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p53核输入功能在鼠双微体2调节的p53蛋白降解和泛素化中的作用
目的研究p53核输入功能在鼠双微体2(murine double minute 2,MDM2)调节的p53降解与泛素化中的作用.方法由直接点突变的方法构建质粒,将决定p53-GFP核位置信号(NLS)的两个部分5个基本氨基酸(赖氨酸和精氨酸)单一替换为丙氨酸,构建了p53-NLS突变型p53KRKKKGFP,并且经DNA序列确定.用DNA克隆技术将p53KRKKK与pEGF-Nuc融合,构建了p53KRKKKNLS-GFP,然后分别转染U2OS细胞,在荧光显微镜下直接观察活细胞的蛋白表达部位;同时用间接免疫荧光染色、Western blot和泛素化分析的方法,观察p53KRKKK与MDM2野生型或MDM2-NLS突变型共转染U2OS细胞时的蛋白表达部位、降解和泛素化现象.结果 p53KRKKK-GFP蛋白表达完全在细胞浆,并且不能被野生型和NLS突变型的MDM2降解,但是可以被泛素化.p53KRKKK-NLS-GFP可以使p53蛋白表达重新回到细胞核,此时能被MDM2野生型和NLS突变型降解和泛素化.p53野生型和NLS突变型均可被MDM2野生型和NLS突变型泛素化,当p53KRKKK和MDM2-NLS同时表达在细胞浆时,p53蛋白出现了更高效率的泛素化,但不能被降解.结论 p53核输入对由MDM2调节的p53降解是必须的;MDM2调节的p53泛素化可以出现在细胞浆,而且效率更高.
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RNA干扰沉默mdm2治疗骨肉瘤的实验研究
目的 观察靶向mdm2的小干扰RNA(siRNA)对骨肉瘤生长的影响.方法 构建PGCsilencerTM-mdm2 siRNA,转染至骨肉瘤细胞U2OS.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测siRNA对mdm2的沉默效果,采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测siRNA对细胞增殖的影响,应用流式细胞术检测诱导细胞凋亡的情况.通过裸鼠移植瘤模型观察siRNA对骨肉瘤体内治疗效果.结果 成功构建simdm2质粒.在转染simdm2的U20S细胞中,simdm2-1组和simdm2-2组的mdm2 mRNA表达量分别下降至空白对照组的35.6%和42.1%(P<0.05),mdm2蛋白表达分别降低至空白对照组的34.0%和47.2%(P<0.05),而且增殖能力显著降低,发生明显凋亡,simdm2-1组和simdm2-2组的细胞凋亡率分别为29.9%和20.9%.阴性对照组和空白对照组的差异无统计学意义.裸鼠移植瘤实验结果显示,simdm2转染组的肿瘤受到抑制,而且mdm2基因和蛋白表达明显下调.结论 simdm2能有效的抑制骨肉瘤生长,并抑制mdm2基因和蛋白的表达.
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肝外胆管癌Bmi-1、Mdm2和Ki-67的表达及其临床意义
目的 探讨Bmi-1、Mdm2和Ki-67蛋白在肝外胆管癌中的表达及临床意义.方法 采用免疫组织化学方法检测30例肝外胆管癌组织中和10例正常胆管上皮组织中Bmi-1、Mdm2和Ki-67蛋白表达情况,分析其与临床病理特征的关系.结果 Bmi-1在正常胆管上皮组织中均呈阴性表达,而在肝外胆管癌组织中18例呈阳性表达,阳性表达率60.0%.明显高于正常胆管上皮组织(P<0.05).胆管癌组织中Mdm2的阳性表达率为56.7%(17例),明显高于正常胆管上皮组织的20.0%(2例)(P<0.05).正常胆管卜皮组织Ki-67标记的增殖指数均
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紫外线照射对卵巢癌细胞NFkB、P53和MDM2的影响
目的:研究NFkB家族蛋白、p 53和MDM2在卵巢癌细胞系的表达及紫外线照射后所引起的变化.方法:培养11株卵巢癌细胞系,收获细胞,对其进行胞质、胞核蛋白质提取,Western印迹法观察NFkB家族蛋白及其抑制物的表达,并观察p53和MDM2的表达;采用20J/m2剂量紫外线照射细胞,继续培养并提取蛋白质进行检测.结果:11个卵巢癌细胞系p50、p65和IKB-α细胞质表达阳性率分别为63.6%、45.5%、81.9%,胞核表达阳性率分别为63.6%、54.5%、18.2%.紫外线照射后胞核p50、p65和IKB-α阳性率分别为81.9%、72.7%、36.4%.p53在卵巢癌细胞表达阳性率为45.5%,MDM2表达阳性率为27.3%,紫外线照射后p53和MDM2表达阳性率分别为63.6%、72.7%.结论:NFkB、p53和MDM2与卵巢癌细胞的发生、发展有关;紫外线照射可引起胞核NFkB及细胞MDM2阳性率明显提高,NFkB和MDM2可望成为判断卵巢癌预后新的标志物.
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P53和mdm2在骨巨细胞瘤中的表达
目的:探讨p53和mdm2在骨巨细胞瘤(GCT)的表达及与GCT病理分级和复发的关系.方法:应用SP免疫组织化学方法检测p53和mdm2在52例GCT(GCT按Jaffe分级:Ⅰ级15例、Ⅱ级25例、Ⅲ级12例)中的表达.结果:14例p53表达阳性,阳性率26.9%,18例mdm2表达呈阳性,阳性率34.6%.其阳性表达与病理分级均无显著性差异(P值分别为0.699;0.871).p53和mdm2在复发和无复发的病例中,阳性表达率分别为46.2%、20.5%和61.5%、25.6%.两者同时阳性表达的有7例,p53和mdm2同时过表达与GCT复发有高度显著性差异(P=0.008).结论:p53和mdm2在GCT中的表达与病理分级无关而与其复发有关.
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MDM2-p53反馈环增强卵巢癌对顺铂敏感性的体内实验研究
目的 探讨MDM2-p53反馈环对卵巢癌裸鼠移植瘤药物敏感性的影响及其作用机制.方法 将p53为野生型的人类卵巢癌细胞A2780种植于裸鼠背部皮下形成移植瘤模型,将动物随机分为5组,瘤内注射pCMV-MDM2-脂质体+顺铂为治疗组,仅注射顺铂为对照Ⅰ组,注射pCMV-MDM2-脂质体为对照Ⅱ组,注射空载体pCMV-脂质体为对照Ⅲ组,注射RPMI1640为对照Ⅳ组;每组6只.观察裸鼠一般情况、肿瘤生长速度,测量瘤体大小及重量;取肿瘤组织进行免疫组化染色,Western blot进行MDM2、p53蛋白表达检测,流式细胞技术进行细胞周期检测.结果 治疗组肿瘤体积[(0.321±0.086)cm3]显著小于对照Ⅰ组[(1.832±0.165)cm3]、对照Ⅱ组[(3.251±0.179)cm3](t值分别为21.213、26.317,P值均＜0.05);重量[(0.513±0.089)g]也显著小于对照Ⅰ组[(1.412±0.134)g]、对照Ⅱ组[(2.665±0.153)g](t值分别为12.543、15.312,P值均＜0.05);对照Ⅰ组与对照Ⅱ组之间差异有统计学意义(P＜0.05);而对照Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组间差异无统计学意义.治疗组可见明显MDM2蛋白表达,而无p53蛋白表达,并且出现明显S期阻滞,而对照Ⅰ组主要出现G2/M期阻滞.结论 MDM2基因转染可增强卵巢癌裸鼠移植瘤对顺铂的敏感性,这是通过抑制p53表达并使癌细胞G1检查点丧失而实现的.
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Mdm2反义脱氧寡核苷酸抗胶质瘤的机理研究
目的 探讨Mdm2反义寡核苷酸(ASODNs)对U251人胶质瘤细胞株的抗肿瘤作用.方法 以Lipofectamine介导的Mdm2 ASODNs转染U251细胞,用RT-PCR检测Mdm2 mRNA的改变,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot检测野生型p53(wild type p53,wtp53)的表达,研究其抗肿瘤作用.结果 Mdm2 ASODNs以不同浓度转染U251细胞后,Mdm2表达减少,细胞增殖抑制程度升高,细胞周期分析显示S期细胞下降,TUNEL法染色观察到明显的凋亡细胞.Western blot检测野生型p53的表达增加.结论 Mdm2 ASODNs可提高野生型p53的表达,从而抑制U251细胞增殖,引起细胞周期停滞和诱导凋亡,该作用具有浓度依赖性.
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喉鳞状细胞癌中T-box转录因子3及小鼠双微体基因的表达及其临床意义
目的 分析T-box转录因子3(T-box transcription factor 3,TBX3)与小鼠双微体基因(murine double mimute2,MDM2)在喉鳞状细胞癌(简称喉鳞癌)组织中的表达水平及其与临床病理特征的相互关系,并探讨其在喉鳞癌发生发展过程中可能的作用.方法 回顾性分析55例喉鳞癌患者临床病理资料,分别用实时荧光定量PCR (real-time quantitative PCR,RQ-PCR)和免疫组化法检测喉鳞癌组织及相应的癌旁组织中TBX3与MDM2的mRNA和蛋白表达水平.结果 TBX3与MDM2mRNA在喉鳞癌组织中均呈过表达状态(t分别为13.226,13.504,P均为0.000),TBX3的表达与肿瘤的分化水平相关(x2=9.728,P=0.002),MDM2的表达与肿瘤的临床分期、淋巴结转移相关(x2分别为7.834、13.257,P分别为0.005、0.000).TBX3蛋白定位肿瘤细胞的细胞核,MDM2蛋白主要定位于细胞核与细胞浆,二者在蛋白水平上的表达结果与RQ-PCR一致.TBX3与MDM2 mRNA在喉鳞癌组织中的表达水平呈正相关(r=0.479,P=0.000).结论 TBX3与MDM2基因均在喉鳞癌中过表达且二者之间的表达水平呈正相关,联合检测喉鳞癌中的TBX3和MDM2可以作为喉鳞癌早期诊断和预后判断的重要指标之一.
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视网膜母细胞瘤组织芯片中PTEN、mdm2、p53表达及与组织病理特征关系的研究
目的 探讨视网膜母细胞瘤组织芯片中PTEN,murine double minute 2(mdm2)及p53蛋白的表达及与肿瘤临床组织病理特征的关系.设计实验性研究.研究对象 64例视网膜母细胞瘤和6例正常视网膜组织.方法 免疫组化方法检测视网膜母细胞瘤组织芯片和正常视网膜组织石蜡标本中PTEN,mdm2及p53的表达情况,将肿瘤分为球后视神经受侵袭组和球后视神经未受侵组,检测两组间mdm2及p53表达差异,并结合肿瘤的组织病理学特征进行综合分析.主要指标视网膜母细胞瘤组织芯片中PTEN,mdm2和p53表达率.结果 视网膜母细胞瘤中PTEN,mdm2与p53的阳性表达率分别为53.13%,48.43%和53.13%.球后视神经受侵袭组较球后视神经未受侵组mdm2(P=0.027)及p53(P=0.017)表达均明显增高.视网膜母细胞瘤中PTEN与p53表达呈负相关(r=-0.384,P=0.045),mdm2与p53蛋白表达呈正相关(r=0.281,P=0.018).结论 视网膜母细胞瘤中mdm2和p53的过度表达与视神经侵袭程度存在一定相关性.mdm2及p53蛋白的检测可能成为视网膜母细胞瘤恶性程度的参考指标.
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HIPK2对肝癌细胞HepG2生物学表型的调控机制研究
目的:研究外源同源结构域相互作用蛋白激酶2(HIPK2)基因表达对人肝癌细胞系HepG2裸鼠成瘤性的影响及机制.方法:将人HIPK2基因的全长cDNA序列克隆至腺病毒载体(pAdeno-HIPK2),制备Adeno-HIPK2重组腺病毒.以50 pfu/细胞的Adeno-HIPK2感染HepG2细胞作为实验组,Adeno-lacZ感染作为阴性对照,未感染细胞作为空白对照,观察各组细胞的裸鼠成瘤性和细胞凋亡情况,并绘制细胞生长曲线.第6周取材,检测各组样品中HIPK2、JNK1、JNK2、P53、mdm2的水平和JNK激酶活性.结果:实验组细胞的裸鼠成瘤性明显降低,细胞凋亡率有所上升.实验组的P53和mdm2的蛋白表达分别是对照组的3倍和15%,JNK1和JNK2基本不变,但JNK激酶活性则升至对照组的5倍. 结论:HIPK2高表达可以激活JNK激酶途径,并有效提高细胞内P53水平,使HepG2细胞的裸鼠成瘤性下降,是肝癌生物治疗中重要目的基因.
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CDK4及MDM2在不同危险分层腹膜后脂肪瘤中的表达研究
目的:比较CDK4及MDM2在不同危险分层腹膜后脂肪肉瘤(RPLS)中的表达.方法:选择我院普外科手术切除的原发性及复发性RPLS 129例(共151例次标本),均经常规术后病理检查确诊并行CDK4、MDM2等免疫组化检查,比较CDK4、MDM2在不同危险分层RPLS中的阳性表达情况.结果:CDK4在高危组阳性表达率达98.0％,显著高于低危组的70.4％ (P＜0.05);与中危组的80.8％比较,差异不显著(P＞0.05).MDM2在高危组阳性表达率为93.8％,显著高于低危组的66.7％和中危组的61.5％(P＜0.05).CDK4和MDM2在高危组不同病理分型阳性表达率均较高,但组间差异不显著(P＞0.05).结论:CDK4、MDM2在高危RPLS阳性率表达更高,对RPLS预后有一定参考价值.
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γ射线诱发小鼠皮肤汗腺癌中p53、MDM2基因的表达
目的观察p53、MDM2在γ射线诱发的小鼠皮肤汗腺癌组织中的表达,探讨p53、MDM2在辐射诱发皮肤汗腺癌中的作用.方法用γ射线照射BALB/c小鼠诱发皮肤汗腺癌,建立辐射致癌动物模型;应用Western blot技术检测小鼠汗腺癌组织、癌旁组织及正常对照组织中的MDM2蛋白表达情况;运用免疫沉淀技术(IP)检测MDM2蛋白的磷酸化水平;PCR-SSCP及银染技术用于检测p53基因突变.结果癌变组织的MDM2蛋白表达水平高于正常组织和癌旁组织,而且MDM2磷酸化水平明显升高(P＜0.05).SSCP检测到的p53基因异常比野生型增多或缺失条带.结论p53/MDM2途径参与γ射线诱发的小鼠皮肤汗腺癌的发生和发展过程,作用机制可能与MDM2过表达及高磷酸化和p53基因突变有关.
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γ射线诱发的小鼠急性淋巴细胞白血病中MDM2的表达研究
目的观察MDM2在γ射线诱发的小鼠淋巴细胞白血病组织细胞中的表达变化,探讨MDM2在辐射致癌中的作用及可能的分子机理.方法用γ射线照射BALB/c小鼠诱发白血病发生,建立辐射致癌动物模型;分别应用Western blot和原位杂交技术,从蛋白水平和mRNA水平检测小鼠胸腺和骨髓组织中MDM2的表达情况;运用免疫沉淀技术(IP)检测MDM2蛋白的磷酸化水平;PCR-SSCP及银染技术用于检测基因突变.结果癌变组和辐射未癌变组胸腺细胞/骨髓细胞MDM2蛋白表达水平都高于对照组(P＜0.05);而癌变组和辐射未癌变组之间MDM2蛋白水平差异无显著性(P＞0.05).γ射线照射后早期辐射组骨髓MDM2蛋白表达水平也明显高于对照组.原位杂交结果显示:癌变组织中MDM2阳性反应和阳性率均明显高于对照组.在癌变组组织中发现有MDM2磷酸化比其他组都明显升高(P＜0.05).辐射组和对照组均未检测到基因突变.结论MDM2可能参与γ射线诱发的小鼠淋巴细胞白血病的发生和发展过程,作用机理可能与过表达及高磷酸化所致活性增强有关.MDM2的基因突变在辐射致小鼠白血病发生不起主要作用.
关键词： Mdm2 白血病 Western blot 原位杂交 -
MDM2 PTEN P53在宫颈鳞癌中的表达
目的 探讨MDM2、PTEN及P53蛋白在宫颈鳞癌中的表达及相关性,进一步探讨宫颈鳞癌的发生和发展机制. 方法于郑州大学第三附属医院收集50例宫颈鳞癌手术切除标本,30例癌旁非典型增生组织,50例正常宫颈黏膜组织.采用免疫组化SP法检测MDM2、PTEN及P53 蛋白的表达情况.结果 宫颈鳞癌组织、癌旁非典型增生组织与正常宫颈黏膜组织中 MDM2及P53 蛋白阳性表达率依次降低,而PTEN 蛋白阳性表达率依次升高,差异有显著性(P<0.05).结论 MDM2、PTEN及P53在宫颈黏膜从良性病变到癌前病变到癌的进展过程中发挥重要作用.
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p53在DNA损伤反应中的研究进展
p53基因是研究广泛的抑癌基因之一,也是细胞内的一个强大的转录因子,在正常状态下呈低水平表达.在各种应激包括DNA损伤时,p53可以被不同的信号通路激活并稳定,通过增强其下游多种基因的转录而引起细胞周期阻滞、凋亡或衰老,保持细胞基因组的完整性并清除损伤细胞,这些生物学作用取决于不同的应激信号和细胞类型.p53通路是机体应对DNA损伤的天然防护屏障,对这一机制的深入研究可为肿瘤的发生发展和抗肿瘤药物的开发提供重要的信息.
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MDM2和PTEN 基因表达与贲门癌发生发展的相关性
目的 MDM2、PTEN 基因表达与贲门癌发生发展关系的研究.方法 用免疫组化S-P 法检测32 例贲门癌组织及18 例正常贲门粘膜组织中MDM2 和PTEN 表达情况.结果 贲门癌组织中MDM2 表达34.4%,显著高于正常贲门粘膜组织(P＜0.05),且与贲门癌淋巴结转移、浸润深度呈正相关.PTEN 在贲门癌组织中的表达40.6%,显著低于正常贲门粘膜组织(P＜0.05),且与贲门癌淋巴结转移、分化程度相关.结论 MDM2 和PTEN 异常表达与贲门癌的关系密切,共同参与了贲门癌的发展、转移及浸润.
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MDM2和p53共同染色可成为膀胱癌独立的预后指标
目的：以免疫组织化学染色的方法，研究MDM2和P53蛋白在膀胱癌中的表达，以及与病理和临床表现之间的关系。方法：应用抗MDM2和p53的单克隆抗体，以标准的LSAB方法，共分析了131例组织学确诊的膀胱癌标本。结果：MDM2染色阳性的肿瘤为39例(29.8％),阴性的肿瘤为92例(70.2％)。MDM2染色在不同细胞分级和不同临床分期之间无统计学差异，对是否复发及生存率也无影响。p53染色阳性的肿瘤为86例(65.6％)，G3级阳性的比例(84.1％)明显高于G1-2级(56.3％，P=0.0012)；浸润型(T2-4)肿瘤阳性的比例(75.8％)明显高于表浅型(Ta-1)肿瘤(55.4％，P<0.001)。p53阳性患者的生存率明显低于阴性患者(P=0.007)。两种蛋白表达之间无明显关系。P53+/MDM2-的患者生存率量低，且在多因素分析中，成为独立的预后因素(P=0.0046)。结论：P53+/MiDM2-患者的生存率低，并且是独立的预后因素。MDM2和p53共同染色，可为预后判断提供更准确的资料。
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Smac和MDM2蛋白在子宫颈鳞状细胞癌中的表达及意义
目的 探讨Smac和MDM2蛋白的表达与宫颈鳞癌临床病理参数之间的关系,以了解其在宫颈癌的发生、发展、转移中的作用及意义.方法 用免疲组织化学方法,检测60例宫颈鳞癌和45例宫颈上皮内瘤变(CIN)及15例正常宫颈组织中smac和MDM2蛋白的表述,并分析其表达与年龄、肿瘤大小、组织学分级及淋巴结转移间的关系.结果 Smac蛋白在正常宫颈,低级别宫颈上皮内瘤变(CIN Ⅰ)、高组别宫颈上皮内瘤变(CIN Ⅱ-Ⅲ)及宫颈鳞癌组织中的阳性表达率分别为100%(15/15)、85%(17/20)、72%(18/25)及65%(39/60).MDM2蛋白在正常宫颈、子宫颈低、高级别鳞状上皮内瘤变及宫颈鳞癌中的阳性表达率分别为0(0/15)、10%(2/20)、22.4%(6/25)及61.7%(37/60);Smac和MDM2蛋白的表达在正常宫颈对照组和CIN Ⅱ-Ⅲ及与宫颈鳞癌之间均有统计学差异(P<0.05).宫颈鳞癌中Smac和MDM2蛋白表达在琳巴结有无转移及组织分化分组中,差异有统计学意义(P<0.05);Smac蛋白和MDM2蛋白的表述之间存在负相关性(r=-0.435,P<0.001).结论 Smac和MDM2这2种蛋白互相调控,其表达与宫颈癌的发生、发展等有关.
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Mdm-2、p16在大肠癌中的研究进展
近年来,对肿瘤与细胞周期深入研究,越来越清晰地认识到肿瘤是一类细胞周期疾病和细胞周期调控机制在肿瘤的侵袭、转移的过程中起着重要作用.
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膀胱尿路上皮癌中TBX2与MDM2蛋白的表达及临床意义
目的 研究膀胱尿路上皮癌中TBX2、MDM2蛋白的表达与膀胱尿路上皮癌患者各临床病理因素之间的关系.方法 采用免疫组织化学EnvisionTM二步法检测90例膀胱尿路上皮癌和20例正常膀胱黏膜组织中TBX2、MDM2的表达情况.结果 在正常膀胱黏膜组织中TBX2、MDM2蛋白的表达阳性率为0,在膀胱尿路上皮癌中,TBX2的阳性率为65.6％(59/90),随着TBX2表达程度的增高,癌组织的分化程度越低、临床分期越晚、更易出现复发(P＜0.01).MDM2的阳性率为31.1％(28/90),随着癌组织分化程度的降低,MDM2的阳性率升高(P＜0.01);出现复发的膀胱尿路上皮癌中MDM2的阳性率为57.5％ (23/40),无复发的膀胱尿路上皮癌中,MDM2的阳性率仅为10.0％(5/50),两者差异有统计学意义(P＜0.01).pTNM分期Ta～T1期MDM2阳性率为0(0/52),T2～T3期MDM2阳性率为73.7％(28/38),MDM2阳性患者pTNM分期更晚(P＜0.01).癌组织中TBX2的表达与MDM2呈正相关(r=0.487,P＜ 0.05).结论 TBX2及MDM2在膀胱尿路上皮癌中的高表达与肿瘤的侵袭及复发有关.
