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补骨脂水煎液在大鼠体内组织分布的研究
采用先进的技术手段阐明中药的归经理论是中医药理论研究中的重要部分.该文采用现代药物动力学的方法,考察了补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素在大鼠体内组织分布的特性,为探讨中药的归经理论提供了研究思路和实验依据.该文一次性灌胃给予大鼠补骨脂水煎液,采用HPLC测定不同时间大鼠体内心、肝、脾、肺、肾、脑和睾丸等组织中的补骨脂素和异补骨脂素的浓度,应用DAS 2.0软件计算药动学参数.研究结果表明,补骨脂素和异补骨脂素在大鼠体内不同组织中的HPLC方法学考察指标符合生物样品测定要求,2种成分在心、肝、脾、肺、肾、脑和睾丸中均有分布,AUC0t分别为肝＞肺≈肾＞心＞脑＞脾＞睾丸、肝＞肾＞肺＞心＞脑≈脾＞睾丸,肝、肾和肺中2种成分的AUC0-l与其他组织比较有显著性差异(P＜0.05),2种成分在各个组织中的平均滞留时间为10 h左右,补骨脂水煎液中补骨脂素和异补骨脂素对肝、肾和肺有较强的靶向选择性.
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正交试验优化复方卡力孜然凝胶剂的提取工艺
目的:优选复方卡力孜然凝胶剂的佳提取工艺.方法:采用正交试验设计,分别以补骨脂素、异补骨脂素、蛇床子素和浸膏收率为指标,优化补骨脂等8味药材的提取工艺;以二苯乙烯苷和浸膏收率为指标,优选白芥子与何首乌2味药材的提取上艺.结果:8味药佳提取工艺为8倍量60%乙醇,提取2次,每次1 h;何首乌和白芥子的佳提取工艺为8倍量40%乙醇,提取2次,每次1 h.结论:优选的提取工艺稳定、可行.
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补骨脂素加长波紫外线诱导NB4细胞凋亡及对Fas/FasL基因表达影响的研究
目的 探讨自中药补骨脂中提取的补骨脂素(psoralen,PSO)加长波紫外线(ultraviolet A,UVA)诱导人白血病细胞NB4凋亡及对Fas/FasL基因表达的影响.方法 以NB4细胞为研究对象,采用流式细胞术、透射电镜、定量PCR等方法观察不同浓度的PSO,在不同时间的波长为360 nm的UVA照射下,细胞凋亡率、细胞超微结构以及细胞Fas/FasL基因、蛋白表达水平的变化.结果 (1)补骨脂素加长波紫外线(PUVA)可诱导NB4细胞凋亡,当PSO浓度为10、20、40、80μg/mL时,UVA照射5 min的细胞凋亡率分别为(26.57±0.42)%、(30.67±0.11)%、(34.90±0.30)%、(24.63±0.38)%,凋亡率呈剂量-时间依赖性,两因素间有交互作用.(2)电镜下观察经PUVA处理后的NB4细胞超微结构,可见明显的凋亡形态学改变特征.(3)PUVA可上调NB4细胞Fas基因、蛋白的表达水平,并呈剂量-时间依赖性,在基因水平两因素间有交互作用,在蛋白水平两因素无交互作用.(4)PUVA可下调NB4细胞FasL基因、蛋白的表达水平,并呈剂量-时间依赖性,且两因素间有交互作用.结论 PUVA可诱导白血病细胞NB4发生凋亡,Fas/FasL系统是PUVA诱导NB4细胞发生凋亡的作用途径之一.
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补骨脂素加长波紫外线的光化学疗法诱导NB4细胞凋亡及对Caspase-8、3蛋白表达的影响
目的 研究补骨脂素(psoralen,PSO)加长波紫外线(ultraviolet A,UVA)的光化学疗法(PUVA)对人白血病NB4细胞凋亡和细胞凋亡信号通路的影响.方法体外培养NB4细胞,利用流式细胞术检测不同浓度的PSO(0、5、1 0、20、40 μL)、在不同照射时间(0、5 min)、波长为360 nm的UVA干预后的细胞凋亡率；利用透射电镜检测细胞超微结构的改变；采用免疫细胞化学法(ICC)检测凋亡信号通路中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(Cas pase-8)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cas pase-3)蛋白表达情况.结果不同浓度的PSO经0、5 min UVA照射后,NB4细胞的凋亡率呈剂量与时间依赖性的增加,而于40 μg/mL浓度的PSO联合5 min UVA照射时达峰值,且二者呈现交互作用(P＜0.01).PUVA处理后的NB4细胞超微结构出现明显的凋亡形态学的改变.PSO、UVA及PUVA均上调Caspase-8、Caspase-3蛋白的表达,但PUVA上调Caspase-3的作用于12h显著强于前两者(P＜0.01),呈时间依赖性,PSO浓度与时间呈现交互作用(P＜0.01).结论 PUVA的佳方案组合为40 μg/mL浓度的PSO联合5 min UVA照射,PUVA可体外激活Caspase-8、Caspase-3基因,具有诱导NB4细胞凋亡作用.
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补骨脂素对去卵巢痴呆大鼠脑组织中SOD和MDA含量的影响
目的：观察补骨脂素对去卵巢痴呆大鼠脑组织中超氧化物歧化酶和丙二醛含量的影响。方法：建立去卵巢痴呆大鼠模型，考察痴呆大鼠的学习记忆能力，测定脑组织中的SOD和MDA含量。结果：造模后假手术组大鼠的逃避潜伏期明显小于造模组（P<0.05），用药后补骨脂素组大鼠的逃避潜伏期明显小于模型组（P<0.05）。与假手术组相比，模型组SOD活性显著降低（P<0.05），MDA含量明显升高（P<0.05）；同时补骨脂素组与模型组比较也有明显差异（P<0.05）。结论：补骨脂素能升高去卵巢痴呆大鼠脑组织SOD含量，降低MDA活性，增强大鼠记忆能力。
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试论化浊解毒中药血清及补骨脂素对肝星状细胞生物活性的影响
肝病纤维化的主要特征为肝脏收缩及形成结节，是肝脏末期并发症的发病基础。肝纤维化是慢性肝损伤患者的多发现象，终会形成肝硬化，严重的会患有肝癌。有研究显示，肝星状细胞是形成肝纤维化为重要的细胞。肝纤维化的主要治疗方法是抑制形状细胞的活性，包括抑制肝星状细胞的增殖以及凋亡等。目前，临床上治疗肝纤维化的主要方法是化浊解毒方，但是医学上又缺乏对化浊解毒方作用机制的深入研究，因此，探究化浊解毒中药血清以及补骨脂素对肝星状细胞生物活性的影响具有重要的医学意义。
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补骨脂素对大鼠腰椎间盘软骨细胞炎性退变的影响
目的 探讨补骨脂素延缓椎间盘退变的内在机制.方法 体外分离1月龄雌性SD大鼠腰椎间盘软骨板,采用组织块法培养,通过HE染色、甲苯胺蓝染色和免疫荧光进行细胞辨别、鉴定.通过细胞增殖实验和RT-PCR法进行补骨脂素佳浓度筛选.取第3代生长状况良好的椎间盘软骨细胞,以每孔1×105的浓度将细胞置于6孔板内,分为空白对照组、白细胞介素-1β (IL-1β)诱导组(10 ng/ml)、补骨脂素组(IL-1β 10ng/ml+补骨脂素佳浓度),每组3孔,检测各组Ⅱ型胶原基因(Col2a1)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5(ADAMTS-5)、IL-1β和环氧化酶-2(COX-2) mRNA的表达.结果 补骨脂素浓度在100、150、200、400 μM时,细胞活性较浓度为0时明显减弱(P＜0.01).补骨脂素在12.5、25 μM时较浓度为0时能上调Col2a1 mRNA表达(P＜0.05或P＜0.01).补骨脂素组Aggrecan mRNA高于空白对照组(P＜0.01);与IL-1β诱导组比较,补骨脂素组Col2a1 mRNA升高,ADAMTS-5 mRNA降低(P＜0.01).结论 补骨脂素可以一定程度缓解IL-1 β诱导的椎间盘软骨细胞的退变进程,并对IL-1β炎性信号通路的相关因子产生影响.
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补骨脂抗骨质疏松研究概况
补骨脂是治疗骨质疏松方剂中的常用中药.研究表明,补骨脂具有促进骨形成和抑制骨吸收的双重抗骨质疏松活性.综述了补骨脂提取物及其单体成分对成骨细胞、破骨细胞和骨质疏松动物模型作用的研究概况,为抗骨质疏松新药的开发提供研究思路.
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预激态补骨脂素抑制 K562细胞增殖的实验研究
本研究的目的是观察预激态补骨脂素对K562细胞增殖的影响,为补骨脂素的临床应用提供实验依据.取预激态补骨脂素和晚激态补骨脂素处理的细胞,在培养后检测台盼蓝拒染细胞数和白血病细胞集落,并对它们在台盼蓝拒染细胞抑制率(TBIR)、细胞增殖抑制率(CPIR)和集落形成抑制率(CFIR)方面的差异进行比较.结果表明:预激态补骨脂素对K562细胞增殖有抑制作用;随着预激态补骨脂素浓度的增加,其抑制作用也随之增强;预激态补骨脂素与晚激态补骨脂素的TBIR、CPIR、CFIR各值比的差异不显著;为使预激态补骨脂素要充分发挥对K562细胞的抑制作用,补骨脂素的紫外线照射时间应在10分钟以上;与K562细胞作用时间也应大于12小时;抑制作用会因预激态补骨脂素预激后搁置时间的延长而下降,在6小时内作用强.结论:预激态补骨脂素和晚激态补骨脂素对K562细胞的增殖均表现出抑制作用,有望作为临床的抗肿瘤用药.
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补骨脂素对去势雌鼠E2、ERβ、TNF-α、IL-17的影响
目的 观察补骨脂素对去势雌鼠E2、ERβ、TNF-α、IL-17的影响,探讨补骨脂素防治绝经后骨质疏松的机理.方法 选取3月龄雌性SD大鼠72只,随机分为假手术组、模型组、戊酸雌二醇对照组、壮骨止痛胶囊对照组、补骨脂素高剂量组、补骨脂素低剂量组,每组12只.除假手术组外,其它大鼠造成双侧去卵巢骨质疏松症病理模型,术后5d拆线后开始给药,连续13周.后一次给药后次日取血标本采用ELISA检测血清中雌激素(E2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-17(IL-17)的含量.提取左股骨组织mRNA样本进行RT-PCR反应检测骨组织TNF-α、ERβ、IL-17基因的表达.取右股骨脱钙切片免疫组化检测ERβ表达.结果 模型组去势雌鼠血清E2水平显著低于假手术组(P＜0.01).壮骨止痛胶囊显著升高血清E2水平(P＜0.01),补骨脂素高剂量组血清E2水平显著高于模型组(P＜0.01),补骨脂素低剂量组血清E2水平与模型组相比无统计学差异(P＞0.05).模型组血清TNF-α、IL-17水平及股骨TNF-α、IL-17mRNA表达显著高于假手术组(P＜0.01),股骨ERβ显著低于假手术组(P＜0.05).戊酸雌二醇组血清TNF-α 、IL-17水平及股骨TNF-α、IL-17mRNA表达显著低于模型组,股骨ERβ显著高于模型组(P＜0.05).壮骨止痛胶囊组血清TNF-α、IL-17水平显著低于模型组(P＜0.05),股骨TNF-α、IL-17mRNA表达非常显著低于模型组(P＜0.01),而股骨ERβ显著高于模型组(P＜0.05).补骨脂素高剂量组血清TNF-α水平及股骨TNF-αmRNA表达显著低于模型组(P＜0.05),而血清IL-17水平及股骨IL-17mRNA表达非常显著低于模型组(P＜0.01),股骨ERβ显著高于模型组(P＜0.05).补骨脂素低剂量组血清TNF-α水平显著低于模型组(P＜0.05),但其股骨TNF-αmRNA表达与模型组相比无统计学差异,而血清IL-17水平及股骨IL-17mRNA表达显著低于模型组(P＜0.05),股骨ERβ与模型组相比没有统计学差异.结论 补骨脂素可通过提高去势雌鼠血清E2水平和股骨ERβ水平,降低去势雌鼠骨组织TNF-α、IL-17基因表达和血清TNF-α、IL-17水平发挥抗绝经后骨质疏松症作用.
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关于补肾中药防治骨关节炎分子机制的体外实验研究
目的 观察补肾中药单体淫羊藿苷、补骨脂素、齐墩果酸、二苯乙烯苷对间充质细胞中BMP2、BMP4、RUNX2表达的影响,以探讨和阐释肾中精气对关节软骨的调控作用及其分子机制,以丰富、补充和发展“肾藏精主骨”脏象理论.方法 取1月龄野生型小鼠双侧后肢骨,分离间充质细胞(P1),分为空白组、对照组、淫羊藿苷组、补骨脂素组、齐墩果酸组和二苯乙烯苷组,实时定量PCR法检测BMP2、BMP4、RUNX2基因表达;Western-Blotting法检测BMP2、BMP4、RUNX2蛋白表达含量.结果 ①与成骨对照组相比,四个中药组BMP4、RUNX2基因表达均显著增高(P＜0.05),与成骨对照组相比,淫羊藿组和二苯乙烯苷组BMP2基因表达显著增高(P＜0.05);②与成骨对照组比较,补四个中药组BMP2、BMP4蛋白表达均有不同程度增强;淫羊藿苷组和二苯乙烯苷组RUNX2蛋白表达较对照组增强.结论 ①实验用四种补肾中药单体能够上调BMP2、BMP4、RUNX2基因和蛋白表达;②补肾中药对骨关节炎的防治作用可能与本研究的分子机制有关;③“肾主骨”理论包含了肾对关节软骨的调控作用.
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白癜风治疗新进展
白癜风是一种局部脱色性疾病，是皮肤科的常见病。近年来发病率呈上升趋势。此病病因及机理尚不清楚，现代医学主要有以下几种学说：化学性色素脱失、黑素细胞自毁、神经体液因子损伤、自体免疫及遗传学说等。随着临床研究的深入，当前有许多新的治疗方法。 一、非手术疗法 1.光化学疗法 是指用光敏剂加长波紫外线照射治疗皮肤病的一种方法。 ⑴补骨脂素光化学疗法(PUVA)：治疗时(以8-MOP为例)，可在照光前1.5～2 h按0.5～0.6mg/kg内服8-MOP，每日或隔日1次［1］。邢成楼等［2］曾用此法治疗白癜风60例，总有效率达80 %。如皮损范围小，数目少，亦可于白斑处外涂0.2 % 8-MOP溶液，0.5 h后进行照光。夏岱印等［3］报道外用8-MOP加UVA治疗白癜风120例，总有效率为92.5 %。目前临床上对上述疗法进行了改进，采用在补骨脂素溶液或软膏中加入二甲基亚砜或皮质类固醇激素等以利药物渗透，缩短了照射时间，减轻光敏性炎症反应。近来Korean等利用5-MOP代替8-MOP或TMP治疗，效果较好，仅有轻微的光敏性炎症反应。 ⑵凯啉光化学疗法(KUVA)［4］：KUVA治疗方法同PUVA。即口服卟啉后外用UVA照射，也可直接进行自然的日光照射。据国外报道，KUVA不会导致趋光性红斑，此法安全简捷，患者可以在家中进行治疗，无需医师操作管理。但据调查，经KUVA治疗后的患者约1/3有转氨酶升高的现象，长期KUVA治疗可能会激发皮肤卟啉症。
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补骨脂素和女贞子对小鼠B16黑素瘤细胞c-KIT表达的影响
目的：探讨中药补骨脂素和女贞子对小鼠B16黑素瘤细胞c-KIT表达的影响及意义。方法体外培养小鼠B16黑素瘤细胞，用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）测定补骨脂素和女贞子对小鼠B16黑素瘤细胞c-KIT表达的影响，用Transwell小室法检测补骨脂素和女贞子对小鼠B16黑素瘤细胞迁移功能的影响。结果补骨脂素与女贞子用药组迁移到膜下层的每视野细胞个数分别较对照组多（P＜0.05），并呈剂量依赖关系；用药组c-KIT mRNA、c-KIT蛋白表达分别比对照组增加，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论补骨脂素和女贞子可能是通过促进小鼠B16黑素瘤细胞c-KIT的表达而促进其迁移功能，从而对白癜风产生治疗作用。
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补骨脂素对HL60耐药细胞内化疗药物浓度影响研究
目的 研究补骨脂素对HT耐药白血病细胞HL60/HT的逆转多药耐药(MDR)作用.方法 采用MTT法测定补骨脂素对细胞增殖抑制作用,高效液相色谱法检测细胞内HT的浓度.结果 补骨脂素在1～20 μmol/L浓度下能不同程度降低HT对HL60/HT细胞的IC50,并不同程度提高细胞内HT浓度.结论 补骨脂素能逆转HL60/HT细胞的MDR作用,可能成为一种MDR调节剂.
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补骨脂素对MCF-7/ADR耐药细胞内ADR及Ca2+浓度的影响
目的 研究补骨脂素对MCF-7/ADR耐药细胞逆转作用及对耐药细胞内Ca2+浓度影响,探讨其可能作用机制.方法 采用MTT法测定补骨脂素对细胞增殖抑制作用,高效液相色谱法检测细胞内ADR的浓度,激光共聚焦显微镜测定细胞内不同时段的Ca2+浓度.结果 补骨脂素在1～20 μmol/L浓度下能不同程度降低ADR对MCF-7/ADR细胞的IC50,并不同程度提高细胞内ADR浓度;1～20 μmol/L补骨脂素在不同作用时段(24、48、96 h)对MCF-7/ADR细胞内Ca2+浓度与作用时间呈负相关.结论 补骨脂素能逆转MCF-7/ADR细胞的MDR,其作用机制与影响耐药细胞内Ca2+浓度,故而增加细胞内ADR浓度有关.
关键词： 补骨脂素 多药耐药 逆转 MCF-7/ADR细胞 -
玄胡索散及其拆方对补骨脂素与异补骨脂素溶出量的影响
目的 研究玄胡索散及其拆方对补骨脂素与异补骨脂素溶出量的影响.方法 将玄胡索散拆方提取后,采用HPLC法,ES Industries Epic PolarC18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-水(55∶45)为流动相,流速1.0 ml/min,检测波长246 nm,柱温25℃进行测定,分析补骨脂素与异补骨脂素的溶出量.结果 玄胡索散拆方前后补骨脂素与异补骨脂素的溶出量变化明显,单因素方差分析与SNK检验结果显示,各拆方组与全方组比较均有显著性差异(P＜0.05).结论 当归、牛膝有助于补骨脂素与异补骨脂素的溶出,而延胡索抑制二者的溶出.
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高效液相色谱法同时测定荷丹片中荷叶碱丹参酮ⅡA补骨脂素和异补骨脂素的含量
目的 采用高效液相色谱法同时测定荷丹片中荷叶碱、丹参酮ⅡA、补骨脂素和异补骨脂素的含量.方法 采用50%乙醇超声提取,在色谱柱Agilent SB-Aq C18(4.6 mmx250 mm,5μm)上进行分离,柱温为25%,流动相:A相为水-乙腈--三乙胺--冰醋酸(355:30:9:3.9);B相:乙腈,梯度洗脱:0～11 min,30%B～20%B,11～18 min,20%B～20%B,18～30min,20%B～70%B,30～40 min,70%B～70%B,流速:1ml/min,双波长检测:245 nm(检测补骨脂素和异补骨脂素),270 nm(检测荷叶碱和丹参酮ⅡA).结果 样品中4种成分得到良好分离,荷叶碱在13.028～103.28μg/ml(r=0.9999)、丹参酮ⅡA在1.124～11.24μg/ml(r=0.9999)、补骨脂素在6.630～66.30μg/ml(r=0.9999)、异补骨脂素在6.385～63.85μg/ml(r=0.9999)范围内都呈良好线性关系;荷叶碱、丹参酮ⅡA、补骨脂素和异补骨脂素的回收率分别为95.13%、100.14%、99.76%、101.41%;RSD分别为1.07%、1.84%、1.80%、1.86%,样品溶液在12 h内稳定.结论 该方法简单准确,专属性强,重复性好,可作为复方荷丹片的常规质量控制方法.
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参茸三鞭丸质量标准研究
目的 提高完善参茸三鞭丸的质量标准.方法 采用TIC法对制剂中的淫羊藿、续断、木香进行定性鉴别；HPLC 法测定处方中补骨脂的有效成分补骨脂素和异补骨脂素的含量,以甲醇-水(45∶55)为流动相,检测波长为246 nm.结果 TLC法可鉴别淫羊霍、续断、木香的特征斑点且空白无干扰；补骨脂素、异补骨脂素分别在0.0202～0.1212 μg(r =0.9999,n=6)、0.0406～0.2436μg(r=0.9999,n=6)范围内呈良好线性关系,平均回收率分别为101.20％、101.39％,RSD分别为0.41％ 、0.48％.结论 提高后的质量标准具有专属性强、准确、重复性好的特点,可用于参茸三鞭丸的质量控制.
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HPLC法测定乳没接骨丸中补骨脂素和异补骨脂素的含量
目的 建立HPLC法测定乳没接骨丸中骨脂素和异补骨脂素的含量.方法 色谱柱为Inertsil C18(150 mm× 4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(52∶48),流速为0.80 ml ·min-1,检测波长246 nm.结果 补骨脂素和异补骨脂素分别在5.20～83.6 μg·ml-1(r =0.9991)和4.95～79.2 μg ·ml-1(r =0.9995)范围内有良好的线性关系,平均回收率分别为99.1％(RSD为1.55％,n=9)和99.5％(RSD为2.08％,n=9).结论 本方法简便、可靠、准确,可用于乳没接骨丸的质量控制.
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HPLC法测定白斑霜中补骨脂素异补骨脂素的含量
目的 建立HPLC法测定白斑霜中补骨脂素、异补骨脂素含量的方法.方法 采用Kromasil 100-5C18色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(38∶62),流速:0.8 ml·min-1,柱温:25℃,检测波长:246 nm.结果 补骨脂素在1.62～32.48 ng范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=1.0000;异补骨脂素在1.62～32.34 ng范围内与峰面积呈良好的线性关系,r =0.9999;补骨脂素平均回收率为99.06％,RSD为1.75％;异补骨脂素平均回收率为96.41％,RSD为1.31％.结论 本方法简便、准确,结果稳定,可用于白斑霜中补骨脂素、异补骨脂素的含量测定.
