首页 > 文献资料
-
地龙和水蛭复方制剂干预后大鼠脑缺血耐受和基质金属蛋白酶9的表达
目的:观察地龙和水蛭复方制剂对缺血预处理诱导的脑缺血耐受的干预作用及对基质金属蛋白酶9表达的影响.方法:于2004-09/2005-02在四川大学华西医院外科实验室完成动物实验部分;于2005-03/05在华西医院移植免疫中心完成图像采集和分析部分.①选用健康雄性SD大鼠48只.随机分为3组:假手术组、预缺血组、预缺血+地龙和水蛭复方制剂组,每组16只.采用二次线栓法制备大鼠脑缺血耐受模型.预缺血+地龙和水蛭复方制剂组:缺血预处理10 min,腹腔注射地龙和水蛭复方制剂(主要成分为地龙、水蛭,含生药1 g,由牡丹江友搏药业有限责任公司提供,2 mL/支,批号:040413-1)10 mL/(kg·d),连续3 d,3 d后给予2 h大脑中动脉阻塞,再灌22 h后处死大鼠;预缺血组:不给药,余处理同预缺血+地龙和水蛭复方制剂组;假手术组:仅暴露解剖结构,不予10 min缺血预处理,余同预缺血组.②各组取8只大鼠于术后清醒2 h进行神经功能评分(0～4分,0分为无神经系统功能缺失;4分为不能自发行走,意识丧失).③每组随机取5只大鼠,取脑,计算脑含水量[(湿重-干重)/湿重×100%].④每组随机取5只大鼠,取脑,制切成.计算脑梗死体积(mm3)(各层梗死面积之和×层间隔).⑤采用免疫组化染色和图像分析比较各组基质金属蛋白酶9蛋白表达.⑥计量资料差异比较采用方差分析.结果:预缺血组和预缺血+地龙和水蛭复方制剂组术后各死亡1只,剔除后随机补充,终有48只大鼠进入结果分析.①神经功能评分和脑含水量:预缺血组和预缺血+地龙和水蛭复方制剂组大鼠两项指标均明显低于假手术组[神经功能评分:(2.01±0.21),(1.76±.36),(2.31±0.68)分;脑含水量:(82.01±0.83)%,(78.92±0.76)%,(85.23±1.08)%,P＜0.05].预缺血+地龙和水蛭复方制剂组明显低于预缺血组(P＜0.05).②脑梗死体积和基质金属蛋白酶9蛋白表达:预缺血组和预缺血+地龙和水蛭复方制剂组明显低于假手术组[脑梗死体积:(142.79±17.84),(103.00±12.46),(198.32±19.56)mm3;基质金属蛋白酶9蛋白表达:12 473 18±398.47,9 185.00±176.32,15 687.21±259.49,P＜0.05].预缺血+地龙和水蛭复方制剂组明显低于预缺血组(P＜0.05).结论:缺血预处理可诱导脑缺血耐受作用,基质金属蛋白酶9表达降低是其机制之一;地龙和水蛭复方制剂可进一步下调基质金属蛋白酶9表达,与缺血预处理具有协同作用,减轻再缺血后脑损伤.
-
补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血损伤的长期保护作用
目的:观察补阳还五汤对大鼠脑缺血损伤后感觉运动功能和脑损伤的长期影响.方法:实验于2005-06/08在浙江中医学院实验动物中心完成.①取33只健康雄性SD大鼠,随机分为3组:补阳还五汤组(n=12)、缺血组(n=11)和假手术组(n=10).前2组采用线栓法诱导大鼠大脑中动脉阻塞模型;假手术组只分离血管,不插栓线.补阳还五汤组:从缺血前7天开始按13.3 g/kg剂量灌服补阳还五汤水煎剂(补阳还五汤处方来源于<医林改错>,成分:黄芪120 g,当归6 g,川芎4.5 g,赤芍4.5 g,地龙3 g,红花3 g,桃仁3 g,药材购自浙江中医学院附属门诊部并经鉴定,煎2次,40 min/次,合并后浓缩为含生药2 g/mL),持续到缺血后14 d,1次/d;其余各组同时灌等量生理盐水,干预时间同补阳还五汤组.②通过肢体放置实验[包括7个步骤.评分标准:正常,2分;延迟(2 s)和/或不完全,1分;不反应,0分]在缺血后1～7,10,14,21和28 d评价前后肢对触觉和本体感觉的反应.通过横木行走实验(用噪音刺激大鼠跨过横木.评分标准:大鼠不能呆在横木上,0分;大鼠能呆在横木上但不动,1分;大鼠试图跨过横木但摔下,2分;大鼠跨过横木,但损伤的后肢滑落次数超过50%,3分;超过1次但不到50%,4分;仅滑落1次,5分;顺利通过,6分)评价运动的协调和整合缺损.通过黏胶揭除实验(评分标准:1分为≤10 s;2分为10～19 s;3分为20～29 s;4分为30～39 s;5分为40～49 s;6分为50～59 s;7分为≥60s)评价躯体感觉功能.2块同面积的医用胶布分别贴在两前肢腕部腹侧面作为触觉刺激,记录大鼠揭除胶布的潜伏期.③缺血后第29天处死大鼠,取脑,冠状冰冻切片,采用甲苯胺蓝染色测定梗死体积.④肢体放置和横木行走实验结果差异比较采用非参数Mann-Whitney U检验,黏胶揭除实验结果和梗死体积差异比较采用单因素方差分析.结果:大鼠33只均进入结果分析.①肢体放置实验评分:缺血后1～10,14,21,28 d缺血组明显低于假手术组(u=0～9,P＜0.01).补阳还五汤组大鼠在缺血后1～7,10,14 d明显高于缺血组(u=4.5～35,P＜0.05～0.01).②横木行走实验评分:缺血后1～7 d缺血组明显低于假手术组(u=0～10,P＜0.05～0.01).缺血后1～3 d补阳还五汤组明显高于缺血组(u=26.5～31,P＜0.05).③黏胶揭除实验评分:缺血后1,7,14,21,28 d缺血组明显高于假手术组(t=2.56～21.91,P＜0.05～0.01).缺血后1,7,14,21 d补阳还五汤组明显低于缺血组(t=2.36～3.88,P＜0.05～0.01).④脑梗死体积:缺血后29 d,补阳还五汤组明显小于缺血组[(95±25),(123±22)mm3,t=2.75,P＜0.05].结论:补阳还五汤能显著改善脑缺血大鼠长期感觉运动功能,减轻脑损伤.
-
乌龙丹对大鼠局灶性脑缺血神经元凋亡及其相关基因表达的影响
目的:观察乌龙丹对大鼠局灶性脑缺血神经元损害病理过程的保护作用,并分析其作用途径.方法:实验于2004-09/2005-10在南方医科大学中医药学院实验室完成.①选用Wistar大鼠30只,3～4月龄,体质量(250±20)g.按随机抽签法将大鼠分为5组(每组6只):假手术组:只做开颅术,不结扎血管;模型组和乌龙丹低、中、高剂量组:造成局灶性脑缺血模型.乌龙丹低、中、高剂量组:造模前灌胃乌龙丹流浸膏[乌龙丹由生黄芪、葛根、制首乌、川芎、丹参、地龙、全蝎、制僵蚕、水蛭、生晒参、石菖蒲、女贞子、白术、当归组成,由南方医科大学南方医院中药房提供,加工为流浸膏(含生药2.5g/mL)]1,2,4 mL,给药7 d;假手术组:术前灌胃2 mL生理盐水,干预7 d;模型组:造模前灌胃2 mL生理盐水,干预7 d.②于末次给药后2 h造模:结扎右侧颈总动脉,夹闭左侧颈总动脉1 h后放开;阻断大脑中动脉造成局灶性脑缺血模型.③大鼠造模24 h后,剥取脑组织,冠状连续切片.在JEM1200-EX透射电镜下观察脑组织的超微结构.采用原位末端标记法,按试剂盒说明书方法操作,应用图形分析仪系统,计算原位末端标记法染色阳性细胞数(细胞凋亡数).采用免疫组化法,按试剂盒说明书方法操作检测Bcl-2与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达情况.④组间计量资料差异比较采用单因素方差分析,结果:Wistar大鼠30只均进入结果分析.①假手术组:神经细胞形态正常.模型组:神经细胞有明显病理改变,神经元肿胀或浓缩,有凋亡细胞表现.乌龙丹3个剂量组:多数细神经细胞胞保存完好,神经细胞基本形态结构完整,与假手术组相似.②模型组脑组织原位末端标记法染色阳性细胞、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3免疫反应阳性细胞数明显多于其他4组(P＜0.05),Bcl-2免疫反应阳性细胞数明显少于其他4组(P＜0.05).乌龙丹低、中、高剂量组神经细胞凋亡情况与相关基因表达与假手术组相近.结论:乌龙丹具有减轻局灶性脑缺血神经细胞结构的病理损伤,对抗细胞凋亡的神经保护作用,该作用发挥可能与乌龙丹影响脑缺血后Bcl-2,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3基因表达有关.
-
丹皮酚对大鼠脑缺血再灌注后细胞间黏附分子-1表达的影响
目的:观察丹皮酚对大鼠脑缺血再灌注后细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)蛋白表达的影响.方法:利用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血2 h再灌注24 h模型,治疗组缺血时腹腔注射丹皮酚.行苏木精-伊红染色计数缺血区中性粒细胞浸润及坏死神经元的数目,应用免疫组化方法检测ICAM-1蛋白的表达情况.结果:丹皮酚治疗组坏死神经元百分率[(25.85±3.93)%]低于对照组[(31.13±4.58)%,t=2.770,P＜0.05].中性粒细胞的浸润数治疗组[(15.40±2.59)个/视野]较对照组[(19.10±2.81)个/视野]显著减少(t=3.063,P＜0.01).ICAM-1的表达治疗组[(13.90±2.18)条/视野]较对照组[(16.20±2.30)条/视野]下调(t=2.290,P＜0.05).结论:丹皮酚可能具有抑制大鼠脑缺血再灌注后ICAM-1蛋白表达的作用,从而减轻了神经元损伤.
-
经颅多普勒监测评估疏血通对急性缺血性脑卒中患者颅内微栓子的干预作用
目的:通过经颅多普勒(TCD)自动监测微栓子信号(micro embolic signal,MES),研究疏血通注射液对急性缺血性脑卒中患者颅内微栓子的干预作用.方法:入院即时予德国DWL-Embo-dop型TCD监测MES,并对MES自动分析与计数,分为阳性、阴性两大组,两组再各随机分为常规治疗组、疏血通注射液治疗组,并分别于第2,5,7,10,15,20天监测TCD.结果:入院MES阳性组中,疏血通注射液治疗组20例,至第15天有19例MES消失,而对照组18例至第20天时仅有7例MES消失,两组MES消失的概率比较,差异有非常显著性意义(X2=16.35,P＜0.01);入院MES阴性组中,疏血通注射液治疗组至第20天有13例次出现MES,而对照组至第20天有32例次出现MES,两组MES出现的概率差异有显著性意义(X2=13.08,P＜0.05);疏血通注射液的抑栓作用在使用第5天即出现,于第7天达高峰,至第10,15天继续作用;但停药5 d后有MES复现的现象.结论:疏血通注射液对急性缺血性脑卒中的微栓子具有预防和治疗作用;TCD栓子自动监测有助于及时发现微栓子、评估药物疗效.
-
康脑液对脑缺血再灌注损伤大鼠软脑膜微血流量的影响
目的:观察依益气活血化瘀、清热平肝、熄风定惊法立方制成康脑液对大鼠脑缺血及脑缺血再灌注时软脑膜微血流量的干预作用.方法:实验于2004-09/12在河北北方学院医学院病理生理实验室完成.①选用清洁级雄性Wistar大鼠20只,鼠龄3个月.按随机抽签法将大鼠分为2组:治疗组和模型组,每组10只.治疗组:灌胃康脑液(主要成分为黄芪、丹参、川芎、葛根、钩藤、三七粉等).制备:常规煎煮2次,再将两煎的上清液混合,文火煎浓缩至70 mL),2 mL/次,1次/d(相当于给原生药3.8 g).模型组:灌胃等量生理盐水.②2组均在灌胃第18天的给药后2 h用颈动脉引流法复制大鼠脑缺血再灌注损伤模型.右侧颞顶部造一个5 mm×8 mm开放式颅窗,以MKD-1型多功能激光多普勒微循环血流仪分别记录造模前,脑缺血后15,30,45,60,75,90min及再灌注后15,30,60,90,120,150,180 min软脑膜的微血流量.结果:Wistar大鼠20只均进入结果分析.①模型组大鼠脑缺血后软脑膜微血流量骤减,随着缺血时间的延长逐渐有所回升,但始终明显低于造模前(P＜0.01).治疗组大鼠脑缺血后15～30 min软脑膜微血流量也明显减少(P＜0.05～0.01),缺血后45 min,其绝对值虽然也未恢复至实验前水平,但差异不明显(P＞0.05).治疗组脑缺血15～60 min软脑膜微血流量明显多于模型组(P＜0.05～0.01).②模型组大鼠脑缺血再灌注后30 min内软脑膜微血流量回升较为明显,30～90 min微血流量再次降低,之后又回升,但始终明显低于造模前(P＜0.01).治疗组大鼠脑缺血再灌注后180 min内,软脑膜微血流量绝对值低于造模前,但差异不明显(P＞0.05).治疗组大鼠再灌注后60～90 min及150 min时软脑膜微血流量明显多于模型组(P＜0.05～0.01).结论:康脑液能拮抗大鼠脑缺血及再灌注时软脑膜微血流量的减少,起到脑保护作用.
关键词： 脑缺血/中药疗法 再灌注损伤/中药疗法 黄芪 丹参 -
痴呆康复冲剂对血管性痴呆大鼠脑细胞损伤的保护机制
目的:观察痴呆康复冲剂对血管性痴呆大鼠脑细胞损伤后的学习记忆能力、大鼠海马锥体细胞形态改变及对海马CA1区细胞数和生长抑素阳性神经元数的影响.方法:实验于2005-06/10在华中科技大学同济医学院生理教研室完成.①选用Wistar大鼠108只,雄性.按随机数字表法分为3组:假手术组、模型组和痴呆康复冲剂组,每组36只.②采用4血管阻断法制作痴呆大鼠动物模型.假手术组:开颅但不阻断颈总动脉,正常饲养.痴呆康复冲剂组:按1.08g/(kg·d)的剂量连续灌胃痴呆康复冲剂(由黄芪、丹参、制首乌、枸杞子、熟地黄、赤芍药、郁金、远志和紫车河等组成,按药典标准配制成煎膏剂,使用时配成混悬液,由本院自制),共14 d,然后造模,术后5 d,连续灌服痴呆康复冲剂.模型组:造模后每天灌胃等量生理盐水.各组均于造模后干预120 d.③采用水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力:用一约1 m3有机玻璃槽,槽内为迷宫状,有多处盲端.实验时,槽内充水,水深20 cm,水温(25±2)℃.造模后第7天,训练4次,第5次记录其游完全程的时间和5 min内进入盲端的次数作为学习成绩.24 h后再测一次上述指标作为记忆成绩.上述实验于造模后30,60,120d进行.④造模后120 d,取脑,制成切片,内氏体染色,光镜(×50,×400)观察海马细胞形态变化.计数1 mm2海马CA1区中段正常细胞数,取双侧海马细胞数的均值为CA1区细胞计数.免疫组化反应法检测海马生长抑素阳性神经元数目.⑤组间计量资料差异比较采用t检验.结果:大鼠108只均进入结果分析.①造模后30 d,模型组大鼠水迷宫实验游完全程时间明显长于假手术组(P＜0.05),与痴呆康复冲剂组相近(P＞0.05).造模后60,120 d,模型组大鼠水迷宫实验游完全程时间明显长于其他2组(P＜0.05).②造模后30,120 d,模型组大鼠水迷宫实验5 min内进入盲端次数明显多于假手术组(P＜0.05),与痴呆康复冲剂组相近(P＞0.05).造模后60 d,模型组大鼠水迷宫实验5 min内进入盲端次数明显多于其他2组(P＜0.01,0.05).③痴呆康复冲剂组大鼠CA1区细胞线清晰,锥体细胞形态大多数正常,无明显细胞变性、坏死,明显优于模型组,CA1区细胞计数接近正常,细胞排列紧密,数量明显增多,尼氏体丰富,见仅见少数细胞变性、坏死.④造模后120 d,模型组大鼠海马CA1区单位面积细胞计数和海马生长抑素阳性神经元数目明显少于其他2组(P＜0.01).结论:痴呆康复冲剂能改善血管性痴呆大鼠海马CA1区的细胞形态,增加海马生长抑素阳性神经元数目,增强学习记忆功能,有明显神经保护作用.
-
去痰活络健脑制剂改善脑缺血模型大鼠记忆功能的途径
目的:通过放射免疫法测定脑缺血模型大鼠脑组织中神经肽Y及白细胞介素2、白细胞介素6的含量,分析以去痰活络为治则的健脑制剂健脑宁改善其记忆障碍的可能途径.方法:实验于2000-07/2003-02在北京中医药大学东直门医院临床药理实验室完成.选取清洁级4月龄SD大鼠152只,取150只随机分为多发性脑梗死、中动脉脑梗死、去脑膜毛细血管造模大鼠各50只,每组模型随机再分为5组,即对照组、模型组、健脑宁11.25,3.75,1.25g/(kg·d)剂量组,每组10只,雌雄各半;余2只用于取血,配制血栓水溶液.健脑宁胶囊(由天麻、人参叶、枳壳等组成,武汉健民药业集团股份有限公司,批号:000205),实验时将药物用5g/L消毒羧甲基纤维素钠配制成混悬液.150只大鼠在无菌条件下采用由颈总动脉向颈内动脉注入同种动物血栓、结扎颈外动脉由颈外动脉向颈内动脉插线再灌注、开颅去皮质毛细血管的方法制造了3种实验性记忆功能减退实验动物模型,对照组均为假手术.术后对照组、模型组喂饲5 g/L消毒羧甲基纤维素钠,健脑宁11.25,3.75,1.25g/(kg·d)剂量组,给生药剂量分别为11.25,3.75,1.25g/(kg·d),用5g/L消毒羧甲基纤维素钠配制,给药体积均为10 mL/kg体质量.连续给药4周,麻醉取血,分离血浆,用放射免疫法测定中动脉脑梗死、多发性脑梗死、去皮质毛细血管模型大鼠脑组织中神经肽Y及白细胞介素2、白细胞介素6的含量.结果:每个模型组均取模型组9只,健脑宁11.25g/(kg·d)剂量组8只,3.75 g/(kg·d)剂量组9只,1.25g/(kg·d)剂量组8只,对照组9只;剔除手术过程中死亡或造模不成功大鼠21只,终129只进入结果分析.①实验4周后,多发性脑梗死、去脑膜毛细血管、中动脉脑梗死正常组大鼠海马组织中白细胞介素2含量明显高于模型组,白细胞介素6含量和血浆、海马、脑皮质、下丘脑组织中神经肽Y含量均明显低于模型组(P＜0.05～0.01).②多发性脑梗死、去脑膜毛细血管、中动脉脑梗死健脑宁11.25g/(kg·d)剂量组大鼠海马组织中白细胞介素2含量与模型组比较明显升高,白细胞介素6含量和血浆、海马、脑皮质、下丘脑组织中神经肽Y含量均明显降低(P＜0.05～0.01).③多发性脑梗死、去脑膜毛细血管健脑宁3.75g/(kg·d)剂量组大鼠海马组织中白细胞介素6、海马、脑皮质、下丘脑组织中神经肽Y含量与模型组比较明显降低,海马组织中白细胞介素2含量明显升高(P＜0.05～0.01).④去脑膜毛细血管健脑宁1.25 g/(kg·d)剂量组大鼠海马组织中白细胞介素6、中动脉脑梗死大鼠血浆、下丘脑组织中神经肽Y含量与模型组比较均明显降低(P＜0.05～0.01).结论:健脑宁能调节3种脑缺血实验模型大鼠脑组织中白细胞介素2、白细胞介素6和神经肽Y的含量可能是其具有改善脑缺血模型大鼠记忆功能的重要机制.
-
葡萄籽原花青素对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用
背景:研究发现,葡萄籽原花青素具有清除自由基、抗心肌缺血再灌注损伤、增强实验动物学习、记忆等的能力.但其对小鼠脑缺血再灌注损伤的作用尚不十分清楚.目的:观察葡萄籽原花青素对脑缺血再灌注小鼠脑中总抗氧化能力、一氧化氮合酶活性及丙二醛含量的影响,探讨葡萄籽原花青素的脑保护作用.设计:完全随机分组设计,对照实验.单位:锦州医学院病理生理教研室和机能中心实验室,锦州医学院附属第一医院神经内科.材料:实验于2004-03/08在锦州医学院机能中心实验室完成.选用锦州医学院动物实验中心提供的昆明种小鼠40只.随机分为5组:对照组、模型组、低剂量葡萄籽原花青素治疗组、高剂量葡萄籽原花青素治疗组及尼莫地平治疗组,每组8只.方法:①建立脑缺血再灌注模型:动物乙醚麻醉,颈正中切口,两边颈总动脉用微动脉夹夹闭30 min后去除动脉夹,恢复动脉血流.对照组只分离两边颈总动脉,不夹闭.②模型组和对照组:在夹闭小鼠双侧颈总动脉同时及再灌注后每隔24 h分别按40 mg/kg剂量腹腔注射蒸馏水、低和高剂量葡萄籽原花青素组及尼莫地平组按10,40,2 mg/kg剂量腹腔注射葡萄籽原花青素及尼莫地平.再灌注72 h后断头取脑,采用化学比色法测定一氧化氮合酶的酶活力,总抗氧化能力及丙二醛含量.③组间计量资料差异比较采用t检验. 主要观察指标:各组大鼠脑组织中总抗氧化能力、一氧化氮合酶活性及丙二醛含量. 结果:进入结果分析小鼠40只,每组8只.①总抗氧化能力:模型组明显低于对照组(t=8.145,P=0.000),而低、高剂量葡萄籽原花青素治疗组及尼莫地平治疗组又明显高于模型组(t=6.313,8.956,4.14,P＜0.01).②一氧化氮合酶活性:模型组明显高于对照组(t=12.541,P＜0.01),而低、高剂量葡萄籽原花青素治疗组及尼莫地平治疗组又明显低于模型组(t=2.231,8.956,7.260,P＜0.05～0.01).③丙二醛含量:模型组明显高于对照组(t=7.883,P＜0.01),高剂量葡萄籽原花青素治疗组及尼莫地平治疗组又明显低于模型组(t=5.234,4.518,P＜0.01).结论:葡萄籽原花青素可能通过提高机体总抗氧化能力,对抗脂质过氧化以及降低脑组织中一氧化氮合酶活性而发挥脑保护作用.
关键词： 脑缺血/中药疗法 再灌注损伤/中药疗法 丙二醛 一氧化氮合酶 -
知母总皂苷对脑缺血再灌注损伤的保护机制
目的:评价知母总皂苷对于大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用,观察其对内皮素1及内皮型一氧化氮合酶的影响.方法:实验于2004年在南方医科大学药理学实验室进行,大鼠132只数字表法随机分为5组:①知母总皂苷50,100mg/kg组(n=30):灌胃相应剂量的知母总皂苷,1次/d,连续7 d,7 d后线栓法制备急性局灶缺血模型.②己酮可可碱组(n=12,仅进行神经功能评分及脑梗死体积测定):灌胃45.88 mg/(kg·d)己酮可可碱,连续7 d,7 d后同前造模.③模型组(n=30):灌胃等量生理盐水7 d,7 d后同前造模.④假手术组(n=30):灌胃等量生理盐水7 d,7 d后手术,但不插线栓塞血管.造模24 h观察大鼠神经功能损害并评分,取缺血侧脑组织用TTC染色后比较脑梗死体积,用放射免疫法测定缺血脑组织中内皮素1含量,免疫组织化学法比较脑组织中内皮型一氧化氮合酶阳性表达.结果:87只大鼠进入结果分析.①脑组织梗死体积百分比:知母总皂苷50,100mg/kg组和己酮可可碱组均小于模型组[(21.56±5.03)%,(23.80±3.59)%,(18.50±3.74)%,(28.61±2.76)%,P＜0.05,0.01].②神经功能评分:知母总皂苷50,100mg/kg组和己酮可可碱组均低于模型组(P＜0.05,0.01).③脑组织内皮素1含量:模型组显著高于对照组[(0.68±0.19),(0.31±0.11)ng/g,P＜0.01];知母总皂苷50,100mg/kg组均低于模型组[(0.43±0.06),(0.36±0.20)ng/g,P＜0.05,0.01],但2组间比较差异无显著性意义.④内皮型一氧化氮合酶阳性表达:知母总皂苷50,100mg/kg组阳性细胞数增多、表达强度增强.结论:知母总皂苷对于脑缺血再灌注后引起的脑损伤具有确定的保护作用,其保护机制可能涉及减少内皮素1的释放、增强内皮型一氧化氮合酶表达、改善缺血脑组织中血管内皮功能及血供有关.
-
通心络对大鼠脑缺血再灌注模型微血管细胞间黏附分子1和血管细胞黏附分子1表达的影响
背景:现代医学发现通心络制剂除了具有抗凝和抑制血小板聚集作用外,对血管内皮细胞有一定的保护作用.目的:观察中药复方制剂通心络是否影响脑缺血再灌注动物模型黏附分子的表达.设计:随机对照实验.单位:解放军第二军医大学长征医院神经内科.材料:实验于2002-10/2003-01在解放军第二军医大学长征医院神经内科实验室完成.选择雄性SD大鼠25只,随机分为假手术组5只、模型组10只和通心络组10只.方法:线栓法制备大鼠大脑中动脉脑局灶性脑缺血再灌注模型,假手术组除将尼龙线插在颈外动脉接近颈内动脉分叉处外,其余同模型组.通心络组大鼠在缺血再灌注前给予通心络粉剂1.0 g/(kg·d),溶在生理盐水中灌胃1周.模型组和假手术组灌胃等剂量生理盐水.各组大鼠麻醉后取脑制备切片,行常规苏木精-伊红染色、免疫组化及原位杂交染色.主要观察指标:①缺血再灌注后细胞间黏附分子1和血管细胞黏附分子1阳性微血管表达数目.②缺血再灌注后细胞间黏附分子1 mRNA阳性微血管表达数目.结果:①假手术组手术侧大脑半球皮质和基底节区未见细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子1蛋白和细胞间黏附分子1 mRNA阳性微血管表达.②模型组大鼠缺血2 h再灌注6 h后,缺血侧大脑细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子-1蛋白表达水平和细胞间黏附分子1 mRNA表达水平显著升高.③通心络组缺血侧大脑半球皮质和基底节区蛋白和mRNA阳性微血管数较模型组显著降低[(10.42±1.98),(12.42±2.14)/高倍视野;(8.54±2.00),(11.12±1.56)/高倍视野](P＜0.05),血管细胞黏附分子1蛋白阳性微血管表达数目无显著变化(P＞0.05).结论:通心络可以降低大鼠脑缺血再灌注后细胞间黏附分子1的转录和翻译过程,有助于减轻脑缺血后的炎症性损伤过程.
-
牛蒡子复方制剂对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用
目的:探讨牛蒡子复方制剂(阿克亭)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其可能的机制.方法:①实验于2004-09/2005-01在哈尔滨医科大学动物实验中心及病理实验室完成.选用健康雄性Wistar大鼠84只.将大鼠随机分为6组:假手术组,模型组,神经节苷脂组及牛蒡子复方制剂大、中、小剂量组,每组14只,每组又随机分为再灌注1,24 h 2个时相点,每个时相点7只进行观察.②采用改良线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注模型,每组模型均缺血30 min,随机使其中的7只再灌注1 h,另外7只再灌注24 h.神经节苷脂组在缺血即刻腹腔注射神经节苷脂(购自TRB Pharma S.A,2 mL/支,生产批号20037)30 mg/kg,牛蒡子复方制剂(牛蒡子生药,3 g/mL,生产批号20050618,由乌苏里江制药责任有限公司提供)大、中、小剂量组在缺血即刻分别腹腔注射牛蒡子复方制剂100,50,10mg/kg,模型组给予等量生理盐水.③于大鼠缺血30min再灌注1,24 h进行神经病学评分(0分:无神经功能缺失症状,活动正常者;1分:不能伸展对侧前爪者;2分:爬行时出现向左转圈者;3分:行走时身体向偏瘫侧倾倒者;4分:不能自发行走,意识丧失者).④采用苏木精-伊红染色,光镜下观察脑组织变性坏死程度.⑤采用免疫组化分析方法观察Caspase-3蛋白的表达变化.⑥多组间比较采用单因素方差分析,同一时间点两组间比较采用Dunnett-t检验,不同时间点的比较采用两样本t检验.结果:进入结果分析大鼠保持为84只.①神经病学评分:神经节苷脂组和牛蒡子复方制剂各剂量组明显低于模型组(t=-2.951～-5.477,P＜0.05),牛蒡子复方制剂各剂量组与神经节苷脂组比较,差异不明显(P＞0.05).②病理形态改变:模型组再灌注1 h可见部分神经细胞核浆分界不清,细胞水肿;模型组再灌注24 h病灶中心区神经细胞脱失范围增大,梗死血管周围出现大片空泡区.神经节苷脂组及牛蒡子复方制剂各剂量组与模型组比较,坏死区缩小,神经元受损减轻.③脑组织Caspase-3阳性细胞数:模型组再灌注1和24 h明显多于假手术组(t=23.221,25.025,P＜0.01),模型组、神经节苷脂组、牛蒡子复方制剂各剂量组再灌注24 h时明显多于再灌注1 h(t=2.298～4.322,P＜0.05);神经节苷脂组、牛蒡子复方制剂各剂量组再灌注1和24 h明显少于模型组(t=-6.823～-15.917,P＜0.01);牛蒡子复方制剂小剂量组明显多于神经节苷脂组和牛蒡子复方制剂大、中剂量组(t=6.080,6.336,P＜0.01).结论:Caspase-3在局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织中活性显著增高;神经节苷脂及牛蒡子复方制剂均能降低神经功能缺失评分、抑制Caspase-3的激活,提示其脑保护作用可能与抑制缺血区Caspase-3激活从而抑制细胞凋亡有关,牛蒡子复方制剂大中剂量抑制Caspase-3激活的作用强于小剂量,与神经节苷脂作用差异不明显.
-
自制复方中药对局灶性脑缺血大鼠脑组织一氧化氮含量的影响
目的:动态观察自制复方中药对局灶性脑缺血大鼠脑梗死体积和脑组织一氧化氮含量的影响,并与步长脑心通药物进行对照.方法:实验于2004-09/12在河北医科大学中医学院完成.将176只SD大鼠随机分为5组,①假手术组:只分离、暴露血管,不结扎颈总动脉及颈外动脉,不插入尼龙鱼线,5g/L羧甲基纤维素钠液灌胃.②模型组:采用线栓法复制局灶性脑缺血大鼠模型,5g/L羧甲基纤维素钠液灌胃.③中风康1.88g/mL组:制备局灶性脑缺血大鼠模型,18.8 g/kg中风康灌胃(由枸杞子、怀牛膝、川芎、水蛭、地龙、橘络、胆南星、石菖蒲、冰片等药物组成).④中风康0.94 g/mL组:制备局灶性脑缺血大鼠模型,0.94g/kg中风康灌胃.⑤步长脑心通组:制备局灶性脑缺血大鼠模型,0.33g/kg步长脑心通灌胃.假手术组每时间点取8只大鼠,其余各组每时间点取9只大鼠,于脑缺血6,12,24,48 h动态观察各组大鼠脑梗死体积和脑组织一氧化氮含量.结果:模型组,中风康1.88g/mL组,步长脑心通组,中风康0.94g/mL组分别死亡1,2,2,3只,造模失败3,2,2,1只,进入结果分析数量为每组大鼠32只,每时间点各8只.①各组大鼠脑梗死体积:局灶性脑缺血6 h模型组梗死灶体积迅速扩大,随缺血时间延长,梗死灶体积缓慢进展,24 h达到高峰,至48 h梗死灶略有缩小;各治疗组梗死灶体积均有不同程度缩小,以中风康1.88 g,/mL组效果为显著(P＜0.05或P＜0.01),且缺血6 h中风康1.88g/mL组梗死灶体积明显小于步长脑心通组[(88±31),(136±35)mm2,(p＜0.01)].②各组大鼠脑组织一氧化氮含量;局灶性脑缺血6 h,模型组脑组织一氧化氮含量开始升高,24 h达到高峰;局灶性脑缺血24 h和48 h,中风康1.88 g/mL组一氧化氮含量明显低于模型组[(20.69±3.52),(24.89±3.13)μmol/g;(17.15±4.07),(22.37±3.04)μmol/g,(P＜0.05或P＜0.01)],局灶性脑缺血48 h,步长脑心通组一氧化氮含量亦明显低于模型组[(1827±3.35),(22.37±3.04)μmol/g,(P＜0.05)].结论:中风康可通过降低脑组织一氧化氮含量,减轻细胞毒作用,缩小梗死灶体积,能有效的减轻局灶性脑梗死引起的缺血性损伤,其疗效优于步长脑心通.
-
黄连解毒汤对小鼠脑缺血慢性神经损伤的保护作用
目的:观察黄连解毒汤对小鼠脑缺血慢性神经损伤的保护作用.方法:以大脑中动脉阻塞(MCAO)15 min诱导小鼠短暂性局灶性脑缺血.从术前7 d开始,用药组灌服黄连解毒汤2 g/kg和4 g/kg,实验对照组和假手术组灌服生理盐水,均连续给药21 d,一日一次.缺血后35 d(5周)内进行神经症状评分、斜板试验,并记录小鼠的终生存率.实验结束后,测定脑损伤体积和神经元数量.结果:黄连解毒汤4 g/kg能显著提高小鼠MCAO术后35 d的终生存率,2 g/kg和4 g/kg均明显改善术后的神经症状,降低脑梗死体积、减轻脑萎缩.黄连解毒汤4 g/kg可明显增加缺血侧海马CA1区、纹状体和皮层的神经元密度,2 g/kg明显增加缺血侧海马CA1区的神经元密度.结论:黄连解毒汤对小鼠局灶性脑缺血慢性神经损伤有保护作用,能提高小鼠的终生存率并促进神经功能的恢复.
-
血塞通对全脑缺血/再灌注后大鼠海马回中核因子-κappaB的影响
目的 探讨血塞通( XST)干预治疗SD大鼠全脑缺血/再灌注(I/R)后大脑海马回核因子-κappaB p65( NF-κBp65)的表达,阐明其在全脑I/R损伤后的保护作用.方法 72只健康SD大鼠,随机分为假手术组( SO)24只,全脑I/R组24只,XST治疗组24只.采用简化的Pulsinelli等的四血管阻塞法建立急性全脑I/R损伤及XST对其作用的模型；用HE染色检测海马CA1区存活锥体细胞数目；用TUNEL原位末端标记法检测锥体细胞凋亡率；用免疫组织化学SABC法检测海马CA1区锥体细胞中NF-κB p65的表达.结果 XST组在再灌注后存活锥体细胞数持续增加,且在用药后3、12、24、48 h均明显多于I/R组[(99.23 ±4.22)个/mm vs (75.83±7.17)个/mm,( 80.93±5.36)个/mm vs (51.50 ±8.26)个/mm,(103.24 ±5.48)个/mm vs(35.67±13.17)个/mm,( 126.22±7.54)个/mm vs (9.83 ±4.71)个/mm],差异均有统计学意义(P＜0.01)；XST组各时间点锥体细胞凋亡率与I/R组比较均明显降低[(8.82±2.71)％ vs (22.58±4.68)％,(19.15±6.23)％vs(42.68±3.04)％,(11.82±2.87)％ vs(55.51±6.81)％,(8.44±3.23)％ vs(71.69±7.71)％],差异均有统计学意义(P＜0 01)；XST组各时间点NF-κB p65表达阳性的细胞数均明显少于I/R组[(13.20±2.50) vs(18.00±1.87),( 8.20±5.31)vs(41.60±3.65),(6.70±3.36)vs(55.30±5.10),(7.10 ±3.57) vs (72.80±4.71)],差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 在全脑I/R损伤后,XST可抑制NF-κB p65的表达,抗细胞凋亡,增加存活神经元的数目而起到脑保护作用,从而为XST在脑复苏应用中提供有力的理论依据.
-
中药脑泰方保护脑缺血再灌注损伤中血管内皮细胞凋亡机制探讨
目的 从凋亡信号通路探讨中药保护脑缺血再灌注损伤中血管内皮细胞凋亡机制.方法 将64只清洁级SD大鼠随机分为4组(每组16只):假手术对照组、脑缺血再灌注组、脑缺血预处理组和中药预处理组;再将脑缺血再灌注组、脑缺血预处理组和中药预处理组按不同时相分为1、7、14及21 d的4个亚组,中药预处理组应用中药脑泰方提取物进行干预.取大鼠大脑中静脉血管内皮细胞,分别行Hoechst 33258染色后计数以及DNA"梯状"条带检测内皮细胞凋亡情况,再应用Western-blot分析中药脑泰方对Caspase-3,8,9活化和Bid裂解的影响情况;从凋亡信号通路探讨中药保护脑缺血再灌注损伤中血管内皮细胞凋亡机制.结果 中药脑泰方提取物可抑制脑缺血再灌注损伤中血管内皮细胞凋亡,能明显抑制缺血再灌注损伤所致的Caspase-3,8,9活化,也抑制了Bid裂解成tBid.结论 中药脑泰方提取物从凋亡信号通路抑制了脑缺血再灌注损伤中血管内皮细胞凋亡.
-
补阳还五汤及拆方对脑缺血再灌注模型血清、脑组织的SOD、MDA及NO含量影响
目的揭示补阳还五汤及拆方抗脑缺血再灌注损伤的作用机理,并研究方剂配伍的意义.方法通过四血管结扎法制作SD大鼠脑缺血再灌注模型,观察总方组与拆方黄芪组、活血组药物对模型血清、脑组织SOD、MDA及NO含量的影响.结果模型组大鼠血清、脑组织MDA及NO含量明显增高,SOD含量明显降低;总方组与拆方黄芪组、活血组能降低MDA及NO含量,升高SOD含量,总方组作用强.结论补阳还五汤及拆方通过抗自由基,达到抗脑缺血再灌注损伤作用.总方组的疗效明显优于拆方组,符合方剂学"整体取性原理".
-
桑葛合剂对脑缺血、脑血流及血管舒张功能的影响
目的探讨桑葛合剂对缺血性脑血管疾病的治疗机理.方法建立动物模型,观察桑葛合剂对脑缺血、脑血流、血压、心率、心电图及血管舒张功能的影响.结果桑葛合剂可以明显降低急性脑缺血模型大鼠脑指数、脑含水量及脑毛细血管通透性;显著增加犬脑血流量,降低其脑血管阻力,而对血压、心率、心电图均无明显影响;能使去甲肾上腺素(NE)和5-羟色胺(5-HT)引起离体兔大脑中动脉的收缩产生舒张作用,且呈剂量依赖式特点.结论提示桑葛合剂可能通过扩张血管,增加脑血流量,降低脑血管阻力改善脑循环.
关键词： @桑葛合剂/药理学 脑缺血/中药疗法 脑血管循环/药物作用 疾病模型 动物 -
脑醒喷鼻剂对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织超微结构的影响
目的研究脑醒喷鼻剂对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织超微结构的影响.方法将 30只 Wistar大鼠随机分为脑醒喷鼻剂高剂量组(高剂组)、脑醒喷鼻剂中剂量组(中剂组)、脑醒喷鼻剂低剂量组(低剂组)、尼莫通腹腔注射组(对照组)、生理盐水喷鼻剂组( NS组)、假手术组(正常组),给药 3 d后,用线栓法阻断大鼠左侧大脑中动脉建立左大脑中动脉栓塞( L- MCAO)模型,缺血 1 h再灌注 24 h后,取左额叶皮层脑组织作电镜观察.结果脑醒喷鼻剂高、中剂组的神经细胞、胶质细胞及毛细血管等超微结构的损伤程度明显低于 NS组,其中以高剂组损伤轻,与尼莫通对照组无明显差别.结论从组织形态学角度证实,脑醒喷鼻剂能减轻脑缺血大鼠大脑皮层神经组织的损伤,对脑组织的缺血再灌注损伤有明显的保护作用.
-
复方仙灵脾注射液对大鼠局灶性脑缺血的实验研究
目的探讨复方仙灵脾注射液对大鼠局灶性脑缺血的治疗作用.方法将 SD大鼠 60只,随机均分为假手术组、模型组、川芎嗪对照组、复方仙灵脾大、中、小剂量组.通过结扎大鼠一侧大脑中动脉( MCAO)造成局灶性脑缺血模型,观察复方仙灵脾注射液对血浆中的血栓素、前列环素、血小板聚集、超氧化物歧化酶、丙二醛及脑梗塞面积的影响.结果复方仙灵脾注射液不仅能明显提高血浆中的前列环素水平,降低血小板聚集率,增加超氧化物歧化酶活力,而且能明显减少血栓素水平和丙二醛的含量,缩小脑梗塞面积.结论复方仙灵脾注射液在改善血浆 TXA2- PGI2的平衡,抑制血小板聚集,增加脑血流量的同时,又能清除自由基,改善脑功能,减轻急性脑梗塞所致的缺血损伤.
关键词： @复方仙灵脾注射液/药理学 脑缺血/中药疗法 疾病模型 动物
