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胶质瘤细胞化学增敏作用实验研究
目的:研究巯基修饰剂BSO对胶质瘤细胞株GSH含量的修饰作用及化学增敏作用.方法:利用Tietze还原酶法观察BSO对体外培养的胶质瘤细胞GSH的作用.利用MTT法观察BSO对胶质瘤细胞化学敏感性的影响.结果:经BSO作用后胶质瘤细胞的GSH含量显著下降、化学敏感性增加.结论:BSO能降低胶质瘤细胞的GSH含量,增加胶质瘤细胞对化学药物的敏感性.
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顺铂对大鼠肝细胞毒性及谷胱甘肽的保护作用
目的探讨顺铂对原代培养的大鼠肝细胞的毒性及谷胱甘肽对其影响.方法从大鼠的肝脏分离培养肝实质细胞接种于96孔培养板,培养3h后加入一系列浓度的顺铂,或在加入顺铂前16和4h,分别加入谷胱甘肽(glutathione,GSH)合成抑制剂DL-buthionine-(S,R)-sulfoximine(BSO)和GSH的前体物半胱氨酸,继续培养,分别在8,24和48 h 3个时间点用噻唑蓝(MTT)方法检测细胞存活率.结果顺铂对大鼠肝细胞有明显的毒性,在不同的时间点有各自的剂量-反应关系,顺铂对大鼠肝细胞在8,24和48 h 3个时间点半数抑制浓度(IC50)分别为1.13,0.21和0.15 mmol/L;BSO能使3组IC50均降低,分别为0.017,0.011和0.013 mmol/L,而半胱氨酸则可使3组IC50均升高,均大于5mmol/L.结论顺铂对大鼠肝细胞具有明显的毒性作用,且呈时间和剂量依赖关系;BSO可增强顺铂的肝细胞毒性,而半胱氨酸对顺铂引起的肝细胞毒性有保护作用,提示细胞内GSH对顺铂所致肝细胞毒性有保护作用.
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谷胱甘肽对顺铂所致肾小管上皮细胞毒性的保护作用
[目的] 探讨谷胱甘肽(GSH)对顺铂所致不同性别大鼠肾小管上皮细胞毒性的影响. [方法] 从不同性别的大鼠分离的肾小管上皮细胞接种于96孔培养板,培养24 h后加入一系列浓度的顺铂,或在加入顺铂前16和4 h,分别加入GSH合成抑制剂BSO和GSH合成前体物半胱氨酸,再培养24 h后用MTT方法检测细胞存活率. [结果] 顺铂对雌雄大鼠肾小管上皮细胞具有形状相似的剂量-反应关系曲线,半数抑制浓度(IC50)分别为0.178 mmol/L和0.182 mmol/L;BSO能使2组IC50均降低为0.001 mmol/L,可使剂量-反应曲线左移,而半胱氨酸则可使2组IC50均升高,均大于5 mmol/L,使剂量-反应曲线下沉. [结论] 顺铂对雌雄大鼠肾小管上皮细胞同样具有明显的毒性;BSO和半胱氨酸可分别增强和降低顺铂的毒性,间接证明细胞内GSH对顺铂所致大鼠肾小管上皮细胞毒性有保护作用,且与性别无关.
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还原型谷胱甘肽稳态在腭裂发生中的作用
目的:观察还原型谷胱甘肽稳态的改变对腭中嵴上皮细胞形态及腭裂发生率的影响,探讨氧化自由基在四氯二苯二噁英(TCDD)致畸过程中的作用.方法:将GD10 的SPF 级C57BL/6J 孕鼠随机分为4 组,TCDD 组:腹腔注射生理盐水和TCDD 灌胃;TCDD+丁硫氨酸-亚砜胺(BSO)组:腹腔注射BSO 4 h 后给予TCDD 灌胃;BSO 组:腹腔注射BSO 和玉米油灌胃;对照组:腹腔注射生理盐水和玉米油灌胃.光学显微镜和电子扫描电镜下观察胎鼠腭胚突的发育及细胞表面形态.统计各组小鼠在GD17 的腭裂发生率.免疫组织化学方法检测各组腭中嵴上皮各时期CYP1A1 蛋白的表达.采用SPSS13.0 软件包对数据进行统计分析.结果:TCDD 成功构建高致畸率的腭裂模型.BSO 增加了5％的腭裂发生率,但是相对于TCDD 组无显著差异(P＞0.05).TCDD 组腭胚突上抬时间较对照组推迟1 d,添加BSO 的 TCDD 组腭胚突上抬过程较正常组减慢.电镜下胚胎发育的各发育时期,腭中嵴上皮表面TCDD 组与对照组有显著差异.免疫组织化学检测发现,TCDD 组腭中嵴上皮可见CYP1A1 高表达.结论:扰乱体内还原型谷胱甘肽稳态,可能会减少对小鼠体内氧化自由基的消耗,从而影响腭胚突的融合,继而加速了TCDD 的毒性,影响腭裂发生.
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BSO逆转人肺腺癌细胞株多药耐药性的实验研究
目的研究谷胱甘肽(GSH)合成酶抑制剂--BSO对人肺腺癌多药耐药细胞株A549/DDP细胞内GSH含量影响;探讨BSO逆转多药耐药(MDR)作用机制及逆转效果.方法GSH还原酶循环法测定BSO对细胞内GSH含量的影响.MTT比色法测定经BSO预处理后顺氯氨铂(DDP)、阿霉素(ADM)对细胞50%抑制浓度(IC50)的影响.流式细胞仪检测BSO对MDR细胞内柔红霉素(DNR)荧光强度的影响.结果耐药细胞A549/DDP细胞内GSH含量较人肺腺癌A549细胞内GSH含量明显增高.BSO在一定浓度范围内(50～200μmol·L-1)对A549细胞和耐药细胞A549/DDP无明显细胞毒性作用(抑制率均小于10%).BSO呈剂量依赖性非线性抑制细胞内GSH的合成,其对MDR细胞内GSH合成影响较为显著,而对A549细胞内GSH合成影响较小.BSO在一定浓度范围内能降低DDP、ADM对A549/DDP细胞的IC50,而对A549细胞的I50无明显影响.A549/DDP细胞内DNR荧光强度较A549细胞显著降低,能不同程度提高A549/DDP细胞内柔红霉素荧光强度,均较未处理组显著提高;与未经BSO处理的A549细胞比较,细胞内荧光强度轻度增高,但统计学上无显著性差异.结论BSO能有效逆转A549/DDP细胞的MDR,其机制与降低MDR细胞内GSH含量有关.
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降低谷胱甘肽的水平增强硒的凋亡效应:体外研究涉及p38和JNK MAPKs
为了评价在缺乏谷胱甘肽情况下硒(Se)对凋亡的影响.用睾丸细胞作为评价细胞模型.研究时,细胞被保持在各种不同处理条件下4h,即Se(0.5 μmol和1.5 μmol)、BSO (20 nmol)、Se+ BSO联合处理(0.5 μmol Se+20 nmolBSO和1.5 μmol Se+20 nmol BSO),收集被处理过的细胞,评价指标为:细胞生存能力、还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、氧化还原率、活性氧的产生和DNA的完整性.提取JNK、p38、caspase 3和Bcl-2的mRNA进行RT-PCR分析.将对照组和处理组细胞进行比较,观察到在联合处理组伴随着GSH水平降低细胞的生存能力减弱,GSSG水平升高,活性氧(ROS)产生增加.伴随着caspase 3表达增加和Bcl-2表达减少,JNK和p38 MAPK的mRNA表达增加.联合处理组细胞的DNA完整性改变.因此,本结果和早期报道观点是一致的,即细胞内活性氧(ROS)的增加可以调节由亚硒酸钠导致的细胞凋亡和硒的细胞毒性.Se处理细胞内GSH的减少也伴随凋亡增加、p38和JNK MAPK表达增加,Bel-2表达减少,caspase-3表达增加.数据显示GSH参与睾丸细胞凋亡,GSH分子的减少在决定细胞凋亡方面起着关键的作用.
