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1400W对脂多糖诱导少突胶质细胞前体死亡通路的阻断研究
目的 建立细菌脂多糖(LPS)诱导的2日龄感染型脑室周围白质软化(PVL)新生大鼠动物模型,探讨iNOS抑制剂1400W对LPS诱导脑白质少突胶质细胞(OL)前体死亡的体内阻断效果.方法 2日龄新生大鼠随机分为假手术组、PVL组、1400W-即刻组、1400W-8h组、1400W-16h组以及1400W-24h组,分别在LPS注射后即刻、8 h、16 h以及24 h经皮下注射1400W 20 ms/ks.于造模后第5天处死取脑,分别进行光镜下脑白质病理评估、硝酸还原法检测一氧化氮(NO)含量、Western blot法检测诱生型一氧化氮合酶(iNOS)表达量、免疫组织化学染色检测过氧亚硝酸盐(ONOO-)含量以及OL前体数量.结果 LPS诱导可引起新生大鼠脑白质明显损伤,脑内iNOS表达明显上调,NO和ONOO-含量显著增加,脑白质内少突胶质细胞前体标记物(O4)标记的OL前体显著减少.与PVL组比较,1400W-即刻组、1400W-8h组以及1400W-16h组新生大鼠的脑白质病理均获明显改善,iNOS蛋白合成量、NO及ONOO-生成量均显著降低,OL前体数量明显增加(P<0.05).1400W-24h组的各项检测结果与PVL组相似,均无明显改善.结论 体内研究确认1400W通过抑制iNOS的表达上调、减少脑内NO及ONOO-的生成量,从而阻断OL前体的死亡通路,发挥对脑白质的保护效果.在LPS诱导后16 h内应用1400W,均有良好的脑保护作用.
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经脑室神经干细胞移植对脑室周围白质软化新生大鼠的脑病理评估
目的 对经脑室植入神经干细胞(NSCs)的脑室周围白质软化(Periventrieular leukolamacia,PVL)新生大鼠进行光镜下脑病理评估,探讨NSCs移植对治疗早产儿PVL的可行性.方法 采用E14胎鼠大脑皮层制备NSCs.2日龄新生大鼠随机分为PVL对照组(PVL组),PVL+DMEM/F12培养基对照组(PVL+DMEM/F12组),PVL+神经干细胞(NSCs)移植组(PVL+NSCs组),假手术对照组(Sham组),Sham+DMEM/F12培养基对照组(Sham+DMEM/F12组),Sham+NSCs移植组(Sham+NSCs组),每组18～21只.对2日龄PVL新生大鼠在建模后72 h进行经脑室NSCs移植,分别于移植后7,14,21 d进行光镜下脑病理评估.结果 随着移植后时间的增加,脑白质病变呈进一步改善.移植后21 d光镜下病理证实,未移植组脑白质呈轻度和重度病变各占50%,神经元病理评分为1.28±0.86.移植组则有30%白质完全正常,轻度和重度病变各占40%和30%,神经元病理评分为0.32±0.16,两组在脑白质病变程度以及神经元病理评分之间的差异均呈非常显著性意义(x2=10.7,P<0.01;F=29.664.P<0.01).结论 经脑室外源性NSCs移植可明显改善脑白质的病理损伤.经脑室NSCs移植对早产儿PVL具有很大的治疗潜力,为今后成功防治早产儿这一常见的脑损伤顽症提供了新的可行性途径.
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脑室周围白质软化新生大鼠模型的创建及所伴随的白内障病变
目的 创建与人类早产儿脑室周围白质软化(periventricular leukomalacia,PVL)病理相似的可靠PVL动物模型,并探索本PVL模型所伴随的白内障病变及其形成机制.方法 新生大鼠分为PVL组和假手术对照组,通过双侧颈总动脉结扎和8%低氧下缺氧30 min,建立PVL动物模型.分别于术后1 d进行脑片TTC染色以观察脑梗死情况,术后2 d和21 d进行光镜下脑病理检查,以及术后21 d进行眼部裂隙灯检查和光镜下眼球病理检查.结果 脑片TTC染色显示PVL新生大鼠脑组织呈现大面积白色梗死区,其梗死体积达(53.45±33.90)mm3,梗死百分比为(24.98±15.44)%.光镜下病理研究证实,术后2 d的PVL新生大鼠脑室周围以及皮层下白质呈现囊性坏死和细胞凋亡,皮质神经元损伤轻微.术后21 d,其脑室周围以及皮质下白质可见多个囊性疏松坏死区域形成.相应日龄假手术组大鼠脑组织内则未观察到明显病理改变.术后21 d后,肉眼及裂隙灯下均观察到PVL组所有幼鼠双眼均呈现白内障,光镜下显示球后组织无明显病理改变.假手术组幼鼠眼部均正常.结论 通过对2日龄新生大鼠进行双侧颈总动脉结扎伴缺氧,成功创建了与人类早产儿PVL病理相似的PVL动物模型,效果肯定,重复性好.同时本建模方法也可引起白内障病变,可作为制作白内障动物模型的推荐方法之一.
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脑室周围白质软化新生大鼠脑组织ephrin-B3表达及神经细胞凋亡
目的 建立新生大鼠脑室周围白质软化(periventricularleukomalacia,PVL)模型,探讨PVL新生大鼠脑组织ephrin-B3 mRNA表达以及神经元凋亡的变化及意义.方法 采用2日龄SD清洁级大鼠,通过结扎右侧颈总动脉并吸人6%氧气4 h建立PVL模型,分别于模型后0,8,24,48,72 h、7 d处死,同时设立相应假手术对照组.脑组织苏木精-伊红染色检测病理变化;DAPI染色检测细胞凋亡,荧光定量RT-PCR检测ephrin-B3 mRNA表达.结果 新生大鼠PVL后,脑白质ephrin-B3 mRNA在缺氧缺血后表达增加,与对照组比较,在8,24,48,72 h和7 d有统计学意义(P＜0.05),脑组织细胞凋亡在缺氧缺血后明显增加,与对照组相比,在8,24,48,72 h有统计学意义(P＜0.05).结论 新生大鼠PVL时,脑白质ephrin-B3 mRNA表达显著增加,脑组织细胞凋亡明显增加,ephrin-B3可能是神经细胞凋亡的重要因素之一.
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早产儿脑室周围白质软化治疗进展
随着产科和新生儿重症监护技术的不断提高,早产儿存活率增加,早产儿脑损伤的发病率亦逐年增加.早产儿脑损伤包括脑室周围白质软化(PVL)、脑室内出血(IVH)、出血后脑积水等.近年来,IVH发生率呈逐渐下降趋势,因此PVL已上升为早产儿脑损伤的主要类型.
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谷氨酸受体2和钙离子在新生大鼠脑室周围白质软化症发病机制中的作用探讨
目的 观察α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(α-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionie acid,AMPA)受体亚单位谷氨酸受体2(GluR2)在2日龄缺氧缺血新生鼠脑白质中的表达,并检测脑白质细胞内游离Ca2+浓度在缺氧缺血后不同时间点的变化及其意义.方法 建立2日龄SD大鼠缺氧缺血脑室周围白质软化(periventricular leukomalacia,PVL)模型,分别应用荧光定量PCR和Western Blot检测脑白质缺氧缺血后12,24,48h和72 h GluR2 mRNA和蛋白表达的变化;用Furo 2/AM荧光探针和双波长荧光分光光度计分别检测脑白质细胞内游离Ca2+浓度.结果 与对照组相比,PVL组大鼠脑白质GluR2 mRNA和蛋白含量在缺氧缺血后24 h开始降低,并持续降低至72 h(P＜0.05);PVL组大鼠脑白质细胞内游离Ca2+浓度在缺氧缺血后12 h开始升高,持续增高至72 h(P＜0.05).结论 GluR2表达减少可能导致脑白质细胞内钙离子超载,引起细胞损害.
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缺血启动未成熟大鼠脑白质内源性修复功能的研究
目的 探讨缺血启动未成熟脑白质的内源性修复机制.方法 5日龄Sprague-Dawley新生大鼠随机分为假手术(Sham)组和PVL组.分别于建模后7d及21 d光镜、电镜下评估脑白质病变及髓鞘形成情况,免疫组化检测脑白质O4+少突胶质细胞(OL)前体,观察SVZ区祖细胞的激活、增殖、迁移和分化情况.结果 与Sham组比较,PVL组在建模后7d和21d光镜下脑白质病理均呈轻或重度病变；病理评分均明显增高；髓鞘形成数量明显减少,厚度变薄；免疫组化显示O4+OL前体明显减少.建模48h后,PVL组SVZ区BrdU、NG2共阳性祖细胞明显增殖并向脑室周围迁移,至7d达到高峰；从72 h开始,脑室周围出现呈BrdU、O4共阳性OL前体,至21 d,新生OL 前体明显多于同时段Sham组.结论 缺血可启动新生大鼠脑白质的内源性修复机制,诱导SVZ区胶质源性神经祖细胞激活、增殖、迁移至脑室周围和分化为OL前体.
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少突胶质细胞在早产儿缺血缺氧性脑损伤关键作用的研究进展
脑室周围白质软化(PVL)是早产儿缺血缺氧性脑损伤的主要神经病理类型,少突胶质细胞(OLs)是PVL病变的关键靶细胞,本文阐明了早产儿缺血缺氧性脑损伤中少突胶质细胞损伤的机制,即通过氧自由基和兴奋性氨基酸直接或间接地造成少突胶质细胞损伤,终导致脑室周围白质软化.随着对早产儿少突胶质细胞损伤的进一步研究,其损伤机制将得到更深入、更全面的阐明,这对临床治疗早产儿缺血缺氧性脑损伤具有指导意义.
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超声与核磁共振成像对早产儿脑室周围白质软化诊断价值的对比性分析
目的:提高早产儿脑室周围白质软化(PVL)的诊断准确率.方法:对比分析超声和核磁共振成像(MRI)检查对早产儿PVL的诊断情况,以及不同时期PVL在两种方法中的特征表现.结果:超声检查对早产儿PVL的检出率(86.0％)高于MRI检查(73.7％),且具有统计学意义(P≤0.05);胎儿体质量在超声检查的阳性率中具有统计学意义(P≤0.05);胎龄在超声与MRI检查差异均具有统计学意义(P≤0.05);早产儿早期超声检查对侧脑室三角和侧脑室体旁软化灶发现率高于MRI检查,且具有统计学意义(P≤0.05);中晚期早产儿MRI对白质体积等的发现率高于超声检查(P≤0.05).结论:超声对早期早产儿PVL的诊断准确率高于MRI检查,早期未发现病灶且临床症状较重者需进一步随访及进行MRI检查.
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重组人促红细胞生成素对脑白质损伤3日龄鼠胶质纤维酸性蛋白表达的影响
目的：探讨重组人促红细胞生成素（rhEPO）对3日龄大鼠缺氧缺血性脑白质损伤的胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响．方法：150只3日龄（P3）SD 大鼠随机分为对照组，脑室周围白质软化（PVL）组和 rEPO 治疗组．于造模后1、7、21 d 对各组大鼠脑质量损伤百分比进行检测，造模后3、7、14、21 d 用免疫组织化学方法观察脑组织 GFAP 表达情况等来研究 EPO 对3日龄大鼠缺血缺氧性脑白质损伤的保护作用．结果：PVL 组和 rEPO 组的脑质量损伤％在各取样时间点均明显大于对照组（P ＜0.05），且 rEPO 组明显小于 PVL 组（P ＜0.05）．HE 染色示 PVL组术后7 d 胼胝体结构疏松，术后21 d 可见侧脑室扩大明显；rEPO 组术后7 d 胼胝体结构基本正常，术后21 d 侧脑室仅稍微扩大．术后3 d PVL 组 GFAP 阳性表达增多（P ＜0.05），术后7 d rEPO 组和 PVL 组 GFAP 阳性表达均明显增多（P ＜0.05），且 PVL 组增多更为明显（P ＜0.05）；术后14 d rEPO 组与 PVL 组 GFAP 阳性表达开始回落，但仍多于对照组（P ＜0.05），PVL 组阳性表达数仍然比 rEPO 组多（P ＜0.05），术后21 d 各组 GFAP 阳性表达数基本回落至正常水平．结论：脑白质损伤时 GFAP 阳性表达增加，rEPO 能减少脑白质损伤后 GFAP 阳性表达．
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颅脑超声诊断新生儿脑损伤的临床价值
目的：探讨颅脑超声诊断新生儿脑损伤的临床价值。方法应用颅脑超声对1387例住院新生儿进行早期检查及随访，分析声像图表现。结果颅脑超声检查1387例，其中正常声像图594例，异常声像图793例。结论颅脑超声对新生儿脑损伤诊断率高，并能连续监测新生儿病情变化，故可成为新生儿脑损伤早期诊断、判断其严重程度及随访的有效手段。
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神经节苷脂对脑室周围白质软化早产儿血浆一氧化氮合酶、白介素-1β及肿瘤坏死因子-α水平的影响
目的:分析神经节苷脂(GM-1)对脑室周围白质软化(PVL)早产儿血浆中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法:回顾性分析2013年7月至2016年7月陕西省渭南市妇幼保健院收治的50例PVL早产儿的临床资料,按治疗方法不同分为对照组(23例)和研究组(27例).对照组接受常规治疗及康复训练,并加用脑活素治疗;研究组在对照组治疗基础上给予GM-1治疗.比较两组的治疗有效率以及治疗前、后血浆iNOS、IL-1β和TNF-α浓度的变化.结果:研究组治疗有效率明显高于对照组(P＜0.05);治疗后两组血浆iNOS、IL-1β和TNF-α浓度均较治疗前明显降低(均P＜ 0.05),且研究组低于对照组(P＜0.05).结论:GM-1治疗PVL早产儿的机制可能与抑制炎症细胞因子释放,降低iNOS活性和减少NO参与的神经毒性损伤有关.
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早产儿脑白质损伤的高危因素
脑瘫是早产儿严重的并发症.有人认为早产儿脑损伤是低出生体重儿发展成脑瘫的主要原因.早产儿脑损伤依神经病理学可分为:①脑白质损伤(white matter damage,WMD)、包括脑室周围白质软化(periventricularleukomalacia,PVL)、脑室周围白质区出血及梗死(periventricular hemorrhage or infarction,PVH)、晚期的脑室扩张(ventriculomeglay);②非脑实质区的出血如脑室内出血(intraventricular hemorrhage,IVH)、蛛网膜下腔出血及脉络丛出血等;③其它部位损伤,如小脑、基底、脑干出血等[1].其中早产儿WMD被认为是脑瘫主要的危险因素,存在WMD者发生脑瘫的危险性将增加15倍[2].因此对早产儿发生WMD的高危因素的研究将有助于我们在临床工作中对早产儿WMD进行早期诊断、治疗和预防.
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早产儿脑室周围白质软化综合干预的临床研究
在新生儿医学领域中,早产儿的脑损伤及其预防为重中之重,其中早产儿脑室周围白质软化(PVL)为棘手,迄今国内外对PVL尚无有效防治方法,是国际性的重点攻克目标.本研究对早产儿脑室周围白质软化进行早期综合干预,并观察至患儿出生后18个月,现将结果报告如下.
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早产儿脑室出血和脑室周围白质软化高危因素的探讨
目的 采用床旁头部B超研究早产儿脑室出血(IVH)和脑室周围白质软化(PVL)发病情况,探讨脑损伤的高危因素.方法 2009年1月至2010年12月我院儿科病房共收治134例早产儿,在生后7 d内进行床边头部B超检查,分析相关临床资料.结果 134例早产儿中,65例早产儿存在脑损伤,脑损伤的发生率为48.5%,其中IVH 58例,占43.3%,PVL7例,占5.2%.胎龄26～34周早产儿IVH发病率(53.4%)高于35周以上早产儿(27.8%),1500 g以下早产儿IVH发病率(50.0%)高于1 500 g以上早产儿(39.2%),差异均有统计学意义(P<0.01).与早产儿有关的高危因素依次为胎龄小、低出生体重儿、窒息、肺透明膜病、呼吸暂停、呼吸衰竭、肺出血、低血糖、感染、低血压、凝血异常、胎膜早破以及宫内感染.结论 脑室出血及脑室周围白质软化在早产儿中比较常见,其发生与多种因素有关.
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肿瘤坏死因子-α对少突胶质前体细胞的影响及其机制的研究
目的：探讨肿瘤坏死因子‐α（T N F‐α）对少突胶质前体细胞（O PC ）的作用及机制，为脑室周围白质软化（PV L ）的治疗提供策略。方法将分离纯化的OPC分为空白对照组、TNF‐α组、肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）抗体组，将50 ng／mL TNF‐α作用于TNF‐α组、TNFR1抗体组，免疫荧光化学检测OPC的分化情况，四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测3组细胞的相对活力， RT‐PCR检测细胞TNFR1的mRNA水平的表达情况。结果与空白对照组和TNFR1抗体组相比，TNF‐α组OPC的细胞活力明显下降（P＜0．05），并且不能沿着少突胶质谱系细胞进行分化，即分化为原少突胶质细胞。TNF‐α组TNFR1的mRNA表达明显的上调，空白对照组和TNFR1抗体组的mRNA表达无明显的变化。结论 TNF‐α主要通过 TNFR1引起OPC的凋亡，抑制O PC分化。
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早期干预对未成熟大鼠脑损伤学习记忆及NMDA受体NR1亚单位表达的影响
目的 探讨早期干预对未成熟大鼠脑损伤后学习记忆及NMDA受体NR1亚单位表达的影响.方法 选2日龄SD大鼠制作未成熟大鼠脑损伤模型,随机分为丰富环境(EE)组、贫瘠环境(IE)组、标准环境(SE)组,每组20只.另选20只2日龄SD大鼠,仅分离左侧颈总动脉,不予结扎和缺氧,作为对照组(Sham).EE组于术后第3天行触摸和丰富环境干预,总干预时间为30d.标准环境组和对照组均饲养于标准环境中,不行早期干预.干预结束后行学习记忆能力检测,同时分别于生后第7、35天取各组大鼠海马脑组织免疫细胞化学检测NR1亚单位表达.结果 生后5周龄时,EE组学习记忆能力较SE组及IE组明显改善[逃避潜伏期(ELP):4.75±2.85与12.45±3.23、8.42±2.23比较,空间探索能力:61.36±8.12与50.24±8.29、40.12±7.99比较,P<0.05];且丰富环境组海马CA1区NR1阳性反应物着色强,与标准环境组、贫瘠环境组及对照组比较差异有统计学意义(43.2±6.6与59.5±8.1、88.5±15.5、62.3±9.5比较,P<0.01).结论 早期干预可增强未成熟大鼠脑损伤的学习记忆能力,NMDA受体NR1亚单位表达增多可能是其机制之一.
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早产儿呼吸暂停的护理
早产儿呼吸暂停是指早产儿呼吸停止15～20秒,或虽不到15秒但伴有心动过缓和出现紫绀.呼吸暂停是早产儿常见症状之一.发生率约20%～30%,极低体重儿可达50%[1],胎龄越小发作越多.呼吸暂停既可为原发,由于早产儿呼吸中枢和呼吸器官功能不成熟,红细胞内缺乏碳酸酐酶,由碳酸分解为二氧化碳少,从而对呼吸中枢的刺激也少,容易引起呼吸暂停及青紫[2];亦可继发于低体温、发热、缺氧、酸中毒、低血糖、低血钙、高胆红素血症等.呼吸暂停常见于孕龄28～32周的新生儿.反复发作呼吸暂停如处理不当可因脑缺氧损害中枢神经系统,造成脑室周围白质软化及耳蜗背侧神经核受损,导致脑性瘫痪及高频性耳聋[3],预后严重.呼吸暂停也是造成未成熟儿死亡常见原因之一,故呼吸暂停必须及时发现迅速纠正.我院自2002年以来共收治早产儿68例,发生呼吸暂停30例.现将护理体会报道如下.
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早产儿脑损伤的早期诊断与治疗
早产儿脑损伤是导致新生儿早期死亡、智力和运动发育障碍的主要原因,它包括脑室内出血(intraventriclular hemorrhage,IVH)、脑室周围白质软化(periventricular leukomalacia,PVL)、出血后脑积水以及选择性神经元坏死和基底神经节丘脑损伤等,其中以IVH和PVL为常见.早产儿脑损伤不仅是因为胎儿过早出生造成的神经细胞发育不成熟,同时宫内感染、缺氧、出生后窒息、产伤、颅内出血以及出生体重和胎龄等也是其重要的影响因素,该病的早期诊断以及尽早、合理的治疗,对取得良好的预后起着重要的作用.
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新生大鼠脑白质损害模型神经胶质细胞的凋亡及 MK2、Nogo-B的表达研究
目的 观察2日龄(P2)新生大鼠脑白质损害(WMD)后神经胶质细胞凋亡及丝裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶 2(MK2)、Nogo-B 的变化;探讨神经胶质细胞凋亡与MK2、Nogo-B变化的时相关系.方法 制备新生鼠 WMD 模型,分别于WMD后30 min、1 h、4 h、12 h、1 d、3 d、7 d、14 d及21 d处死大鼠,TUNEL 法检测脑白质神经细胞凋亡.免疫组化(SP)法检测Nogo-B蛋白的表达,原位杂交(POD法)检测MK2 mRNA表达.结果 WMD组大鼠凋亡指数在缺氧缺血4 h、12 h、1 d、3 d、7 d组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);WMD 后1 hMK2 mRNA 在脑室周围白质及胼胝体区表达上调,并于损伤后3 d达到高峰.Nogo-B在WMD后12 h表达增加,3 d达高峰,在12 h、1 d、3 d、7 d的表达与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论 MK2、Nogo-B在新生大鼠脑白质损害时表达增高,提示其参与了脑白质损害.
