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膀胱癌组织中MMP-2、MMP-9、Survivin、Livin和VEGF表达的临床意义分析
目的 探讨膀胱癌组织中MMP-2、MMP-9、Survivin、Livin和VEGF表达的临床意义.方法 应用RT-PCR方法检测51例膀胱癌手术切取标本中的MMP-2、MMP-9、Survivin、Livin和VEGF表达,并分析其临床意义.结果 膀胱癌组织中MMP-2、MMP-9、VEGF、Survivin、Livin表达水平均明显高于正常癌旁组织,组间比较差异有统计学意义,P＜0.05.随着膀胱癌分期及分级的增加,MMP-2、MMP-9、VEGF、Survivin、Livin表达水平均明显提高,且不同分级及分期间表达水平相比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 膀胱癌组织中存在多种基因的表达异常,其发生、发展以及转移与多基因的联合作用有着密切联系.
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膀胱癌患者化疗前后β2-MG、CYFRA21-1和SCC-Ag水平的检测及意义
目的 探讨膀胱癌患者化疗前后β2-MG、CYFRA21-1和SCC-Ag水平的检测及意义.方法 选择2015年1月至2017年1月于我院就诊的60例膀胱癌患者作为观察组,同时选取同期我院60例健康体检者作为对照组,比较各组SCC-Ag、CYFRA21-1,β2-MG水平变化.结果 与对照组相比,观察组患者治疗前SCC-Ag水平较高,差异具有统计学意义(P＜0.05);与治疗前相比,观察组治疗后患者SCC-Ag水平降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,观察组患者治疗前CYFRA21-1水平较高,差异具有统计学意义(P＜0.05);与治疗前相比,观察组治疗后患者CYFRA21-1水平降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,观察组患者治疗前β2-MG水平较高,差异具有统计学意义(P＜0.05);与治疗前相比,观察组治疗后患者β2-MG水平降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 膀胱癌患者中SCC-Ag、CYFRA21-1,β2-MG指标水平比正常人群高,治疗后其水平降低,SCC-Ag、CYFRA21-1,β2-MG可用于间接反映膀胱癌患者的疾病预后情况.
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XPF基因多态性与膀胱癌发病风险的关联分析
目的 探讨XPF基因的3个多态性位点(rs28360317、rs1805377、rs2836007)的基因型与膀胱癌及其病理参数的相关性.方法 采用病例对照研究,使用Taqman检测技术对270例膀胱癌患者和270名正常对照的3个多态性位点的基因型分布进行分析.采用logistic回归模型分析各基因型与膀胱癌的发生及其病理参数的关系.结果 XPF基因的3个多态性位点在病例及对照组中分布差异均没有统计学意义(P＞0.05).rs2836007的CT基因型(CT vs.CC:OR =2.30,95％CI:1.33 ～3.99)、TT基因型(TT vs.CC:OR=3.50,95％ CI:1.14～ 10.77)在高分化膀胱癌组与正常对照组中的分布频率差异有统计学意义(P＜0.05).但rs2836007位点各基因型在肿瘤分期、周围淋巴结转移、远端淋巴结转移、低分化组、中分化组中的分布频率与对照组相比差异均无统计学意义(P＞0.05).rs28360317和rs1805377位点与膀胱癌病理参数无显著相关性(P＞0.05).结论 本研究发现XPF基因的rs28360317、rs1805377、rs2836007位点与膀胱癌的发病不相关,rs2836007与高分化膀胱癌相关.
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131I-BDI-1在荷人膀胱癌裸鼠体内的生物分布研究及辐射剂量评估
目的 探讨131I-BDI-1在荷人膀胱癌裸鼠模型中的体内生物分布和对肿瘤的靶向定位性能以及其生物安全性,并由此估算131I-BDI-1在人体内主要脏器的内照射吸收剂量和人体有效剂量.方法 通过氯胺-T法用131I溶液直接标记抗人膀胱癌单克隆抗体BDI-1,制备131I-BDI-1,荷人膀胱癌EJ细胞裸鼠尾静脉注射222kBq 131I-BDI-1后,于不同时刻处死动物,取感兴趣器官和组织,称重并测量放射性计数,计算131I-BDI-1在荷瘤裸鼠中的标准摄取值和靶/非靶组织比值.利用标准的MIRD数据表计算人体的％ID/g,通过MIRDOSE3.1软件估算131 I-BDI-1对人体各个器官的辐射吸收剂量及有效剂量.结果 生物分布数据示131I-BDI-1血液清除缓慢,肿瘤部位放射性明显持续滞留,除血液外,具有较高的靶/非靶组织比值.131I-BDI-1人体内照射的有效剂量为1.46×10-2 mGy/MBq.结论 131I-BDI-1对肿瘤有良好的靶向性,有望成为一种新型的针对人膀胱癌肿瘤的诊治药物,其辐射吸收剂量较低,作为肿瘤治疗药物是安全的.
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尿CYFRA21-1的测定及其与膀胱癌相互关系的探讨
CYFRA21-1是从癌症患者血清中发现的细胞角蛋白19片段,是一种酸性细胞蛋白,相对分子量为4000道尔顿,单抗BM19-21和KS19-1能特异性识别该片段;它由MCF-7免疫小白鼠而获得,反应于简单的上皮细胞,免疫组化证明CK19位于单层和复层上皮肿瘤细胞的细胞浆内[1];细胞死亡时它以溶解片段的形式释放于血清内.CYFRA21-1主要用于非小细胞肺癌的诊断,这已成共识.既然CK19源于上皮肿瘤细胞,那么95%以上是上皮性肿瘤的膀胱癌会不会有所表现呢?据国外报道,血清CYFRA21-1的测定由于灵敏度低,特异性差而未被用于膀胱癌的诊断.鉴于此,本文对正常人、膀胱癌患者及其它泌尿系疾病患者三组尿CYFRA21-1的样本进行了测定,并对其相互关系作了探讨,现报道如下.
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辐射敏感性启动子调控CD基因表达联合125I照射对膀肤癌EJ细胞的杀伤作用
以脂质体介导的辐射敏感性基因联合胞嘧啶脱氨酶(cytosine deantinase,CD)基因转染膀胱癌EJ细胞,研究放射性核素125 I照射后5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)对转染膀胧癌EJ细胞的杀伤作用.人工合成辐射敏感性启动子E8,将启动子克隆至质粒pCD2的CD基因上游,构建以E8为启动子、CD基因为目的基因的新质粒,并采用DNA测序法测定E8和CD基因的序列;脂质体Lipofectamine2000介导pE8-CD转染膀胧癌EJ细胞,用[3]I照射(吸收剂量为2舜)后,蛋白质免疫印迹分析(Western blot)测定CD蛋白表达;在转染EJ细胞中分别加人不同剂量125 I勺和5-FC,四哇盐比色法(MTT法)测定各组细胞存活率,并以未经125 I勺照射组、未加5-FC组和5-氟尿啼吮(5-FU)组(阳性对照组)进行对照.DNA测序显示构建的pE8-CD质粒含E8启动子及CD基因序列;Westem blot可检测到CD基因表达;125 I加5-FC组细胞存活率明显低于未经125 I照射组及未加5-FC组,与5-FU组相近.这表明放射性核素与基因治疗联合对肿瘤细胞具有协同杀伤作用.
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甲酰肽受体1在膀胱癌细胞中的表达及其分析
目的 探究甲酰肽受体1在膀胱癌细胞中的表达及其激活后的作用.方法 利用实时荧光定量PCR方法和蛋白免疫印迹法检测正常膀胱上皮细胞和T24和pumc-91细胞甲酰肽受体1mRNA和蛋白的表达量,用甲酰肽受体1的激活剂fMLP激活甲酰肽受体1后,实时荧光定量PCR方法检测IL-8mRNA表达量.结果 基因水平上,甲酰肽受体1在两株膀胱癌细胞和正常的膀胱上皮细胞中均表达,与正常的膀胱上皮细胞相比T24和pumc-91细胞均低表达;蛋白水平上,FPR1在两株膀胱癌细胞中也均表达,与正常膀胱上皮相比T24和pumc-91细胞均高表达.fMLP激活FPR1后,T24和pumc-91膀胱癌细胞IL-8mRNA的表达量增加.结论 FPR1在膀胱癌细胞中高表达并且调控T24和pumc-91细胞IL-8mRNA的分泌,可能与膀胱癌的发生发展相关.
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AG490在人膀胱癌细胞株Pumc-91中STAT3的抑制作用
目的 研究不同孵育时间以及不同浓度的STAT3特异性抑制剂AG490作用于人移形上皮膀胱癌细胞株(pumc-91)中STAT3信号通路蛋白表达的条件优化.方法 分别在0、24、36、48、60h收集细胞并提取细胞蛋白,应用Western Blot对各组中STAT3的蛋白表达水平进行半定量分析;加入100μmol/L AG490作用于pumc-91细胞,分别用0、50、100、200μmol/L的AG490处理pumc-91细胞48h后,应用Western Blot检测各组中STAT3的蛋白表达水平.结果 STAT3蛋白的表达随AG490作用时间延长而逐步降低,在作用时间为48h时,差异有统计学意义(P＜0.05).STAT3蛋白的表达明显随AG490浓度的升高而逐步下降,在浓度为200μmol/L时差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 AG490通过抑制STAT3蛋白的表达,成功抑制了STAT3信号通路的活性,而且其抑制作用具有时间和剂量的依赖性,AG490在作用浓度为200μmol/L和作用时间为48h的条件下,有效的抑制了STAT3蛋白在pumc-91细胞系中的表达.
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DAB2IP基因沉默引起膀胱癌细胞辐射耐受与化疗抵抗
目的 观察DAB2IP基因对膀胱癌细胞放化疗敏感性的影响.方法 RNA干扰建立DAB2IP表达抑制的膀胱癌细胞,克隆形成实验比较不同DAB2IP表达的细胞对射线放射敏感性的差异,噻唑蓝方法检测不同DAB2IP表达的细胞对常用化疗药物敏感性的变化.结果 DAB2IP基因沉默造成细胞对射线与化疗药物均出现耐受.结论 DAB2IP可能用作预测膀胱癌患者放射或化学治疗预后的分子标志物.
关键词： 卵巢癌差异表达基因2相互作用蛋白 膀胱癌 辐射敏感性 化学敏感性 -
膀胱癌的放射免疫显像与放射免疫治疗
膀胱癌是泌尿系常见的恶性肿瘤之一,按全世界肿瘤发病数统计,膀胱癌约占4.7%,居所有恶性肿瘤的第8位[1],在泌尿系肿瘤中仅次于前列腺癌(7.6%).在我国泌尿系肿瘤中,无论其发病率和死亡率均占首位.
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膀胱癌相关MicroRNA的研究进展
微小RNA(micro RNA,mi RNA)是生物体内源性的非编码RNA,在转录后水平负调控基因表达,影响细胞的生长与分化,参与免疫应答,维持内部环境的稳定.膀胱癌是国人泌尿系统中常见的肿瘤之一,研究表明,miRNA可以作为癌基因或抑癌基因在膀胱癌中发挥作用.本文综述了miRNA在膀胱癌中的表达和作用以及治疗的研究进展.
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磁靶向定位灌注化疗膀胱癌磁性吡柔比星纳米粒的制备与评价
目的：构建一种新型的磁靶向定位灌注化疗膀胱癌的吡柔比星纳米制剂，并探讨其磁靶向定位及抗膀胱癌细胞特性，为定位灌注化疗膀胱癌的临床应用提供帮助。方法通过N－N′－羰基二咪唑（CDI）交联剂将治疗膀胱癌的临床药物吡柔比星（ pirarubicin，THP）连接在表面氨基化的四氧化三铁（ Fe3 O4）磁性纳米粒上，制备具有磁性的THP纳米制剂，并在体外考察其磁定位性能和对膀胱癌细胞的抑制作用。结果THP成功地连接到了粒径40 nm左右的Fe3 O4磁性纳米粒上，磁性药物制剂在不同pH值的缓冲液中药物在90％以上，并可在外界磁场作用下定位于靶向部位。对膀胱癌细胞可造成THP和Fe3 O4双重抑制效果，抑制率高达58．44％。结论该纳米制剂可通过外界磁场定位于靶向部位，膀胱癌细胞抑制效果明显，为临床定位灌注化疗的应用奠定了基础。
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肌层浸润性膀胱癌亚型的生物信息学分析
目的 通过生物信息学分析研究两种膀胱癌亚型(基底样膀胱癌和管腔型膀胱癌)之间不同的分子调控机制和分子特性,为更准确地区分膀胱癌亚型和探索潜在的治疗靶点提供帮助.方法 利用稳健的多芯片平均算法将由22个基底样膀胱癌和132管腔型膀胱癌样本组成的数据集进行标准化,并选择其中前1000个具有高标准差的基因进行两种亚型的差异表达基因分析.将得到的差异表达基因进行GO功能注释和KEGG通路富集分析.此外,选择前100个差异表达基因构建蛋白质互作网络.结果 得到基底样和管腔型膀胱癌差异表达基因共742,其中基底样亚型上调的基因405个,下调的基因337个.GO富集分析显示差异表达基因显著富集在细胞外区基质、趋化性、炎症等功能上,KEGG通路富集显示差异表达基因显著富集在细胞外基质受体相互作用的通路上.构建的蛋白质互作网络显示重要的hub蛋白质为LNX1、MSN和PPARG.结论 本研究得到的基底样和管腔型膀胱癌亚型分子机制的区别主要体现在细胞外区域的分子作用机制、细胞趋化性和炎症反应等,基因LNX1、MSN和PPARG为区别两种膀胱癌亚型的特征基因.
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siRNA下调SNCG基因表达抑制膀胱癌细胞系5637的增殖和侵袭
目的 探讨突触核蛋白γ(SNCG)基因对膀胱癌细胞5637增殖和侵袭能力的影响.方法 设计并合成3对SNCG-siRNA序列,转染5637细胞后,用RT-qPCR和Westem blot检测SNCG的表达.分别通过CCK-8增殖实验和侵袭实验评估5637细胞增殖和侵袭能力.结果 与膀胱癌细胞系T24、EJ和UMUC-3相比,5637细胞中SNCG表达水平高(P＜0.05);与空白和阴性对照组相比,3对SNCG-siRNA序列转染5637后均可抑制SNCG mRNA和SNCG蛋白的表达(P＜0.05),但SNCG-siRNA-244组抑制效果明显;实验组5637细胞的增殖受到明显抑制(P＜0.05),且细胞的侵袭能力显著下降(P＜0.05).结论 通过特异性干扰SNCG基因的表达可抑制膀胱癌细胞5637的增殖和侵袭,SNCG的siRNA序列可能成为膀胱癌治疗的新靶点.
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RON基因在膀胱癌组织中的表达及对T24细胞增殖的影响
目的 探讨RON基因对T24细胞增殖与迁移的影响.方法 收集膀胱癌组织标本,通过RT-qPCR检测RON在膀胱癌组织中的表达,其次用siRNA技术干扰T24细胞RON,用RT-qPCR、Western blot检测干扰效果,CCK-8、Transwell实验及流式细胞术分别检测细胞的增殖、迁移及细胞凋亡.结果 膀胱癌组织中RON表达与TNM分期呈正相关(P＜0.05).在T24细胞的RON-siRNA组,细胞增殖能力减弱(P＜0.05),迁移与侵袭能力降低(P＜0.05),凋亡细胞数增加(P＜0.05),同时P-ERK蛋白表达减少,但Total-ERK表达不变.结论 RON基因促进膀胱癌细胞的增殖与迁移,有望成为膀胱癌治疗的新靶点.
关键词： siRNA 膀胱癌 T24细胞 巨噬细胞刺激蛋白受体 RON -
PLCε通过PKCα／β／TBX3信号通路调控人膀胱癌细胞系T24的迁移和侵袭
目的：体外实验研究PLCε基因调节人膀胱癌细胞迁移和侵袭的分子机制。方法设计并合成针对PLCε基因mRNA的寡核苷酸序列，构建重组腺病毒Ad-shPLCε。 T24细胞感染Ad-shPLCε腺病毒后，用Western blot检测PKCα／β及TBX3、E-cadherin的表达；用划痕实验、Transwell 迁移和侵袭实验检测膀胱癌细胞T24的迁移、侵袭能力。结果 Ad-shPLCε重组腺病毒感染膀胱癌细胞T24，对其PLCε mRNA表达抑制率为75.6％，对其PLCε蛋白表达抑制率为67.4％。 Ad-shPLCε感染组T24细胞迁移能力较空载组和空白对照组明显减弱（ P＜0.05）；重组腺病毒Ad-shPLCε感染组T24细胞穿膜细胞数较空载组和空白对照组明显减少（ P＜0.05）。 Ad-shPLCε重组腺病毒感染膀胱癌T24细胞后下游PKCα／β的活化受到抑制（ P＜0.05），同时，TBX3的表达减少，而E-cadherin的表达增高（ P＜0.05）。结论通过以重组腺病毒干扰抑制PLCε基因，能有效抑制膀胱癌T24细胞系中PLCε下游PKCα／β的活化情况及TBX3，E-cadherin的表达变化，并且对T24细胞的迁移、侵袭能力具有一定的抑制作用。
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靶向沉默膀胱癌T24细胞系VEGF对树突状细胞分化成熟及免疫功能的影响
目的 观察靶向沉默膀胱癌T24细胞系VEGF对树突状细胞(DC)分化成熟及免疫功能的影响.方法 构建VEGF慢病毒干扰载体LV-VEGFA-RNAi(实验组)及慢病毒阴性对照载体LV-CON(阴性对照组),分别感染各组T24细胞,空白对照组不采取任何干预措施.分别用RT-PCR和ELISA检测各组T24细胞VEGF mRNA和蛋白的表达.各组T24上清分别与PBMC来源的未成熟DC共培养,用流式细胞仪检测DC分化成熟指标CD1a、CD83及免疫功能指标CD86.结果 与空白对照组和阴性对照组相比,实验组T24细胞VEGF mRNA及蛋白的表达均受到显著抑制(P<0.05).实验组DC表型CD1a、CD83和CD86较空白对照组明显增高(P<0.05),较阴性对照组亦明显增高(P<0.05).结论 靶向沉默膀胱癌T24细胞VEGF的表达,有利于微环境中DC的成熟及其免疫功能的发挥,可能通过修复DC被损害的免疫监视功能,增加DC的抗肿瘤能力.
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CD44RNAi对EJ细胞增殖、迁移及其与特异性单抗结合力的影响
目的 研究EJ细胞中CD44小RNA干扰后细胞增殖、迁移功能以及其与特异性单抗KMP1结合力的改变.方法 小RNA干扰的方法抑制EJ细胞中CD44表达,Western blot和流式细胞仪检测EJ细胞与CD44特异性单抗KMP1的结合功能变化,细胞划痕实验和Boyden小室检测shCD44-EJ细胞的迁移功能,[3H]掺入法检测shCD44-EJ细胞的增殖能力.结果 shCD44-EJ细胞与KMP1的结合能力下降,CD44的表达量也降低,Wide type组和shCD44-EJ组的迁移到划痕中央的细胞数分别为257 ±32个和132±29个,shCD44-EJ组和Vector组细胞迁移到膜中和下室中的平均细胞数为356±13和672±17个,显示shCD44-EJ细胞的迁移能力较Wide type组和Vector组分别降低52％和53％,shCD44-EJ细胞的增殖活性是Vector组的73％.结论 特异性沉默CD44可降低EJ细胞与其特异性单抗KMP1的结合功能,并抑制EJ细胞的迁移和增殖能力.
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聚维酮联合阿霉素体外抑制膀胱癌细胞T24生长并预防膀胱癌患者术后复发
目的 探讨聚维酮(PVP)联合阿霉素(ADM)对人膀胱癌细胞株T24的作用及预防膀胱癌术后复发的疗效.方法 MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞周期和黏附作用.对231例浅表膀胱癌患者术后膀胱灌注PVP+ADM(实验组)或生理盐水+ADM(对照组),观察预防复发效果.结果 2.5%PVP作用24 h和72 h细胞生长抑制率为15.11%和49.57%;7.5%浓度时,抑制率升为35.42%和79.66%.单用0.25 mg/L ADM作用48 h抑制率为39.05%;合用2.5%和7.5%PVP抑制率升为68.51%和88.39%.5%PVP能使T24细胞的G0/G1期比率下降和G2/M期比率上升.PVP能提高抗鼠IgG1对T24细胞的黏附作用.194例患者获随访,实验组复发率明显降低,复发时间明显延长(均P＜0.01).结论 PVP通过阻滞细胞周期G2/M期和增强黏附作用来抑制T24细胞生长,与ADM联合具有协同作用.PVP联合ADM膀胱灌注预防浅表膀胱癌术后复发疗效确切,副作用少.
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人膀胱癌EJ细胞EZH2基因表达降低后基因表达谱的差异分析
目的 利用基因芯片技术筛选膀胱癌EJ细胞EZH2基因RNA干扰后的差异表达基因,探讨EZH2基因在肿瘤中的作用机制.方法 构建EZH2基因的shRNA表达载体,转染膀胱癌EJ细胞,基因芯片筛选差异表达基因并上传passway miner服务器(http://www.biorag.org./passway.htm)进行功能分类.结果 差异表达基因436条,下调179条,上调257条,功能聚类分析显示115个差异表达基因定位于已知的生物通路中,有EGF信号传导通路、P53传导通路、细胞增殖、细胞周期通路、Notch、Wnt通路等.EZH2靶基因WNT1、MYT1、CNR1、WT1表达上调,部分通路及基因与肿瘤干细胞和细胞分化有关.结论 EZH2基因通过多个基因介导参与细胞分化,对EZH2相关基凶的研究有助于明确EZH2在细胞癌变过程中的作用机制.
