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一项乙肝检测的新技术
乙肝抗原抗体测定是诊断乙肝常用的方法.酶联免疫测定由于操作简便,成本低廉,敏感性和特异性较好,80年代中期以来就成为乙肝抗原抗体检测主要的方法.但是本法只能定性,作为定量测定的方法就不够准确了.比如,不同乙肝感染者e抗原的浓度可相差100倍,表面抗原的浓度甚至相差800倍,统统用"阳性"来表示,实在太粗糙,很难满足临床的需要.为了弥补这个缺陷,进入90年代以来,国外先后推出第四代检测方法:化学发光法、电化学发光法.但是这两个方法需要昂贵的设备,试剂成本高,在我国难以普遍应用.在这种情况下,又能量化测定乙肝抗原抗体,又比较经济的诊断方法--时间分辨荧光免疫检测法逐渐吸引了人们的目光.
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巨细胞病毒特异性抗体IgG检测方法的建立
目的:建立一种以0.4U/ml为临界值的巨细胞病毒(CMV)特异性抗体IsG的检测方法.方法:用美国食品与药品监督局(FDA)认证的标准品标定临界值标准,以常规间接酶联免疫测定方法(ELISA)进行检测,对检测方法的各个环节进行比较研究,确定检测方法的佳工艺流程;对179份育龄妇女血清进行检测,并经过FDA认证的ELISA方法为金标准与之进行比较.结果:灵敏度、特异性和准确性分别为100%(160/160)、94.7%(18/19)、99.4%(178/179);批内、批间变异系数分别为6.3%～10.5%.9.3%～14.8%,基本符合ELISA方法的标准(10%～15%).结论:本研究建立的CMV-Igc检测方法灵敏度高、特异性好、重复性好,可用于育龄妇女CMV-IgG水平的检测.
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多卵巢癌病人血清中几种细胞因子关系的探讨
目的:评价两种细胞因子-转化生长因子α、β(TGF-α、TGF-β1)在卵巢癌诊断和监测中的临床价值.方法:用放射免疫及酶联法(ELISA)测定了10例正常妇女,22例卵巢良性肿瘤病人和30例卵巢上皮性癌病人术前、术后血清TGF-α、TGF-β1和CA-125的值.结果:绝大多数正常妇女和卵巢良性肿瘤病人的血清TGF-α、TGF-β1、CA-125水平明显低于卵巢癌病人:卵巢癌病人术后30天血清TGF-αβ,、CA-125降低,TGF-β1升高,各型及各期间无差异;TGF-α在卵巢癌病人血清中的异常检出率为65%,TGF-β1为75%,CA-125为80%,三者总的异常检出率为95%.结论:TGF-α、TGF-β1与卵巢癌的发生、发展有关,TGF-α、TGF-β1和CA-125联合检测对卵巢癌的鉴别诊断、病情监测及提高总的异常检出率具有价值.
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原发性胆汁性肝硬化患者自身抗体测定的意义
目的:探讨自身抗体测定对诊断原发性胆汁性肝硬化(PBC)的临床意义.方法:PBC患者52例和非PBC患者202例,其中包括自身免疫性肝炎(AIH)41例,原发性硬化型胆管炎(PSC)18例,乙型肝炎(HBV)89例,丙型肝炎(HCV)54例以及健康体检者40例,采用间接免疫荧光法(IIF)检测抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(SMA)、抗线粒体抗体(AMA)、抗心肌抗体(HRA)、抗骨骼肌抗体(ASA)、抗胃壁细胞抗体(PCA)、抗双链DNA(ds-DNA)抗体、抗肝肾微粒体抗体(LKM)、抗可溶性肝抗原(SLA)抗体和抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)等自身抗体,ELISA法检测抗髓过氧化酶抗体(MPO),并对其结果进行回顾性分析.结果:PBC患者中AMA阳性例数高为46例(88.5%),ANA阳性率为71.2%(37/52);非PBC患者中阳性例数则分别为20例(9.9%)和51例(25.2%),两组比较,有非常显著性意义(P＜0.01).AMA、SMA抗体检测在PBC与AIH患者中,均有非常显著性意义(P＜0.01).但两组之间的ANA阳性率无显著性意义(P＞0.05).PSC患者18例ANA阳性6例,AMA阳性7例均低于PBC患者.HBV, HCV感染患者检测ANA阳性率分别只有9.0%和22.2%;AMA阳性率也只有7.9%和3.7%,与PBC患者比较均有显著性差异(P＜0.01).PBC患者及对照组检测ds-DNA,ANCA,LKM,SLA和MPO抗体结果显示PBC患者检测高的ANCA阳性率为26.9%(14/52),其次是MPO阳性率为25.0%(13/52),与AIH比较,均有非常显著性意义(P＜0.01).结论:血清自身抗体的检测对诊断、治疗和阻止原发性胆汁性肝硬化的发展有着十分重要作用.对提高PBC同其他疾病鉴别诊断和治疗有着非常重要的意义.
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二甲双胍对高脂饲养大鼠肝脏脂肪变的干预作用
目的:探讨胰岛素抵抗在非酒精性脂肪性肝发病中的作用及机制,观察二甲双胍对高脂饲养大鼠肝脏脂肪变的干预效果.方法:21只♂Wistar大鼠分为3组,每组7只,普通饮食组(SD),高脂饮食组(HF),二甲双胍组(HFMet)在高脂饮食的同时给予二甲双胍,共8wk.8wk末处死大鼠,称量附睾脂肪,计算肝指数,生化方法测定ALT、AST、TG、TC、FFA、SOD和MDA.放免法测定空腹胰岛素,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和ELISA法检测肝脏TNF-αmRNA和蛋白的表达,用葡萄糖输注率(GIR)来评价胰岛素敏感性,并观察肝组织病理变化.结果:与HF相比,HF-Met肝细胞脂肪变和小叶炎症明显减轻,肝指数、胰岛素、AST、ALT、TG、FFA显著下降(3.25±0.26vs4.29±0.12,33_37±8_34 vs 46.73±5.24,17.29±5.34 vs 43.48±6.21,4.10±2.47 vs 12.05±4.05,P＜0.01;106.0±31.04 vs 141.37±24.87,48.31±16.11 vs 88.34±21.94,P＜0.05)TNF-α的表达也显著下降,GIR增加(7.58±1.05 vs 6.31±1.28,P＜0.05).结论:二甲双胍干预能明显改善高脂饲养大鼠的胰岛素抵抗,降低肝脏TG、FFA和TNF-α的表达,减轻肝脏脂肪变的程度,提示胰岛素增敏治疗可能是NAFLD防治的一种积极策略.
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血清NSE水平与急性颅脑损伤患者预后的相关性
目的 检测血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)在急性颅脑损伤患者中的水平,并探讨NSE与颅脑损伤及其预后之间的相关性.方法 采用ELISA方法测定了98例颅脑损伤患者的血清NSE水平,结合Glasgow昏迷和预后分级进行分析.结果 重型、中型、轻型颅脑损伤患者与对照组比较,血清NSE水平存在显著性差异(P<0.05);预后不良组和恢复良好组的血清NSE水平对比差异明显(P<0.05).结论 血清NSE水平与脑损害的严重程度呈正相关,是较重要的颅脑损伤的预后评估指标之一.
关键词： 颅脑损伤 神经元特异性烯醇化酶 酶联免疫测定 -
外周血中生存素的表达与胃癌预后的相关研究
目的:通过检测外周血中生存素来判断是否能预测胃癌的复发与转移.方法:以反转录-聚合酶链式反应-酶联免疫测定(RT-PCR-ELISA)方法检测胃癌患者外周血中生存素mRNA的表达,分析其与临床病理因素之间的关系.对部分患者进行36个月随访,分析复发及转移时间与外周血中生存素mRNA的表达之间的关系.结果:53例胃癌外周血中32例(60.4%)生存素mRNA表达阳性.肿瘤大小>5cm及≤5cm生存素mRNA表达率分别为78.3%、46.0%.浸润深度达浆膜层者外周血生存素mRNA表达率74.2%,高于侵及黏膜下层及肌层的表达率(33.3%),淋巴结有转移者外周血表达率为75.0%,高于无淋巴结转移的表达率(29.4%).通过随访研究发现外周血生存素阳性的患者复发及转移率明显高于阴性患者.结论:生存素mRNA在外周血的表达与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移和临床分期均有明显相关性,但与肿瘤部位、分化程度无明显相关.并可用于提示患者复发与转移风险.外周血生存素的表达可作为评价胃癌生物学行为及预后的参考指标.
关键词： 生存素 胃癌 反转录-聚合酶链式反应 酶联免疫测定 外周血 -
酶联免疫测定的干扰因素及对策
ELISA法操作简便、快速等特点给实验人员带来了多方便,但实践证明,这种技术并不是完美无缺的,须对此有足够的重视,把握实验过程中每一个可能出差错的关键性问题,采取相应的措施才能使实验误/诊减少到低限度,现就其四个方面的负效应、干扰素及措施加以阐述.
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核转录因子kB在牙周膜细胞中的激活及对IL-6合成的影响
目的观察核转录因子kB(NF-kB)在牙周膜细胞中活性的变化及对IL-6合成的影响,探讨NF-kB是否参与牙周疾病的调控及其途径.方法采用免疫组化染色法,观察NF-kB在牙周膜细胞中活性的变化;用酶联免疫测定法检测IL-6的合成.结果 LPS以10μg/ml作为有效刺激浓度,6h后NF-kB核转位达峰值;将LPS以不同的浓度作用,结果表明10μg/ml-100μg/ml的浓度都有可能是NF-kB激活的有效浓度;IL-6的合成随PDTC(NF-kB的抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸脂)浓度的增加而降低.结论 NF-kB可在LPS诱导的人牙周膜细胞中激活发生核转位;其可能通过调控细胞因子(如IL-6)合成的途径参与牙周疾病的调控.
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应用磁分离酶联免疫法评估甲状腺功能状态
由于放射性免疫法(RIA)[1]检测甲状腺激素存在放射性污染及标记物125I半衰期短等不利因素,而采用非放射性免疫分析法,如磁分离酶联免疫法(MAIA)检测日益受到临床及检验科室的重视和倡导[2].为观察MAIA法测定甲状腺功能5项的临床实用价值,我们对200例甲状腺疾病患者进行测定,结果报告如下.
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酶联免疫测定的影响因素
ELISA方法检测各种抗原抗体以其灵敏度高,特异性好,方便,简便,易于操作,检测结果可靠性高等原因,使其在各大、中、小医院得到了广泛应用,由于操作中所用的酶标仪和洗板机直接关系到检验结果的准确性,为此,各仪器生产厂家也在不断开发新的产品,国内、国外多种型号的酶标仪及与之相配套的洗板机也成了检验科在选择仪器时重视的问题,其中洗板机的选择和使用,直接影响检测结果的准确性,使用不当可造成假阳性结果,以及其它多种因素均可造成假阳性或假阴性结果,我们经过多年的检测经验,总结以下几点体会,供大家参考:
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ELISA法检测血清HBsAg前带现象的探讨
HBV表面抗原免疫检测的方法主要有凝聚试验、放射免疫测定(RIA)、酶联免疫测定(ELA)、免疫层析测定以及化学发光免疫测定(TRFLA)等,国内检测HBV血清学指标的方法大多是ELISA法[1].ELISA和RPHA是HBsAg筛选常用的方法,ELISA法具有灵敏度较高的优点,被普遍应用于临床及预防等领域[2];RPHA法检测血清HBsAg作为一种较传统和经济的方法,在本市一些单位一直延用,在检测工作中,常出现病人不知以何家结果为准的困惑.为了解两法在检出率、特异性、假阳性、假阴性方面的差异,本实验室对809例血清标本分别用ELISA法和RPHA法进行检测,结果如下.
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FK506(他克莫司)滴眼后在兔眼组织中的分布研究
目的 探讨FK506(他克莫司)滴眼液表面应用后在眼前段组织和房水中的分布.方法 配制0.05%、0.1%、0.2%、0.4%FK506滴眼液.在滴眼后不同的时间点,应用酶联免疫测定法测定房水、角膜、结膜和虹膜中的FK506浓度.结果 0.05%FK506,1h房水药物浓度达到高峰,峰值是18.93±6.95 ng/ml.0.1%FK506峰值在2h,房水药物浓度是28.33±9.31 ng/ml.4种不同浓度的滴眼液滴眼后1h,结膜、角膜中的FK506浓度为43.52ng/g～123.35ng/g、虹膜中8.85ng/g～21.76ng/g、房水中18.90～33.55ng/ml.各种浓度滴眼液滴眼后2.5h,角膜中的FK506浓度为41.75ng/g～118.29ng/g,房水中为8.35ng/ml～27.85ng/ml,结膜和虹膜中的含量明显减少.结论 我们配制的FK506滴眼液,具有良好的眼部穿透性,在房水、角膜和结膜中均可以达到有效的治疗浓度,可以用来治疗眼表或眼前段免疫相关性疾病.
关键词： FK506(他克莫司) 分布 滴眼液 酶联免疫测定 -
外周血生存素的表达与胃癌生物学行为相关性研究
目的 以反转录-聚合酶链式反应-酶联免疫测定(RT-PCR-ELISA)方法,检测胃癌患者外周血中生存素基因的表达.并分析其与胃癌生物学行为的关系,探讨其作为评价胃癌生物学行为及预后检验指标的可能性.方法 收集53例胃癌患者外周血,以RT-PCR-ELISA方法检测胃癌患者外周血中生存素mRNA的表达,比较其是否与肿瘤部位、大小、浸润深度、分化程度、淋巴结转移和临床分期具有相关性.结果 53例胃癌外周血中60.4%(32例)生存素mRNA表达阳性.肿瘤>5 cm及≤5 cm生存素mRNA表达率分别为78.3%、46.0%.浸润深度达浆膜层者外周血生存素mRNA表达率74.2%,高于侵及黏膜下层及肌层的表达率(33.3%),淋巴结有转移者外周血表达率为75.0%,高于无淋巴结转移的表达率(29.4%).结论 生存素mRNA在外周血的表达与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移和临床分期均有明显相关性,但与肿瘤部位、分化程度无明显相关.外周血生存素的表达可作为评价胃癌生物学行为及预后的参考指标.
关键词： 生存素 胃癌 反转录-聚合酶链式反应 酶联免疫测定 外周血 -
健康成年人及患者外周血激活素A和卵泡休止素水平分析
目的探讨健康成年人外周血激活素A与卵泡休止素的关系及其在疾病状态下的变化.方法采用放射免疫测定(RIA)检测健康成年人及患者外周血激活素A水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测健康成年人及患者外周血卵泡休止素水平.结果健康成年人外周血激活素A水平变化与年龄成正相关,随年龄的增加,激活素A水平增高;卵泡休止素与激活素变化相似,也随年龄增加而升高;外周血卵泡休止素水平与激活素水平变化正相关,r=0.86.卵巢癌、肾功能不全患者血中激活素A水平明显升高,P＜0.01与P＜0.05,糖尿病及甲状腺功能亢进患者未见明显变化;卵巢癌、肾功能不全患者血中卵泡休止素水平也明显升高,P＜0.01.结论人外周血激活素A与卵泡休止素水平变化成正相关,卵泡休止素与激活素A水平升高与机体年龄及疾病状态有关.
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内皮素-1在慢性心力衰竭大鼠心肌的表达及生长激素释放肽的干预作用
目的 研究内皮素(ET)-1在慢性心力衰竭大鼠心肌的表达及生长激素释放肽(GHRP)的干预作用,并探讨其相关机制.方法 60只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和GHRP组,每组20只.采用腹腔注射阿霉素法建立心衰模型；检测心功能变化；HE染色观察心肌细胞形态变化；ELISA法检测心肌组织匀浆中ET-1含量.结果 心功能和心肌细胞形态与对照组比较,模型组有显著变化,而GHRP组变化不明显.心肌组织中ET-1的含量,模型组高于对照组和GHRP组(P＜0.05),而GHRP组和对照组间无明显差异(P＞0.05).结论 GHRP能降低心肌组织中ET-1的表达,具有保护和改善心功能的作用.
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异常凝血酶原含量的测定及其在肝癌诊断中的临床应用
目的:探讨血浆中异常凝血酶原(Abnormal prothrombin,APT)含量对肝癌的诊断意义,提高原发性肝癌早期诊断的敏感性.方法:采用双抗体酶联免疫法在331人中进行血浆APT含量的测定,并与AFP免疫测定相比较.结果:166例肝癌患者中阳性率达到90.4%,高于AFP检测.结论:血浆中APT含量增高对肝癌有诊断意义,本研究所建立的APT含量检测方法对肝癌诊断特异性强,灵敏度高,是理想的肝肿瘤标志物.
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胶体金免疫层析法与酶免疫法对比检测HBSAg和HBSAb的分析
乙型肝炎病毒(HBV)是严重危害人类健康的传染病病原体之一,我国是HBV感染的高发区,约有1亿人为乙肝病毒表面抗原携带者[1].HBV感染,不仅引起急性、慢性病毒性肝炎,而且与肝纤维化、肝细胞癌的发生密切相关.目前临床领域用于免疫检测的方法主要有凝集实验、放射免疫测定(RIA)、酶联免疫测定(ELISA)、免疫层析测定等手段.
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血浆18-羟皮质醇亲和素-生物素酶联免疫测定方法的建立
本文用自制18-羟皮质醇抗血清,建立血浆18-羟皮质醇竞争性ABC-ELISA.同时测定部分正常人、原发性醛固酮增多症(原醛)和原发性高血压病人血浆18-羟皮质醇水平.结果该方法批内变异为6.6%～8.1%,批间变异为11.3%～12.2%,平均回收率为102.1%,低可测定限为0.42 nmol.L-1,正常参考值为3.0±1.7 nmol.L-1.原醛腺瘤组血浆18-羟皮质醇明显高于原醛增生组,原发性高血压组和正常组(P＜0.05),后三组之间无显著性差异(P＞0.05).鉴于本法具有简便、灵敏、稳定等特点,可提供一种原醛诊断和鉴别诊断新的检测手段.
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一步夹心法检测HBsAg的ELISA技术
本文介绍一种应用单克隆抗-HBs作为试剂,检测HBsAg的高灵敏度ELISA技术.单克隆抗-HBs的H3F5与D2H5株分别用作固相包被抗体与酶标记抗体.待检血清标本与酶标记抗体混合同期培育,45°C1h.洗板后加入底物(TMB)显色.灵敏度水平达到1～3ngHBsAg/ml(T/N值2.1N5.O).对32份已知HBsAg阴性(RIA)的正常人血清,本法无1例阳性.已知HBsAg阳性(RIA)携带者血清269份,用本法检测全部阳性.1000例各类人群血清,本法与RIA法平行测试,结果一致率达97.6%.
