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基于NLRP3炎性小体研究补阳还五汤对脑低灌注大鼠的脑保护作用
目的:观察脑低灌注损伤后大鼠海马组织NLRP3及其下游分子Caspase-1的表达,探讨补阳还五汤的影响及其作用机制.方法:双侧颈总动脉阻断建立脑低灌注模型,HE染色观察海马病理组织学改变,免疫组化法测定海马NLRP3、Caspase-1的水平.结果:脑低灌注导致大鼠海马神经细胞数量减少,核萎缩,细胞排列松散,间隙变大,排列不规则;补阳还五汤可有效改善脑低灌注所致的海马损伤.模型组NLRP3、Caspase-1的表达明显高于正常组(P＜0.01);补阳还五汤组大鼠海马组织NLRP3、Caspase-1的表达明显低于模型组(P＜0.05).结论:补阳还五汤可能通过抑制脑低灌注中NLRP3炎性小体的激活发挥脑保护作用.
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NALP3在低氧肺损伤大鼠肺组织中的表达及意义
目的:探讨SD大鼠在急性低氧肺损伤形成过程中NALP3炎性体的表达变化及其意义.方法:将40只SD大鼠随机分为4组:正常对照组、模拟海拔5 000 m 1 d组、3 d组、7 d组.分别在进入模拟海拔5 000 m后1、3、7 d取肺组织.血气分析仪检测动脉血气;电子天平称量肺组织湿干重并计算湿/干比值;显微镜下观察肺组织形态结构变化和超微结构变化;免疫组化法检测肺组织NALP3、caspase-1、IL-1β蛋白表达水平;ELISA法检测血清IL-1β水平.结果:肺组织病理炎症评分的等级实验各组均高于对照组(P<0.05),3 d组高于1 d、7 d组(P<0.05);电镜结果显示:实验组肺泡II型上皮细胞内有空泡,肺泡腔内较多巨噬细胞;免疫组化结果显示:NALP3、caspase-1、IL-1β的表达1 d开始增加,3 d达到高峰,7 d下降(P<0.05),与肺损伤程度呈正相关(r=0.81, P=0.01;r=0.76,P=0.03;r=0.84,P=0.01).实验各组血清IL-1β水平高于对照组(P<0.05),3 d组高于1 d、7 d组(P<0.05).结论:低氧急性肺损伤早期,NALP3炎性体被激活,通过caspase-1的活化,下游信号IL-1β成熟释放增加,引发肺损伤,提示NALP3炎性体可能在高原低氧急性肺损伤的发生发展中发挥作用.
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CASP1在非小细胞肺癌组织中的表达与生物学意义
目的 探讨含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶caspase-1 (CASP1)表达在非小细胞肺癌(NSCLC)发生、发展中的作用.方法 收集华北理工大学附属医院2010～2014年确诊为NSCLC患者的肺癌及癌旁组织25对.采用免疫组织化学染色方法,比较CASP1基因在肺癌和癌旁组织以及不同病理类型及分化程度肺癌组织中的表达差异.使用正常和肿瘤组织表达数据库(GENT)提供的数据,分析CASP1在肺癌组织及正常组织中的表达差异.结果 免疫组织化学结果显示,CASP1在肺癌组织中的表达量(0.021±0.004)低于相应的癌旁组织(0.083±0.008),差异有统计学意义(t=-8.554,P =0.000).进一步对GENT数据库进行分析,发现在U133plus2提供的数据中,CASP1在肺正常组织中的表达量为(1137±42.17),高于其在肺肿瘤组织中的表达量(844±19.35),差异有统计学意义(Z=-7.037,P =0.000).同样的结果出现在U113A提供的数据中,CASP1在肺正常组织的表达(467±11.19)高于其在肺肿瘤组织(423±8.44)中的表达,差异有统计学意义(Z=-2.898,P=0.004).不同分化程度肺癌组织的免疫组织化学结果显示,CASP1的表达水平在高分化(0.027±0.006)、中分化(0.017±0.003)、低分化(0.007±0.002)肺癌组织中的差异有统计学意义(F =6.653,P=0.006).组间比较显示,CASP1在高分化组织中的表达高于其在低分化肺癌组织中的表达,差异有统计学意义(P =0.001),但与中分化组织中的表达比较无统计学意义(P =0.056).笔者未发现CASP1在肺腺癌(0.019±0.003)和鳞癌(0.012±0.004)中表达差异有统计学意义(t=1.382,P=0.180).结论 CASP1在非小细胞肺癌组织中表达下调,表明其在NSCLC的发生、发展过程中可能发挥重要作用.
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脂多糖诱导的人气道上皮细胞Caspase-1的表达研究
目的 探讨脂多糖(LPS)诱导人气道上皮细胞半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1)的表达情况.方法 体外培养人气道上皮细胞,将其随机分为阴性对照组、LPS组及Caspase-1特异性抑制剂(Ac-YVAD-cmk) +LPS组(简称cmk+LPS组).采用四氮唑盐(MTT)法测定各组细胞的增殖能力；实时荧光定量RT-PCR检测各组细胞Caspase-1mRNA的表达水平；Western-blot测定各组细胞Caspase-1蛋白的表达;ELISA法检测各组细胞上清液白介素1β(IL-1β)水平.结果 3组细胞增殖差异无统计学意义(P＞0.05)；LPS组Caspase-1 mRNA的表达水平较cmk+LPS组和对照组增高,3组间差异有统计学意义(P＜0.05); LPS组Caspase-1蛋白的表达明显高于对照组和cmk+LPS组,3组间差异有统计学意义(P＜0.05)；LPS组IL-1β水平高于对照组和cmk+LPS组,3组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 NLRP3炎症复合体诱导的Caspase-1活化参与人气道上皮细胞LPS的致敏过程,并促进下游IL-1β的生成.
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小白菊内酯对球囊损伤后新生内膜增殖的影响
目的：研究小白菊内酯（PN）对球囊损伤（balloon injury，BI）后新生内膜的影响及机制。方法：将30只雄性新西兰兔2．0～2．3 kg在高脂适应性喂养1周后随机分为6组：假手术＋生理盐水（ sham＋NS）组；假手术＋二甲基亚砜（ sham＋DMSO）组；球囊损伤＋生理盐水（ BI＋NS）组；球囊损伤＋DMSO（ BI＋DMSO）组；球囊损伤＋PN低剂量（ BI＋PN low）组；球囊损伤＋PN高剂量（ BI＋PN high）组。 PN溶解于DMSO，术后立即按分组腹腔注射同体积药物治疗，每日1次。继续高脂喂养4周后取血清及髂总动脉，分析比较血管内－中膜厚度、半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶（caspase）－1、白细胞介素（IL）－1β和IL－8的表达量以及血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）和高密度脂蛋白（HDL）的含量。结果： BI＋DMSO组较sham＋DMSO组内膜厚度、caspase－1、IL－1β和IL－8的表达量增加（P＜0．05）；与BI＋DMSO组比较，上述指标在PN高、低剂量组有不同程度降低，但仅PN高剂量组与其差异有统计学意义（ P＜0．05）；各组血脂指标差异不明显。结论： PN能抑制球囊损伤后的内膜增殖，其机制可能与抗炎作用有关。
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P2X4过表达对帕金森病模型大鼠脑内细胞凋亡的作用
目的 探讨过表达 P2X4基因对6-羟基多巴(6-hydroxydopamine, 6-OHDA)诱导的帕金森病(Parkinson disease,PD)大鼠模型中脑内细胞凋亡的影响.方法 120只Wistar雄性大鼠随机分为6组(n=20):①对照组,②6-OHDA组,③单纯目的基因(RNA-P2X4)组,④目的基因(RNA-P2X4)+6-OHDA组,⑤单纯阴性病毒(P2X4-NC)组,⑥阴性病毒(P2X4-NC)+6-OHDA组.根据分组情况分别于大鼠左侧黑质定向注射携带目的基因的慢病毒或阴性病毒和(或)6-OHDA或等量生理盐水.免疫荧光法检测各组黑质中多巴胺能神经元细胞数;Western blot法分别检测各组黑质中P2X4R、caspase-1及NLRP3蛋白表达水平.结果 与P2X4-NC+6-OHDA组比较,RNA-P2X4+6-OHDA组P2X4R(1.099±0.05569 vs. 0.7821±0.02008,P=0.0003)、NLRP3(0.9875± 0.01932 vs. 0.6645±0.01747,P<0.0001)、caspase-1(0.9948±0.01788 vs. 0.8276±0.04543,P<0.0001)蛋白表达量均显著升高,差异有统计学意义.结论 P2X4在PD的发病中发挥重要作用,P2X4激活后可增加NLRP3炎性体和caspase-1的表达,促进炎症及凋亡反应,有潜在的神经损害作用.
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Caspase-1活化在胆红素诱导的大鼠海马神经元损伤中的作用
目的 研究半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)活化及VX-765在胆红素诱导大鼠海马神经元损伤中的作用.方法 原代培养大鼠海马神经元分为胆红素组、对照组、VX-765组;胆红素组给予胆红素(50 μmol/L),对照组给予同体积药物溶剂二甲基亚砜(DMSO),VX-765组在胆红素干预前1 h给予VX-765(50 μmol/L);Western blot检测NLRP3、活化caspase-1表达,改良MTT、乳酸脱氢酶(LDH)释放率及台盼蓝染色检测细胞相对存活率及死亡率,ELISA法检测原代培养上清IL-18水平.结果胆红素诱导原代培养大鼠海马神经元3、6 h,NLRP3、活化caspase-1蛋白表达明显高于对照组(P<0.05).VX-765干预后,活化caspase-1表达与胆红素组相比明显降低(P<0.05).分组干预细胞24 h,VX-765组的相对存活率为(84.020±2.311)%,明显高于胆红素组(P<0.05),低于对照组(P<0.05);VX-765组LDH释放率为(10.780±1.577)%,明显低于胆红素组(P<0.05),高于对照组(P<0.05);VX-765组台盼蓝染色阳性率为(5.580±1.234)%,明显低于胆红素组(P<0.05),高于对照组(P<0.05).结论 在原代培养的大鼠海马神经元中,caspase-1活化参与胆红素神经毒性的发生,VX-765抑制其活化发挥神经保护作用.
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驱动蛋白家族成员11作为一个新的caspase-1靶点嵌合到caspase-1依赖性的细胞死亡
目的:探讨驱动蛋白家族成员(KIF)11降解在诱导细胞死亡中的作用.方法:用基因克隆技术构建不同显性负KIF11 (△KIF1 1-T)表达质粒,通过脂质体转染将质粒导入细胞中,使其在细胞中表达出目的蛋白.用溴化乙锭染色法检查细胞死亡,用免疫细胞化学法染色G2/M期标志物磷酸化的组蛋白H3 (pH3)和细胞凋亡标志物激活的caspase-3,通过蛋白质免疫印迹杂交法(Western blot)检测KIF11剪切产物.结果:成功构建不同△KIF11-T表达质粒,转入细胞48 h后,引起的细胞死亡是对照组的2～3倍,且没有使细胞中的pH3增加,caspase-3虽然在转染了△KIF1 1-T的细胞中被激活数目比对照质粒pCIG中的多,但有激活的caspase-3的细胞占死亡细胞的比例很小.氨基酸序列分析显示,KIF11有2个caspase-1酶切位点,Western blot检测到40 ku的KIF11剪切产物.结论:通过在细胞中表达△KIF1 1-T诱导的死亡不一定涉及细胞周期的抑制也并非主要依靠caspase-3相关机制.
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细胞焦亡与缺氧缺血性脑损伤
细胞焦亡是由半胱天冬酶-1引起的一种新型炎性细胞死亡方式,并可促进IL-1β等大量炎症因子的释放,参与内在炎症免疫反应.近年来研究表明,细胞焦亡可能与缺氧缺血性脑损伤相关,例如,参与细胞焦亡的炎性小体NLRP1、NLRP3及AIM2在缺氧缺血性脑损伤鼠神经元中高表达等.通过对细胞焦亡作用机制及相关疾病的深入研究,为临床疾病的防治提供新思路.
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清胰汤对胰腺炎肺损伤大鼠Caspase-1及相关细胞因子表达的影响
目的:研究清胰汤对实验性胰腺炎肺损伤半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)及其相关细胞因子表达的影响.方法:采用15g/L去氧胆酸钠逆行注入胰胆管诱发胰腺炎肺损伤大鼠模型,通过自动生化分析仪检测血清淀粉酶;采用ELISA法测定血清IL-1β水平、RT-PCR检测肺组织Caspase-1 mRNA的表达;免疫组织化学法检测肺组织Caspase-1蛋白的表达.通过检测肺组织髓过氧化物酶( MPO)活性、肺湿/干重比值和肺组织病理切片判定肺损伤程度.结果:胰腺炎肺损伤各组血清淀粉酶和IL-1β水平显著升高,清胰汤及善宁两治疗组血淀粉酶和IL-1β水平明显下降.胰腺炎肺损伤组Caspase-1mRNA和Caspase-1蛋白表达显著上调,清胰汤治疗组和善宁治疗组的表达显著下调.两治疗组肺组织 MPO活性减低、肺湿/干重比值下降、肺组织损害程度明显减轻.结论:清胰汤通过下调Caspase-1及其激活的细胞因子IL-1β的表达起到治疗胰腺炎肺损伤作用.
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肝细胞内NLRP3炎症体的表达与炎症应答初步研究
目的 探讨炎症体(inflammasome)在肝细胞内的表达,明确肝细胞内炎症体是否具有正常的炎症应答功能.方法 以肝细胞株L02、HepG2为研究模型,RT-PCR、Real-time PCR检测LPS刺激及未刺激组caspase-1、IL-1β的mRNA的表达水平;Western blot检测NLRP3的表达和各刺激组胞内caspase-1活化;ELISA检测各刺激组上清中IL-1β和IL-18的分泌.结果 L02、HepG2细胞均表达NLRP3炎症体,LPS刺激促进肝细胞内caspase-1、IL-1β 表达上调;内源性危险信号ATP能有效活化肝细胞内caspase-1酶原,促进IL-1β 和IL-18分泌增加,caspase-1特异性抑制剂能特异性的抑制IL-1[β、IL-18的分泌.结论 肝实质细胞的NLRP3炎症体对内源性危险信号具有炎症应答功能,在肝内无菌性炎症的启动和维持中可能具有重要促进作用.
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炎性体复合物及其与脓毒症的关系研究进展
自2002年Martinon等[1]发现炎性体复合物(inflammasome)以来,人们对它们的结构和功能及其诱导机制的认识在不断完善.炎性体复合物通过控制半胱天冬氨酸酶1(caspase-1)的活化进而调节着机体的炎症反应,并在抗感染过程中发挥着积极的保护作用.脓毒症是感染引起的全身炎症反应,炎性体复合物可能参与了脓毒症炎症反应的启动和抗感染过程.研究发现炎性体复合物与脓毒症患者的生存率及病情严重程度密切相关,炎性体复合物及caspase-1的表达和活化受抑可能是造成脓毒症患者免疫麻痹的原因之一[2,3],这将为脓毒症的早期诊断和干预提供新的思路.现将炎性体复合物在启动炎症反应和抗感染方面的作用,特别是与脓毒症的关系综述如下.
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黑米花青素对大鼠视网膜光化学损伤感光细胞凋亡和Caspase-1表达的影响
目的 探讨黑米花青素(black rice anthocyanins,BRACs)对视网膜光化学损伤(retinal photochemical damage,RPD)感光细胞凋亡及Caspase-1表达的影响.方法 60只Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组(n=30)和BRACs组(n=30),均饲以基础饲料,12 h明/12 h暗循环光照.BRACs组按100 mg/kg·bw剂量给予BRACs,每天灌胃1次;对照组给予等量生理盐水灌胃1次.15 d后,两组动物同时给予(3 000士200)lux强度的白色荧光持续光照0～24 h,原位末端标记(TUNEL)法检测视网膜细胞凋亡,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组织化学法检测视网膜内Caspase-1 mRNA和蛋白表达水平.结果 光照能诱导大鼠视网膜感光细胞凋亡(P＜0.05),灌胃给予BRACs能降低光照诱导的感光细胞凋亡(P＜0.05);光照后Caspase-1 mRNA和蛋白表达增加,BRACs干预后Caspase-1表达显著降低(P＜0.05);光照后外核层和内核层出现大量的Caspase-1阳性细胞,而BRACs组阳性细胞数量明显少于对照组.结论 BRACs能抑制RPD中感光细胞的凋亡,防护视网膜光化学损伤,该作用可能与其下调Caspase-1表达相关.
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NALP3炎性复合体及ERK信号通路在氧化应激中的作用及阿魏酸钠的干预机制
目的 探讨氧化应激时人肺上皮细胞(A549)中NALP3炎性复合体、细胞外调节蛋白激酶(ERK)的表达变化,阿魏酸钠(SF)的干预作用及其可能的机制.方法 培养A549细胞,分为空白对照组,H2O2刺激组,阿魏酸钠组,caspase-1抑制剂(Z-VAD)组,ERK阻断剂(PD98059)组,阿魏酸钠+H2O2组.其中H2O2刺激组用H2O2 200 μmol/L培养细胞2h,阿魏酸钠组用阿魏酸钠400 μg/mL处理细胞30 min,Z-VAD组、PD98059组、阿魏酸钠+H2 O2组分别用Z-VAD 20 μmol/L、PD98059 50μmol/L、阿魏酸钠400μg/mL预处理A549细胞30 min后加入H2O2 200 μmol/L培养2h,采用实时荧光定量PCR检测各组A549中caspase-1、NALP3mRNA的表达,Western blot检测caspase-1、NALP3、磷酸化ERK(p-ERK)、ERK蛋白含量;ELISA法检测各组A549上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)含量.结果 与空白对照组比较,H2O2可使A549细胞caspase-1、NALP3mRNA及caspase-1、NALP3、p-ERK/ERK蛋白水平表达增强,IL-1β分泌增加(P均＜0.05),而阿魏酸钠组与空白对照组差异无统计学意义(P＞0.05).与H2O2刺激组比较,Z-VAD组、PD98059组和阿魏酸钠+H2O2组caspase-1、NALP3 mRNA及蛋白表达降低,p-ERK/ERK蛋白表达降低,IL-1β分泌下降(P均＜0.05),Z-VAD组或PD98059组与阿魏酸钠+H2O2组间上述作用差异无统计学意义(P＞0.05).结论 阿魏酸钠可能通过抑制ERK活化,减少caspase-1、NALP3及IL-1β的表达,从而减轻氧化应激导致的炎症级联反应.
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细胞焦亡在心力衰竭进程中的研究进展
细胞焦亡(pyroptosis)是一种新的程序性细胞死亡方式,主要通过半胱天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)来介导,并伴有大量的促炎性细胞因子的释放.在心力衰竭进展的不同阶段,细胞焦亡通过炎症小体活化及激活caspase-1参与心力衰竭的病理生理过程.本文就细胞焦亡在心力衰竭进程中的作用作一评述.
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除湿通痹方对急性痛风性关节炎大鼠炎症级联反应的作用
目的 探讨除湿通痹方对急性痛风性关节炎炎症级联反应的作用.方法 SD大鼠随机分为空白组、模型组、秋水仙碱组,除湿通痹方高、中、低剂量组共6组,每组10只,于给药前1d和给药第6天,除空白组给予生理盐水外,其余5组复制急性痛风性关节炎模型,连续灌胃22d后处死采取标本取材,观察各组大鼠关节肿胀度、功能障碍指数和炎症指数、测定IL-1β、TNF-α浓度,检测caspase-1、ASC、NLRP3基因表达,并分析其关系.结果 各给药组对急性痛风性关节炎大鼠活动障碍均有缓解作用;秋水仙碱组TNF-α表达水平显著低于模型组(P＜0.05):秋水仙碱组及除湿通痹方高剂量组IL-1β、caspase-1、ASC、NLRP3表达水平显著低于模型组(P＜ 0.05);caspase-1、ASC、NLRP3均与IL-1β存在相关性(P＜0.05);TNF-α与ASC存在相关性(P＜0.05).结论 秋水仙碱及除湿通痹方高剂量能通过抑制NLRP3炎性体的表达,从而抑制IL-1β相关的炎性过程,发挥其抗炎免疫作用.
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C1q和肿瘤坏死因子相关蛋白4(CTRP4)降低子痫前期大鼠滋养层细胞的caspase-1和IL-1β水平
目的 探讨C1q和肿瘤坏死因子相关蛋白4(CTRP4)对子痫前期大鼠胎盘滋养层细胞的影响.方法 构建子痫前期大鼠模型,采集正常孕鼠和模型大鼠胎盘滋养层组织,运用实时定量PCR和Western blot法检测CTRP4、白细胞介素1β(IL-1β)和caspase-1 mRNA和蛋白表达水平;分离培养正常孕鼠和模型鼠滋养层细胞,在不同时间点,运用流式细胞术检测碘化丙啶和caspase-1双阳性(PI+ caspase-1+)细胞(pyroptosis),运用实时定量PCR和Western blot法检测IL-1 β和caspase-1表达水平;在模型大鼠滋养层细胞培养基中分别加入(0.5、5、15、25、50) ng/mL CTRP4重组蛋白或(10、20) ng/mL CTRP4蛋白中和抗体,处理72 h后检测pyroptosis细胞数目和caspase-1、IL-1β水平.结果 子痫前期大鼠胎盘滋养层组织caspase-1、IL-1β表达增强,CTRP4表达水平下调;CTRP4重组蛋白处理体外培养的大鼠滋养层细胞可显著减少PI+ caspase-1+细胞数量并降低caspase-1、IL-1β水平,而CTRP4蛋白中和抗体处理显著增加PI+ caspase-1+细胞数量并增强炎症反应.结论 CTRP4可显著抑制caspase-1/IL-1 β炎症调节通路的活性,并抑制子娴前期大鼠胎盘滋养层细胞的pyroptosis.
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小鼠巨细胞病毒播散性感染急性期脾脏损伤的免疫病理机制
目的:观察小鼠巨细胞病毒(MCMV)播散性感染急性期脾组织病理损伤程度与病毒量、caspase-1和下游促炎因子IL-1β、IL-18表达的关系,探讨MCMV感染后脾脏的免疫病理损伤机制.方法:建立MCMV全身播散性感染模型,MCMVSminth株接种后第3、7、14和第28天各处死3只小鼠；同时设模拟感染小鼠作为对照.标准空斑试验检测脾组织病毒滴度；Western blot法检测脾脏中caspase-1表达强度；免疫组化法检测脾组织中IL-1β和IL-18表达状况,HE染色后用半定量法评估脾脏组织病理损伤程度；分析病毒滴度及caspase-1、IL-1 β和IL-18表达与组织病理损伤的关系.结果:MCMV感染后,脾组织病毒滴度在感染后3d升高,7d明显下降,14 d时用标准空斑试验已检测不到病毒；与模拟感染对照组比较,MCMV感染组感染后第3天脾组织中caspase-1表达明显升高后逐渐下降(P＜0.01)；脾组织中IL-1β和IL-18表达呈进行性升高,于感染后7d达峰值,14d减少,28d基本接近正常；脾组织病理损伤呈进行性加重,至感染后14 d达高峰,28d明显减轻；IL-1β和IL-18在脾组织中的高表达早于其组织病理损伤,随着IL-1β和IL-18表达水平的下降,病理损害也逐渐恢复.结论:巨细胞病毒感染引起caspase-1表达增加,促进炎性因子(IL-1β、IL-18)合成和释放增加.IL-1 β、IL-18不仅有抗病毒作用,同时也可能参与MC-MV播散性感染后脾组织的免疫病理损伤.
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细胞焦亡在心血管疾病中的作用
细胞焦亡是一种新发现的细胞程序性死亡方式,该过程包含多种细胞因子的激活与降解.首先,细胞内炎症小体被激活,进而诱导半胱天冬酶(caspase)-1的激活和促炎症因子IL-1和IL-18前体的降解.之后,细胞膜裂解与细胞核DNA片段化可导致IL-1和IL-18释放,终诱发炎症反应.机体固有免疫细胞经模式识别受体,识别病原相关分子模式或损伤相关分子模式,诱发细胞焦亡而清除病原体或损伤组织细胞,形成保护机体的一道有效屏障.越来越多的研究表明,在动脉粥样硬化(AS)的病理过程中,细胞焦亡不仅参与动脉粥样斑块的形成,也是促进斑块发展,甚至是影响斑块稳定性的重要因素.在心肌缺血/再灌注损伤中,细胞焦亡亦是MI区与边界区炎症反应的重要调控因子,其可影响修复期MI面积、纤维化程度与心功能.因此,细胞焦亡可能成为临床防治AS,以及促进缺血/再灌注心肌修复的新靶点.
关键词： 细胞焦亡 Caspase-1 动脉粥样硬化 心肌缺血/再灌注损伤 -
大鼠卒中后抑郁模型中NMDA受体调控NLRP3-caspase-1通路的作用及分子机制
目的:阐明卒中后抑郁与炎症之间的关系,以及该过程中N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)对于NLRP3-caspase-1通路的影响.方法:以大脑中动脉栓塞(MCAO)模型联合大鼠悬尾实验(TST)模型构建大鼠卒中后抑郁模型,按实验要求分为Control组、MCAO组,PSD组(MCAO +TST组)、PSD +D-丝氨酸干预组(MCAO+TST +D组)、PSD+氯胺酮干预组(MCAO+ TST+K组)共5组.以糖水消耗实验及血清5-HT检测评估大鼠精神状态,通过ELISA、Western Blot、real-time PCR等方法检测NLRP3-caspase-1通路相关分子的变化.随后采用D-丝氨酸及氯胺酮等对NMDAR的活性进行调节,以糖水消耗实验及血清5-HT,ELISA、Western Blot、Real-time PCR等方法进一步观察对上述指标的影响.结果:与Control组相比,MCAO组中的大鼠,其血清5-HT的水平以及糖水消耗比变化不明显(P＞0.5),但NLRP3-caspase-1通路出现了激活(P ＜0.001);MCAO+ TST组中,大鼠血清的5-HT及糖水消耗比明显下降,NLRP3-caspase-1通路相关分子出现了明显活化(P＜0.001);而通过应用NMDA受体共激动剂D-丝氨酸干预,在MCAO+ TST+D组中,大鼠糖水消耗比及血清5-HT出现了进一步的下降,同时NLRP3-caspase-1通路相关分子的激活较前更为明显(P ＜0.001);而应用NMDA受体拮抗剂氯胺酮后,MCAO+TST +K组中,大鼠糖水消耗比及血清5-HT较前明显提高,同时NLRP3-caspase-1通路相关分子的激活较前出现了下调(P＜0.001).结论:NLRP3-casp踮e-1通路所代表的炎症反应过程与卒中后抑郁的发生发展密切相关,而通过干预与其密切相关的NMDA受体,可实现对该过程的调控,起到影响卒中后抑郁程度的作用.
