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钙对人卵母细胞皮质颗粒排放的调节及与经典型蛋白激酶C关系
目的探讨经药物处理人卵母细胞,钙引起人卵母细胞皮质颗粒排放的机制.方法分别用蛋白激酶C(PKC)激活剂、抑制剂及钙离子载体处理人卵母细胞,使用激光共聚焦扫描显微镜观察PKC的转位及皮质颗粒的排放.结果使用PKC激活剂处理后,卵母细胞出现了明显的PKCα和γ的转位,但未观察到皮质颗粒的排放.钙离子载体A23187可以引起明显的皮质颗粒的排放,但未出现PKC的转位. 结论PKC不介导人卵母细胞内钙离子升高引起的皮质颗粒的释放放.
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冷冻环玻璃化法冷冻小鼠卵母细胞的效果评价
目的 评价ED15(15%ethylene glycol,EG+15% dimethylsulphoxide, DMSO)冷冻环玻璃化法冻存小鼠成熟卵母细胞的效果,以及对其纺锤体形态、染色体分布和发育潜能的影响.方法 分别以小鼠新鲜成熟卵母细胞为对照组,玻璃化冷冻复苏卵母细胞为冷冻组.玻璃化冷冻以冷冻环为载体,以乙二醇(EG)及二甲亚砜(DMSO)联合作冷冻保护剂.解冻后观察细胞存活情况并对解冻后培养0、1、2 h的卵母细胞行纺锤体及染色体免疫荧光染色,激光共聚焦扫描显微镜观察;其余卵母细胞行体外受精培养,计算受精率、囊胚形成率.结果 冷冻组成熟卵母细胞存活率为98.2%,复苏后卵母细胞培养0、1、2 h的纺锤体形态正常率及染色体分布正常率与对照组比较无显著性差异(分别为87.0%、90.9%、90.3% vs 95%,P＞0.05;91.3%、95.4%、93.5% vs 90%,P＞0.05);冷冻组受精率及囊胚形成率与对照组比较均无显著性差异(81.3% vs 85.2%,P＞0.05;76.1% vs 75.4%,P＞0.05).结论 ED15冷冻环玻璃化法冻存小鼠成熟卵母细胞复苏存活率高,对其纺锤体形态、染色体分布及发育潜能无明显影响.
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海藻糖用于小鼠卵母细胞玻璃化冷冻的研究
目的 探讨海藻糖对小鼠卵母细胞玻璃化冷冻的影响. 方法 采用12只小鼠控制性超排卵获得的360枚成熟的卵母细胞,分别放入含1.0、0.5、0.3及0 mol/L的海藻糖中孵育3h.部分卵母细胞进行碘化丙啶(PI)染色；320枚卵母细胞进行玻璃化冷冻和复苏,并进行体外受精,观察卵母细胞成活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率. 结果 0.3 mol/L海藻糖组复苏率、受精率与对照组无显著差异(92.59％ vs.90.90％,70.67％ vs.61.43％),但是卵裂率、囊胚形成率均高于对照组(83.02％ vs.44.19％,72.72％ vs.47.37％)(P＜0.001)；0.5 mol/L海藻糖组复苏率、受精率、囊胚形成率与对照组无显著差异,但是卵裂率高于对照组(65.22％ vs.44.19％)(P＜0.05)；0.3 mol/L海藻糖组囊胚形成率高于0.5 mol/L海藻糖组(72.72％ vs.50.00％)(P＜0.001);1.0 mol/L海藻糖组卵母细胞复苏率、受精率、卵裂率、囊胚形成率均低于对照组低(P＜0.001). 结论 一定浓度范围的海藻糖对小鼠卵母细胞的玻璃化冷冻有保护作用,0.3 mol/L海藻糖浓度比较适合小鼠卵母细胞玻璃化冷冻.
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人卵母细胞胞浆中央颗粒化对胚胎发育潜能的影响及其分级和成因探讨
目的 探讨人类辅助生殖技术中卵母细胞胞浆中央颗粒化(CLGC)对胚胎发育潜能的影响及其分级评估、形成的可能原因. 方法 回顾性分析荆州市中心医院生殖中心2012年6月至2014年3月卵胞浆内单精子注射(ICSI)治疗的患者,选取全部卵母细胞CLGC的30例患者作为研究组,随机选择同期卵母细胞胞浆形态无异常的200例患者作为胞浆形态正常组,比较二组间年龄、基础FSH、平均促性腺激素(Gn)使用天数、平均Gn总量,以及受精率、卵裂率、优质胚胎率、可利用胚胎率及妊娠结局的差异.并对卵母细胞CLGC的程度进行分级评估,比较轻、重度CLGC患者受精率、优质胚胎率、可利用胚胎率的差异. 结果 研究组与对照组之间的年龄、基础FSH无统计学差异(P＞0.05),而平均Gn使用天数、平均Gn总量、受精率、卵裂率、优质胚胎率、可利用胚胎率及临床妊娠率、流产率差异均有统计学意义(P＜0.05);轻度CLGC组受精率、卵裂率、优质胚胎率、可利用胚胎率均显著高于重度CLGC组(P＜0.05). 结论 人卵母细胞随CLGC的程度加重其胚胎的发育潜能逐渐降低.CLGC作为一种常见的卵母细胞胞浆形态异常对胚胎发育潜能的评估有重要的参考意义.合理的临床降调节方案、合适剂量的Gn使用可能是减少所获卵母细胞CLGC的途径之一.
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卵母细胞玻璃化冷冻对早期胚胎发育潜能和卵母细胞特异性基因表达的影响
目的 研究玻璃化冷冻-复苏液及冷冻-复苏过程对卵母细胞体外受精后早期胚胎发育潜能及卵母细胞特异性发育相关基因表达的影响. 方法 C57BL/6小鼠417枚成熟期卵母细胞随机分为三组,新鲜对照组154枚,新鲜-复苏液处理组105枚,玻璃化冷冻复苏组158枚,行体外受精比较三组2-细胞率及囊胚率,比较三组卵母细胞特异性基因H1foo、Bmp15、Gdf9、Sohlh2、Nobox的mRNA表达水平. 结果 体外受精后玻璃化冷冻复苏组2-细胞率(63.93％)显著低于其他两组(81.25％、77.42％) (P＜0.05),囊胚率三组无统计学差异.Bmp15、Gdf9、Sohlh2、Nobox的mRNA表达水平三组无统计学差异(P＞0.05),H1foo αmRNA和蛋白表达在玻璃化冷冻复苏组显著低于新鲜-对照组和新鲜-复苏液处理组(P＜0.05).结论 玻璃化冷冻-复苏液对卵母细胞体外受精后早期胚胎发育及卵母细胞特异性基因表达无显著影响,而冷冻复苏过程会降低体外受精后2-细胞率及H1foo-αmRNA和蛋白表达水平.
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Synaptotagmin1影响小鼠卵母细胞减数分裂和皮质反应的研究
目的 探讨Synaptotagmin1 (Syt1)对小鼠卵母细胞减数分裂过程和皮质反应的影响. 方法 免疫印迹检测Syt1在小鼠卵母细胞的表达;免疫荧光分析Syt1在卵母细胞中定位以及对减数分裂过程的影响;活细胞实时拍摄系统观察皮质反应以及纺锤体、染色体在降调Syt1表达的动态变化. 结果 (1)Syt1和小鼠卵母细胞皮质颗粒完全共定位;(2)降调Syt1表达,小鼠卵母细胞减数分裂进程受到阻碍;(3)活细胞实时拍摄系统证实了降调Syt1会影响中后期转换、第一极体释放以及进一步的皮质反应. 结论 Syt1参与调控卵母细胞的减数分裂的成熟过程和皮质反应的发生.
关键词： Synaptotagmin1 减数分裂 皮质反应 卵母细胞 -
人卵母细胞和胚胎在低温保存过程中细胞内外冰晶形成规律的研究
目的 研究人卵母细胞和胚胎在不同降温速率下细胞内外冰晶形成的规律,进一步解析其低温生物学特性,为开发合适的低温保存方案提供依据. 方法 将临床废弃卵母细胞和胚胎在包含1 mol/L的乙二醇和植冰剂Snomax(10mg/L)PBS溶液中培养15 min后,放置在低温显微镜下观察.通过设定不同的降温程序,实时记录细胞内外冰晶形成的过程. 结果 细胞外冰晶形成的温度为-(7.4±0.3)℃.当降温速率为-0.5℃/min时,人卵母细胞和胚胎细胞内均未有细胞内冰晶的形成;当降温速率分别为-2℃/min、-4℃/min、-8℃/min、-20℃/min时,人卵母细胞和胚胎的细胞内冰晶形成的温度分别为-(26.9±12.3)℃、-(26.2±12.0)℃;-(25.0±8.6)℃、-(20.4±6.3)℃以及-(23.0±6.5)℃、-(19.2±6.3)℃;-(25.4±8.4)℃、-(19.1±5.5)℃.桑椹胚细胞内冰晶形成有两种特点:卵裂球同时且均匀的形成冰晶或者单个卵裂球、一组卵裂球依次形成冰晶. 结论 卵母细胞细胞内冰晶形成的温度(-25.0℃)更低于胚胎(-20.4℃),且人卵母细胞细胞内冰晶形成的温度域宽且分散,而胚胎细胞内冰晶形成的温度域窄且集中.
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卵泡液内激素水平与卵母细胞成熟度的关系
卵母细胞的发育依赖于卵泡液中的各种激素和生长因子,以及这些物质在卵母细胞和颗粒细胞之间的相互影响[1],为此关于卵泡内微环境(即卵泡液)对卵母细胞发育影响的研究成为近年来研究的热点.在进行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗过程中,控制性超排卵(COH)使患者在同一周期产生多个成熟和不成熟卵,为研究不同发育时期的卵母细胞提供了机会.卵母细胞的成熟度直接关系到受精率、着床率及妊娠率.本文就卵泡液内激素水平与卵母细胞成熟度的关系进行探讨.
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缩短受精前卵母细胞培养和精卵共孵育时间对妊娠结局的影响
目前,常规体外受精(IVF)一般是在取卵后4～6 h进行,精卵共孵育时间16～20 h.文献[1]报道受精前卵母细胞培养时间多少对结果无明显影响,缩短精卵共孵育时间也就是短时受精可提高胚胎质量和种植潜能[2].本研究对缩短卵母细胞的培养及精卵共孵育时间,卵母细胞受精后脱去及保留颗粒细胞的结局与常规IVF结局比较.
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体外培养人卵母细胞不同发育阶段原癌基因c-mos的表达
成熟促进因子(MPF)和有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)是调节卵母细胞细胞周期的关键分子,二者的激活和失活导致了减数分裂的恢复、阻滞和完成.许多蛋白激酶通过调节MPF和MAPK活性来影响减数分裂.其中,c-mos激活脊椎动物卵母细胞的MAPK,从而启动成熟分裂并维持中期阻滞[1].
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冻融卵母细胞显微授精后冻融胚胎移植成功并分娩一例报道
本文报道1例患者经玻璃化方法冷冻卵母细胞,解冻后行卵胞浆内单精子注射(ICSI)获得胚胎,部分胚胎行玻璃化冷冻,冻融胚胎移植后获得临床妊娠并分娩1正常男婴.为卵母细胞及胚胎多次冷冻后的临床应用及应用可行性提供一定的参考.
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盆腔液中抽取卵母细胞行常规体外受精-胚胎移植成功妊娠一例
患者38岁,因结婚12年不育,于2006年12月来我中心就诊.输卵管造影(HSG)提示双侧输卵管未显影,近段阻塞;腹腔镜下发现双侧输卵管伞端严重粘连.患者要求行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗,常规检查基础卵泡刺激素(FSH)8.23 U/L,双方人免疫缺陷病毒(HIV)、梅毒血清反应(RPR)检测阴性,女方阴道分泌物解脲支原体、衣原体检测阴性;夫精液常规检查:量2.4 ml,精子数57×106/ml其中A+B级精子41%、形态正常率61%,白细胞2～3个/HP,解脲支原体、衣原体阴性.
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多囊卵巢综合征患者小卵泡穿刺获得核成熟卵母细胞行卵胞浆内单精子注射成功妊娠一例
患者27岁,月经稀发,体重48 kg, 结婚3年未避孕未育,排除男方因素.阴道B超检查每侧卵巢直径2～8 mm的卵泡>10个,持续无排卵,临床诊断为多囊卵巢综合征(PCOS).
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超排卵方案中HCG日的确定
利用HCG模拟内源性黄体生成素峰是超排卵过程中重要的环节之一.对卵泡经线大小和卵母细胞质量相关性的研究证实卵泡的大小可预测卵母细胞的发育潜能.因此,主导卵泡或主导卵泡簇的经线大小仍然是超排卵方案HCG日确定的重要参数.其它参数,包括雌二醇水平、孕酮水平和避免周末取卵等也需要考虑在内.
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小心促排过程促性腺激素过量使用
FSH是常用于不孕症治疗的促性腺激素.在控制性促排卵过程中,FSH水平应高于引起卵巢反应的阈值水平.但是,长时间高FSH水平会诱导多卵泡募集和超生理E2水平,使卵巢过度刺激综合征(OHSS)风险升高,而且高E2水平与低出生体重和小于胎龄儿出生有关.因此,在控制性促排卵过程中要格外注意调整FSH剂量.
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MII期卵是完全成熟的受精前卵母细胞吗?
卵母细胞质量决定胚胎的质量.在卵母细胞发育过程中,众多环节影响卵母细胞自身发育潜能.人类卵母细胞停滞在减数分裂I期可长达几十年.在这期间,卵母细胞积聚mRNA、蛋白质、脂肪和糖等后成熟所必须的物质.在后阶段,卵母细胞完成减数分裂I,并进入减数分裂II的中期(MII).卵母细胞成熟由相互关联和依赖的两部分组成:胞浆成熟和核成熟.
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超排卵周期如何控制卵母细胞胞核与胞质的同步成熟
卵母细胞的成熟包括细胞核与细胞质的成熟.目前以第一极体的释放作为细胞核成熟的标志.卵冠丘与卵周颗粒细胞形态为评价卵母细胞的成熟状态提供了线索.在自然排卵周期,随着卵母细胞的成熟,颗粒细胞与卵冠丘复合物扩展,并与核成熟同步.但在刺激周期,卵丘扩展受到外源性促性腺激素干扰,不与核成熟同步.刺激周期卵丘扩展的状态阻碍了对卵母细胞成熟度的判断.而胞浆的成熟,目前还无法通过卵冠丘复合体、卵母细胞大小、卵母细胞色泽、透明带、卵周隙以及胞质均质度等形态学的观察来判断.皮质颗粒迁移到细胞膜被认为是排卵前阶段细胞质成熟的标志[1].然而,对于部分未成熟卵母细胞皮质颗粒迁移的研究显示,皮质颗粒迁移可能只是成熟过程的事件之一,但可能不是重要的.近年来,很多研究尝试寻找能够判断胞质成熟的相关因子如生长分化因子-9(GDF9)、骨形态发生蛋白15(BMP15)等[2],但尚缺乏快速、直接的判定指标.鼠胚的研究结果报道,成熟卵母细胞的平均直径与囊胚形成呈正相关[3],但在人类,卵母细胞直径与受精以及胚胎质量无相关性[4].
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体外受精胚胎发育潜能的形态学评估
随着体外受精-胚胎移植(IVF-ET)技术的不断进步,如卵巢刺激方案和胚胎培养技术的革新,已促使妊娠率大幅度提高,而伴随的多胎妊娠率也升高.多胎妊娠危及母婴的安全,有悖于优生原则.减少移植胚胎的数目,推行单胚胎移植是降低多胎出生为有效的措施,但困扰胚胎学家的是如何选择具有发育潜能的胚胎用于移植.目前,胚胎体外发育潜能的评估方法仍主要依据胚胎形态学的评分,其他选择方法,如对胚胎的蛋白组学和代谢组学等方法的研究还很难被广泛地应用,仍无法代替简便、快捷、又不失效率的形态学评估方法.受配子/胚胎自身因素以及体外操作、培养环境的影响,胚胎在体外发育过程中常伴随出现一些形态学上的异常现象,而这些形态学特征往往与其发育潜能相关,但形态学并不能完全准确地反应配子/胚胎的发育潜能,尤其是单一时间点的形态学评分,因此综合考虑配子至胚胎各个阶段的形态学评分将有助于选择较高发育潜能的胚胎用于移植.
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多精受精原因和机理
多精受精是哺乳动物卵母细胞较普通的一种异常受精形式,生理情况下体内很少发生多精受精,然而人工治疗手段则增加多精受精的发生率.要了解多精受精发生的原因和机制,首先来了解正常受精机制.
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卵母细胞、受精卵及早期胚胎质量判断方法的探讨
根据近年来有关研究工作的进展和作者的工作,从历史和发展的多个角度回顾和评述了胚胎质量评价方法和进展.并从几个方面对卵母细胞、合子和胚胎质量的判断方法进行了概述.
