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甲酰肽受体1在膀胱癌细胞中的表达及其分析
目的 探究甲酰肽受体1在膀胱癌细胞中的表达及其激活后的作用.方法 利用实时荧光定量PCR方法和蛋白免疫印迹法检测正常膀胱上皮细胞和T24和pumc-91细胞甲酰肽受体1mRNA和蛋白的表达量,用甲酰肽受体1的激活剂fMLP激活甲酰肽受体1后,实时荧光定量PCR方法检测IL-8mRNA表达量.结果 基因水平上,甲酰肽受体1在两株膀胱癌细胞和正常的膀胱上皮细胞中均表达,与正常的膀胱上皮细胞相比T24和pumc-91细胞均低表达;蛋白水平上,FPR1在两株膀胱癌细胞中也均表达,与正常膀胱上皮相比T24和pumc-91细胞均高表达.fMLP激活FPR1后,T24和pumc-91膀胱癌细胞IL-8mRNA的表达量增加.结论 FPR1在膀胱癌细胞中高表达并且调控T24和pumc-91细胞IL-8mRNA的分泌,可能与膀胱癌的发生发展相关.
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趋化肽fMLP与博安霉素序贯给药对肝癌H22移植瘤生长的影响
目的 观察趋化肽fMLP与抗肿瘤抗生素博安霉素(BAM)序贯给药对肿瘤生长的影响. 方法 采用小鼠肝癌H22移植瘤模型观察二者序贯给药的作用. 结果 fMLP 1 mg/kg瘤周给药×3,对肿瘤的生长没有影响.BAM 20 mg/kg腹腔给药×1,设计了以下两个实验:(1)先给BAM后给fMLP,合用组肿瘤生长速度与单用BAM组的相似,BAM组在14 d的抑瘤率58.9%,合用组为51.1%,CDI>1;(2)先给fMLP后给BAM,合用组肿瘤生长速度比单用BAM组明显减慢,BAM组在14 d的抑瘤率28.4%,合用组为51.3%,P<0.05,CDI=0.73. 结论 先给趋化肽fMLP后给BAM对小鼠肝癌H22移植瘤的生长抑制有协同作用.
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新型PDE3抑制剂西洛他唑对fMLP诱导的HL-60细胞超氧自由基生成和钙离子浓度升高的影响
目的研究新型磷酸二酯酶(PDE)3抑制剂西洛他唑(cilostazol)对中性粒细胞超氧自由基(O*2)和钙离子浓度([Ca2+]i) 的影响.方法体外培养急性早幼粒细胞白血病HL-60细胞,以1.3% DMSO分化诱导为中性粒细胞样细胞后,采用特制新型仪器,同时实现化学发光法测定O*2和荧光法测定[Ca2+]i,观察西洛他唑对趋化肽N-甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰苯丙氨酸(fMLP)刺激引起的中性粒细胞样HL-60细胞O*2生成和[Ca2+]i升高的影响以及二者变化的时相关系.结果西洛他唑(1～30 μmol*L-1)明显抑制由fMLP诱导的中性粒细胞O*2生成和[Ca2+]i升高,其中10和30 μmol*L-1浓度的西洛他唑组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).在时相关系上,fMLP诱导O*2生成的达峰时间较之[Ca2+]i的变化略显滞后,而10 μmol*L-1西洛他唑对fMLP诱导O*2生成和[Ca2+]i升高的影响表现出一致性,几乎同步.结论西洛他唑对fMLP-诱导的中性粒细胞样细胞内O*2生成和[Ca2+]i具有同步的抑制作用,提示该药的药理学作用部分是通过影响中性粒细胞功能而实现的.
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趋化肽fMLP与博安霉素偶联物制备及其体内抗肿瘤活性的初步评价
目的:建立fMLP与博安霉素(BAM)的偶联物制备方法,初步评价其抗肿瘤活性.方法:以偶联荆EDC和NHS-SO3将fMLP与BAM进行偶联,以MALDI-TOF质谱检测其偶联效果,以Sephadex G15分离纯化偶联物;以TTC法观察偶联物的抗菌作用,采用小鼠肝癌H22移植瘤模型来观察其抗肿瘤作用.结果:通过Sephadex G15分离纯化,收集第1峰前半部分获得了较纯的偶联物;偶联物fMLP-BAM的抗菌活性是BAM的17.0%,偶联物BAM-fMLP 5 mg·kg-1组抑瘤率为52.3%,BAM 5 mg·kg-1组抑瘤率为67.6%(P>0.05).结论:根据本文提供的方法可以制备fMLP与BAM的偶联物,但该偶联物体内抗肿瘤活性与博安霉素相比略有下降.
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趋化肽fMLP增强博安霉素的抗肿瘤作用
背景和目的:博安霉素(Boanmycin,BAM)是博来霉素的A6组分,临床研究表明对多种肿瘤有效.趋化肽可吸引与激活白细胞(含巨噬细胞),使其对肿瘤生长、侵袭与转移过程产生一定的影响.本研究探讨BAM和趋化肽fMLP(N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine,CHO-Met-Ile-Phe)联合抗肿瘤作用.方法:体外采用MTT法测定BAM和fMLP联合对肿瘤细胞的细胞毒作用,尤其是巨噬细胞存在时的作用.体内实验以小鼠移植性肝癌H22模型观察BAM和fMLP联合抗肿瘤作用.结果:体外实验,BAM与fMLP联合对肿瘤细胞没有协同作用,但BAM10μg/ml、30μg/ml和100μg/ml与fMLP20μg/ml联合在加入巨噬细胞后对肿瘤细胞有显著协同作用.体内实验时,fMLP1mg/mouse为瘤周给药×3,fMLP无显著抗肿瘤作用.BAM和fMLP合用时设计了3个实验:(1)肿瘤接种后24h开始治疗,BAM为瘤周给药×3,BAM0.5mg/kg在13天的抑瘤率为26.6%,合用fMLP后为64.7%,P<0.05,CDI值为0.36,有显著协同作用.(2)肿瘤接种后24h开始治疗,BAM为腹腔给药×3,BAM1mg/kg组肿瘤生长较快,合用fMLP后生长缓慢.在14天的抑瘤率为11%,合用fMLP后为70.6%,P<0.05,CDI为0.42,有显著协同作用.(3)肿瘤接种后96h开始治疗,BAM腹腔给药×3,BAM1mg/kg组肿瘤生长较快,合用fMLP后生长缓慢.在13天的抑瘤率为38.2%,合用fMLP后为77.1%,P<0.05,CDI为0.51,有显著协同作用.结论:本实验研究表明,趋化肽fMLP可增强BAM的抗肿瘤作用,这种作用可能需要巨噬细胞的参与,提示趋化调节在癌化学治疗中可能发挥一定的作用.
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甲酰基肽受体1对BV-2细胞迁移的影响及机制的体外研究
目的 探讨甲酰基肽受体1(formyl peptide receptor 1,FPR1)对BV-2细胞迁移的影响及潜在机制.方法 免疫荧光染色检测BV-2细胞FPR1的表达,Transwell小室实验分别检测浓度为1、10、50、100、500 nmol/L的FPR1特异性激动剂(formylmethionyl-leucyl-phenylalanine,fMLP)对细胞迁移的影响,划痕实验及Transwell小室实验验证fMLP促进细胞迁移的作用可以被FPR1特异性阻断剂Boc-MLF所抑制.Western blot检测激动剂组、阻断剂组和阻断剂+激动剂组BV-2细胞经干预后其FPR1蛋白和磷酸化细胞外信号调节激酶(phospho-extracellular regulate kinase,p-ERK)蛋白表达量的变化.结果 经免疫荧光染色结果显示,BV-2细胞表达FPR1,主要位于细胞膜表面.随着fMLP浓度的升高,Transwell迁移实验结果显示BV-2细胞的迁移能力明显增加(P＜0.05),呈现出明显的剂量依赖性.100 nmol/L及500 nmol/L激动剂组效果明显,fMLP促进BV-2细胞迁移的适浓度为100 nmol/L.划痕及Transwell小室实验结果显示5μmol/L的Boc-MLF可显著阻断上述现象(P＜0.05).fMLP可以上调BV-2细胞中FPR1的表达(P＜0.05),并且显著活化胞内ERK信号通路,上调p-ERK蛋白的表达水平(P＜0.05),Boc-MLF又可显著抑制上述改变(P＜0.05).结论 BV-2细胞表达FPR1,且FPR1在促进BV-2细胞迁移中具有重要作用.
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铜绿假单胞菌分泌物对中性粒细胞趋化运动的抑制功能
目的 研究铜绿假单胞菌分泌物对中性粒细胞趋化功能的影响.方法 用percoll密度梯度离心法分离小鼠骨髓中性粒细胞并用FACS检测其纯度;铜绿假单胞菌PAO1静置培养5d后涡旋并离心收集其上清;通过TAXIScan-FL检测被膜上清PAO1 d5(PAO1菌株静置培养第5天)的趋化作用;不同浓度的fMLP所引起的中性粒细胞趋化运动及PAO1 d5上清稀释50倍后的趋化作用;PAO1 d5上清对fMLP所引起的中性粒细胞趋化运动的影响.结果 分离的小鼠骨髓中性粒细胞纯度大于90％;TAXIScan-FL检测被膜上清有趋化作用,但是速度及方向上与fMLP及LTB4有明显差别(P＜0.001);高浓度的fMLP对中性粒细胞的趋化作用减弱,PAO1 d5稀释50倍后趋化作用消失;PAO1 d5上清可以抑制fMLP所引起的中性粒细胞趋化运动.结论 PAO1d5被膜上清中存在抑制中性粒细胞趋化的物质.
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FMLP刺激HL-60细胞NADPH氧化酶激活的信号转导途径
目的澄清中性粒细胞中[Ca2+]i及某些激酶在NADPH氧化酶激活中的作用和NADPH氧化酶激活的信号转导途径.方法利用中性粒细胞样HL-60细胞,研究[Ca2+]i和某些激酶对fMLP刺激NADPH氧化酶激活的影响.结果用10 μmol/L BAPTA-AM去除[Ca2+]i后使O-2生成明显减少;8 μmol/L的PKC抑制物GF109203x显著地抑制了O-2产生;50 μmol/L的p38抑制物SB203580、50 μmol/L的ERK抑制物PD098059和0.1 μmol/L的PI3K抑制物Wortmannin使O-2产生受到不同程度抑制;PKC、PI3K、p38和ERK激活对[Ca2+]i升高没有影响;[Ca2+]i、PKC和PI3K对p38激活有一定作用,而ERK和Akt激活主要受PI3-K的调控.结论试验说明[Ca2+]i依赖途径(PKC)和[Ca2+]i非依赖途径(PI3K、p38和ERK)对NADPH氧化酶激活都起着重要作用.
