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缺血性脑血管病患者骨髓间充质干细胞的实验研究
目的:观察缺血性脑血管病患者骨髓间充质干细胞形态学特征.方法:将缺血性脑血管病患者自体骨髓中的问充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)经密度梯度离心法分离、纯化和培养,观察原代和传代细胞的形态.结果:原代培养的BM-MSCs佳贴壁时间为3 d,生长性状不一,呈散在圆形细胞群、散在梭形细胞群、克隆圆形细胞群、花带状细胞群、漩涡状细胞群,而传代培养的细胞,增殖速度较快,性状一致,排列规则,呈饱满的梭行.结论:通过体外非诱导培养获得的自体BM-MSCs,有较强的增殖能力和多向分化潜能,为缺血性脑血管病的临床治疗提供了实验依据.
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纳洛酮对脑缺血再灌注损伤保护作用的研究进展
脑是人体对缺氧为敏感的器官,脑组织缺血将会导致局部脑组织及其功能的损害.临床上处理脑缺血性损伤的原则是尽早恢复血液再灌注,使缺血脑组织重新得到氧的供应.然而缺血后的血流恢复在某些情况下能导致进一步的组织损伤和功能障碍[1].
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新生儿缺氧缺血性脑病患儿中部分检验指标的变化
新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)后,由于患儿严重缺氧缺血,导致体内内分泌失调,炎性反应增强,再加上本身致HIE因素包括缺氧缺血低灌注、缺血再灌注损伤、能量代谢障碍、细胞酸中毒、氧自由基产生过多,血脑屏障损害、Ca2+稳态失衡、兴奋性神经递质释放增多等的共同作用,使HIE患儿体内的许多指标发生改变,近年来的研究表明新生儿HIE发生后,发现以下一些检验指标有单独或同时的变化.
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全脑缺血再灌注小鼠额叶和海马c-fos基因的表达
目的:探讨c-fos基因表达在全脑缺血再灌注后不同时间的变化规律.方法:实验动物全部采用由白求恩医科大学实验动物中心提供的雄性昆明小鼠,6～7周龄,体质量25～28 g.①动物分组:第1批:40只小鼠随机分为假手术组5只,脑缺血再灌注组35只,根据再灌注不同时间提取标本,分别为术后1 h,1 d,3 d,7 d,2周,4周,6周,每个时间点5只.第2批:40只小鼠用于反转录-聚合酶链反应,分组同上.②模型制备及检测方法:制备全脑缺血再灌注损伤模型,假手术组不阻断颈总动脉亦不放血.采用卒中指数对各组小鼠神经病学症状进行评价.于小鼠双侧颈总动脉阻断再灌注后1 h,1 d,3 d,7 d,2周,4周,6周取小鼠额叶皮质、海马区脑组织采用免疫组织化学染色、反转录-聚合酶链反应技术,对c-fos基因表达变化进行检测.结果:80只小鼠均进入结果分析,无脱落.①免疫组化检测c-fos基因表达产物Fos蛋白结果:假手术组Fos蛋白有较弱表达,免疫组化染色假手术组未见Fos蛋白阳性神经元;再灌注1 h在额叶皮质与海马区即可见Fos蛋白表达升高,与假手术组差异显著,再灌注1 d Fos蛋白表达达高峰,并持续至2周(P＜0.01),以后随时间延长逐渐下降,到6周达假手术组水平.②反转录聚合酶链反应检测c-fos表达结果:假手术组海马区有少量c-fos mRNA表达.再灌注1 h c-fos mRNA转录水平显著升高,与假手术组差异有显著性意义(P＜0.01),至5周时仍呈现较高转录水平(P＜0.05),随后下降,至4周时达假手术组水平.结论:全脑缺血再灌注可诱导中枢神经系统c-fos基因的持续表达.
关键词： 脑缺血/病理学 再灌注 基因 fos 原癌基因蛋白质c-fos/血液 -
血塞通大输液对局灶性脑缺血大鼠的影响
目的:观察血塞通大输液对中动脉脑缺血模型大鼠的影响.方法:通过栓线法造成大鼠中动脉缺血.观察血塞通大输液对缺血大鼠行为状态、脑缺血面积、脑组织形态学改变的作用效果.结果:血塞通大输液以32.7、16.4、8.2mg/kg剂量给大鼠静脉注射,能明显改善脑缺血后大鼠的行为状态,缩小缺血范围,降低缺血程度,使病变的脑组织得到明显的改善.结论:血塞通大输液对局灶性脑缺血性脑损伤具有明显的保护作用.
关键词： 脑缺血/中医药疗法 @血塞通大输液/治疗应用 脑缺血/病理学 大鼠 -
黄连解毒汤对小鼠脑缺血慢性神经损伤的保护作用
目的:观察黄连解毒汤对小鼠脑缺血慢性神经损伤的保护作用.方法:以大脑中动脉阻塞(MCAO)15 min诱导小鼠短暂性局灶性脑缺血.从术前7 d开始,用药组灌服黄连解毒汤2 g/kg和4 g/kg,实验对照组和假手术组灌服生理盐水,均连续给药21 d,一日一次.缺血后35 d(5周)内进行神经症状评分、斜板试验,并记录小鼠的终生存率.实验结束后,测定脑损伤体积和神经元数量.结果:黄连解毒汤4 g/kg能显著提高小鼠MCAO术后35 d的终生存率,2 g/kg和4 g/kg均明显改善术后的神经症状,降低脑梗死体积、减轻脑萎缩.黄连解毒汤4 g/kg可明显增加缺血侧海马CA1区、纹状体和皮层的神经元密度,2 g/kg明显增加缺血侧海马CA1区的神经元密度.结论:黄连解毒汤对小鼠局灶性脑缺血慢性神经损伤有保护作用,能提高小鼠的终生存率并促进神经功能的恢复.
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内源性组胺在小鼠缺血预处理诱导的脑缺血耐受中的作用
目的:利用组氨酸脱羧酶敲除(HDC-KO)小鼠,研究组胺是否参与缺血预处理诱导的脑缺血耐受的形成.方法:分别将野生型(WT)小鼠双侧颈总动脉夹闭(BCCAO)6、10、14 min,再灌注48 h后,再持续BCCAO进行永久性前脑缺血,观察其缺血耐受时间.部分小鼠取脑、冰冻切片、进行甲苯胺蓝染色,观察神经元损伤情况.比较BCCAO 预处理10 min对WT和HDC-KO小鼠永久性前脑缺血耐受时间的影响.测定WT小鼠再灌30 min、5 h、48 h脑内组胺含量.结果:缺血预处理各时间点均可延长WT小鼠在永久性前脑缺血后的存活时间,其中预处理10 min有显著性差异,并且未引起海马和纹状体神经元的损伤.但预处理10 min不能诱导HDC-KO小鼠脑缺血耐受的形成.WT小鼠预处理10 min再灌30min、48 h时脑内组胺含量升高,但再灌5 h时与对照组相比无明显变化.结论:内源性组胺可能参与缺血预处理诱导的脑缺血耐受的形成,其作用机制有待进一步深入研究.
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高压氧对大鼠脑缺血区线粒体氧自由基影响的实验研究
目的:研究高压氧(HBO)对大鼠脑缺血区线粒体氧自由基及抗自由基酶的影响.方法:参照改良的Koizumi方法,在激光多普勒 血流仪监测局部脑血流的条件下,建立线栓法大鼠局灶性脑缺血模型,缺血90 min后再灌注 ,缺血后3 h高压氧治疗(3个标准大气压,1 h),缺血后24 h分别取缺血核心区和半暗区脑组织,差速离心提取线粒体,进行超氧阴离子自由基(O2()/(·) )生成速率、H2O2含量、丙二醛(MDA)含量测定,以及线粒体超氧化歧 化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量测定. 结果:脑缺血再灌注24 h后缺血半暗区和核心区线粒体的H2O2、O2()/( ·)、MDA的含量较正常对照组明显增加,而SOD、GSH-PX活性以及GSH的含量较正常 对照组明显下降(P<0.05).经HBO治疗后,缺血半暗区线粒体O2(含量增加(P<0.05),SOD活性提高(P<0.05),而MDA含量减少( P<0.05);缺血核心区线粒体O2()/(·)含量增加(P<0. 05),SOD活性提高(P<0.05),但MDA含量不变.HBO治疗对脑缺血区的H2O 2、GSH-PX和GSH作用无影响.结论:在脑缺血时间窗内,HBO治疗能增 加脑缺血区线粒体自由基生成,提高线粒体抗自由基酶活性;能抑制脑缺血半暗区线粒体的 脂质过氧化损伤,但对核心区作用不明显.提示线粒体的功能状态在HBO治疗后的自由基反应中起重要作用.
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大鼠全脑缺血后脑内肥大细胞的变化
目的:研究大鼠全脑缺血再灌注损伤后脑内肥大细胞的变化.方法:采用大鼠4血管结扎法建立全脑缺血再灌注损伤的模型,在手术不同时间后予以心脏灌流、取脑、冰冻切片、甲苯胺兰染色,观察肥大细胞的形态并记数.结果:肥大细胞主要位于丘脑.脑缺血再灌注损伤后1 h、7 d,丘脑内肥大细胞数量出现2次明显的下降,而肥大细胞脱颗粒的比例出现2次明显增加.结论:脑内肥大细胞在大鼠全脑缺血再灌注损伤后出现明显的脱颗粒,其可能参与了脑缺血再灌注损伤的病理过程.
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透光法测定小鼠局灶性脑缺血梗死灶
目的:探索透光法评价局灶性脑缺血模型梗死体积的方法.方法:采用大脑中动脉阻塞法(MCAO)诱导小鼠持续性局灶性脑缺血,于缺血后24 h取脑,切成1 mm厚的脑片,先在体视显微镜下进行透光,图像输入计算机;然后,在0.5%氯化三苯四氮唑(TTC)溶液中37℃孵育30 min,并将TTC染色的脑片图像输入计算机.以AnalyPower1.0软件计算每一脑片以透光法和TTC染色法测得的梗死体积,以Photoshop 5.0计算缺血组和对照组透光和TTC染色脑片左右侧灰度.结果:透光测定的脑梗死体积与TTC染色测定的梗死体积具有较好的相关性(r=0.81).缺血组小鼠透光和TTC染色测得的缺血侧大脑平均灰度、皮层灰度、皮层下灰度和海马灰度,与非缺血侧相应部位及对照组相应部位比较有显著差异(P<0.001),对照组脑片左右侧及对照组与缺血组非缺血侧比较无显著差异(P>0.05).结论:透光法可用于局灶性脑缺血的定量分析.
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大鼠局灶性脑缺血模型的定量分析
目的:采用大脑中动脉阻塞(MCAO)诱导大鼠局灶性脑缺血模型的方法,用计算机辅助技术定量分析脑损伤变化及药物保护作用.方法:以不同MCAO时间诱导脑缺血并再灌注24 h后,观察神经功能缺失症状,并以计算机图像分析技术测定脑梗死体积、脑半球面积、皮层及纹状体神经元密度及白蛋白渗出;在缺血前后腹腔注射地塞米松0.1 mg/kg或尼莫地平0.4 mg/kg,观察药物的保护作用.结果:缺血30 min和再灌注24 h可发生神经功能缺失症状、梗死灶形成、缺血侧脑半球面积增加11.4%、神经元密度减少36.2%、白蛋白渗出明显增加.地塞米松和尼莫地平可改善神经功能缺失症状,显著减小梗死体积,抑制缺血侧脑半球面积增加、神经元死亡和白蛋白渗出.结论:缺血30 min和再灌注24 h是诱导局灶性脑缺血的合适条件,计算机辅助技术客观定量综合评价脑缺血损伤及药物作用是可行的方法.
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小鼠持续性脑缺血后NMDA受体亚单位表达的变化
目的:研究小鼠持续性脑缺血后不同脑区NMDA受体亚单位表达的变化及其与病理损伤之间的联系.方法:采用大脑中动脉阻断法制作小鼠持续性脑缺血模型,取缺血后不同时间的皮层、海马、皮层下脑组织,用免疫印迹技术测定NMDA受体亚单位ζ1和ε1及ε2蛋白的含量.同时作冰冻切片和苏木素伊红染色,计算相应脑区神经元密度.结果:NMDA受体ζ1和ε1及ε2亚单位表达的改变发生于缺血后5 h内,皮层下3个亚单位表达均明显增加,海马则各亚单位表达变化不一.脑梗塞灶和相关脑区神经元密度显著减小均出现于缺血后5 h ,相关脑区神经元死亡严重程度依次为皮层下组织和海马CA1区及大脑颞叶皮层Ⅲ-Ⅳ层.结论:小鼠持续性脑缺血,缺血侧脑组织NMDA受体亚单位ζ1和ε1及ε2表达的变化发生在明显的病理损害之前,表达变化程度因脑区不同,与相关脑区神经元损害的程度相应.
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缺血再灌注离体海马脑片活性的光通透性评价方法
目的:探讨缺血再灌注离体海马脑片的光信号改变特征,以及L型Ca2+通道在脑缺血急性期损害中的作用.方法:以缺氧缺糖(OGD)方法诱导离体海马脑片缺血模型,采用自行构建的脑片透光检测系统,结合图象处理软件Photoshop中的灰度分析检测脑片活性,并观察尼莫地平的作用.结果:体外缺血使海马CA1区域对光通透性增加, (7.59±1.42)min达峰值,再灌后(6.37±1.89)min恢复至本底水平(n=15 slices);L型Ca2+通道阻断剂尼莫地平(0.5 μmol/L, n=10 slices; 5 μmol/L, n=9 slices)对缺血所致的海马脑片透光度增加具有抑制作用.而高剂量组(50 μmol/L, n=11 slices)则引起脑片透光度的增加,给药后(25.83±6.32)min达峰值;尼莫地平使海马脑片透光度增加,并呈剂量依赖性.结论:离体脑片光通透性检测是一种简易,无创性的脑片活性评价方法;L型Ca2+通道对于维持正常脑片活性具有重要意义,同时参与脑缺血急性期损害,作用具有双重性.
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大鼠全脑缺血再灌注损伤及相关分子表达的时间过程
目的:研究大鼠全脑缺血再灌注损伤的时间过程及相关分子的表达变化.方法:在四血管阻断法(4VO)诱导全脑缺血模型上观察脑组织病理改变;同时应用免疫印迹方法检测脑组织NMDA受体亚单位蛋白及VCAM-1水平.结果:全脑缺血再灌注后3～14 d海马CA1区产生迟发性神经元死亡.皮层NR1和NR2A亚单位表达分别于再灌注后1和3 d显著增加,NR2B亚单位在1～3 d也显示较高水平;海马NR1亚单位表达在1 d明显下降,以后呈进行性升高,于14 d 达高峰;NR2A和NR2B表达有相似的趋向并于7d明显增加.海马和皮层VCAM-1分别于再灌注后3和7 d表达明显上调.结论:脑缺血再灌注过程中海马神经元数量减少,皮层和海马的NMDA受体亚单位蛋白(NR1、NR2A和NR2B)及粘附分子VCAM-1有不同变化;干预两者的表达可能减轻脑缺血再灌注损伤.
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高压氧对急性损伤期缺血再灌注大鼠脑内水通道蛋白-4表达的影响
[目的]研究水通道蛋白-4(AQP4)在缺血/再灌注脑损伤大鼠脑内的表达,及高压氧(hyperbaric oxygen,HBO)对其表达的影响.[方法]将135只SD大鼠分为假手术对照组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)和高压氧处理组(HBO组),以四动脉阻断法建立全脑缺血再灌注大鼠模型.I/R组和HBO组按再灌注的时间不同分为四个亚组,每组15只,即动物缺血20 min后分别再灌注6h、24h、3d 和5d, HBO各亚组在再灌注后分别行不同次数的高压氧处理.测定脑组织含水量及伊文斯蓝含量,并采用免疫组织化学技术检测AQP4的表达.同时观察HBO对脑水肿和AQP4表达的影响.[结果]Sham组AQP4表达较低,在缺血损伤后表达升高,脑组织含水量及伊文斯蓝含量增加,给予HBO后AQP4的表达和脑组织含水量降低.[结论]缺血/再灌注脑损伤后AQP4表达上升,脑水肿明显,给予HBO可抑制AQP4的表达,减轻脑水肿.
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异丙酚促进大鼠脑缺血/再灌注中CGRP释放的机制研究
目的 探讨异丙酚在大鼠脑缺血/再灌注(IR)损伤中是否促进内源性保护物质降钙素基因相关肽(CGRP)目的释放及其调节机制.方法 实验大鼠分为对照组、假手术组、脑IR组及脑IR+异丙酚治疗组,测定CO、放射免疫测定大鼠脑组织中CGRP、cGMP含量,免疫组化测定HO-1目的表达.结果 脑IR期间,脑IR+异丙酚治疗组目的HO-1、CO、cGMP和CGRP显著高于脑IR组和假手术组(P<0.05),且HO-1与CO、CO与cGMP、cGMP与CGRP目的表达变化呈正相关(P<0.05),假手术组和对照组间相比较差异无显著性.结论 异丙酚能促进IR期间CGRP目的升高,对大鼠脑IR损伤具有明显目的保护作用,作用机制之一可能是通过HO-1-CO-cGMP途径促进CGRP目的合成和释放,减轻缺血再灌注目的损伤反应.
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参芎注射液对大鼠脑缺血再灌注后内质网应激相关分子C/EBP同源蛋白表达的影响
目的 检测内质网相关分子C/EBP同源蛋白(C/EBP homology protein,CHOP)在缺血再灌注大鼠脑内的表达变化及参芎注射液对CHOP的影响,以期为参芎注射液的脑保护作用提供理论依据.方法 144只雄性SD大鼠按随机数字表法分为三组:假手术组、手术组、参芎组.采用线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注模型,分别于再灌注后6、12、24、72 h时相点处死动物,用免疫组化学及逆转录聚合酶链反应法分别检测脑缺血区CHOP蛋白水平及mRNA水平；末端标记法原位检测神经细胞凋亡.结果 CHOP mRNA及蛋白水平在再灌注后均有升高,分别在再灌注后12、24 h时相点达到高峰；在缺血再灌注模型中,神经细胞凋亡的数量随再灌注时间延长而增加,24h时相点到达高峰；在再灌注后各个时间点参芎干预组凋亡细胞数均低于手术组(P＜0.01)；再灌注后6、12、24、72 h参芎干预组CHOP mRNA及蛋白水平明显低于相应时间点的手术组大鼠(P＜0.01).结论 参芎注射液可能通过抑制脑缺血再灌注后内质网应激诱导的CHOP的表达进而减少神经细胞凋亡,发挥神经保护作用.
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益气活血片对脑缺血神经细胞凋亡及相关基因表达的影响
[目的]研究益气活血片(主要由黄芪、川芎、当归、石菖蒲、全蝎、益母草、冰片等组成)对不完全性脑缺血后大鼠海马和额叶皮层细胞凋亡及相关基因Mc-2表达的影响.[方法]建立不完全性脑缺血大鼠模型,治疗组在建立模型后每天灌服益气活血片至实验结束.应用流式细胞仪测定细胞群中细胞凋亡的比例和Mc-2蛋白的含量,并结合常规病理观察组织学改变.[结果]模型组大鼠组织学可见早期凋亡的形态学改变,并且海马、额叶神经细胞凋亡以及Mc-2蛋白含量较假手术组升高;益气活血片治疗后凋亡细胞减少,但海马区仍高于假手术组,bk-2蛋白水平有所下调,接近假手术组.[结论]不完全性脑缺血可引起神经细胞凋亡,益气活血片对此有一定的治疗作用.
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补阳还五汤对沙鼠脑缺血损伤细胞凋亡的影响及机理研究
目的:研究补阳还五汤对沙鼠脑缺血损伤后神经细胞凋亡的作用及可能的作用机理.方法:采用沙土鼠双侧颈总动脉夹闭脑缺血再灌注模型,于再灌后120h取大脑半球,在解剖显微镜下切取海马,电镜观察神经细胞凋亡的情况;同样模型,于缺血再灌注后48h取脑组织测定Na+、K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Mg2+-ATP酶活性、乳酸含量、NO含量、一氧化氮合酶(NOS)活性、氨基酸含量等.结果:补阳还五汤可使发生海马CA1区神经细胞凋亡的例数明显减少;可防止缺血再灌注后脑组织Na+、K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性的降低;增加NO含量,提高NOS活性;可使缺血再灌注48h后脑内谷氨酸(Glu)含量降低.结论:补阳还五汤可对抗沙鼠脑缺血再灌注损伤后的神经细胞凋亡,其作用机理与改善脑能量代谢、调节NO的合成、拮抗兴奋性氨基酸毒性等方面有关.
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脑立苏冲剂对脑缺血模型大鼠的影响
[目的]观察脑立苏冲剂对实验性脑缺血模型大鼠的影响.[方法]采用大脑中动脉栓塞法复制大鼠脑缺血模型,观察脑立苏冲剂对脑缺血模型大鼠脑含水量的影响;采用比色法测定大鼠脑内伊文思蓝含量,观察该药对脑缺血大鼠脑组织血管通透性的影响,采用苏木素-伊红(HE)染色观察该药对模型大鼠脑组织形态结构改变的影响.[结果]脑立苏冲剂能改善缺血脑组织毛细血管通透性、减轻脑水肿,与缺血模型组比较有显著性差异(均P＜0.01),其作用与维脑路通相仿.[结论]脑立苏冲剂具有增加脑血流量,减轻脑含水量,降低毛细血管通透性,改善组织形态结构的作用,其治疗脑缺血疾病的疗效可能与此有关.
