(P<0.05),SC+DNP组差异无统计学意义(P>0.05).结论 加巴喷丁可能通过上调DNP大鼠DRG中Nrf2表达,从而减轻大鼠DNP.
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抗氧化的NRF2通路与糖尿病及其慢性并发症
氧化应激在糖尿病及其并发症的发生发展中发挥着重要作用.核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2, NRF2)通路已被证实为重要的内源性抗氧化通路之一,近年该通路与糖尿病及并发症的相关性受到越来越多的关注.本课题组致力于NRF2通路与糖尿病慢性并发症的关联研究.本文就NRF2在糖尿病肾病、糖尿病溃疡及糖尿病肌萎缩中的保护性作用,及其内在作用的分子机制进行综述,同时探讨NRF2激动剂用于糖尿病慢性并发症防治的可行性.
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KEAP1基因突变调控Nrf2-ABCG2信号介导胃癌耐药的研究
目的：研究KEAP1基因突变通过Nrf2-ABCG2信号通路介导胃癌耐药的分子机制。方法：PCR测序法检测胃癌病人肿瘤组织中KEAP1基因突变，免疫组织化学分析胃癌组织中Nrf2及ABCG2表达情况。根据是否携带KEAP1突变分为突变组和未突变组，比较组间术后生存期及Nrf2和ABCG2表达量。结果：126例胃癌病人中检测到15例KEAP1基因突变，突变频率为11.9%。 KEAP1基因突变组胃癌病人术后中位生存期为14.0个月，低于KEAP1基因无突变组（40.5个月），其差异有统计学意义（χ2=4.360，P<0.001）。KEAP1基因突变的胃癌病人中，Nrf2及ABCG2蛋白表达量高于KEAP1基因未突变的病人，其差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：KEAP1基因突变通过上调Nrf2及ABCG2的表达，增强胃癌细胞的耐药性。
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藤黄酸联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导 配体诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡的 效果和机制
背景与目的:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)能选择性地杀伤肿瘤细胞,但多种肿瘤对其耐药.该研究旨在探讨藤黄酸(gambognic acid,GA)与TRAIL联合对人结肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤生长的影响及GA联合TRAIL抗结肠癌的作用机制.方法:建立人结肠癌HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤模型,测定TRAIL和(或)GA对裸鼠移植瘤的影响,采用H-E染色观察肿瘤组织形态结构改变,TUNEL法检测细胞凋亡状况;HT-29细胞经过siRNA干扰Nrf2表达后,通过AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,RT-PCR法检测Nrf2、Bcl-2、Bax和DR5 mRNA的表达水平.结果:联合应用GA显著促进了TRAIL对裸鼠皮下移植瘤的生长抑制(抑瘤率达67.0％)和诱导凋亡作用,下调了组织中Nrf2、Bcl-2的表达,增强了Bax和DR5的表达;与阴性对照siRNA相比,Nrf2干扰能明显上调TRAIL诱导HT-29细胞的凋亡率,提高ROS含量,下调Nrf2和Bcl-2表达,上调Bax和DR5表达.结论:GA可能是通过下调Nrf2表达,使ROS水平升高而激活线粒体凋亡途径与死亡受体途径,从而逆转人结肠癌HT-29细胞体内外对TRAIL的耐药性.
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Nrf2/NF-κB信号通路在高压氧干预缺血性视神经病变模型大鼠中的作用机制
目的 观察高压氧对缺血性视神经病变大鼠氧化应激和凋亡的影响.方法 采用数字表法将30只SD大鼠随机分为3组(每组10只):假手术组、模型组和高压氧组.假手术组只给与手术,不造成缺血性视神经病变;模型组和高压氧组给予缺血性视神经病变处理,高压氧组术后给予高压氧处理.采用实时荧光定量PCR检测各组视神经Nrf2 mRNA和NF-κB mRNA相对表达含量,采用Westernblot方法检测各组视神经Nrf2核蛋白和NF-κB蛋白的表达量,采用ELISA法检测各组血液过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量.结果 模型组大鼠视神经Nrt2 mRNA(0.40 ±0.01)、Nrf2核蛋白(1.03±0.01)、NF-κB mRNA (0.53±0.02)和NF-κB蛋白(1.15±0.02)相对表达量均高于假手术组(0.31 ±0.02、0.98±0.01、0.41 ±0.01、0.95±0.01),差异均有统计学意义(P＜0.05),模型组大鼠CAT、SOD、GSH-Px活力低于假手术组,差异有统计学意义(P＜0.05);高压氧组大鼠眼组织Nrf2 mRNA、Nrf2核蛋白相对表达量及CAT、SOD、GSH-Px活力高于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).高压氧组大鼠眼组织NF-κB mRNA和NF-κB蛋白低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 高压氧干预能够上调缺血性视神经病变大鼠视神经Nrf2核蛋白,增加大鼠CAT、SOD、GSH-Px的活力,抑制NF-κB蛋白,提高机体抗氧化和抗凋亡能力.
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汉黄芩苷通过抑制PI3K/Akt/Nrf2/ARE通路逆转SGC7901/cDDP细胞耐药性
本研究旨在观察汉黄芩苷对人胃癌顺铂 (cisplatin, cDDP) 耐药细胞株SGC7901/cDDP耐药性的影响, 并探讨其分子机制.采用浓度梯度递增法构建SGC7901/cDDP细胞;CCK-8法检测汉黄芩苷和cDDP对SGC7901/cDDP细胞活性的影响;Chou-Talalay中效分析法对两药的联合效应进行评价;流式细胞术检测活性氧 (reactive oxygen species, ROS) 含量和细胞凋亡;sh RNA干扰技术抑制Nrf2基因表达;Western blot检测Nrf2、NQO1、GST-π、MRP1、cleaved Caspase-3、p-Akt和Akt的蛋白水平.结果显示, 汉黄芩苷与顺铂单独作用或二者联用48 h均可剂量依赖性地抑制SGC7901/cDDP细胞活力 (P<0.05);当抑制率超过16％时, 二者联用呈协同效应;SGC7901/cDDP细胞的p-Akt、Nrf2和MRP1蛋白水平显著高于其亲代SGC7901细胞 (P<0.05);汉黄芩苷与PI3K抑制剂LY294002均可抑制SGC7901/cDDP细胞Akt磷酸化 (P<0.05), 增加ROS含量 (P<0.05), 下调Nrf2蛋白水平 (P<0.05), 上调cleaved Caspase-3蛋白水平 (P<0.05), 终导致细胞凋亡 (P<0.05);但抗氧化剂NAC可减轻汉黄芩苷诱导的氧化应激和细胞凋亡 (P<0.05);汉黄芩苷与沉默Nrf2基因均可使SGC7901/cDDP细胞NQO1、GST-π和MRP1蛋白水平下降 (P<0.05) .以上结果表明, 汉黄芩苷可在体外增强SGC7901/cDDP细胞对cDDP的敏感性, 这可能与其抑制PI3K/Akt/Nrf2/ARE通路, 从而增强cDDP的毒性作用并触发氧化应激损伤有关.
