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小鼠卵母细胞透明带膨胀辅助去核方法的研究
目的探讨新的小鼠卵母细胞透明带膨胀(ZPD)辅助去核法的可靠性.方法本实验用ZPD辅助去核法与其他常用方法对小鼠卵母细胞进行去核操作,比较其去核操作效率.结果ZPD辅助去核方法显著提高去核操作后卵母细胞存活率,减少去核操作时间,经卵丘颗粒细胞核移植构建重构胚胎,激活后原核形成率达62.8%,经体外培养可发育至4细胞期.结论ZPD辅助去核方法是一种适用于小鼠卵母细胞操作的快速、简单、实用的去核方法.
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PCOS合并代谢综合征患者卵泡液激肽谱与卵子质量的关系
目的 探讨PCOS合并代谢综合征患者卵泡液内脂质代谢模式与卵泡液内激肽系统表达谱及胚胎发育的关系. 方法 前瞻性队列研究,选取年龄匹配的体外受精助孕患者共90例,其中单纯PCOS 30例,PCOS合并代谢综合征患者30例,正常对照组30例.所有患者均采用拮抗剂方案促排卵,取卵日收集单个优势卵泡(直径18~21 mm)卵泡液,采用悬液芯片技术检测卵泡液内激肽表达谱,比较各组患者卵泡液内脂代谢指标、激肽表达谱及相关的胚胎质量. 结果 (1)三组患者基础性激素(FSH,LH,E2,P)水平、HCG扳机日和取卵日激素(LH,E2,P)水平,及收集卵泡液的卵泡直径大小均无统计学差异(P>0.05).(2)PCOS合并代谢综合征组患者的体重指数、血清和卵泡液内甘油三酯水平均显著高于其他两组患者(P<0.05),而高密度脂蛋白水平显著下降(P<0.05);PCOS合并代谢综合征患者卵泡液内胆固醇水平和TNF-α水平均显著高于其他两组患者(P<0.05),而G-CSF水平显著降低(P<0.05);其他15种激肽水平各组间无统计学差异(P>0.05).(3)卵泡液G-CSF水平与其内胆固醇(TG)和甘油三酯(TC)水平存在负相关(相关指数分别为0.29和0.25),而TNF-α则与TG水平正相关(相关指数0.26).(4)三组患者间受精率、胚胎可用率均无统计学差异(P>0.05),优质胚胎率在PCOS合并代谢综合征组(20.0%)显著低于PCOS组(38.4%)及对照组(34.6%)(P<0.05). 结论 PCOS合并代谢综合征患者卵泡液内脂代谢异常指标主要与激肽表达谱中的G-CSF和TNF-α有关;由于激肽系统对卵子的发生存在直接影响,我们推断PCOS合并代谢综合征患者的卵子发育潜能下降的原因很可能涉及这一机制.
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控制性超排卵影响卵子质量吗?
卵泡发育必须经过启动和选择两个重要阶段才能终发育成优势卵泡.始基卵泡启动生长受到内分泌、旁分泌和自分泌机制的调控.控制性超排卵(COH)是体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中常用的重要方法,是IVF能够广泛顺利开展的前提和保障.但COH也有其不良作用,除卵巢过度刺激综合征(OHSS)外,还影响胚胎的着床.COH影响胚胎着床主要表现在对胚胎质量和子宫内膜容受性的影响两个方面.COH影响卵母细胞质量的可能机制目前还不甚清楚.
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大剂量促性腺激素超排卵的安全性——负面影响
世界第一例试管婴儿是利用自然周期的卵母细胞,然而自然周期IVF成功率极低,超促排卵药物的应用为每个周期获得多量的卵提供了可能,极大的提高了IVF的成功率,已经成为IVF中几乎不可避免的一个手段.
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影响补救性卵胞浆内单精子注射周期妊娠的因素
常规体外受精(IVF)周期中不受精或者低受精(周期受精率≤25%)在临床上的发生率一般占常规IVF的10%～30%[1-3],补救性卵胞浆内单精子注射(rescue-ICSI)作为一种受精失败的补救措施在临床上的应用已有十余年,但rescue-ICSI的临床结局不如人意,对于这部分患者,目前国内外仍无有效的改善措施.
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卵母细胞发育停滞
大多数哺乳动物的卵原细胞在胎儿期进入减数分裂,如小鼠卵原细胞在妊娠第13.5天,人卵原细胞在胚胎第8周即开始减数分裂.经过减数分裂I(Meiosis I, MI)前期的细线期、偶线期和粗线期后,双线期的卵母细胞被颗粒细胞前体细胞包裹,形成原始卵泡.
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IVF/ICSI受精失败的原因
全部卵母细胞受精失败(或低受精率)是体外受精(IVF)实验室经常遇到的困惑之一.尽管在熟练掌握和广泛使用卵胞浆内单精子注射(ICSI)技术后,全卵不受精现象已显著降低,但在IVF实验室内仍然存在着难以预测和不明原因的全卵不受精现象.
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刚地弓形虫对BALB/c小鼠卵母细胞的毒性
弓形虫是一种广泛存在于细胞内的寄生原虫,是可引起人兽共患的弓形虫病.正常人感染弓形虫后,多数呈隐性感染,但育龄妇女感染弓形虫后常引起不孕或出现流产、死胎、死产等不良妊娠结局~([1]).
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敌百虫对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响
有机磷类农药对人体健康的影响早已为人所知,但是其潜在的生殖毒性却是近年来关注的热点.其进入体内的途径主要有皮肤与消化道,特别是食入有机磷农药污染的蔬菜可在体内逐渐聚集,影响多种组织细胞和器官功能的作用.
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1-18 苯、CS2诱导小鼠卵母细胞染色体非整倍体率增高
目的研究苯,CS2对卵母细胞染色体非整倍体率的影响.方法成年雌性NIH小鼠,1次灌胃,苯(942、1 881、3 762 mg/kg),CS2(372、744、1 488 mg/kg)和多次吸入染毒,苯(706、1 922、4 864 mg/m3);CS2(199、651、1 209 mg/m3),染毒后收集MII卵母细胞,作细胞遗传学分析,测定染色体非整倍体率.结果在灌胃组,苯仅见高剂量组MII卵母细胞非整倍体率(5.64%)高于对照组;CS2 3个剂量组MII卵母细胞染色体非整倍体率分别为4.88%、6.82%、6.82%,与对照组(0.78%)比较,差异均有显著性(P＜0.05).小鼠吸入染毒,苯、CS2各3个剂量组MII卵母细胞染色体非整倍体率分别为7.06%、7.50%、9.76%和6.60%、12.00%、10.00%.与对照组(1.30%)比较,差异均有显著性(P＜0.05).同时也观察到苯、CS2染毒后,第1次减数分裂(MI)卵母细胞停滞,MI卵母细胞率高于对照组(P＜0.05).结果提示苯、CS2有致非整倍体作用.结论高剂量苯、CS2可诱导小鼠MII卵母细胞非整倍体率增高.
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6种金属元素对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响
为研究镉、铅、镍、锰、铬、铝元素的生殖毒性,采用卵母细胞体外培养、体外受精的方法,观察它们对卵母细胞成熟和受精能力的影响.结果显示除了铝外,其它各金属元素均可以明显降低小鼠超排卵数;6个剂量组均可以抑制卵母细胞的成熟,显著降低卵母细胞第一极体释放率、体外受精率和细胞存活率,对体内卵母细胞的生发泡破裂没有影响,但是对体外培养卵母细胞的生发泡破裂有明显的抑制作用(铝组除外).结果提示,这些金属元素被人体过量吸收后,可以破坏育龄妇女卵母细胞正常成熟,使受精能力下降,甚至导致不孕或不育.
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汞对雌性小鼠生殖功能及脏器的影响
为探讨汞化合物对脏器及生殖的毒性,采用卵母细胞体外培养、体外受精的方法研究了汞对小鼠脏器系数、卵母细胞成熟和受精能力的影响.结果表明,0.5和1.5mg/kg BW汞对小鼠的肝脏、肾脏有明显的毒性作用,1.5mg/kg BW组还对卵巢有明显的毒性作用,并能显著降低超排卵的卵母细胞数;汞对体内卵母细胞生发泡破裂没有影响,但可以抑制卵母细胞第一极体的释放,影响卵母细胞的存活率并降低体外受精(IVF)率.结果提示,氯化汞可以影响卵母细胞的成熟,明显破坏卵母细胞的体外受精能力,损伤或降低小鼠的生殖能力.
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香烟烟雾对雌鼠卵母细胞氧化损伤及发育潜能的影响
目的 研究香烟烟雾暴露对雌鼠卵母细胞的氧化应激水平及其发育潜能的影响.方法 将96只SPF级6周龄ICR雌鼠按照体重相近原则随机分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组24只,实验组置于点燃1支香烟的染毒柜中,染毒柜容积分别为60、32和23 L,对照组正常饲养,每天2次,每次1h,连续4周.每天称重并记录,绘制体重变化曲线;利用试剂盒检测卵巢组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX)活性水平;通过组织切片、间接免疫荧光及体外成熟等技术分别检测各组卵巢脏器系数、卵母细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平及第一极体率等指标.两组均值的比较采用t检验,多组均值之间的比较采用单因素方差分析,P＜O.05表示差异具有统计学意义.结果 与对照组比较,处理组小鼠体重增长明显减慢,高剂量组体重增量仅为1.05％±0.41％;卵巢脏器系数、卵巢组织SOD、GPX活性及产仔量(高剂量组降至5.20％±1.48％)均明显下降;卵母细胞中ROS水平明显升高,卵母细胞体外成熟第一极体率降低,高剂量组降至49.34％±5.78％,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 香烟烟雾暴露可引起小鼠卵巢脏器系数、SOD、GPX活性水平下降,卵母细胞内ROS含量增高,第一极体率及产仔量的下降.
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活体细胞的组合图像处理研究
为了提高活体细胞的显微图像分辨率虽然有多种方法,然而至今还未找到一种公认的处理所有活体细胞图像方法.本文采用伪彩色处理与多种图像处理方法结合处理50幅原始图像,并比较处理前后的卵母细胞图像,使用SPSS10.0统计软件包加以处理,探讨处理活体细胞是否能提高图像的分辨率及系统是否适用于活体细胞的图像处理,为今后临床和科研研究活体细胞创造条件.
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两种长方案促排卵方法对获卵数少者行体外授精-胚胎移植妊娠结局的影响
随着女性生育年龄的后延,卵巢储备功能下降患者寻求助孕治疗越来越多.除了年龄＞ 40岁是公认获卵数减少的高危因素[1],卵巢、输卵管手术史等也是导致获卵数少的风险因素.如何使用药物刺激卵巢获得适当多数目的高质量卵母细胞成为生殖科医师关注的问题,本文探讨改良长方案与短效长方案在此类患者中的应用效果.1资料与方法1.1一般资料对2011年10月～2012年7月,在本院进行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)或卵泡浆内单精子注射(ICSI)助孕治疗,年龄≥40岁或获卵数＜6枚[2]患者的病例资料进行回顾分析.
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胚胎干细胞向生殖细胞分化的研究进展
近年来,不断有研究证明人胚胎干细胞(hESC)的多能性,以及小鼠胚胎干细胞(mESC)能够分化为早期配子并形成囊胚样结构[1,2].2003年5月,Hubner等[1]研究发现,小鼠胚胎干细胞在体外可分化为卵母细胞.Nayernia等[3]研究发现,mESC可于体外分化为未成熟的精子,并且成功获得了存活的后代.这些研究对发展新的生殖工程学提供了开创性思路,研究胚胎干细胞向生殖细胞的分化将为人类生殖细胞的发育机制带来新认识,并为不孕不育症的治疗提供一种崭新的思路和方法.
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凋亡对女性生殖细胞的调节作用
卵泡被一层颗粒细胞包绕阻滞于减数分裂Ⅰ期,这种生殖细胞体细胞单位叫做卵泡,以后经过一系列成熟过程,包括卵母细胞生长、颗粒细胞增生以及卵母细胞的后成熟阶段,完全成熟的卵泡释放出卵母细胞,进入生殖管道受精、形成胚胎并进一步发育成胎儿.成年女性在生殖年龄持续存在这个过程,直到卵泡耗竭终止,这时卵巢发生衰老,在人类形成绝经[1].在女性一生中仅有很少的一部分卵母细胞生长、排卵、受精,大部分卵母细胞走向闭锁退化,如在中孕期女性胎儿大约有7×106的生殖细胞,但在出生时或出生后不久卵巢内生殖细胞仅保留大约1×106,在青春期及成年阶段卵母细胞数目持续减少,到绝经过渡期卵巢内仅发现大约几百个退化的卵母细胞.妇女在她的成年期大约可以排400个卵母细胞,显然99.9%的卵母细胞发生了退化[2,3].
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卵泡液干细胞因子水平对卵母细胞发育、受精和卵裂影响的实验研究
目的:探讨卵泡液中干细胞因子(SCF)水平对卵母细胞发育、受精和卵裂的影响.方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测68例体外受精-胚胎移植患者卵泡液中SCF水平,分析其与卵母细胞发育、受精和卵裂的关系.结果:卵泡液SCF水平为526±58ng/L,显著高于血清SCF水平(389±31ng/L)(P＜0.01).含成熟卵母细胞的卵泡液SCF水平为540±62ng/L,高于含未成熟卵母细胞者(515±55ng/L)(P＜0.05);受精卵的SCF水平(538±61ng/L)高于未受精卵(519±56ng/L)(P＜0.05);Ⅰ级和Ⅱ级胚胎的SCF水平(536±59ng/L、531±60ng/L)高于Ⅲ级和Ⅳ级胚胎(522±56ng/L、520±55ng/L)(P＜0.05).结论:卵泡液SCF可促进卵母细胞发育,提高受精卵发育潜能.
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含滑面内质网聚焦体卵母细胞ICSI成功妊娠1例报告
资料:某女,27岁,因结婚7年不孕,于2006年11月来本中心就诊.子宫输卵管造影提示双侧输卵管近段阻塞;常规检查卵泡刺激素(FSH)7.6U/L,黄体生成素(LH)4.1U/L;男方精液常规检查:精液量2.4ml、精子数量8×106/ml、a+b级精子10%、形态正常率36%、白细胞2～3个/HPF.
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玻璃化冷冻法在未成熟卵子冷冻技术中的应用
目的:探讨玻璃化冷冻法在未成熟卵子冷冻方面的应用价值.方法:选取GV期卵母细胞744枚,随机分为5组,A组(128枚),GV期卵子直接进行未成熟卵母细胞体外培养(IVM);B组(220枚),GV期卵子直接行玻璃化冷冻;C组(155枚),GV期卵子直接行IVM,待培养至MⅡ期,再行玻璃化冷冻;D组(112枚),GV期卵子去除冠-丘细胞,行玻璃化冷冻;E组(129枚),GV期卵子保留除冠-丘细胞行玻璃化冷冻.比较各组卵母细胞的存活率、成熟率、受精率、卵裂率及囊胚形成率.结果:与A组相比,B组和C组的成熟率、受精率、卵裂率和囊胚形成率均降低(P＜0.05);B组与C组间存活率、成熟率、受精率、卵裂率和囊胚形成率无差异(P＞0.05).E组的成熟卵子率较D组提高(P＜0.05),但两组在解冻卵子存活率、受精率、2细胞数和＞2细胞数方面无差异(P＞0.05).结论:未成熟卵子的玻璃化冷冻保留冠-丘细胞可显著提高冻融效果.
