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诱导型一氧化氮合酶影响吲哚醌类化合物抗肿瘤活性的实验研究
观察诱导型一氧化氮合酶(iducible nitric oxide synthase,iNOS)对新型吲哚醌类生物还原化合物630和630Ac的抗肿瘤活性和乏氧选择性的影响.以人纤维肉瘤细胞HT1080及其iNOS基因转染的细胞克隆为研究对象,噻唑蓝法检测不同iNOS活性的细胞克隆对化合物630和630Ac化学敏感性的差异;比较乏氧和有氧条件下半数抑制浓度(IC50)的差异;流式细胞术观察化合物对细胞周期的影响.630Ac和630在实验中均显示出较强的抗肿瘤活性,且630Ac的细胞毒性强于630;而iNOS转染的细胞对630和630Ac敏感性较亲本细胞HT1080有所下降,IC50分别高1～7倍左右.氧对630的细胞毒性无显著影响,而630Ac则具有较好的乏氧选择性细胞毒作用,尤其是对iNOS转基因细胞,有氧和乏氧条件下IC50相差4～7倍.提示iNOS活性的增强会引起肿瘤细胞对化合物630和630Ac敏感性的降低.
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DAB2IP基因沉默引起膀胱癌细胞辐射耐受与化疗抵抗
目的 观察DAB2IP基因对膀胱癌细胞放化疗敏感性的影响.方法 RNA干扰建立DAB2IP表达抑制的膀胱癌细胞,克隆形成实验比较不同DAB2IP表达的细胞对射线放射敏感性的差异,噻唑蓝方法检测不同DAB2IP表达的细胞对常用化疗药物敏感性的变化.结果 DAB2IP基因沉默造成细胞对射线与化疗药物均出现耐受.结论 DAB2IP可能用作预测膀胱癌患者放射或化学治疗预后的分子标志物.
关键词： 卵巢癌差异表达基因2相互作用蛋白 膀胱癌 辐射敏感性 化学敏感性 -
胰腺癌中p33ING1b基因变化及其表达研究
肿瘤抑制基因,ING1,定位于人染色体13q33-34,主要编码蛋白p33ING1b,细胞核内表达.p33ING1b蛋白主要参与肿瘤的发生、细胞凋亡、DNA修复、细胞周期调节、衰老、锚着依赖性生长和化学敏感性等重要细胞生命活动.
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内源性NO对人乳腺癌细胞化疗敏感性的影响
目的 研究内源性一氧化氮(NO)对人乳腺癌细胞化疗敏感性的影响. 方法应用IL-1β处理培养的MCF-7细胞,检测NO的产生情况并用蛋白质印迹法检测诱导型一氧化氮合酶(in-duceble nitric oxide synthase,iNOS)蛋白的表达.M1rr法检测MCF-7细胞在NOS抑制剂NG-甲基-L-精氨酸(NG-monomethyl-L-arginine,L-NMMA)和NO合成原料L-精氨酸(L-arginine,L-Arg)作用下对多柔比星(adriamycin,ADM)和5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)药物的敏感性. 结果内源性NO的产量与IL-1β剂量呈正相关.在IL-1β诱导作用下MCF-7细胞大量表达iNOS蛋白,并与L-Arg、L-NMMA存在与否无关.当ADM浓度为0.5 μmol/L和1 μmol/L时,实验组细胞的生存率明显下降(P<0.05).加入L-NMMA能显著提高实验组细胞的生存率(P<0.05);加入L-Arg能显著提高MCF-7细胞对化疗药物的敏感性(P<0.05).结论在细胞因子IL-1β诱导下MCF-7细胞产生的内源性NO增加,并使MCF-7细胞化学敏感性提高.
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能使体外培养细胞长期存活的技术
美国科学家的新研究表明Rho激酶抑制剂(Y-27632)与纤维母细胞饲养细胞合用能够诱导许多组织的正常上皮细胞以及肿瘤上皮细胞在体外无限增值,而不需要转导外源性病毒或细胞基因.例如原始前列腺和乳腺细胞重编程为基底细胞样干细胞样表型并在基底膜中形成有序的前列腺球和乳腺球.相较于筛选稀少的干细胞样细胞,在所述的生长条件下能够在活检组织获取后的5 d～6 d内产生2×106个细胞,能够从冷冻组织少于4个活细胞培养起来.持续的细胞增殖依赖于纤维母细胞饲养细胞和Y-27632两者,进行有条件重组的细胞(CRCs)保持了正常的核型和非致瘤性.该技术也能够有效建立人和啮齿类动物肿瘤细胞的培养系.例如,从人前列腺癌建立的CRCs表现出第13号染色体的不稳定性,在基底膜中的异常增殖以及在有严重合并免疫缺陷的老鼠中形成肿瘤.这种从少量活检样本和冷冻组织迅速产生许多肿瘤细胞的能力为基于细胞的诊断和治疗(包括测试化学敏感性)提供了很大机会并大大提高了生物银行的价值.另外,CRC方法能够对取自体内的上皮细胞进行遗传操作以及随后的自体体内评估.
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卵巢肉瘤样癌细胞系的生物学特性及对化疗药物的敏感性
目的 研究人卵巢肉瘤样癌永生化细胞系BUPH:OVSC-2的生物学特性,筛选卵巢肉瘤样癌敏感的化疗药物.方法 以手术切除的卵巢肉瘤样癌腹壁转移组织为材料,进行体外培养.将永生化基因--SV40 T抗原基因转染第10代细胞,经筛选,抗性克隆扩大培养,得到人卵巢肉瘤样癌永生化细胞系.通过光学显微镜、电子显微镜、生长曲线测定、染色体分析、双层软琼脂培养、裸鼠接种、免疫组化等,研究其生物学特性.用MTT的方法检测该细胞系对顺铂、阿霉素、足叶乙甙、拓扑替康四种化疗药物的敏感性.结果 人卵巢肉瘤样癌永生化细胞系,BUPH:OVSC-2,现已传至100余代.其生物学特性为,形态学观察细胞呈肉瘤样细胞形态,超微结构证实为上皮起源;细胞生长旺盛;具有恶性细胞的特征,恶性度高.该细胞在体外对阿霉素和顺铂非常敏感,对足叶乙甙尚敏感,对拓扑替康不敏感.结论 BUPH:OVSC-2为一株恶性度高的人卵巢肉瘤样癌永生化细胞系,保留了其来源细胞的生物学特性,阿霉素与顺铂联合治疗可能是卵巢肉瘤样癌较敏感的化疗方案.
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人乳腺癌细胞过量产生NO对ADM和5-FU敏感性的调节作用
目的:研究内源性一氧化氮(NO)对于调节肿瘤细胞对化疗药物敏感性的影响.方法:应用IL-1β处理培养的MCF-7细胞检测NO的产生情况,并用蛋白质印迹法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的表达.设立实验组和对照组,采用MTT法检测MCF-7细胞在一氧化氮合酶(NOS)抑制剂NG甲基-L-精氨酸(L-NMMA)和NO合成原料L-精氨酸(L-Arg)作用下,对多柔比星(ADM)和氟尿嘧啶(5-FU)的药物敏感性.结果:内源性NO的产生量与IL-1β间存在着剂量依赖关系.蛋白质印迹法分析结果显示,在IL-1β诱导作用下,细胞大量表达iNOS蛋白.同时无论L-Arg和L-NMMA存在与否,iNOS蛋白都无差异.当ADM浓度为0.5和1μmol/L时,实验组细胞生存率有较明显的下降,P<0.05.L-NMMA的加入显著提高了实验组细胞的生存率,P<0..5;L-Arg的加入,在一定程度上提高了化疗药的敏感性,P<0.05.当L-Arg和L_NMMA与IL-1β同时存在,肿瘤细胞的生存率不会有明显下降,P<0.05.结论:在细胞因子IL-1β诱导下,MCF-7产生的内源性NO能提高肿瘤细胞的化学敏感性.
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一氧化氮合酶对丝裂霉素C衍生物629细胞毒性的影响
目的 评价一氧化氮合酶对丝裂霉素C(MMC)衍生物--5-氮丙啶基-3-羟基-1-甲基吲哚-4,7-二酮(629)的细胞毒性和乏氧选择性的影响.方法 以人纤维肉瘤细胞株HT1080和其诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因转染的细胞克隆(iNOS9,iNOS12)为实验对象.四噻唑蓝(MTT)法检测MMC与其衍生物629的细胞毒性,比较乏氧和有氧条件下两种化合物半数抑制率(IC50)的差异;琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术观察629作用后肿瘤细胞脱氧核糖核酸(DNA)的损伤情况,分析不同iNOS活性的肿瘤细胞对629敏感性的差异及原因.结果 629的IC50较MMC低数百倍,是高细胞毒性的化合物;随着细胞中iNOS活性的增加,629对乏氧细胞的选择性损伤作用显著增强,DNA电泳显示629引起细胞坏死,造成细胞周期G2/M阻滞.结论 MMC衍生物629是具有更高乏氧选择性的增敏化合物.
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内源性NO在人宫颈癌Hela细胞株合成对顺铂敏感性的影响
目的 通过细胞因子γ-干扰素(INF-γ)诱导内源性一氧化氮(Nitric Oxide,NO)的产生,探讨其对人宫颈癌Hela细胞株顺铂(DDP)敏感性的影响.方法 用NO测试盒检测一定浓度的INF-γ处理人宫颈癌Hela细胞在不同时间NO的产,生量及一定作用时间下不同浓度的INF-γ处理Hela细胞NO的产生量;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测经一定浓度及一定时间INF-γ处理后的人宫颈癌Hela细胞在不同浓度顺铂作用后的生存率;分别加入一氧化氮合酶(Nitric Oxide Synthase,NOS)的抑制剂NG-甲基-L-精氨酸(L-NMMA)及NO的合成原料L-精氨酸(L-arginine,L-Arg)再次以MTT法检测Hela细胞生存率的变化.结果 体外培养的Hela细胞在经INF-γ作用后第8小时NO生成量达高峰,随后呈下降趋势,而不加INF-γ的空白对照组,Hela细胞NO的生成量无明显变化(P＜0.05);Hela细胞NO的生成量与INF-γ的浓度之间有一定的依赖性.采取MTT法检测:经lnMINF-γ作用8h的实验组Hela细胞与不加INF-γ的对照组相比,低浓度DDP作用时前者Hela细胞生存率显著下降(P＜0.05),但随DDP浓度升高后两组的生存率无显著差异;经lnMINF-γ处理8h的Hela细胞加入L-NMMA组Hela细胞在DDP作用后的生存率显著提高(P＜0.05),而加入L-Arg组结果则与之相反.结论 人宫颈癌Hela细胞在一定剂量、一定时间INF-γ的作用下,能够诱导iNOS产生内源性NO,且NO产生的量与INF-γ存在时间、剂量依赖关系;经INF-γ诱导产生的内源性NO可提高人宫颈癌Hela细胞株对DDP的敏感性.
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胶质瘤细胞化学增敏作用实验研究
目的:研究巯基修饰剂BSO对胶质瘤细胞株GSH含量的修饰作用及化学增敏作用.方法:利用Tietze还原酶法观察BSO对体外培养的胶质瘤细胞GSH的作用.利用MTT法观察BSO对胶质瘤细胞化学敏感性的影响.结果:经BSO作用后胶质瘤细胞的GSH含量显著下降、化学敏感性增加.结论:BSO能降低胶质瘤细胞的GSH含量,增加胶质瘤细胞对化学药物的敏感性.
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增殖细胞核抗原与卵巢癌细胞系化学敏感性的关系
目的探讨增殖细胞核抗原(PCNA)与上皮性卵巢癌细胞系化学敏感性的关系.方法使用顺为铂作用于A2780及AD60细胞株.在MTT法测定耐药倍数基础上,用ABC检测PCNA表达.结果MTT测定MD60的耐药倍数为2.4.A2780 PCNA的表达低于AD60,且随药物浓度的递增染色较耐药组明显变浅.A2780、AD60相同药物浓度作用后PCNA的表达有显著性差异(P＜0.01);同一细胞株不同药物浓度作用后PCNA表达有显著性差异(P＜0.01).结论增殖细胞核抗原表达与上皮性卵巢癌细胞对细胞毒性药物的化学敏感性呈负相关.
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诱导型一氧化氮合酶对乳腺癌细胞化学敏感性的影响
目的 分析可诱导一氧化氮合酶(iNOS)对乳腺癌细胞化学敏感性的影响,评价新型蒽醌类生物还原化合物RH1对乳腺癌细胞毒性和乏氧选择性.方法 实验以人乳腺癌细胞MDA-MB-231wt和其转染空载体的对照组细胞(PEF-vector)及一氧化氮合酶基因转染的细胞克隆(iNOS10)为实验对象.噻唑蓝(MTT)法比较不同酶活性的细胞克隆对顺铂等抗肿瘤药物和丝裂霉素C(MMC)衍生物-2,5-二氮丙啶-6-羟甲基-3-甲基苯-1,4-二酮(RH1)的敏感性的差异.结果 同对照组细胞相比,iNOS10细胞对顺铂等几种抗肿瘤药物呈现不同程度的耐受,而对阿霉素的敏感性有所增强(P＜0.05),用L-甲基盐酸精氨酸抑制细胞中NO的合成,则会降低iNOS10细胞对阿霉素的敏感性,而对其他几种抗肿瘤药物的敏感性无显著影响;生物还原化合物RH1是高毒性的化合物,IC50较MMC下降577倍;乏氧条件下,细胞对RH1的化学敏感性显著增强,流式细胞术显示RH1可以引起iNOS10细胞周期的G2/M阻滞.结论 MMC衍生物RH1是高细胞毒性的化合物,可诱导一氧化氮合酶活性的增强,也可引起肿瘤细胞对部分抗肿瘤药物的敏感性降低,且对高表达iNOS的细胞具有乏氧选择性的损伤作用.
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miR-200c对结肠癌SW620细胞5-FU化学敏感性的影响
目的 探讨结肠癌SW620细胞株中微小核糖核酸200c(miR-200c)的表达对5氟尿嘧啶(5 FU)化学敏感性的影响.方法 实验分为miR-200c类似物转染SW620细胞株组(A组)、miR-200c类似物阴性对照转染组(B组)、miR-200c抑制物转染SW620细胞株组(C组)、miR-200c抑制物阴性对照转染组(D组)和空白对照组(E组).采用RT PCR、MTS及流式细胞术分别检测转染后细胞中miR-200c的表达、5 FU半数抑制浓度(IQ0)及细胞凋亡;Western blot检测转染后细胞中磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(p Akt)的表达.结果 与B组相比,A组转染24 h后miR-200c的表达水平提高了(35.94±0.39)倍(P＜0.05),5 FU的IC50提高[(1512.67±0.48) μg/ml vs.(926±0.70) μg/ml] (P＜0.05),5 FU促细胞凋亡的作用降低[(5.01±0.25)％ vs.(8.07±0.16)％](P＜0.05).与D组相比,C组miR-200c的表达水平降低了(19.61±0.86)倍(P＜0.05),5 FU的IC50降低[(740±0.60) μg/ml vs.(941±0.59) μg/ml] (P＜0.05),5 FU促细胞凋亡作用提高[(12.23±0.60)％ vs.(8.22±0.18)％](P＜0.05).转染48 h后,A组p Akt的表达较B组升高(P＜0.05),C组p Akt表达较D组降低(P＜0.05).结论 在结肠癌SW620细胞中,降低miR-200c的表达可提高结肠癌细胞对5 FU的化学敏感性,可能与miR-200c调控Akt的磷酸化有关.
关键词： 结肠癌SW620细胞 微小核糖核酸-200c 5-氟尿嘧啶 化学敏感性 -
聚肌胞增强肝癌细胞 HepG2对甲氨蝶呤化学敏感性的机制
目的：探讨聚肌胞（PolyI：C）增强肝癌细胞对甲氨蝶呤（MTX）化学敏感性的机制。方法体外培养肝癌细胞 HepG2，并随机分成对照组、MTX 组、联合组，对照组加入生理盐水，MTX 组加入 MTX 至20μg／mL，联合组加入 MTX 至20μg／mL 和 PolyI：C 至50μg／mL。MTT 法检测各组细胞增殖抑制率，流式细胞术检测各组细胞凋亡率，PCR 法检测各组细胞中维甲酸诱导基因1（RIG-1）、干扰素β（IFN-β）和半胱胺酸天冬胺酸转移酶3（Caspase-3） mRNA 表达，蛋白免疫印迹法检测 RIG-1、IFN-β和 Caspase-3蛋白表达。结果联合组与 MTX 组相比，细胞增殖抑制率和凋亡率均显著升高，而 RIG-1、IFN-β和 Caspase-3 mRNA 及蛋白表达水平亦显著提高两组比较差异有统计学意义（P 均＜0．05）。结论PolyI：C 通过上调 RIG-1、IFN-β和 Caspase-3 mRNA 及蛋白表达，促进肝癌细胞的抑制和凋亡，从而增强 MTX 对肝癌细胞的化学敏感性。
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人卵巢癌细胞系BUPH:OVSC-1的建立及化疗药物对其生长的影响
目的:介绍人卵巢肉瘤样癌细胞系BUPH:OVSC-1的建立,筛选卵巢肉瘤样癌敏感的化疗药物.方法:以手术切除的卵巢肉瘤样癌腹壁转移组织为材料,进行体外培养,建立人卵巢肉瘤样癌细胞系.通过MTT的方法在相同条件下检测该细胞系对顺铂、阿霉素、足叶乙甙、拓扑替康四种化疗药物的敏感性.结果:建立卵巢肉瘤样癌细胞系BU-PH:OVSC-1,该细胞在体外对阿霉素非常敏感,对顺铂较敏感,对足叶乙甙和拓扑替康的敏感性较差.结论:阿霉素与顺铂联合治疗可能是卵巢肉瘤样癌较敏感的化疗方案.
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增殖细胞核抗原与卵巢癌细胞系化学敏感性的关系
目的探讨增殖细胞核抗原(PCNA)与上皮性卵巢癌细胞系化学敏感性的关系.方法使用顺铂作用于A 2780及AD 60细胞株.在MTT法测定耐药倍数基础上,用ABC检测PCNA表达.结果 MTT测定AD 60的耐药倍数为2.4.A 2780 PCNA的表达低于AD 60,且随药物浓度的递增染色较耐药组明显变浅.A 2780、AD 60相同药物浓度作用后PCNA的表达有显著差异(P＜0.01);同一细胞株不同药物浓度作用后PCNA表达有显著性差异(P＜0.01).结论增殖细胞核抗原表达与上皮性卵巢癌细胞对细胞毒性药物的化学敏感性呈负相关.
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端粒酶活性与卵巢癌细胞系化学敏感性的关系
目的探讨端粒酶活性与上皮性卵巢癌细胞系化学敏感性的关系.方法使用顺铂作用于敏感细胞株A2780及耐药细胞株AD60.在四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定耐药倍数的基础上,应用聚合酶链反应-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PCR-PAGE)方法测定端粒酶活性.结果经MTT测定卵巢癌耐药细胞株AD60的耐药倍数为2.4.A2780端粒酶活性随药物浓度的递增明显降低,而AD60降低不明显.结论端粒酶活性与上皮性卵巢癌细胞对细胞毒性药物的化学敏感性相关.
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二甲双胍对顺铂治疗食管鳞癌的增敏作用
目的 探讨二甲双胍(Met)对食管鳞癌细胞株TE-1增殖的抑制作用及其对顺铂治疗食管鳞癌的增敏作用.方法 人食管癌细胞株TE-1细胞分为空白对照组、单用顺铂组(顺铂A组浓度为4.17 μmol·L-1,顺铂B组浓度为8.33 μmol·L-1)、单用Met组(Met浓度分别为5、10、20、40、80 mmol·L-1)及顺铂+ Met联合组(联合A组:顺铂浓度为4.17 μmol·L-1、Met浓度为5 mmol·L-1,联合B组:顺铂浓度为8.33 μmol·L-1,Met浓度为5 mmol·L-1),通过四甲基偶氮唑盐法测定各试验组不同时间(24、48、72 h)的细胞增殖抑制率.结果 在同一时间点,不同浓度Met对TE-1细胞的增殖抑制率均显著高于空白对照组(P＜0.01),且呈浓度依赖性(P＜0.01);在Met各浓度组内,48、72 h时的TE-1细胞增殖抑制率均显著高于24h时(P＜0.01),但48 h与72 h增殖抑制率比较差异无统计学意义(P＞0.05).作用24、48、72 h时,联合A组和联合B组对TE-1细胞的增殖抑制率均高于同时间段5 mmol·L-1 Met组和同浓度单用顺铂组,差异均有统计学意义(P＜0.01);联合A组增殖抑制率与单用顺铂B组比较差异无统计学意义(P＞0.05);同一时间点联合B组增殖抑制率均高于联合A组,差异有统计学意义(P＜0.01);联合A组和联合B组48、72 h时对TE-1细胞的增殖抑制率均高于24h时,72 h时的增殖抑制率均高于48 h时,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 Met对食管鳞癌细胞株TE-1细胞的增殖有抑制作用,且可增加TE-1细胞对顺铂的化学治疗敏感性.
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RNA干扰LMP1阻滞淋巴瘤细胞于G0/G1期并提高细胞对顺铂的敏感性
目的 利用RNA干扰方法下调EB病毒潜伏膜蛋白1(1atent membrane protein,LMP1)的表达,探讨LMP1对化疗药物敏感性的影响.方法 采用小分子干扰片段转染EB病毒阳性淋巴瘤B95.8细胞,RT-PCR和Western blot分别检测LMPI的mRNA和蛋白的表达水平;联合应用化疗药物顺铂,通过MTT法观察细胞增殖活性变化.结果 干扰LMP1后,其mRNA和蛋白的表达均明显下调;细胞增殖能力减弱;细胞被阻滞在C0/G1期;并且细胞对顺铂的IC<,50>明显降低.结论 干扰LMP1提高了B95.8细胞对化疗药物的敏感性,揭示LMP1可能是一个潜在的药物靶点.
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鼠尾草酚抗肿瘤活性机制的研究进展
具有生物活性(尤其是已报道有减少癌症风险的作用,且不良反应较少)的植物化合物已成研究的热点.鼠尾草酚为迷迭香中的一种酚类二萜,有抗肿瘤的特性,在抗肿瘤的生化机制上已经取得了进展.动物模型和体外细胞培养的实验研究已经证实了鼠尾草酚有抑制实验诱导性的癌变并呈现有效的抗氧化、抗炎、抗增生、诱导凋亡、增强对化疗药物耐药癌细胞的敏感性、调节自噬及控制EMT的特性.文中的综述旨在阐明鼠尾草酚抗肿瘤作用的详细机制.
