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稳心颗粒对大鼠心室肌细胞L型钙电流的影响
目的 研究步长稳心颗粒对大鼠心室肌细胞L型钙电流((L-type calcium current,Icа-L)动力学特性的影响.方法 以酶解法分离获得单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术,研究1 g/L、5 g/L、10 g/L稳心颗粒对Ica-L的影响.结果 1 g/L、5 g/L、10 g/L的稳心颗呈浓度依赖性地抑制Ica-L,对其峰电流的的抑制率分别为29.3%±4.8%、45.8%±5.3%、72.6%±4.1%.10 g/L的稳心颗粒使Ica-L电流电压曲线上移,激活曲线右移,并延长失活后恢复时间.结论 稳心颗粒对大鼠心室肌细胞Ica-L具有浓度依赖性的抑制效应,与其抗心律失常效应有关.
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镁通过L型钙通道α1C和β3亚基抑制高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化
目的：探讨L型钙通道（L?type calcium channel ，LTCC）α1C、β3亚基在镁抑制高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）钙化中的作用。方法体外原代培养大鼠胸主动脉VSMC和血管环，用β?甘油磷酸盐（β?glycerophosphate ，β?GP）诱导钙化。将细胞、血管环分别分为4组培养7 d：正常对照组、高磷组（10 mmol/Lβ?GP）、镁干扰组（10 mmol/Lβ?GP+3 mmol/L MgSO4）、镁通道抑制剂（2?APB）组（10 mmol/Lβ?GP+3 mmol/L MgSO4+0.1 mmol/L 2?APB）。采用茜素红染色、硝酸银染色分别检测各组VSMC、血管环的钙盐沉积情况，且用邻甲酚酞络合酮比色法检测钙含量。反转录PCR、Western印迹检测VSMC中LTCCα1C、β3亚基，Runx2的基因和蛋白表达。免疫组织化检测各组血管环中Runx2蛋白表达。ELISA测定VSMC碱性磷酸酶（ALP）活性，荧光探针法测定细胞内钙离子浓度。结果与正常对照组比较，高磷组VSMC钙含量，ALP活性，LTCCα1C、LTCCβ3和Runx2 mRNA和蛋白的表达，胞内钙离子浓度均增加（均P＜0.05）；与高磷组比较，镁干扰组VSMC钙含量，ALP活性，LTCCα1C、LTCCβ3和Runx2 mRNA和蛋白的表达，钙离子浓度均降低（均P＜0.05）。镁干扰组血管环组织钙含量和Runx2蛋白表达均低于高磷组（均P＜0.05）。镁通道抑制剂组以上各项目与高磷组比较差异均无统计学意义。结论镁可以抑制高磷诱导的大鼠血管钙化，其可能是通过抑制LTCCα1C和β3亚基表达，阻滞VSMC钙离子内流，降低Runx2的表达，从而抑制VSMC发生表型转化实现的。
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阻断T型钙通道可减轻早期糖尿病大鼠的蛋白尿和肾脏病理改变
目的探讨T型钙通道在实验性糖尿病肾病中的作用.方法采用单侧肾切除(UNx)的糖尿病大鼠模型,分别每日灌胃给予T型钙通道阻滞剂米贝地尔(Mib)、L型钙通道阻滞剂氨氯地平(Aml)、血管紧张素转换酶抑制剂西拉普利(Cil)、及Mib与Cil合用(M+C),共4周,并使各药物处理组血压相近(每组n=6～8).结果 Mib、Cil和M+C治疗组较未治疗的糖尿病(DM)组尿白蛋白量明显减少(Mib:7.69±1.87,Cil:5.53±1.45,M+C:3.87±0.88比DM:17.67±4.90,单位为μg/24 h;P＜0.05),增高的Ccr下降.病理学检查显示Mib、Cil与M+C组肾小球Ⅳ型胶原、层粘连蛋白显著少于DM.Aml对尿白蛋白量、肾小球基质和Ⅳ型胶原量无明显改善作用,但也可减少尿蛋白、Ccr和肾小球层粘连蛋白含量.M+C治疗组的肾小球基质和Ⅳ型胶原量在各糖尿病大鼠中低(均P＜0.05).结论阻断T型钙通道可减轻糖尿病大鼠的蛋白尿和肾小球基质沉积,与ACE抑制剂合用有额外的保护效应,提示T型钙通道在糖尿病肾病中的作用不同于血管紧张素和L型钙通道,其机制有待进一步研究.
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甘草次酸对豚鼠心室肌单个细胞L型钙通道的影响
目的研究甘草次酸对豚鼠心室肌单个细胞L型钙通道的影响.方法应用全细胞膜片钳技术观察甘草次酸对豚鼠心室肌单个细胞L型通道的影响.结果 10-6mmol@L-1甘草次酸灌注豚鼠心室肌细胞后可使L型钙通道电流(ICa-L)峰值增加22.51%(P＜0.05);各药物的I-V关系曲线虽有相应的下降,但其峰值电压不变.结论甘草次酸可增加ICa-L,使心肌细胞内钙浓度增加.
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产前应激对子代大鼠海马CA3区神经元高电压激活Ca2+通道动力学特征的影响
目的 探讨产前应激对子代大鼠海马CA3神经元高电压激活(HVA)钙通道动力学特征的影响.方法 给予孕鼠束缚应激,急性分离子代海马CA3神经元,应用全细胞膜片钳技术,研究产前应激对子代大鼠海马CA3区神经元高电压激活Ca2+通道的影响.结果 产前应激增加了子代海马CA3神经元高电压激活钙电流幅值、电流面积,而未改变其电导-电压关系、稳态失活动力学、时间到峰等指标.对照组和产前应激组子代海马CA3神经元高电压激活大钙电流幅值分别为(-40.89±0.31)pA/pF和(-49.44±0.37)pA/pF(P＜0.01).大电流面积分别为(106.81±4.20)nA*ms和(133.49±2.59)nA*ms(P＜0.01).结论 在胎儿发育的关键时期,给予母体应激,对子代海马神经元离子通道产生持续的影响.
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新型重组海葵毒素hk2a对大鼠心室肌细胞离子通道的影响
目的观察新型基因重组海葵毒素rhk2a对大鼠心室肌细胞离子通道的影响.方法采用全细胞膜片钳技术分别记录rhk2a对大鼠心室肌细胞钠电流、L型钙电流和钠-钙交换电流的影响.结果与对照组相比,新型重组海葵毒素rhk2a能够明显减慢大鼠心室肌细胞钠通道的时间依赖性失活(Th)(14.15±4.6 ms vs 2.03±0.30ms,P<0.05),而rhk2a对大鼠心室肌细胞钙通道电流(-8.86±0.35 PA/PF vs-8.99±0.64 PA/PF,P>0.05)和钠-钙交换电流(-0.65±0.2 PA/PF vs-0.69±0.15 PA/PF,P＞0.05)无明显直接作用.结论 rhk2a对大鼠心室肌细胞钠通道的时间依赖性失活的减慢是rhk2a对心脏具有正性肌力效应的重要机制.
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血管内皮细胞上钙通道与氯通道功能研究进展
血管内皮细胞属于非兴奋性细胞,覆于血管腔内表面,其胞浆膜富含离子通道,构成其独特的信号传导功能的物质基础,本文综述了近年来有关内皮细胞上钙离子和氯离子通道在内皮细胞功能中的角色的研究,以期能够进一步探讨心血管疾病与离子通道功能异常之间的关系.
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胆汁酸与钙池操作性钙通道关系的研究进展
胆汁淤积在肝脏损害的病理过程中起重要作用,并可能导致原发性硬化和肝功能衰竭,淤胆胆汁酸可诱导肝细胞凋亡和坏死,但它可以通过利胆胆汁酸的药理作用得以缓解,这些作用的实施需要肝细胞内钙库中Ca2+释放的改变和Ca2+内流.而钙池操纵的钙通道系存在于细胞膜表面的一种新发现的钙通道,它是非兴奋性细胞Ca2+内流的主要通道,然而Ca2+内流通道性质的影响因素仍未明了,本文综述了胆汁酸调控SOC的机制及对基质相互作用分子(STIM1)的影响.
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白藜芦醇抗喘活性及机制研究
目的 观察白藜芦醇对豚鼠在体和离体气管平滑肌的松弛作用,并探讨其作用机制.方法 建立豚鼠哮喘模型,采用豚鼠离体气管条法,观察白藜芦醇对豚鼠气管平滑肌的舒张作用.结果 白藜芦醇可显著延长豚鼠引喘潜伏期,对乙酰胆碱、氯化钾、组胺诱发的气管收缩有明显的舒张作用；吲哚美辛和格列本脲预孵育明显减少了白藜芦醇对离体气管条的舒张作用.结论 白藜芦醇具有平喘和明显的舒张气管平滑肌的作用,其机制可能与钙拮抗、促进前列腺素合成和激活ATP敏感性钾离子通道有关.
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细辛配伍附子含药血清对大鼠心室肌细胞L型钙通道的影响
【目的】观察细辛和细辛配伍附子含药血清对大鼠心室肌细胞L型钙通道的影响，探讨其抗心律失常的作用机制。【方法】连续给药7d后制备大鼠含药血清，采用急性酶解法获得单个大鼠心室肌细胞，应用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞L型钙通道电流。【结果】细辛和细辛配伍附子含药血清均能增加大鼠心室肌L型钙通道电流，在0 mV钳制电压下，细辛含药血清使电流增加约（28.36±0.37）%，细辛配伍附子含药血清使电流增加（75.07±0.28）%。细辛含药血清使激活曲线、失活曲线左移，对恢复曲线无明显作用；细辛配伍附子含药血清使激活曲线、失活曲线左移，使失活后恢复时间延长。【结论】细辛配伍附子较单味细辛含药血清对心肌细胞L型钙通道的激活作用更强，表明药物配伍可增加疗效。
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补阳还五汤对全脑缺血模型大鼠恢复脑血流灌注后的皮层神经元钙信号的影响
[目的]观察补阳还五汤预干预对全脑缺血大鼠皮层神经元L型Ca2+通道的影响,探讨Ca2+信号异常参与缺血性神经元损伤的机制及补阳还五汤抗脑缺血的分子机制.[方法]72只SD大鼠随机分为12组,即假手术组(2组)、模型组和补阳还五汤组(此2组各分为缺血再灌注后2、12、24、48、72 h5个时间点组);补阳还五汤各组按0.64 g/kg剂量灌胃,每天2次,连续5 d.除假手术组外,各组均参照改良的Pulsinelli4血管闭塞法复制全脑缺血大鼠模型,缺血后的大鼠分别在存活2、12、24、48、72 h后进行皮层神经细胞急性分离,单通道电流经EPC-9膜片钳放大器放大,采用Pulse&Pulsefit采集入计算机,检测各组大鼠血流再灌注后不同时间点的L型Ca2+通道的平均开放时间和开放概率.[结果]模型大鼠皮层神经元L型Ca2+通道因缺血激活而开放,其开放时间在再灌后各时间点均比假手术组延长,开放概率分别在再灌注2 h和24h时出现高峰;而补阳还五汤组的皮层神经元L型Ca2+通道的开放时间在再灌72 h时比模型组降低(P＜0.01),其开放概率在模型组出现第1个高峰时(再灌2 h)被显著性地降低至与假手术组相仿水平(与模型组比较P＜0.01,与假手术组比较P＞0.05).[结论]补阳还五汤在缺血再灌早期(再灌2 h),主要通过降低L型Ca2+通道开放概率,即影响L型Ca2+通道的可利用性以减少Ca2+内流.而在缺血再灌后期(再灌72 h),主要通过降低L型Ca2+通道开放时间,即影响L型Ca2+通道开放特性以减少Ca2+内流.
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大鼠心室肌细胞的分离及其钙电流的观察
目的:探讨大鼠心肌细胞酶急性分离的方法,并观察大鼠心室肌细胞膜钙电流.方法:采用Langendorff灌流装置,用含胶原酶P(0.12g/L)的台式液,经主动脉逆行灌流心脏,分离心肌细胞;采用膜片钳全细胞记录的方法,观察记录大鼠心室肌细胞膜L-型钙电流.结果:心肌细胞的存活率约70% ～ 80%,形态呈长杆状,横纹清晰,膜良好.膜片钳全细胞记录出电压依赖性内向电流,其激活电位-30 mV,大激活电位0 mV,反转电位50 mV,并且此内向电流可被钙通道阻滞剂维拉帕米抑制.结论:用此法可分离出高存活率的心肌细胞,并具有正常的电生理特性.
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氟哌啶醇季铵盐衍生物F2对大鼠胸主动脉螺旋肌条收缩的影响
目的:观察氟哌啶醇季铵盐衍生物F2对KCl所致大鼠胸主动脉螺旋肌条收缩的影响,并初步探讨其作用机制.方法:采用生物检定法,以大鼠胸主动脉螺旋条为标本,观察F2(2×10-6、6.32×10-6、2×10-5mol/L)对KCl(10 ～ 40mmol/L)诱导的肌条收缩的拮抗作用;F2(10-4mol/L)对30、80mmol/L KCl所致收缩的拮抗作用,和格列苯脲(10-6 ～ 10-4mol/L)对F2作用的影响.结果:F2对KCl所致肌条收缩呈非竞争性拮抗,其拮抗作用呈量效关系,pD2=5.13±0.33.F2(10-4mol/L)可拮抗80mmol/L的KCl所致的肌条收缩.10-6 ～ 10-4mol/L的格列苯脲不能阻断10-4mol/L的F2对30mmol/L KCl所致收缩的舒张效应.结论:F2呈非竞争性拮抗KCl所致大鼠主动脉螺旋肌条收缩.结合相关实验结果,F2的拮抗作用可能与阻断血管平滑肌钙通道和开启钾通道有关,但这种钾通道不是ATP敏感性钾通道.
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人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞Ca2+通道的电生理特性
目的研究人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞L型Ca2+通道的特性及其激动剂BayK 8644对通道的影响.方法培养SK-N-SH细胞,用膜片钳细胞贴附式技术记录和研究L型Ca2+通道的特性.结果SK-N-SH细胞L型Ca2+通道电导为(27.8±2.56)pS,平均开放时间为(0.65±0.08)ms,平均关闭时间的短关闭时间常数(0.53±0.05)ms,长关闭时间常数(6.02±3.46)ms.Bay K 8644使Ca2+通道平均开放时间延长(P＜0.05),但不影响其电导(P＞0.05).结论人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞上存在L型Ca2+通道,与其他神经元上L型Ca2+通道特性相近.
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新α1受体阻断剂--多沙唑嗪(Doxazosine)的药理及临床(一)
抗高血压药种类很多,但因需长期服用必须副作用少,符合这条件的,现认为主要是钙通道阻断剂、血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)或受体阻滞剂及α1肾上腺素能受体阻断剂.在后者中近日出现了多沙唑嗪(Doxazosine,DXZ),除降血压外,还可治疗前列腺肥大,对血脂及血糖代谢均有良好影响.国外已有数篇综述[1,2],国外亦已有制剂,国内正在仿制,值得介绍.
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阿米洛利对心肌自律性的影响及其机制
目的:研究阿米洛利(amiloride)对心肌自律性的作用及其电生理机制.方法:用培养乳鼠心肌细胞观察阿米洛利对心肌细胞搏动频率的影响;用标准微电极技术记录阿米洛利对家兔窦房结动作电位的作用;用膜片钳技术记录电压依赖性的钙通道电流.结果:100μmol/L阿米洛利可使培养心肌细胞收缩频率减慢;100μmol/L阿米洛利还可降低窦房结起搏细胞大除极化速率,使静息电位轻度正移.阿米洛利在10～100μmol/L范围内抑制L型及T型钙通道电流.结论:阿米洛利可抑制心肌L、T型钙通道电流,抑制窦房结自动除极过程,降低心肌细胞自律性来发挥抗心律失常的作用.
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三七皂苷单体对高血压病人血小板功能的影响
目的:以硝苯地平及1{β[3-4-甲基苯丙氧基-甲氧苯]-1-H-盐酸咪唑}(SK&F96365)为对照,探讨三七皂苷单体人参皂苷-2A对血小板聚集功能的作用.方法:肘静脉采高血压病人血标本30份,正常人血标本30份,常规制备富含血小板血浆,分别用不同浓度的硝苯地平、SK&F96365、人参皂苷-2A孵育,以2 μmol/L二磷腺苷为诱聚药,连续5次测定5分钟血小板的聚集率,以血小板大聚集率(maximal platelet aggregauon,PAG…)为观察指标.结果:①高血压病人PAGmax为0.89±0.06,与正常人PAGmax0.68±0.07比较,差异有统计学意义(P＜0.01);②两种浓度(10 μmol/L、20 μmol/L)的硝笨地平对正常人和高血压病人PAGmax均无影响;③4种浓度(2.5μmol/L、5 μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)的SK&F96365对高血压病组的PAGmax均有抑制作用(均为P＜0.05);④4种浓度(2.5 μmol/L、5μmol/L、10 μmol/L、20μmol/L)的人参皂苷-2A对高血压病组的PAGmax均有抑制作用(均为P＜0.05);3种浓度(5μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L)的人参皂苷-2A对正常组的PAGmax均有抑制作用(均为P＜0.05).结论:高血压病人血小板聚集功能明显高于正常人,血小板呈高反应状态,是血栓形成的重要因素之一;硝苯地平不能抑制血小板聚集;SK&F96365能抑制血小板的聚集功能;人参皂苷-2A能抑制血小板的聚集,有明确的抗血小板作用.
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四氢小蘖碱对豚鼠心肌细胞钙通道的影响
目的探讨四氢小蘖碱(THB)对豚鼠单个心肌细胞钙通道的作用.方法利用膜片钳全细胞记录方法检测四氢小蘖碱对豚鼠心肌细胞钙离子电流峰值的变化.结果当钳制电位为-40mv ,去极化至0mv,保持时间为250ms,THB1 μmol·L-1和10μmol·L-1使心肌细胞钙电流峰值分别从(300.75±54.69)PA和(420.45±94.45)PA降至(176.75±27.16 )和(155.58±82.23)PA(P<0.01),其下降百分率分别为41.23%和63.02%,给药前后钙电流(Ica)的翻转电位不变,其大激活电位为0mv,给药后经台氏液冲洗,Ica峰值逐渐恢复.结论 THB对心肌细胞钙通道具有阻滞作用,并呈浓度依赖性.
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5-羟色胺对人胎盘滋养细胞L-型钙通道的影响
目的 探讨5-羟色胺对胎盘滋养细胞钙通道的影响.方法 将体外培养的胎盘滋养细胞分为对照组和低(1.0μmol/L)、高(10.0μmol/L)浓度5-羟色胺组.采用全细胞膜片钳实验方法,在待测胎盘滋养细胞外液中分别加入Nimodpine(10μmol/L)、Fhnarizne(10μmol/L)和替曲朵辛(TTX10μmol/L),进行电流检测;同样的实验条件和方法,在待测胎盘滋养细胞外液中分别加入5-TH(1μmol/L和10μmol/L),测试电流值;在细胞外液中分别加入5-TH(1μmol/L)和Nimodpine(10μmol/L)、5-TH(10μmol/L)和Nimodpine(10μmol/L)后再检测电流.结果 胎盘滋养细胞L-型钙通道开放在-60-50mV之间,大峰值电流在-40-30mV为82.31±6.46(pA).加入Nimodpine(101μmol/L),可阻断此电流大部分成份.Flunarizne(10μmol/L)和TTX((10μmol/L)不能抑制该电流成份.加入5-TH(1μmol/L和10μmol/L)峰值电流明分别为104.77±10.84(pA)和117.16±9.67(pA),与对照组相比有显著差异(P<0.05);加入5-TH(1μmol/L) Nimodpine(10μmol/L)、5-TH(10μmol/L)和Nimodpine(10μmol/L)后,峰值电流分别为85.35±6.54(pA)、89.42±7.62(pA),与对照组相比无显著差异(P>0.05).结论 5-TH可激动胎盘滋养细胞L-型钙通道,促使钙电流值增加.
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钙通道开放和肾上腺素受体兴奋对La3+跨豚鼠心肌细胞膜行为的影响
目的:研究钙通道开放和肾上腺素受体兴奋对稀土La3+跨豚鼠心肌细胞膜行为的影响.方法:使用Fura-2荧光探针方法,测量340 nm/380 nm的荧光强度比的变化,检测La3+的跨膜行为.结果:豚鼠心肌细胞在细胞外La3+浓度为0.01～0.1 mmol/L时,使用钙通道激动剂Bay K8644、高钾KCl(35 mmol/L)使膜去极化打开电压依赖性钙通道,La3+不能跨膜进入心肌细胞内.使用肾上腺素、异丙肾上腺素兴奋肾上腺素受体亦不能使La3+跨膜进入心肌细胞内.结论:开放电压依赖性钙通道和兴奋肾上腺素受体不能促进La3+跨膜进入豚鼠心肌细胞内.
