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精子冷冻环无保护剂玻璃化冷冻方法的初步研究
目的 探讨精子冷冻环无保护剂玻璃化冷冻方法的可行性.方法 正常精液标本上游处理后,进行常规冷冻和冷冻环无保护剂的玻璃化冷冻,复苏后分别从活力参数及电镜下超微结构等指标比较两种冷冻方法的效果. 结果 两种方法冷冻后精子存活率、活动率之间差异无显著性(48%∶48%;44.5%∶43.5%, P＞0.05),但均较未冷冻的89%和88.5%明显下降(P＜0.001).超微结构亦较未冷冻时发生了一定的改变,但核结构基本保持完整. 结论 精子冷冻环无保护剂的玻璃化冷冻是一种简单、方便而行之有效的冷冻方法.
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冷冻环玻璃化法冷冻小鼠卵母细胞的效果评价
目的 评价ED15(15%ethylene glycol,EG+15% dimethylsulphoxide, DMSO)冷冻环玻璃化法冻存小鼠成熟卵母细胞的效果,以及对其纺锤体形态、染色体分布和发育潜能的影响.方法 分别以小鼠新鲜成熟卵母细胞为对照组,玻璃化冷冻复苏卵母细胞为冷冻组.玻璃化冷冻以冷冻环为载体,以乙二醇(EG)及二甲亚砜(DMSO)联合作冷冻保护剂.解冻后观察细胞存活情况并对解冻后培养0、1、2 h的卵母细胞行纺锤体及染色体免疫荧光染色,激光共聚焦扫描显微镜观察;其余卵母细胞行体外受精培养,计算受精率、囊胚形成率.结果 冷冻组成熟卵母细胞存活率为98.2%,复苏后卵母细胞培养0、1、2 h的纺锤体形态正常率及染色体分布正常率与对照组比较无显著性差异(分别为87.0%、90.9%、90.3% vs 95%,P＞0.05;91.3%、95.4%、93.5% vs 90%,P＞0.05);冷冻组受精率及囊胚形成率与对照组比较均无显著性差异(81.3% vs 85.2%,P＞0.05;76.1% vs 75.4%,P＞0.05).结论 ED15冷冻环玻璃化法冻存小鼠成熟卵母细胞复苏存活率高,对其纺锤体形态、染色体分布及发育潜能无明显影响.
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玻璃化冷冻方法三种冷冻载体冻存卵裂期胚胎效果的比较
目的 应用冷冻环、冷冻膜和自制麦管片三种冷冻载体,采用玻璃化冷冻方法冻存昆明小鼠卵裂期胚胎,比较三种载体的冻存效果.方法 采集通过体外受精在体外培养第2天得到的4-8细胞期的昆明小鼠胚胎247个,对其中177个按载体不同随机分为冷冻环组59个,冷冻膜组59个,自制麦管片组59个;剩余的新鲜胚胎70个作为对照组,比较冻融后鼠胚的复苏率和囊胚形成率.结果 冷冻环组、冷冻膜组和自制麦管片组的胚胎复苏率分别为98.3％、98.3％和94.9％,三组比较差异无统计学意义(P＞0.05);冷冻环组、冷冻膜组和自制麦管片组的囊胚形成率分别是84.5％、86.2％和82.1％,三组比较无统计学差异(P＞0.05);新鲜对照组囊胚形成率为94.3％,与冷冻环组、冷冻膜组分别比较无统计学差异(P均＞0.05),与自制麦管片组有统计学差异(P＜0.05).结论 采用玻璃化冷冻方法冻存小鼠卵裂期胚胎,使用冷冻环和冷冻膜作为冷冻载体具有复苏率高、囊胚形成率高的优点,更适合应用于临床.
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冷冻环玻璃化冷冻对小鼠成熟卵母细胞DNA的损伤
卵母细胞冷冻是辅助生育技术(assistel repro-ductive technology,ART)领域的研究热点之一.1986年全世界第一例通过冻存卵母细胞获得试管婴儿成功降生,然而由于卵母细胞体积大、细胞膜与细胞浆比例小等自身生物学特点,卵母细胞冷冻发展较慢,目前临床上尚未广泛应用,仅局限于实验研究[1].我院冷冻环玻璃化法冻存小鼠成熟卵母细胞获得了较好效果[2],本研究通过脱氧核糖核苷酸
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冷冻膜及冷冻环在人早期胚胎玻璃化冷冻中的应用比较
目的 探讨冷冻膜和冷冻环2种载体行玻璃化冷冻对人卵裂期胚胎和囊胚的效果.方法 采用回顾性队列研究分析912个解冻复苏周期,比较2种载体行玻璃化冷冻后胚胎复苏结局和临床结局的差异及其相关危险因素.结果 ①385枚卵裂期胚胎中,冷冻环组(n=251)和冷冻膜组(n=134)的胚胎复苏率、完整胚胎存活率、临床妊娠率、种植率、流产率、移植周期出生率、双胎出生率、早产率及出生男女比率差异均无统计学意义(P＞0.05);冷冻环组新鲜周期优质胚胎率(24.78％)、平均移植周期数(1.3±0.6)、复苏后优质胚胎率(40.76％)、复苏后平均移植胚胎数[(2.1±0.4)个]及低体质量儿出生率(19.01％)均明显高于冷冻膜组[18.59％,P=0.002;1.2±0.4,P=0.001;28.13％,P=0.001;(1.9±0.4)个,P=0.000;4.08％,P=0.015].②527枚囊胚中,冷冻环组(n=287)和冷冻膜组(n=240)的平均移植周期数、胚胎复苏率、完整胚胎存活率、复苏后囊胚扩张率、流产率、双胎出生率、早产率、低体质量儿出生率及出生男女比率差异均无统计学意义(P＞0.05);冷冻环组的临床妊娠率(67.94％)、种植率(49.72％)、移植周期出生率(52.96％)、新鲜周期优质胚胎率(27.0％)、平均移植胚胎数[(1.9±0.4)个]显著高于冷冻膜组[54.17％,P=0.001;39.58％,P=0.002;41.25％,P=0.047;23.0％,P=0.002;(1.8±0.5)个,P=0.004].Logistic回归显示,新鲜周期优质胚胎数、内膜厚度及冷冻胚胎所用载体类型与冷冻囊胚复苏移植后临床妊娠密切相关(P=.017、P=0.049、P=0.044),而年龄、复苏后平均移植胚胎个数、复苏后囊胚扩张数、平均移植周期数及内膜分型等差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 对于卵裂期胚胎,冷冻膜和冷冻环冷冻胚胎的复苏结局和临床结局均是相当的.对于囊胚,冷冻环组的临床结局优于冷冻膜组.
