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具有产生安莎类抗生素潜能的放线菌的分子筛选
目的 建立一种高通量筛选具有产生安莎类抗生素潜能的放线菌的分子筛选方法.原理 3-氨基-5-羟基-苯甲酸(AHBA)是安莎类抗生素生物合成的前体.在通过氨基莽草酸途径生物合成AHBA的过程中,AHBA合酶是催化5-氨基-3-脱氢-5-脱氧莽草酸形成AHBA的一个特异性关键酶.AHBA合酶基因的存在可以作为放线菌菌株具有合成安莎类抗生素能力的一个必要而非充分的条件.AHBA合酶基因高度保守,通过PCR方法可以建立一种针对AHBA合酶基因存在与否的、具有安莎类抗生素产生潜能的放线菌菌株高通量筛选方法.方法 根据已知AHBA合酶序列的相似性,设计了针对AHBA合酶基因中高度保守的一段755bp片段大小的PCR筛选寡核苷酸引物.用于从土壤中分离的未知放线菌高通量筛选.结论 从1900株土壤分离的未知放线菌中筛选获得33株AHBA合酶基因阳性菌株,即具有安莎类抗生素产生潜能的放线菌菌株.
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茅尾海红树林土壤可培养放线菌多样性及其抗尖孢镰刀菌活性分析
目的 研究茅尾海红树林植物根际土壤放线菌多样性并进行抗菌活性筛选,为发现放线菌新物种以及新农用生防菌奠定基础.方法 采用传统涂布分离方法和复合营养成分培养基,从25份红树林土壤样品中分离放线菌;通过PCR扩增菌株16SrRNA基因序列,并通过构建系统发育树研究放线菌多样性;采用纸片扩散法分析放线菌发酵液和乙酸乙酯萃取浓缩液对2种尖孢镰刀菌菌体拮抗和孢子萌发抑制活性.结果 通过排重获得117株放线菌,16S rRNA基因序列比对分析表明117株放线菌分布于6个亚目10个科19个属,除优势菌属链霉菌属外,还发现纤维微球菌属,戈登菌属,栖白蚁菌属,拟诺卡菌属和植物放线孢菌属等稀有放线菌属;尖孢镰刀菌拮抗活性试验表面,共有23株放线菌在至少1个抗菌活性检测中显示为阳性,总阳性率为19.66％.结论 广西北部湾茅尾海红树林根际土壤中存在丰富的放线菌资源,具有从中发现新物种和新型农用生防菌的潜力.
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广西北仑河口红树林植物根际土壤放线菌多样性及抗菌活性研究
目的 勘探广西北仑河口红树林植物根际土壤放线菌资源多样性并进行抗菌活性研究,为新抗生素发现提供药用放线菌资源.方法 采用5种分离培养基,以稀释涂布法分离放线菌;通过PCR扩增获得菌株16S rRNA基因并进行同源性比对,分析放线菌多样性;发酵液经乙酸乙酯萃取,菌丝经丙酮浸泡,分别获得发酵液水相、发酵液酯相和菌丝丙酮浸提液3类样品;纸片扩散法进行抗菌活性测试;PCR技术探测抗菌活性菌株是否存在PKS Ⅰ、PKS Ⅱ及NRPS生物合成基因.结果 从7份红树林植物根际土壤样品中分离纯化得到110株放线菌,分布于7个目9个科15个属,优势菌属为小单孢菌属和链霉菌属;菌株N04M112、3804M13、Z05M23和Z07M34的16S rRNA基因序列与有效发表菌株Agromyces humatus CD5T(AY618216)、Streptomyces atrovirens NRRLB-1635U(DQ026672)、Streptosporangium jomthongense 30EHST(JQ922513)和Micromonospora wenchangensis 2602GPT1-05T(JQ768361)的相似率高,分别为97.49％、98.42％、98.58％和98.54％,可能为潜在新物种;抗菌活性检测结果表明,51株放线菌中,46株有抗菌活性,总阳性率为90.20％;对这46株放线菌的抗生素生物合成基因探测发现,10株同时具有PKS Ⅰ、PKS Ⅱ及NRPS生物合成基因,42株至少含有其中1种,总阳性率91.30％.结论 广西北仑河口红树林植物根际土壤中含有较为丰富的放线菌资源,具有从中发现放线菌新物种和新抗生素的潜力.
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台湾海峡海洋沉积物放线菌的多样性
目的 探究台湾海峡海洋沉积物中放线菌的多样性及发现合成药物先导化合物的新菌源.方法 采用6种选择性培养基分离15份来自台湾海峡沉积物样品中含有的放线菌.挑选不同培养特征的放线菌进行初步分类鉴别、16S rRNA基因序列系统进化分析及基于PCR的烯二炔抗生素基因筛选.结果 共分离到497株放线菌,挑选的95株放线菌分别属于放线菌7个科,11个属.16S rRNA基因序列分析结果提示分离到的小单孢菌科菌种存在数个潜在新种,95株菌中有27％的菌株含有烯二炔抗生素核弹头的生物合成基因片段.结论 海洋环境蕴含丰富的放线菌资源,具有产生烯二炔类抗生素的潜能.
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南海红树林底泥放线菌Streptomyces sp.H41-26的抗菌化学成分研究
目的 对分离自我国南海红树林底泥的链霉菌Streptomyces sp.H41-26菌株的发酵物抗菌活性成分进行分离和鉴定.方法 对链霉菌Streptomyces sp.H41-26菌株的发酵菌丝体采用95％乙醇提取,醇提取物经乙酸乙酯萃取获得抗菌活性部位,通过ODS开放柱层析分离和反相高效液相制备纯化.结果 分离得到4个化合物,经NMR和MS等波谱学方法分别鉴定为:放线菌素D(1)、放线菌素X2(2)、放线菌素Xβ(3)和放线菌素Xa(4).结论 化合物1～4在0.1 mg/mL时,对大肠埃希菌(ATCC8739)、金黄色葡萄球菌(ATCC6538P)、伤寒沙门菌(ATCC6539)、乙型副伤寒沙门菌(50094)和乙型溶血性链球菌(ATCC32204)具有明显的抗菌活性,其中化合物2在0.01 mg/mL时,对除大肠埃希菌外的其他4种细菌抑制效果仍很明显.
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乌头不同生长期根际土壤微生物动态变化特征的研究
目的:研究不同生长期患病与健康乌头植株根际土壤微生物动态变化特征.方法:采用纯培养法测定土壤微生物的数量.结果:不同月份及不同生长状况的乌头根际土壤细菌数量具有显著性差异、且患病植株随着生长期不同呈逐渐下降趋势、健康植株则呈先降低后增强的趋势；而放线菌和真菌数量变化不显著.结论:健康与患病植株细菌数量差异较大,研究结果为乌头病害研究提供了科学参考依据.
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颌下腺放线菌肉芽肿1例
患者,男,53岁,因"发现左颈无痛性包块1+月"入院.包块在一月内由胡豆大小迅速生长为鸡蛋大小.查体示左下颌下区有一4×5×4cm3大小包块,质地较硬,活动度差,边界不清,无压痛,颌下腺开口无红肿和压痛,口底未扪及肿块,颈部未扪及淋巴结肿大.当地包块针吸活检结果为:倾向颌下腺混合瘤伴感染.入院后CT检查示左侧舌骨大角骨质毛糙,其内似有不规则低密度区,其外侧带状肌肿胀,左侧颌下腺肿大,向下与外侧颈阔肌粘连.目前仍不能明确其性质,考虑为左侧颌下腺恶性肿瘤.
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11株临床诺卡菌16SrRNA及药敏分析
目的：探讨应用11株临床诺卡菌16S rRNA序列鉴定该菌菌种名，同时观察该菌的药敏情况。方法：将11株临床分离的诺卡菌菌株分别接种于脑心浸液琼脂培养基分离培养，观察其生长情况；提取菌株DNA，聚合酶链式反应（ PCR）扩增其16S rRNA 序列，并测定其基因序列，所获序列与 GehBahk 数据库进行BLAST比对，鉴别其菌种名；采用Kirby-Bauey纸片扩散法检测11株菌株药敏情况。结果：11株临床诺卡菌在脑心浸液琼脂培养基上生长迅速；PCR扩增菌株16S rRNA基因序列经BLAST 比对，结果与GehBahk中已知的诺卡。菌同源性＞98%，分离的菌株分别为 Nocardia otitidiscaviarum 4株、Nocardia cyriacigeorgica 3株、Nocrdia wallacei1株及Nocardia farcinica3株；药敏实验结果显示11株诺卡菌均对阿米卡星敏感，对亚胺培南耐药，其中Nocardia cyriacigeorgica对氨苄西林、环丙沙星、克拉霉素及阿莫西林的药物敏感性结果与其它菌株截然不同。结论：测定16S rRNA序列能够快速、简便、准确地鉴定诺卡菌菌种，各菌株均对阿米卡星敏感，对亚胺培南耐药。
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FOC4拮抗放线菌DA07405发酵培养基的优化
目的:提高放线菌DA07405产生抗古巴尖孢镰刀菌4号小种(FOC4)活性物质的能力.方法:通过单次单因子试验比较发酵培养基中几种常用碳氮源对DA07405发酵产生抗FOC4活性物质的影响,再采用正交试验获得DA07405发酵培养基中碳氮源的佳配比组合;在优碳氮源组合前提条件下,通过单因子实验获得DA07405发酵培养基中适K2 HPO4浓度.结果:获得佳发酵培养基配方为:1.0％葡萄糖,0.5％蔗糖,0.5％玉米粉,0.75％大豆粉,0.05％ K2HP04;通过优化,DA07405发酵粗提物抑菌圈直径从15.0 mm提高到19.0 mm.结论:本研究结果为FOC4拮抗放线菌DA07405的工业化发酵生产提供了依据.
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一株放线菌发酵液的抗菌活性及稳定性研究
目的:研究放线菌菌株GYM39-2发酵液对临床常见病原性细菌及真菌的抗菌活性,同时观察温度、光照、pH值及紫外线等理化因素对发酵液稳定性的影响.方法:利用纸片扩散法测定放线菌株GYM39-2发酵液对临床病原菌的抗菌谱,观察改变温度、光照、pH及紫外线等理化因素时对发酵液的抗菌活性及稳定性的影响.结果:菌株GYM39-2对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、白念珠菌及新生隐球菌均有抗菌活性,发酵液对温度、光照的改变及紫外线的照射均有较好的稳定性,pH在5～7之间发酵液抗菌活性强.结论:菌株GYM39-2发酵液具有良好的抗菌活性及稳定性,能为相关研究提供菌株资源.
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微生物来源卤化天然产物研究进展
卤化天然产物特别是微生物来源卤化天然产物在生理和生物化学上具有重要作用,是抗生素类药物的重要来源,在控制病原微生物特别是耐药菌感染方面发挥着重要作用.本文综述了近年来发现的放线菌、真菌及其它微生物来源的卤化天然产物及其应用前景.
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放线菌16S rDNA 片段扩增方法的优化
目的：通过对放线菌PCR扩增方法的综合改进，找到某些用常规手段难扩增的放线菌16S rDNA的佳PCR扩增条件。方法（1）提取放线菌基因组DNA并对其进行PCR扩增以找到适退火温度；（2）改变PCR反应体系中模板DNA和Mg2＋的浓度；（3）在反应体系中加入适量的二甲基亚砜。结果在25μL的PCR反应体系中，模板DNA浓度为10×、加入0．5μL的Mg2＋和5％的二甲基亚枫、退火温度为59℃时对放线菌16S rDNA扩增效果为理想。结论本实验研究出一种扩增放线菌16S rDNA的优化条件，为今后大批量的放线菌的分子生物学研究提供了更加高效、方便、快捷、经济的实验方法。
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1例急性化脓性泪小管炎患儿的护理
急性泪小管炎为泪小管的慢性炎症,临床上少见,可以单独发炎,也可以同时伴有泪囊炎.泪小管炎可以由结膜炎蔓延而来,也可以由泪囊炎上行感染造成.临床上分为化脓性、沙眼性、结核性、真菌性和放线菌性泪小管炎等.如果不及时治疗会并发其他眼组织的感染,影响视力,降低生活质量.2007年6月我院门诊收治了1例急性化脓性泪小管患儿,经积极的治疗和耐心细致的护理,得到了良好的治疗效果,未发生其它并发症.现将护理体会报告如下.
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抗菌药物的作用机制
抗菌药物一般是指由真菌、细菌、放线菌等微生物经培养所生产的抗生素及人工半合成或全合成的类似或相同的一类药物的总称.临床应用非常广泛,抗菌药物的合理使用,可预防药源性疾病、减少不良反应、提高疗效并用于降低医疗成本.
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天蓝色链霉菌-研究放线菌分裂发育的模式菌
细菌生长主要通过细胞伸长和分裂的不断循环过程来实现的。由于抗生素可以抑制细菌的生长，因此在医学上主要使用抗生素来治疗传染性疾病。不同的抗生素能够抑制不同的细胞生长进程。例如，β-内酰胺类抗生素可以抑制细菌细胞壁中肽聚糖的合成。临床医学上使用的抗生素主要是链霉菌的天然产物。链霉菌是一类生长于土壤中的放线菌，具有高分化能力，其孢子不能运动。尽管链霉菌的许多生物学特征与临床上的病原菌结核分支杆菌非常相似，但是链霉菌属有一个主要代谢特征，那就是它能够产抗生素。截止目前，尽管人类在链霉菌中尚未发现抑制细菌分裂的抗生素，但是一些其他生物的天然产物以及人工化学合成的化合物均可以抑制细菌分裂过程中重要蛋白分子FtsZ的聚合。该综述将围绕链霉菌的模式菌—天蓝色链霉菌来阐述放线菌的分裂方式，终阐明调控细菌分裂特异蛋白的生物学功能以及对它们作为新抗生素药物靶位点的价值。
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注射用磷霉素钠中磷霉素钠二醇物含量测定方法的研究
目的:建立液相色谱串联质谱法和高效液相色谱-示差折光法测定注射用磷霉素钠中的磷霉素钠二醇物含量,并与现行中国药典方法比较,提高对药品的质量控制.方法:液相色谱串联质谱法采用Promosil CN(250 mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为5 mmol·L-1醋酸铵-甲醇(82:18),采用(-)ESI电离源,多反应监测(MRM)扫描方式,用于定量分析的离子分别为m/z 154.9→80.9(磷霉素二醇物)和m/z 120.9 →77.1(内标苯甲酸).高效液相色谱-示差折光法采用Agilent Zorbax NH2(250 mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为10.89 g·L-1磷酸二氢钾溶液,流速为1.0 mL·min-1；柱温36℃；检测器温度为35℃.结果:采用液相色谱串联质谱法,二醇物在22.46～359.4 ng·mL-1范围内线性关系良好,定量限为4.492 ng·mL-1,每一样品的分析时间为5min.采用高效液相色谱-示差折光法,二醇物在0.104～5.205 mg·mL-1浓度范围内线性关系良好,精密度为0.7％,重复性良好.结论:本研究2种方法专属性高、简便、可靠,可用于注射用磷霉素钠的质量研究和质量控制.
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剖宫产术后复杂性腹腔感染合并苏黎世放线菌感染一例
近年来二胎政策开放,高危妊娠增多,剖宫产率增加,剖宫产并发症也有所上升,子宫切口感染导致切口愈合不良是剖宫产术后严重并发症之一,感染严重者可导致宫腔感染,晚期产后出血,甚至腹腔感染,合并放线菌感染罕见.现报道1例剖宫产术后子宫切口愈合不良放线菌感染,并复习文献探讨剖宫产术后复杂性腹腔感染诊断及治疗原则.
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肿瘤粪菌疗法
人类肠道含有丰富的细菌，其数量是人体细胞数量的10倍，从上往下细菌越来越多：十二指肠102~103/ml，空肠103~105/ml，回肠105~107/ml，大肠1010~1012/ml。肠道菌群（gut microbiota）的重量约占人体体重的2磅左右，其基因量约3百万个基因，是人体基因量的100倍。肠道菌群的细菌组成，在门级（phylum level）水平上，厚壁菌门（Firmicutes）及拟杆菌门（Bacteriodetes）约占90%，其余为蓝藻细菌（Cyanobacteria），变形菌门（Proteobacteria），放线菌（Actinobacteria），梭菌属（Fusobacteria）及疣微菌门（Verrumicrobioa?phyla）。经过5亿年的进化，这些微生物与宿主已经形成了一个命运共同体，成为宿主的另外一个重要器官，这些共生菌群（commensal microbi-ota）通过生物活性分子与宿主交流，影响宿主的多种免疫及非免疫功能[1]，见图1。
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乡镇卫生院抗菌药物临床应用规范化管理初探
具有杀菌或抑菌活性的药物一般统称为抗菌药物，具体包括各种抗生素、磺胺类、咪唑类、硝基咪唑类、喹诺酮类等化学合成药物。是通过细菌、放线菌、真菌等微生物经培养而得到的某些产物，或者是用化学半合成法制造的相同或类似的物质，也可化学直接合成。
