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磁分离酶联免疫法检测IL-4方法的建立
建立磁分离酶联免疫法定量检测人白细胞介素4(IL-4)的方法.用异硫氰酸荧光素(FITC)和碱性磷酸酶(AP)分别标记识别不同表位的两种抗IL-4单克隆抗体(mAb), 用抗FITC多抗或mAb包被免疫磁珠.结果显示: 检测标准品浓度在0-3ng/mL范围内线性关系良好, 敏感性达10pg/mL, 平均回收率为101.7%,批内批间CV均为3.6%,与ELISA比较相关系数为0.9124.此法所需样本量少, 方法稳定, 敏感性高和特异性强, 又无放射性污染, 在临床检验和基础研究中有较大应用价值.
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应用磁分离酶联免疫法评估甲状腺功能状态
本文报告用磁性微粒酶联免疫分析与放射免疫分析法对照甲状腺功能三项(促甲状腺激素TSH、游离三碘甲状腺原氨酸FT3,游离甲状腺素原氨酸FT4)的实验结果.前者具有操作简便、准确、稳定、省时、经济、无放射性危害等优点,易于在广大城市及基层推广应用.
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应用磁分离酶联免疫法评估甲状腺功能状态
由于放射性免疫法(RIA)[1]检测甲状腺激素存在放射性污染及标记物125I半衰期短等不利因素,而采用非放射性免疫分析法,如磁分离酶联免疫法(MAIA)检测日益受到临床及检验科室的重视和倡导[2].为观察MAIA法测定甲状腺功能5项的临床实用价值,我们对200例甲状腺疾病患者进行测定,结果报告如下.
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磁分离酶联免疫法检测AFP
目的 建立检测甲胎蛋白(脚)的磁分离酶联免疫法(Magnetic affinity inmlunoassay,MAIA).方法 采用双抗体夹心法,用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)分别标记识别不同表位的两种抗AFP单克隆抗体(mAb)4A3和5H7,以偶联羊抗Frrc mAb包被的免疫磁珠作为固相载体,单磷酸酚酞(phenolphthalein monophosphate,PMP)做显色底物,建立检测AFP的MAIA法.结果 成功实现了用MAIA法对AFP的定量检测,其检测灵敏度0.2IU/ml,线性范围0.2-510IU/ml,批内CV5.5%-9.3%,批间CV1.6%-9.7%.添加回收率101.4%-104.9%,稀释回收率78.3%-123%.与雅培AxSYM及i2000的检测结果对比,相关系数分别为0.984和0.985.结论 MAIA法的性能优于现有的ELISA和RIA试剂盒,接近进口同类试剂的水平,有助于为市场提供一种高质量而价廉的AFP测定试剂盒.
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两种血吸虫病免疫诊断试剂的比较研究
目的评价日本血吸虫抗体磁分离酶联免疫试剂盒(magnetic particle antibody immunoassay,MPAIA)与血吸虫循环抗原酶联免疫吸附试剂盒(ELISA)在血吸虫病免疫诊断中的应用效果.方法采取随机单盲法,分别用MPAIA法和ELISA法检测经病原学确诊的急性和慢性日本血吸虫病、并殖吸虫病、钩虫病、旋毛虫病、囊尾蚴病、华支睾吸虫病、乙肝患者血清及非疫区健康人血清,评价这两种试剂盒的灵敏度、特异度、Youden指数、一致百分率、阳性似然比和阴性似然比等指标. 结果MPAIA法和ELISA法检测确诊急性日本血吸虫病患者血清阳性符合率分别为100%和89.13%,MPAIA与ELISA法的差别无统计学意义(χ2=1.125,P>0.05),两者检出结果呈高度一致(kappa=0.891);检测确诊慢性日本血吸虫病患者血清阳性符合率分别为100%和17.65%,MPAIA法显著高于ELISA法(χ2=36.36,P<0.05),两者结果一致性低(kappa=0.194).检测非疫区健康人特异度分别为100%和98%;MPAIA法除与并殖吸虫交叉反应率为8.33%外,与其他寄生蠕虫病无交叉反应发生,ELISA法与其他寄生蠕虫无交叉反应现象,根据金标准确定的血吸虫病阳性检测结果和非疫区健康人检测结果,上述两种检测试剂的Youden指数为1和0.5436,一致百分率为100%和76.19%,阳性似然比为∞和28.18,阴性似然比为0和0.44. 结论MPAIA与ELISA法均可用于现场筛查,但MPAIA在检测慢性血吸虫方面检测性能优于ELISA.
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日本血吸虫重组抗原rSj26的磁分离酶联免疫分析的建立及其在低感染度血清抗体检测中的应用
目的 建立基于重组日本血吸虫抗原Sj26(rSj26)的磁分离酶联免疫分析(rSj26-MEIA),并将其用于检测低感染度的日本血吸虫病患者的血清抗体. 方法 将重组质粒pET28a-Sj26转化至大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21,用0.6 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物经镍柱亲和层析法纯化后,二喹啉甲酸(BCA)法测定蛋白含量,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)检测分析rSj26.将纯化后的rSj26与磁珠偶联(100 μg抗原/mg磁珠),优化反应条件,建立rSj26-MEIA方法.用rSj26-MEIA和ELISA分别检测58份低密度感染的日本血吸虫病患者血清、30份非血吸虫病流行区阴性血清和6份并殖吸虫病患者血清,并比较两者的检测结果. 结果 纯化后的重组蛋白含量测定结果显示,rSj26浓度为2.5 mg/ml.SDS-PAGE结果显示,rSj26相对分子质量约27 000,主要以可溶性的形式表达.Western blotting结果显示,rSj26可被感染日本血吸虫的兔血清和小鼠血清特异识别.rSj26-MEIA优化反应条件结果显示,采用rSj26-磁珠0.2 mg(含rSj26 10 μg)、血清稀释度为1∶100时,阳性血清平均吸光度(A550值)/阴性血清平均A550值(P/N)大,为3.97.rSj26-MEIA和rSj26-ELISA检测低密度感染日本血吸虫病患者血清的结果显示,两者的阳性检出率均为24.14％ (14/58),两者P/N分别为3.61和2.56;相关分析结果表明,两者检测的抗体A550值间存在正相关关系(r=0.658,P＜0.01).rSj26-MEIA和ELISA检测6例并殖吸虫病患者血清和30例非血吸虫病流行区阴性血清,均未出现阳性反应. 结论 rSj26-MEIA可作为检测低密度感染日本血吸虫血清抗体的一种新技术.
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磁分离酶联免疫法检测SCC-Ag的方法学研究
目的：建立检测鳞状上皮细胞癌抗原(squamous cell carcinoma antigen，SCC-Ag)的磁分离酶联免疫法(mag-netic affinity immunoassay，MAIA)。方法：采用双抗体夹心法，用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，AP)分别标记识别不同表位的两种抗 SCC-Ag 单克隆抗体(mAb) T17和 H390，以耦联羊抗FITCmAb包被的免疫磁珠作为固相载体，APS-5作为显色底物，建立检测SCC-Ag的磁分离酶联免疫法。结果：成功实现了用磁分离酶联免疫法对SCC-Ag的定量检测，其检测灵敏度为0.22μg/mL，线性范围0~50μg/mL，批内CV 7%~8%，批间CV 6%~9%。添加回收率为97%。与雅培AxSYM微粒子化学发光检测结果对比，相关系数为0.973。结论：磁分离酶联免疫法的检测结果接近进口同类试剂的检测结果，为开发一种高质量的SSC-Ag测定试剂盒提供实验数据。
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磁微粒分离酶联免疫法在日本血吸虫抗体检测中的应用
目的 探讨磁微粒分离酶联免疫法(MPAIA)用于检测日本血吸虫病血清抗体的效果.方法 用MPAIA测定日本血吸虫病血清中特异性抗体.结果 用MPAIA检测384例非血吸虫病流行区阴性血清,均为阴性;检测61例急性血吸虫病人血清、788例慢性血吸虫病人血清、32例晚期血吸虫病人血清其阳性率分别为100%、94.2%、90.6%;检测14例并殖吸虫病人、13例囊虫病人、9例旋毛虫病人血清,均未发现交叉反应.结论 MPAIA检测日本血吸虫血清抗体有较高的灵敏度和特异度,可用于日本血吸虫病的临床诊断和现场疫情监测,该方法 具有广阔应用前景.
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一种高度敏感检测TNF的磁分离酶联免疫法
肿瘤坏死因子(TNF)是一种单核因子, 主要由激活的单核和巨噬细胞产生, 具有杀伤或抑制肿瘤细胞, 促进T细胞、 B细胞的增殖,参与炎症反应和免疫调节等多种生物学效应.TNF产生异常与多种疾病有关, 如类风湿性关炎和系统性红斑狼疮等[1], 患者血清TNF的水平均升高,因此, 定量检测体液中TNF的水平, 已成为临床上常用的免疫学检测指标.
