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16Hz,150dB的次声不同作用时间对大鼠海马caspase-1和caspase-3表达的影响
目的:探讨16 Hz,150 dB次声作用1、3、5d对大鼠海马caspase-1、caspase-3表达的影响.方法:将成年雄性SD大鼠置于高强度次声仓内,进行16 Hz,150 dB强度的次声照射,每天2h.40只大鼠随机分为四组,对照组、次声组(分别为次声1d组、3d组和5d组).次声照射结束后,立即取材.采用免疫荧光法观察大鼠海马caspase-3的表达变化,采用Western Blot方法检测caspase-1、caspase-3的表达量.结果:免疫荧光染色结果显示:与正常组相比,次声5d组的大鼠海马caspase-3的表达增多(P＜0.05);Western Blot结果显示:与正常组相比,次声5d组的大鼠海马caspase-1的表达增多、caspase-3的表达减少、活化形式的caspase-3表达增多(P＜0.05);次声5d组大鼠海马caspase-1、caspase-3的表达均比次声1d组和次声3d组要高(P＜0.05).结论:16 Hz,150 dB的次声随着对大鼠作用的时间延长,其海马caspase-1和caspase-3的表达逐渐增多,引起海马组织的焦亡和凋亡也增多.
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Caspase-1对氧诱导视网膜病变中小胶质细胞参与视网膜新生血管生成的促进作用及其机制
目的:探讨Caspase-1对小鼠氧诱导视网膜病变(oxygen-induced retinopathy,OIR)中小胶质细胞参与视网膜新生血管生成的作用及其机制.方法:随机将12只7日龄(P7)C57BL/6J 小鼠分为正常组、OIR组和OIR+VX-765组,正常组在正常氧环境中饲养,其余两组构建OIR模型;P12~P16,OIR+VX-765组和OIR组分别每天腹腔注射 Caspase-1抑制剂 VX-765(4mg/kg)和等量0.4%聚乙二醇(VX-765溶剂);于P17制作视网膜铺片行Lectin染色,比较三组间视网膜无血管区和新生血管区面积的大小;采用免疫荧光染色法观察视网膜组织中Caspase-1的表达和活化小胶质细胞的分布.培养小胶质细胞BV-2细胞分为对照组、缺氧组及抑制剂组,抑制剂组和缺氧组分别经VX-765和0.4%聚乙二醇预处理3h后,缺氧条件下培养24h;对照组常规培养相同时间.通过Western blot 检测Caspase-1、p20(Caspase-1活化形式)、IL-1β 和 VEGF 的蛋白表达变化;用各组BV-2细胞培养上清液作为条件培养基,刺激培养血管内皮细胞RF/6A,进行管腔形成和细胞迁移实验,并比较各组间的差异.结果:P17正常组小鼠视网膜血管化完全,未见明显无血管区及视网膜新生血管;OIR组视网膜无血管区和新生血管面积百分比分别为16.58% ±1.14%、4.00% ±0.41%;OIR+VX-765组两者明显减少,分别为12.23% ±1.02%和2.16% ±0.52%(P<0.01).免疫荧光染色结果显示, Caspase-1在正常小鼠视网膜组织中表达较弱,在OIR小鼠中主要在神经节细胞层和内丛状层有明显的阳性表达,并与活化的小胶质细胞有明确的共定位.Western blot检测结果显示,缺氧处理的培养小胶质细胞 BV-2中Caspase-1、p20、IL-1β 和 VEGF 蛋白表达明显提高,而Caspase-1抑制剂则可明显下调p20、IL-1β和VEGF的蛋白表达水平(P<0.05).管腔形成和细胞迁移实验结果显示,RF/6A细胞经缺氧组BV-2培养上清液处理后,管腔形成长度和细胞迁移数目分别为271±12和347±34个,而加入抑制剂后,二者明显减少,分别为171 ±22和212 ±27个(P<0.05).结论:在小鼠OIR中,Caspase-1能够调节小胶质细胞促进视网膜新生血管的生成,其作用机制可能与Caspase-1活化小胶质细胞中其下游炎性效应分子 IL-1β,并释放VEGF相关.
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小鼠急性光损伤视网膜组织中c-Fos、Caspase-1蛋白的表达及依达拉奉的干预作用
目的 探讨依达拉奉(edaravone)对小鼠视网膜急性光损伤(retinal photodamage,RP)的保护作用.方法 将42只成年雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组(C组,n=6)和实验组(n=36),后者再分为光损伤组(L组)、edaravone组(E组)、生理盐水组(NS组),其中E组和NS组是同一只动物的不同眼别,即右眼注射edaravone,左眼注射生理盐水.实验组采用(8 000±300)lux白色荧光连续照射4h建立小鼠RP模型,于光照后暗修复0、24、72h时取材,视网膜组织切片HE染色观察视网膜形态及外核层(outer nuclear layer,ONL)厚度,免疫组织化学法染色检测原癌基因c-Fos、半胱天冬酶-1(Caspase-1)蛋白的表达变化,以此评价edaravone对RP的保护作用.结果 与对照组相比,实验组视网膜ONL厚度均随光照后暗修复时间延长而变薄,E组与L组、NS组同一时间点比较,视网膜ONL变薄程度明显减轻(P＜0.05).实验组于暗修复0 h即可在视网膜ONL检测到c-Fos、Caspase-1蛋白表达,二者表达高峰分别位于暗修复0、24 h(P＜0.05);同一时间点,E组视网膜c-Fos、Caspase-1蛋白表达较L组和NS组均明显降低(P＜0.05).结论 RP可引起视网膜ONL变薄,c-Fos、Caspase-1蛋白表达增加,edaravone通过抑制二者表达间接对RP起到保护作用.
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炎症小体调控机制的研究进展
炎症小体(Inflammasome)是一种由机体胞浆内模式识别受体(PRRs)参与组成的多蛋白复合体,主要参与天然免疫反应中caspase-1激活,并介导IL-1β、IL-18的前体产生成熟细胞因子以及诱导细胞凋亡.NLRP3、NLRC4、NLRP1、AIM2是目前研究较多的炎症小体,对其结构、组成成分、作用机制等方面已有较为深入的研究,而主要只对炎症小体的活化及负性调控机制的研究进展进行了综述.
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脑损伤早产儿血清半胱氨酸蛋白酶-1、白介素-6、高迁移率族蛋白-1水平及其危险因素分析
目的：探讨脑损伤早产儿血清半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、白介素-6(IL-6)、高迁移率族蛋白-1(HMGB1)水平变化并分析常见的脑损伤危险因素。方法选取366例早产儿分为脑损伤组(n=137)和非脑损伤组(n=229)，统计早产儿脑损伤发生率，比较两组临床资料，探讨早产儿脑损伤的危险因素；观察脑损伤早产儿血清 caspase-1、IL-6、HMGB1水平变化。结果366例早产儿中137例发生脑损伤，发生率37.43%。脑损伤组母亲妊娠期高血压及绒毛膜羊膜炎发生率、孕周早产儿体重及Apgar评分与非脑损伤组相比，差异均具有显著性(P<0.05)。脑损伤组早产儿血清caspase-1、IL-6、HMGB1水平均显著高于非脑损伤组(P<0.01)。结论早产儿脑损伤的发生与孕妇妊娠期高血压、绒毛膜羊膜炎、孕周、早产儿体重及Ap-gar评分等因素有关，血清caspase-1、IL-6、HMGB1水平检测对早产儿脑损伤具有一定的诊断价值。
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吉西他滨诱导胰腺癌细胞PANC-1中甲基化诱导静止基因的表达与半胱氨酸天冬氨酸酶-1、核转录因子活性的研究
目的 检测吉西他滨(gemcitabine,GEM)诱导胰腺癌细胞株PANC-1中甲基化诱导静止基因(TMS1/ASC)的表达,并探讨半胱氨酸天冬氨酸酶-1(cysteine aspartase,caspase-1)、核转录因子(nuclear factor-κB,NF-κB)的活性与TMS1/ASC之间的关系.方法 用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测GEM在不同浓度(1、2、4、8、16 μg/ml)及不同时间(24、48 h)下对胰腺癌细胞PANC-1存活率的影响;RT-PCR技术检测PANC-1细胞在GEM(4.27 ∴g/ml)刺激组(实验组)和空白组(对照组)培养24h和48 h后TMSl/ASC mRNA的表达情况.用抗κB抑制蛋白(inhibitory protein of NF-κB,I κBα)多克隆抗体、抗easpase-1多克隆抗体和内参β-actin单克隆抗体通过Western blot技术检测并比较IκBα和caspase-1在实验组和对照组中的蛋白表达水平,从而分析NF-κB和caspase-1的活化状态.结果 GEM对PANC-1细胞生长的抑制有浓度和时间依赖性,其半数抑制率(IC50)为24h4.27 μg/ml;24 h时实验组和对照组TMS1/ASC的表达量分别为(0.3±0.004)和(0.1±0.001),48 h实验组和对照组分别为(0.63±0.007)和(0.21 ±0.006),2组相比较,差异有统计学意义(P＜0.01).Western blot结果显示:随着培养时间延长,caspase-1在对照组中未发生活化,GEM可促进其活化;GEM实验组与对照组相比IκBα的表达量无明显变化,GEM不能促使NF-κB活化.结论 GEM能抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖并促进凋亡,随着作用时间的延长其药物敏感性减低.GEM作用一定时间可诱导TMS1/ASC表达增加,caspase-1可能参与GEM诱导胰腺癌细胞株PANC-1 凋亡的信号转导途径,NF-κB不参与GEM诱导胰腺癌细胞株PANC-1凋亡的信号转导途径.
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实验性脑挫伤后caspase-1表达的研究
目的阐明不同程度及不同时间脑挫伤后caspase-1表达的变化.方法应用免疫组织化学染色、Western-blotting和RT-PCR方法对48例实验性脑挫伤大鼠的脑组织进行了检验,同时以3例非脑挫伤和3例假手术的脑组织做对照.结果脑挫伤后1h caspase-1即有表达,24-48h达高峰,挫伤后两周caspase-1阳性细胞仍维持较高水平.阳性细胞多集中于挫伤区及周围带皮质和脑实质内海马区,不同程度脑挫伤各组之间阳性细胞面积存在差异;损伤组caspase-1酶原裂解增加;损伤组caspase-1mRNA表达量明显高于对照组;不同程度脑挫伤组之间于各个时间段caspase-1mRNA表达未见差异.结论Caspase--1表达增加,可辅助诊断1h～14d的脑挫伤,并可根据caspase-1阳性细胞面积的变化来确定脑挫伤程度,同时对判断挫伤时间方面也有一定的价值.caspase-1参与脑挫伤后的神经细胞凋亡.
