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利用一种新的DNA操作系统克隆人神经生长因子△(简报)
神经生长因子(NGF)是早发现的神经趋化因子.它对神经细胞具有营养与保护作用,对损伤神经具有调节与修复功能.为大量获得重组人NGF,本研究采用构建杂合克隆因子(hybrid clonemid)进行DNA操作,使NGF基因与pET-16 b载体重组. 根据人NGF基因序列合成一对PCR引物,并在引物的5'端加上与载体互补的一小段序列(21bp).
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抗环瓜氨酸肽抗体ELISA检测方法的建立及临床意义
类风湿关节炎(RA)是一种致畸性疾病,发病2年即可出现不可逆的骨关节破坏[1].现行的诊断标准主要依靠临床表现、X线检查以及类风湿因子(RF)检测,符合此标准时病人常已出现骨关节破坏,加之RF缺乏特异性,都不利于早期诊断早期干预治疗,因此临床需要能用于RA早期诊断的实验室指标.自从证实抗核周因子(APF)是RA的特异性抗体并可在疾病早期出现后,又陆续发现抗角蛋白抗体(AKA)2-51、抗聚角蛋白微丝蛋白(cytokeratin filamentaggregating protein,filaggdn)抗体(AFA)[6]以及抗Sa抗体[7],这些都对诊断RA具有高度特异性,都可在疾病早期出现.新近认为上述抗体在化学结构上具有相关性,它们的表位都含有瓜氨酸,故称之为瓜氨酸相关自身免疫系统[8].此系统可能在RA的发病及发展中起作用.2000年,国外首次报道根据filaggrin的cDNA序列合成一条含瓜氨酸的环肽(cyclic citrullinated peptide,CCP)可用于ELISA检测,并成功地在RA血清中检测出抗CCP抗体(anfi-CCP)[9].目前国外仅有数篇报道,国内尚无有关报道.我们以人工合成的CCP为底物,自行建立了ELISA方法,检测了RA病人血清中的抗CCP抗体.
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类风湿关节炎自身抗体的新认识
类风湿关节炎(RA)是以对称性多关节炎为主要临床表现的异质性、系统性疾病.本病是慢性、进行性、侵袭性疾病,如不给予适当治疗,病情逐渐发展加重,后导致关节强直、畸形、功能丧失而有不同程度的残废[1].治疗早晚对疗效、转归皆有重要影响.因此临床需要RA早期诊断的实验室指标.自从1964年证实抗核周因子(APF)[2]是RA的特异性抗体并可在疾病早期出现后,又陆续发现抗角蛋白抗体(AKA)[3]、抗聚角蛋白微丝蛋白抗体(AFA)[4]以及抗Sa抗体[5]都对RA具有高度特异性,可在疾病早期出现.2000年国外首次报道根据FILAGGRIN的c DNA序列合成一条含瓜氨酸的环肽(CCP),并用于ELISA检测[6],发现其对RA具有很好的敏感性和特异性,可视为RA新的血清标志物.
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斑疹伤寒型别鉴定的研究
斑疹伤寒包括流行性斑疹伤寒和地方性斑疹伤寒两个病种,分型报告疫情是非常必要的.目前采用能够分型的微量补体结合试验作为实验室诊断的方法,但由于抗原高度交叉,只能以同源高于异源的血清效价来分型,但不能分型者为数不少.本文是在分析莫氏、普氏立克次体核苷酸序列的基础上,选择具有特异性的序列合成引物,通过PCR扩增法[1]对2种斑疹伤寒立克次体进行鉴别诊断,达到分型的目的.现报告如下.
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糖基化免疫球蛋白IgG免疫学特征的变化
免疫球蛋白IgG与其它蛋白质一样,在氨基酸序列合成(蛋白质翻译)之后,蛋白修饰的过程中均会有不同程度的糖基化,是机体正常的生理现象.蛋白质糖基化修饰对其功能有重要的影响,包括蛋白折叠、运输和功能等方面.体内约1/2的蛋白属于糖基化蛋白,但是,过度的、异常的糖基化修饰却对机体产生损害.IgG异常糖基化修饰涉及到其免疫学特征的改变.
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Leptin与药源性库兴氏综合征
Zhang等于1994年首次定位克隆出小鼠的ob基因,利用DNA序列合成ob蛋白,并命名为Leptin(瘦素).国外众多文献证实,由脂肪组织分泌的Leptin,其受体分布广泛,是一种多靶器官、多功能的激素,具有多方面的生物学作用,且与很多疾病相关联.笔者曾以“脂肪组织也是内分泌器官”一文介绍了Leptin 的简况,还报道了Leptin及血脂与非酒精性脂肪肝的关系[1].本研究报道1例Leptin与药源性库兴氏综合征的相关性.
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聚合酶链式反应检测生殖支原体
生殖支原体(mycoplasma genitalium, Mg)是泌尿生殖道感染的病原体之一,因为其培养时间很长,分离相当困难[1]以及血清学诊断又与肺炎支原体有交叉等原因限制了其研究。近来国内已有关于生殖支原体培养成功的报道,但均未提及建株,且其培养成功率及阳性率远远高于国外。而我们对453例标本曾分别用不同条件的PCR及培养法试图检测Mg,却未证实1例阳性[2,3],其原因有待进一步研究。在研究过程中,我们参照文献,采用Mg黏附因子基因序列合成的引物,建立了有高度特异性及敏感性的聚合酶链式反应法检测Mg,现介绍如下。1 材料与方法1.1 标准Mg-DNA 由丹麦Jensen教授惠赠,浓度为1×10-4μg。解脲支原体8型来源于中山医科大学微生物教研室,沙眼衣原体来源于中山医科大学免疫教研室。淋球菌源自临床标本。