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HPLC法测定德国洋甘菊中槲皮素、木犀草素及芹菜素含量
目的 建立可同时测定德国洋甘菊中槲皮素、木犀草素和芹菜素含量的 HPLC 方法,并测定自制的3批德国洋甘菊样品中槲皮素、木犀草素和芹菜素含量.方法 色谱柱为Agilent Zorbox SB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液(45∶55)等度洗脱,流速1 ml/min,柱温25 ℃,检测波长350 nm.结果 槲皮素、木犀草素和芹菜素的色谱分离较好,浓度与峰面积呈良好线性关系,线性范围分别为0.25～4.04 μg(r=1.000)、0.25～3.98 μg (r=1.000)、0.25～4.02 μg (r=1.000).精密度、重复性、稳定性均符合要求.槲皮素、木犀草素和芹菜素平均加样回收率为93.64%、95.85%和95.40%.结论 建立的 HPLC 方法可同时测定德国洋甘菊中槲皮素、木犀草素和芹菜素含量,该方法快速简便,有良好分离度和重现性,可用于德国洋甘菊药材的质量控制.
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柘木中花旗松素、奥洛波尔、槲皮素分离鉴定与含量测定
目的 分离鉴定柘木中花旗松素、奥洛波尔、槲皮素3个黄酮类成分,并采用HPLC法测定其含量.方法 采用柱层析法从柘木醇提物分离得到3种黄酮类成分,并通过核磁共振技术确定其结构.采用HPLC法检测其含量,色谱柱为Aglient ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),以1％醋酸-甲醇为流动相,梯度洗脱,流速1 ml/min,柱温25℃,检测波长310 nm.结果 从柘木中分离鉴定出花旗松素、奥洛波尔、槲皮素3个黄酮类成分,其含量分别为0.850、0.518、0.103 mg/g.结论 本试验方法可为控制柘木药材的质量提供参考.
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槲皮素对人结肠癌HT-29细胞凋亡的影响
目的 研究槲皮素对人结肠癌HT-29细胞凋亡的影响,并探讨其对肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor factor 6,Traf6)/转化生长因子β激活酶1(transforming growth factor-βactivated kinase-1,TAK1)信号通路的调控作用.方法 将细胞按随机数字表法分为对照组、16μg/ml槲皮素组、Traf6抑制剂组、16μg/ml槲皮素+Traf6抑制剂组,对照组常规培养,其余各组加入16μg/ml槲皮素和/或Traf6抑制剂20 nmol/L进行干预.培养24 h,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,采用免疫印迹法检测Traf6/TAK1信号通路蛋白及caspase-3、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)及Bcl-2表达,采用RT-PCR技术检测Traf6 mRNA表达.结果 与16μg/ml槲皮素组比较,16μg/ml槲皮素+Traf6抑制剂组Traf6[(0.59±0.03)比(0.96±0.04)]、p-TAK1[(0.43±0.02)比(0.72±0.04)]、caspase-3[(0.59±0.03)比(0.70±0.04)]、Bax[(0.48±0.03)比(0.67±0.04)]表达降低,Bcl-2[(0.54±0.03)比(0.44±0.02)]表达升高(P<0.05),Traf6 mRNA[(0.38±0.24)比(0.82±0.08)]表达降低(P<0.05).结论 槲皮素可诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡,其作用机制可能与激活Traf6/TAK1信号通路有关.
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超高效液相色谱-串联质谱法同时测定补阳还五汤中6种成分含量
目的 建立同时测定补阳还五汤中苦杏仁苷、芍药苷、阿魏酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、槲皮素及芒柄花素含量的方法.方法 采用超高效液相色谱-串联质谱(ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)联用技术,色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(2.1 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇-2 mmol/L甲酸铵水溶液,等度洗脱,流速200μl/min;柱温35℃;进样量2μl;采用电喷雾化离子源、正负离子切换模式、多反应监测模式进行定量分析,离子源温度400℃,干燥气流量500 L/h,雾化气压力75.8 KPa,毛细管电压4000 V,干燥气温度400℃.结果 苦杏仁苷、芍药苷、阿魏酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、槲皮素及芒柄花素的质量浓度范围分别在0.5～32、0.2～12.8、0.1～6.4、0.8～51.2、0.4～25.6、0.08～5.12 ng范围内与各自的峰面积呈良好线性关系(r分别为0.9921、0.9945、0.9928、0.9958、0.9947、0.9966).加样回收率在99.21％～101.44％范围内,RSD均低于2.05％.结论 该法专属性强、快速灵敏,可用于补阳还五汤中苦杏仁苷、芍药苷、阿魏酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、槲皮素及芒柄花素的含量测定.
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从朱蕉叶中分离得甾体皂苷类化合物并评价其细胞毒性和抗菌活性
作者从朱蕉叶分离鉴定出3种新的甾体皂苷类化合物 fruticoside H(1)、fruticoside I(2)和 fruticoside J(3)，以及5种已知化合物槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素-3-O-[6-反式-对-香豆酰基]-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素-3-芸香糖苷、芹菜素-8-C-β-D-吡喃葡糖苷和杜鹃素，并评价了其对人恶性肿瘤细胞株的细胞毒活性和抗菌活性。
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常用中药及其活性成分抗糖尿病的作用机制
糖尿病属于祖国医学"消渴病"的范畴.对中药单体成分抗糖尿病研究,主要集中在生物碱、黄酮(尤其是槲皮素、熊果酸)、多糖、皂苷、萜类.
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槲皮素通过自噬途径减轻高糖致体外培养RSC96细胞的损伤
目的：观察槲皮素对高浓度葡萄糖培养的大鼠雪旺细胞系细胞( rat Schwann cell line,RSC96)自噬、增殖活性和凋亡的影响。方法高浓度葡萄糖(125 mmol/L)及槲皮素(25μmol/L)离体培养RSC96细胞,作用72小时后,噻唑基四唑( methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞增殖活性,原位末端标记法[ terminal dexynucleotidyl transferase( TdT)-mediated dUTP nick end labe-ling,TUNEL]评价凋亡,Western blot法检测caspase-9活化的P35亚基、caspase-3活化的P20亚基及自噬相关蛋白Beclin1的蛋白表达。结果高糖抑制离体培养的RSC96细胞的增殖活性,吸光度(optical density,OD)值降低,凋亡率增加,P35亚基、P20亚基蛋白表达上调(P<0．05,P<0．01)；槲皮素能够增加高糖培养RSC96细胞的增殖活性,下调P35、P20蛋白表达及凋亡率( P<0．05,P<0．01)。然而当自噬被抑制后,槲皮素上述保护作用则被削弱,细胞死亡增多(P<0．01)。结论槲皮素通过增加自噬以促进RSC96细胞的增殖、减少凋亡,从而减轻高浓葡萄糖的损伤。
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关于完善《中国药典》2015年版槐花炭质量标准的研究
目的:为了有效控制槐花炭的质量,本研究建立了饮片的质量控制方法与标准.方法:参照《中国药典》2010版附录相关方法,对槐花炭的水分、灰分和醇溶性浸出物进行测定.以芦丁、槲皮素为对照品,硅胶G为薄层板,芦丁以乙酸乙酯-甲酸-水(8:1:1)为展开剂,槲皮素以氯仿-甲醇-水(6.5:1:1)为展开剂,均在紫外(365 nm)下检视,建立薄层鉴别方法.采用可见-紫外分光光度法测定总黄酮的含量,以500 nm为检测波长.采用HPLC法测定芦丁、槲皮素含量;芦丁的色谱条件为:以Kromasil C18为固定相,以甲醇-1%冰醋酸水(32:68)为流动相,流速为0.8 mL·min-1,检测波长257 nm,柱温35℃;槲皮素的色谱条件为:以Kromasil C18为固定相,以甲醇-0.4%冰醋酸水(44:56)为流动相,流速为0.8 mL·min-1,检测波长257 nm,柱温40℃.结果:槐花炭(花)中水分、总灰分、酸不溶灰分分别不得超过6.0%、16%、8.0%;在薄层条件下,2个对照品与其他斑点分离度良好;浸出物、总黄酮、芦丁、槲皮素含量分别不得低于40.0%、5.0%,2.5%,0.2%.槐花炭(花蕾)中水分、总灰分、酸不溶灰分分别不得超过6.0%、9.0%、1.5%;在薄层条件下,2个对照品与其他斑点分离度良好;浸出物、总黄酮、芦丁、槲皮素含量分别不得低于45.0%、10.0%, 5.0%,0.9%.结论:本标准提高了饮片的质控水平,为临床应用的安全性和有效性提供了实验依据,为《中国药典》2015年版提供实验数据.
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照山白浸膏片TLC鉴别和HPLC特征图谱研究
目的 建立照山白浸膏片的TLC鉴别方法和HPLC特征图谱,为科学评价和有效控制其质量提供可靠方法.方法 采用2种展开系统建立照山白浸膏片中金丝桃苷、槲皮素和山柰素的薄层色谱鉴别方法.采用HPLC法建立液相特征图谱:以金丝桃苷为参照峰,采用C18色谱柱(250×4.6 mm,5μm);以乙腈(A)-0.1％磷酸溶液(B)为流动相,进行梯度洗脱(0-13 min,8％ A;13-28 min,8％A→21％A;28-46 min,21％ A;46-60 min,21％ A→40％ A;60-77 min,40％ A;77-80 min,8％A);流速:1ml·min-1;检测波长为366 nm;进样量:10μl;柱温:30℃.结果 鉴别分离良好.特征图谱有12个共有峰,在HPLC条件下均分离良好.结论 所建方法可实现全面和整体的评价,为有效提高照山白浸膏片质量控制水平提供依据.
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HPLC法同时测定龙眼花中3种黄酮类化合物含量
目的：建立HPLC测定广西不同产地龙眼花药材中槲皮素、木犀草素和山奈素含量的方法。方法：Hypersil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流动相为甲醇-0.2%磷酸（47：53），流速1.0 mL·min-1，柱温30℃，检测波长360 nm。结果：槲皮素、木犀草素和山柰素分别在0.18~2.88μg、0.059~0.944μg和0.024~0.384μg之间呈良好的线性关系（r=0.9999），平均加样回收率分别为100.06%、99.77%、98.67%， RSD分别为1.72%、1.18%、1.99%（n=9）。结论：该方法简便可靠，快速，重复性好，可用于龙眼花药材的质量控制。
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葛根素、大豆素、槲皮素及芦丁对CCl4诱导小鼠急性肝损伤保护作用的比较研究＊
目的：研究葛根素等4种类黄酮化合物的抗氧化活性，并探讨其构效关系。方法：用4种具有代表性分子结构的类黄酮化合物（大豆素、葛根素、槲皮素和芦丁）分别灌胃小鼠，7天后腹腔注射CCL4，建立小鼠急性肝损伤模型，禁食18 h后，取肝组织进行石蜡切片、苏木素-伊红（HE）染色，观察组织形态，采用全自动生化分析仪检测各组小鼠血清肝酶类成分丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、谷酰转肽酶（GGT）和碱性磷酸酶（ALP）的含量，并采用匀浆法检测肝组织中过氧化产物丙二醛（MDA）、抗氧化酶超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的含量。结果：肝组织病理学结果显示，与模型组相比，4种药物干预组小鼠肝组织损伤程度均减轻，但各干预组间未见显著性差异。血清生化分析结果显示，与模型组相比，葛根素干预组和槲皮素干预组小鼠血清中ALT、AST和GGT含量均明显下降（P<0.05或P<0.01），ALP含量无明显变化；大豆素干预组小鼠血清中仅ALT、AST含量明显下降（P<0.05或P<0.01）；芦丁干预组小鼠血清中各酶活性均无明显变化。肝组织匀浆检测结果显示，与模型组相比，槲皮素干预组和芦丁干预组小鼠肝组织MDA含量明显下降（P<0.05），SOD和GSH-Px含量明显上升（P<0.05或P<0.01），而大豆素干预组和葛根素干预组仅可见GSH-Px含量明显上升（P<0.05或P<0.01）。结论：槲皮素的综合抗氧化能力优于大豆素、葛根素和芦丁，这可能与其结构特点有关。与其他3种化合物相比，槲皮素具有多羟基、羟基未成苷的结构特点，提示槲皮素的结构特点可能与其抗氧化活性密切相关。
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雪白睡莲花中黄酮类成分抗氧化及拟缺血对神经细胞作用的研究
在化学成分研究的基础上,对分离得到的10种黄酮单体进行了药理活性的研究,通过对其体外抗氧化、缺糖缺氧条件下对神经细胞的保护或损伤活性的研究,对其构效关系进行了初步探讨.结果表明:新化合物1同时具有在拟缺血条件下对神经瘤细胞PC12的杀伤和对大鼠皮层原代神经元的保护作用;黄酮类普遍具有较强的抗氧化活性,并提示山奈酚苷元存在特异性,其活性和槲皮素、杨梅素苷元存在显著差异;3,4,5-三羟基苯基为潜在的活性药效团.
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三种黄酮类化合物在高效毛细管电泳中电泳行为的研究
目的:研究芦丁、槲皮素、山萘酚等黄酮类成分在毛细管中的迁移行为与电压、缓冲溶液pH值及其离子浓度的关系.方法:在室温下,分别考察电压、缓冲液pH值及缓冲液离子浓度对分离度的影响.结果:3种黄酮类物质在pH值8.65、电压20KV、缓冲液离子浓度12mmoL/L条件下为佳.结论:对于3种物质在毛细管电泳中的迁移行为,缓冲液的pH值对各峰的分离度起主要作用,电压和缓冲液的离子浓度主要影响各峰的出峰时间.
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川产赶黄草不同部位的槲皮素含量比较
目的：测定川产赶黄草不同部位（花和果实、茎、叶、枝）的槲皮素含量，为其综合开发利用提供参考。方法：采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）对5批川产赶黄草不同部位中的槲皮素进行含量测定并比较。结果：川产赶黄草中不同部位的含量差别较大，槲皮素含量高的是花和果实，其次是叶、枝和茎。结论：建议将其药用部位（花和果实、叶、枝、茎）分开，为提高疗效和合理开发利用川产赶黄草药材资源提供科学依据。
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三七酚类成分特征图谱质量表征关联评价研究
采用HPLC-PDA法建立三七酚类成分特征图谱,筛选9个特征峰并通过相对保留时间表征其质量关联性,同时测定对羟基苯甲酸、槲皮素、山柰酚、异鼠李素含量,以对羟基苯甲酸为对照表征酚酸类含量,采用分光光度法测定三七中总酚含量,从而对三七酚类成分含量及其相对比值进行质量表征,然后对三七中各酚类成分含量进行关联分析,从而发现各成分含量的关联性、质量分布规律性,同时将不同批次的药材与经过药效验证的参比药材进行关联度分析,结合关联度分析,筛选出质量优佳三七药材;运用本方法可全面精确的控制和评价三七的质量.
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HPLC 法测定芪红水煎剂中花旗松素和槲皮素的含量
目的：建立高效液相色谱法测定芪红水煎剂中2种主要有效成分花旗松素和槲皮素的含量。方法：采用Waters Sunfire C18（250 mm ×4.6 mm，5μm）色谱柱，以甲醇-0.5％磷酸溶液为流动相梯度洗脱，流速1 mL／min，检测波长290 nm （花旗松素）、365 nm（槲皮素）。结果：花旗松素和槲皮素线性范围分别为0.0755～0.1208μg（ r＝0.9994）和0.0308～0.0924μg（r＝0.9999）；平均加样回收率（n＝6）分别为102.74％（RSD＝1.71％）和102.45％（RSD＝1.52％）。结论：本法简便、准确，重复性好，可用于芪红水煎剂中花旗松素和槲皮素的含量测定。亦可作为芪红水煎液质量控制方法之一。
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HPLC法同时测定护肝颗粒中的槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量
目的:建立护肝颗粒中槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法测定护肝颗粒中槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量,色谱柱Hedera ODS-2柱(4.6 mm×200 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.4%磷酸,梯度洗脱,流速1 mL/min,检测波长360 nm,柱温为35 ℃.结果:槲皮素、山柰素、异鼠李素分别在0.0768~1.92 μg,0.02004~0.501 μg,0.021~0.525 μg范围内进样量与峰面积积分值线性关系良好,r分别为0.9999、0.9998、0.9999,加样回收率分别为97.4%、98.1%、97.9%,RSD分别为1.4%、1.8%、1.3%.结论:该方法准确、稳定,可以用来同时测定护肝颗粒中槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量.
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槲皮素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响
目的:探讨槲皮素(quercetin,Que)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的保护机制.方法:将大鼠随机分为假手术组、心肌缺血再灌注损伤模型组、阳性对照组(盐酸硫氮卓酮片,0.01 mg·kg-1)和Que低、中、高剂量预处理组(15,30,60mg·kg-1),每组10只.冠状动脉前降支根部结扎30 min后剪断结扎线,再灌注60 min建立MIRI大鼠模型；Que预处理组在造模前给予Que各剂量灌胃1周.各组于再灌注60 min后分别取大鼠血清及心肌组织,测定大鼠血清丙二醛(MDA)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白(cTnI)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性；心肌肌浆网钙泵(SERCA)活性,用TTC染色法确定心肌损伤面积和梗死面积(MIS).结果:模型组血清MDA(17.71±3.24)μmol·L-1,CK-MB(2 010.21±76.31)U·L-1,cTnI(2.25 ±0.76) μg·L-1,IL-6(5.89±0.34) ng ·L-1和TNF-α(114.12 ±22.13) μg·L-1含量较假手术组显著升高(P＜0.01或P＜0.05),SOD(77.58±5.20)U·mL-1,GSH-Px(11.22±4.88)U·mL-1,心肌SERCA (2.76 ± 0.49)μmol· mg-1·prot-1·h-1活性显著降低(P＜0.01或P＜0.05)；Que中、高剂量预处理组血清MDA(11.35±2.68,12.26 ± 2.49) μmol·L-1,CK-MB(1 361.11 ±33.98,1 350.11 ±43.02)U·L-1,cTnI(1.75 +0.43,1.73±0.33) μg·L-1,IL-6(3.23 ±0.16,3.12 ±0.17)ng·L-1和TNF-α(74.01±10.98,73.84±11.87) μg·L-1含量较模型组显著降低(P ＜0.01或P＜0.05),SOD(96.11±10.63,97.02±12.36)U·mL-1,GSH-Px(14.88±3.89,15.39±3.98)U·mL-1,心肌SERCA(3.98±0.23,3.92±0.31)μmol· mg-1·h-1活性显著升高(P＜0.01或P＜0.05)；且明显缩小梗死面积(P＜0.01或P＜0.05).结论:Que预处理能减轻氧化应激损伤,降低炎症反应和减轻细胞内钙超载,对心肌缺血再灌注损伤有明显的保护作用.
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槲皮素抑制人鼻咽癌CNE2细胞生长并诱导其凋亡的研究
目的:探讨槲皮素对人鼻咽癌CNE2细胞生长与凋亡的作用.方法:应用台盼蓝拒染法检测20,40,60,80 μmol·L-1浓度槲皮素作用细胞24,48,72 h后的生长状况,流式细胞仪检测在以上浓度下作用细胞48 h后的细胞凋亡率,Western blot法检测以上浓度槲皮素作用细胞48 h后Bcl-2蛋白的表达情况.结果:各浓度槲皮素对人鼻咽癌CNE2细胞的生长有显著的抑制作用,呈明显的时间和剂量依赖性;经不同浓度的槲皮素作用48 h后,细胞凋亡率显著增加,当浓度在40 μmol·L-1以上时,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.01);Western blot法检测Bcl-2蛋白的表达随着槲皮素浓度的增加而降低,槲皮素浓度在40 μmol·L-1以上时,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:槲皮素可以有效抑制人鼻咽癌CNE2细胞生长,诱导细胞凋亡,其诱导该细胞凋亡的作用机制可能是通过下调Bcl-2蛋白的表达.
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槲皮素保护H2O2诱导的H9C2心肌细胞氧化损伤的作用机制
目的:探讨在H2O2诱导的氧化应激损伤中槲皮素对H9C2心肌细胞存活率、活性氧分子(ROS)、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶、细胞凋亡等关键因子的影响,初步阐明槲皮素对心肌细胞的保护机制.方法:H2O2刺激H9C2心肌细胞建立氧化应激损伤模型,分为正常组、模型组、槲皮素组,采用噻唑蓝(MTT)法检测心肌细胞活力,活性氧检测试剂盒检测槲皮素处理后ROS变化,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测细胞氧化应激反应、细胞凋亡机制相关分子[NADPH氧化酶-4(NOX-4),NADPH氧化酶亚单位p22phox,B淋巴细胞瘤-2原瘤基因(Bcl-2),Bcl-2相关X基因(Bax),半胱胺酸蛋白酶-8(Caspase-8)]基因和蛋白表达水平.结果:10 μmol· L-1槲皮素具有显著的抗氧化、抗凋亡作用.与模型组比较,槲皮素组细胞存活率明显提高(P＜0.05),ROS水平与细胞凋亡率明显降低(P ＜0.05,P＜0.01).此外,槲皮素组中Bcl-2,NOX-4基因表达上调(P ＜0.05);p22phox,Bax,Caspase-8基因表达明显下调(P＜0.05).同时槲皮素能够抑制Bax,p22phox蛋白的表达(P＜0.05),上调磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K),Bcl-2蛋白的表达(P＜0.05).结论:10 μmol·L-1槲皮素能有效减少H2O2介导的心肌细胞氧化损伤,进而抑制心肌细胞凋亡.该机制可能是通过调节NADPH氧化酶亚型NOX-4与p22phox,减少ROS生成,激活PI3K表达,升高Bcl-2实现.
