首页 > 文献资料
-
N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍对人支气管上皮16HBE细胞周期进程的影响
目的 探讨N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)对人支气管上皮16HBE细胞周期进程的影响及相关分子机制。方法 16HBE细胞经MNNG处理后，噻唑蓝(MTT)法检测MNNG对16HBE细胞增殖的影响，PI染色检测细胞凋亡，Hoechst 33342和PI双染检测细胞坏死，流式细胞术检测细胞周期分布，在周期变化明显的时点应用蛋白免疫印记检测周期相关蛋白含量变化。结果 MNNG能够剂量依赖性的抑制细胞增殖和诱导凋亡，亚致死剂量的MNNG使细胞引起明显的S期和G2/M期阻滞，同时细胞周期相关蛋白p-Cdk2(Thr160)和Cdc25A含量下降明显。结论 MNNG通过降低细胞p-Cdk2(Thr160)和Cdc25A的含量诱导16HBE细胞发生S期和G2/M期阻滞。
-
青蒿琥酯抑制人食管癌Eca-109细胞系的CDC25A表达
目的 观察青蒿琥酯(artesunate,Art)对人食管癌Eca-109细胞系的抑瘤作用,并进一步探讨Art诱导肿瘤细胞周期阻滞与CDC25A、TGF-β表达的关系.方法 体外培养人食管癌Eca-109细胞系及正常人外周血单个核细胞(hPBMC),利用MTT法测定细胞增殖;采用流式细胞术(FCM)测定细胞周期;应用RT-PCR方法检测CDC25 A mRNA表达,应用Western blot方法检测蛋白表达.结果 Art能显著抑制Eca-109细胞的增殖,IC50为(68.80±0.76)μmol/L,而对hPBMC的增殖则没有明显抑制作用.低浓度Art可将细胞阻滞于G0/G1期,S期细胞显著减少,当浓度达到100 μmol/L时,细胞阻滞于G2/M期.Art可显著抑制Eca-109细胞CDC25 A mRNA及蛋白表达,同时显著上调TGF-β的蛋白表达水平.结论 Art可抑制肿瘤细胞生长,上调TGF-β表达,抑制CDC25A表达.
-
低剂量棉酚与甾体激素联合应用对大鼠睾丸Cdc25A、cyclinB1及雄激素受体蛋白表达的影响
目的 探讨低剂量棉酚与甾体激素联合应用(棉甾联合用药)对大鼠睾丸Cdc25A、cyclinB1及雄激素受体(AR)蛋白表达的影响. 方法 采用大鼠喂服棉酚12.5mg/(kg·d)+激素[去氧孕烯125μg/(kg·d)+炔雌醇25μg/(kg·d)+十一酸睾丸酮100mg/(kg.d) ]联合用药的方式,与单独喂服相同剂量的棉酚或激素的大鼠及喂服甲基纤维素溶剂的大鼠相对照,通过免疫组织化学染色和免疫印迹法,观察Cdc25A、CyclinB1及AR蛋白表达的变化.结果 各时间点(6周、8周和10周)激素组和棉甾联合用药组Cdc25A在顶体和间质中的表达较对照组减弱,均有显著性差异(P＜0.05).用药6周和8周时,棉酚组、激素组和棉甾联合用药组Cdc25A在精母细胞中表达较对照组增强(P＜0.05);用药10周后,只有激素组显著下降(P＜0.05).各时间点激素组和棉甾联合用药组中CyclinB1在间质细胞中的表达量明显降低(P<0.05),但在圆形精子细胞中的表达量无明显改变.各时间点激素组和棉甾联合用药组间质细胞的AR阳性出现在细胞核,而对照组定位于细胞质.Western blotting结果显示,各用药组大鼠睾丸组织中Cdc25A的表达量与免疫组织化学染色结果的变化趋势基本一致.CyclinB1的含量在各组中无明显差异. 结论棉甾联合用药影响Cdc25A、cyclin B1和AR蛋白在生精细胞和Leydig细胞中的表达,进而影响减数分裂和圆形精子的变态过程;甾体激素的重要作用是抑制间质细胞的功能发挥.
-
原发性肝细胞癌CDC25A的表达与多普勒超声影像特征的关联性分析
目的:检测细胞分裂周期蛋白25A(cell division cycle 25A,CDC25A)基因在原发性肝细胞癌组织中的表达,探讨其与肝癌多勒超声影像特征的关联.方法:运用RT-PCR和Western blot的方法检测86例肝癌组织及对应癌旁组织中CDC25A基因的表达；用B超观察肝癌患者肝脏肿瘤影像学特征.结果:在86例肝癌病例中,75.58％(65/86)的肝癌组织CDC25A mRNA和蛋白表达明显高于对应癌旁组织(P＜0.05)；肝癌组织中CDC25A的表达与多普勒超声影像特征如肿瘤的大小、血流分级、血流阻力指数及门静脉侵袭情况明显相关(P＜0.05),与肝脏肿瘤结节的个数无关(P＞0.05).结论:CDC25A基因可能在肝癌的发生及转移过程中发挥重要作用,肝癌组织中CDC25A基因的表达与超声影像相结合可为肝癌临床治疗及预后判断提供理论依据.
-
大肠癌与CDC25A及TGF-β-Smad信号转导通路
大肠癌为常见的恶性肿瘤,细胞周期中调节因子CDC25(cell division cycle 25,CDC25)A,转换生长因子-β(transforming growthfactor-β,TGF-β)及Smad3异常在其发生发展中起着重要作用.近年来,随着对大肠癌与细饱周期调控因子相关机制研究的不断深入,细胞周期调控因子作为肿瘤标志物对大肠癌的预后及肿瘤转移的风险程度评价成为大肠癌治疗的一个新的研究方向.本文就大肠癌与CDC25A,TGF-β-Smad信号转导通路的相关性研究进展进行综述.
关键词： 大肠癌 Cdc25A TGF-β-Smad信号转导通路 -
双黄升白颗粒双向调控细胞周期CyclinD-CDK4/6信号途径的进一步研究
目的:探讨双黄升白颗粒对化疗所致骨髓抑制荷瘤小鼠细胞周期CyclinD-CDK4/6信号途径的双向调控作用及其机制.方法:该研究采用Lewis肺癌荷瘤小鼠,30只小鼠随机分为空白组、模型组和治疗组.除空白组外,腹腔注射环磷酰胺制作骨髓抑制模型.治疗组用40g/( kg?d)双黄升白颗粒治疗6天后,流式细胞仪检测细胞周期情况,并计算增殖指数(proliferation index,PI),以实时荧光定量PCR法(reverse transcription quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测CyclinD-CDK4/6(cyclin D-cyclin dependent kinase 4/6,CyclinD-CDK4/6)上游激活信号CDC25A、上游抑制信号p16INK4a、p15INK4b,以及CyclinD-CDK4/6所激活的下游信号Rb、pRb、E2F的表达,并以western-blot法进行验证.结果:模型组骨髓组织的G0/G1期细胞比例均低于空白组(P＜0.05),PI和CDC25A、Rb、pRb、E2F的表达均高于空白组(P＜0.05).肿瘤组织G0/G1期细胞比例均低于空白组(P＜0.05),PI和CDC25A的表达均高于空白组(P＜0.05).治疗组骨髓G0/G1期细胞比例低于模型组及空白组(P＜0.05),PI及CDC25A、Rb、pRb、E2F的表达均高于模型组及空白组(P＜0.05).肿瘤组织G0/G1期细胞比例高于空白组及模型组(P＜0.05),PI及CDC25A的表达均低于模型组及空白组(P＜0.05).各组骨髓及肿瘤组织中p16INK4a、p15INK4b的表达经比较无统计学差异.各组肿瘤组织中Rb、pRb、E2F的表达经比较无统计学差异.结论:双黄升白颗粒对骨髓抑制Lewis肺癌荷瘤鼠的骨髓及肿瘤细胞周期具有双向调控作用,其机制可能与调控细胞周期CyclinD -CDK4/6上游激活信号CDC25A及其所激活的下游信号Rb、pRb、E2F的表达有关.
-
青蒿琥酯与阿霉素对SP2/0骨髓瘤细胞作用对比观察及其作用机制的研究
青蒿素是从传统中草药黄花蒿中分离得到的高效、低毒的抗疟药物,具有广泛抗癌活性,李世辉[1]等报道青蒿琥酯对骨髓瘤细胞具有显著的增殖抑制及凋亡促进作用,可使SP2/0细胞阻滞于G0/G1,本研究就其对骨髓瘤细胞SP2/0的作用与阿霉素进行了对比,并对其作用机制进行了初步探讨.
-
真核细胞内外源性HPV16 E7癌基因表达及其对cdc25A及Cyclin E表达的影响
背景与目的:人乳头状瘤病毒(HPV)感染及其引发的抑癌基因功能丧失和细胞周期调控失调是宫颈癌发病的重要因素.HPV16诱发宫颈癌的机制主要与其两个早期开放读码框架E6、E7转化基因密切相关.HPVE6、E7引起细胞生长和增殖异常,同时伴有Cyclin A、Cyclin D1、CDK4等细胞周期蛋白的表达异常.本研究采用体外基因转染技术将HPV 16 E7基因转入靶细胞,通过对目的基因瞬时表达的检测,进而观察在E7病毒癌蛋白的影响下调控G1/S检验点的几种细胞周期调节蛋白的表达,以探讨HPV16型E7基因外源性表达对子宫颈癌HeLa细胞细胞周期调节因子cdc25A及细胞周期蛋白E(Cyclin E)的影响.方法:从宫颈癌标本中经PCR扩增回收HPV16E7基因片段,将其插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1构建重组腺病毒基因组Ad-E7.用脂质体介导Ad-E7导入包装细胞人胚肾细胞系HEK-293细胞,包装出完整腺病毒颗粒.测定病毒上清液滴度,感染体外培养的HeLa细胞.采用RT-PCR方法检测转染前后HeLa细胞cdc25A的mRNA表达的差异;激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测转染前后Cyclin E表达的差异.结果:荧光显微镜下,转染后HEK-293细胞和HeLa细胞表达绿色荧光蛋白.RT-PCR结果显示转染后,HeLa细胞cdc25A的mRNA含量较转染前显著增加[感染前灰度值0.23±0.10,感染后0.87±0.22(P＜0.01)],LSCM检测结果显示转染后Cyclin E表达较转染前明显增加.结论:重组腺病毒可以成功介导外源性HPV16E7基因在HeLa细胞内表达,HPV16E7基因促进HeLa细胞周期调节因子cdc25A和Cyclin E的表达.
-
CyclinD1和CDC25A 在胆囊癌中的表达及意义
目的：通过检测CyclinD1和CDC25A在胆囊癌中的表达，探讨其在胆囊癌发生发展中的作用及其机制，为胆囊癌诊断和治疗寻找新的靶点。方法采用流式细胞术检测44例胆囊癌和35例慢性胆囊炎黏膜组织的CyclinD1、CDC25A蛋白的表达，其中蛋白的表达量用平均荧光强度（均道值）表示。结果胆囊癌组织、慢性胆囊炎黏膜组织中CyclinD1蛋白表达分别为（531.153±28.823）、（496.462±37.191），胆囊癌组织的CyclinD1蛋白表达高于正常组织；胆囊癌组织、慢性胆囊炎黏膜组织中CDC25A蛋白表达分别为（535.029±35.647）、（496.267±41.345），胆囊癌组织的CDC25A蛋白表达高于慢性炎症组织。结论 CyclinD1和CDC25A蛋白在胆囊癌组织中均高表达。这两种基因和蛋白表达的改变可能是引起胆囊癌发生发展的分子机制之一。
-
CDC25A在结直肠腺癌中的表达
目的 研究CDC25A在正常结直肠黏膜组织、结直肠腺瘤与腺癌中的表达差异,探讨CDC25A在结直肠癌发生与发展中的作用,为辅助诊断结直肠腺癌提供新思路.方法 应用Elivision免疫组织化学的方法检测CDC25A在40例结直肠腺癌(腺癌组)、40例结直肠腺瘤组织(腺瘤组)及15例正常结直肠黏膜组织(正常组)中的表达情况.结果 腺癌组和腺瘤组的CDC25A表达阳性率分别为85.0%(34/40)和52.5%(21/40),均高于正常结直肠黏膜组织中的20.0%(3/15)(均P<0.05),且腺癌组CDC25A的表达显著高于腺瘤组(P<0.05).结论 CDC25A的高表达可能是引起结直肠癌变发生和发展的原因之一,对于结直肠腺癌的辅助诊断及治疗具有一定的参考价值.
-
TGF-β对卵巢癌细胞生长抑制的研究
目的:检测14株卵巢癌细胞系中TβRⅡ、Smad4、CDC25A和C-myc的表达情况,并确定这些基因的表达与TGF-β去敏感的相关性.方法:用MTT法检测TGF-β抑制卵巢癌细胞系生长的情况,半定量RT-PCR方法检测卵巢癌细胞中TβRⅡ、Smad4、CDC25A和C-myc的mRNA水平.结果:14株卵巢癌细胞系中均有TβRⅡ表达;与正常卵巢组织相比,10株卵巢癌细胞系中Smad4表达下降,9株中CDC25A过度表达;在致瘤性细胞系中CDC25A mRNA过度表达者占88%(8/9),在非致瘤性细胞系中,仅占20%(1/5,P＜0.05);所有卵巢癌细胞系中均无C-myc过度表达.结论:卵巢癌细胞系对TGF-β去敏感的可能原因是:诱导生长抑制的转导子Smad4表达下降,和(或)CDC25A过度表达,并且这种过度表达与卵巢癌细胞系致瘤性增强相关,TGF-β去敏感与TβRⅡ缺乏无关.
-
CDC25A蛋白和mRNA在胆管癌中的表达及其意义
目的 检测胆管癌和癌旁0.5 cm胆管组织及手术切缘的正常胆管组织中CDC25A蛋白及mRNA的表达,探讨其在胆管癌发生发展中的作用.方法 应用流式细胞分析术检测58例胆管癌和正常胆管组织中CDC25A蛋白的表达,同时应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测44例术中所取的新鲜的胆管癌、同个体癌旁胆管及其手术切缘正常胆管组织中CDC25A mRNA的表达,并与临床资料进行相关分析.结果 正常胆管组织、癌旁组织、癌组织中CDC25A mRNA相对表达量分别为0.3832±0.1440、0.4550±0.1744、0.5802±0.4188,CDC25A mRNA在三组之间表达呈上升趋势(P＜0.05).CDC25A蛋白表达趋势同其相对应的基因表达趋势一致,即CDC25A的mRNA在胆管癌组织中高表达(P＜0.05).结论 CDC25A基因转录和蛋白的表达可能参与了胆管癌的发生发展过程,检测CDC25A的表达可能有助于阐明胆管癌的发生发展机制.
关键词： 胆管癌 Cdc25A 流式细胞分析术(FCM) RT-PCR -
Rock2对肝癌细胞放疗敏感度的影响
目的 探讨Rock2对肝癌细胞放疗敏感度的影响.方法 降低人肝细胞癌Huh-7和HepG2细胞中Rock2的表达,利用IR照射造成DNA损伤模型,MTT法检测细胞增殖情况,Western blot检测Cdc25A的变化,并用能量共振转移法检测Cdk2/CyclinE活性的改变.结果 IR诱导DNA损伤时,干扰Rock2组细胞较Rock2正常组细胞增殖受到抑制.Western blot检测发现,降低Rock2表达可导致肝癌细胞中DNA损伤时Cdc25A表达的进一步下降,而且Cdk2/CyclinE活性也随Cdc25A的降低而降低.结论 降低Rock2表达可能通过抑制Cdc25A而增强肝癌细胞的放疗敏感度,为肝癌的治疗及基因表达调控研究提供新的靶基因.
-
人剪切修复基因XPD对肝癌细胞生长的抑制作用
目的 探讨野生型人剪切修复基因着色性干皮病基因D(xeroderma pigmentosum D,XPD)对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响,井探讨其机制.方法 用脂质体格染法瞬时转染SMMC-7721细胞,转染重组质粒XPD-N2和空载质粒N2,并用未转染的与XPD-N2、N2具有相同遗传背景和代数的SMMG7721细胞作为空白对照.荧光显微镜观察绿色荧光蛋白报告基因表达情况,流式细胞仪检测细胞周期,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法检测细胞中XPD、c-myc、cdc25A、cdK2表达量变化,MTT法观察细胞增殖的活力.结果 提取出的重组质粒pEGFP-N2-XPD用酶切鉴定,与Genebank上的相符.在荧光显微镜下,可以在SMMC-7721-pEGFP-N2,5MMC-7721-pEGFP-N2-XPD细胞中观察到绿色荧光蛋白的表达,质粒的转染效率为30%左右.流式细胞议结果显示,pEGFP-N2-XPD重组质粒转染入细胞后,肝癌细胞进入S期发生阻滞,停滞在G1期.RT-PCR、Western blot检测发现SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD细胞与SMMC-7721-pEGFP-N2和SMMC-7721两对照组相比,其XPD表达明显增高(P<0.05).c-myc、cdc25A,cdK2相对表达量明显减少,差异有统计学意艾(P<0.05).与两对照组相比,SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD细胞增殖率明显减弱(P<0.05).结论 野生型XPD基因可以在转录和翻译水平抑制SMMC-7721细胞内c-myc、cdc25A、cdK2的表达.而且野生型XPD基因通过抑制cdK2的表达作用于S期DNA损伤检控点,从而抑制SMMC-7721细胞增殖.
-
细胞周期及其相关蛋白在食管上皮癌变中的表达及其意义
目的 研究细胞周期调控因子细胞分裂周期素25A(cell division cycle 25 A,CDC25A)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)和Smad3蛋白在食管上皮癌变过程中的表达及其意义.方法 利用流式细胞术检测38例同个体的食管癌、食管正常黏膜组织的细胞周期以及CDC25A、TGF-β、Smad3蛋白的表达.结果 流式细胞术结果 显示,食管癌与正常黏膜相比,增殖指数(proliferation index,PI)显著增高(P<0.05),CDC25A蛋白显著增高(P<0.05),TGF-β、Smad3蛋白显著下降(P<0.05).这些蛋白的表达量与年龄和性别无关(P>0.05),与组织学分级有关,低分化鳞癌与中高分化鳞癌相比,CDC25A蛋白显著增高(P<0.05),TGF-β、Smad3蛋白显著下降(P<0.05).结论 CDC25A、TGF-β、Smad3的表达失衡与食管癌的发生有密切关系,可作为食管癌的诊断指标.
-
miR-195调控Smad7对宫颈癌细胞增殖的影响
目的:研究miR-195对宫颈癌细胞中Smad7表达的调控和影响癌细胞增殖的作用机制.方法:通过检测miR-195在宫颈组织中的表达水平,结合临床病理资料,研究miR-195的表达与相关临床病理资料的关系.利用CCK-8检测miR-195对宫颈癌细胞增殖活性的影响.通过GFP报告基因系统,观察miR-195对Smad7结合位点蛋白表达的调控作用.用Western Blot检测miR-195对内源性Smad7及CDC25A磷酸化的影响.结果:miR-195在宫颈癌组织低表达并与临床分期及淋巴结转移密切相关(P＜0.05).抑制miR-195表达可提高宫颈癌细胞增殖活性,差异有统计学意义(P＜0.05).GFP报告基因系统明确Smad7为miR-195的靶基因.过表达miR-195下调Smad7蛋白水平,终导致CDC25A的磷酸化明显下降.结论:宫颈癌细胞中miR-195可通过其靶向基因Smad7表达水平,影响TGF-β信号通路,改变CDC25A磷酸化水平,影响癌细胞的增殖.
-
细胞分裂周期素25A影响放射线照射后HEp-2细胞的G2/M期阻滞及凋亡
目的:研究放射线照射后HEp-2细胞的G2/M期阻滞与细胞分裂周期素(CDC)25A表达的相关性及过表达CDC25A蛋白对细胞周期及凋亡的影响.方法:通过流式细胞仪和Western blot方法检测4GyX线照射后在不同时间点细胞周期及CDC25A蛋白含量；经脂质体转染pEGFP-N1-CDC25A质粒的HEp-2细胞为CDC25A组,转染pEGFP-N1质粒的为空载对照组,通过实时荧光定量PCR法检测这两组细胞中CDC25A的mRNA含量以鉴定转染效率；通过流式细胞仪检测CDC25A组和空载对照组细胞经4 Gy放射线照射后细胞周期和细胞凋亡率；通过MTT法检测两组细胞的存活曲线.结果:放射线照射后G2/M期在细胞周期中的比例与CDC25A蛋白含量成正相关；CDC25A组细胞的CDC25A mRNA含量为空载对照组的15倍；过表达CDC25A联合4 Gy放射线照射可废除G1/S关卡阻滞,促进G2/M期聚集和提前进入有丝分裂,可导致细胞凋亡增加和细胞存活率降低.结论:CDC25A的含量与G2/M期的比例正相关,调控CDC25A的表达可影响放射线照射后肿瘤细胞的细胞周期和凋亡水平.
-
转染 cdc25A-Fas嵌合基因表达载体体外诱发 Tca8113细胞凋亡的研究
背景与目的: Fas/FasL与口腔鳞癌的发生、发展相关.本研究旨在探讨 cdc25A-Fas嵌合基因表达载体诱导舌鳞癌 Tca8113细胞凋亡的作用.方法:用基因工程方法分别构建 pAdTrack-CMV-cdc25A-Fas( pCCF)和 pAdTrack-cdc25A-Fas( pCF)嵌合基因表达载体;脂质体法将 pCCF、 pCF、 pAdTrack-CMV分别转染 Tca8113细胞;报告基因绿色荧光蛋白( GFP)观察转染效率; Northern blot、 RT-PCR、 Western blot、免疫组化技术检测 Fas基因的转录及表达时序; DNA凝胶电泳带型分析( DNA agarose gel electrophoresis)、原位缺口末端标记 (TUNEL)、 Annexin V、流式细胞仪( flow cytometry, FCM)检测 Tca8113细胞凋亡.结果:( 1)嵌合基因表达载体 pCCF、 pCF转 染 Tca8113细胞的转染率为 15%左右,出现在转染后第 5～ 7天.( 2)转染第 3天, pCCF、 pCF组 Fas表达显著上调;第 3、 5、 7天均表达 Fas蛋白, Fas蛋白主要在胞膜和胞浆表达;表达 Fas蛋白的 Tca8113细胞呈现部分凋亡的形态特征. (3)pCCF和 pCF转染 2.5天 (60 h), Tca8113细胞开始出现凋亡,第 3天凋亡率达到高约 25%,与对照组细胞比较具有显著性差异( P< 0.05), pCCF和 pCF比较无显著性差异( P >0.05). (4)流式细胞仪检测到绿色荧光蛋白表达细胞峰与凋亡细胞峰一致.结论:嵌合基因表达载体 pCCF和 pCF转染口腔鳞癌 Tca8113细胞可诱导细胞凋亡.
-
槲皮素对星形胶质细胞增殖及细胞周期相关蛋白cdc25A的影响
目的 通过体外星形胶质细胞的划痕模型,观察槲皮素对星形胶质细胞增殖和其细胞周期的影响,并探究可能的信号通路,分析cdc25A的表达变化.方法 经划痕处理过的原代培养的新生SD大鼠的星形胶质细胞用槲皮素处理后,将其放入37℃ 5％CO2孵箱中进行培养.分别通过Click-iT Edu test,流式细胞术和Western Blotting检测槲皮素对其增殖、细胞周期的影响及细胞周期相关蛋白cdc25A表达的变化.结果 与对照组相比,在第24h时就能明显观察到槲皮素抑制划痕的愈合；槲皮素处理24h后,其增殖细胞百分比从20.92％降低到2.74％,G1期星形胶质细胞百分比从82.04％增加到92.06％,其S和G2期有一个相应的减少；50μmol/L槲皮素处理24h以后细胞周期相关蛋白cdc25A的表达强度下调约50％,具有明显的统计学差异(F=40.579,P＜0.01).结论 通过划痕模型的研究发现,槲皮素可以通过抑制星形胶质细胞的增殖来抑制划痕的愈合,并通过降低细胞周期相关蛋白cdc25A的表达将其阻断在G1期.
-
抑制CDC25A表达的siRNA真核表达载体的构建
目的 在哺乳动物细胞中构建并鉴定抑制CDC25A表达的siRNA真核表达载体.方法 根据CDC25A的基因序列,设计特异性的siRNA,将合成的siRNA 核酸片段退火形成双链后连接到经Bam HI和HindⅢ双酶切后的psilencer4.1真核表达载体,命名为psilencer4.1-CDC25A以及psilencer4.1-Control,并进行酶切及测序鉴定.结果 通过酶切鉴定和序列测定,成功地构建出抑制CDC25A表达的siRNA载体及其阴性对照载体.结论 成功构建和验证了siRNA真核表达载体,为下一步研究奠定了良好的基础.
