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心肌缺血/再灌注损伤的中西医结合病理研究
中西医两种理论的结合是中西医结合的关键.首先研究了心肌缺血/再灌注损伤(IRI)的西医病理基础,通过研究其病理机制与中医理论的结合点,在中西医两种医学理论的共同指导下对IRI做出新的病理分析.认为IRI的中医病机是在缺血心肌阳虚阴盛的基础上由于血流和氧的骤然来复发生了阴盛格阳的病理变化.
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低氧预处理对大鼠脑缺血再灌注B细胞淋巴瘤2、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 mRNA表达的影响
目的:观察低氧预处理对大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型B细胞淋巴瘤2、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 mRNA表达的影响,探讨其脑保护作用及可能机制.方法:①实验于2004-10/2005-06在苏州大学附属第一医院神经内科完成.选用清洁级成年SD雄性大鼠55只,随机分为3组:假手术组,对照组(缺血再灌注组)和低氧预处理组.②采用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型,假手术组只手术不插线.低氧预处理组在低氧预处理后12 h制备脑缺血再灌注模型.③假手术组在缺血3 h再灌注24 h、对照组和低氧预处理组在缺血3 h再灌注3,6,12,24,48 h不同时间点,进行脑切片的苏木精-伊红染色、原位末端标记法检测细胞凋亡,免疫组化法检测B细胞淋巴瘤2水平、原位杂交染法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 mRNA表达.结果:55只大鼠均进入结果分析.①假手术组无凋亡细胞,低氧预处理组的凋亡细胞较对照组明显减少(P＜0.05).②低氧预处理组大鼠缺血再灌注3 h可见B细胞淋巴瘤2阳性细胞数开始表达,再灌注24 h达高峰,缺血再灌注6,12,24,48 h均较对照组增高(101.40±2.78,68.20±1.45:137.92±2.41,81.34±2.28;172.21+2.89,103.12+2.61;105.68±12.67,60.12±1.47;P＜0.05).③低氧预处理组和对照组缺血再灌注3 h半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 mRNA阳性细胞数的表达逐渐增加,至24 h达高峰;低氧预处理组缺血再灌注12,48 h阳性细胞数的表达均较对照组减少(45.96±5.02,85.48±7.88;33.84±4.67,56.31±7.02;P＜0.05).结论:低氧预处理的脑保护作用与其抑制神经细胞凋亡有关;而上调B细胞淋巴瘤2及下调半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 mRNA的表达,可能是实现保护作用、抑制凋亡的机制之一.
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高压氧对大鼠脑缺血区线粒体氧自由基影响的实验研究
目的:研究高压氧(HBO)对大鼠脑缺血区线粒体氧自由基及抗自由基酶的影响.方法:参照改良的Koizumi方法,在激光多普勒 血流仪监测局部脑血流的条件下,建立线栓法大鼠局灶性脑缺血模型,缺血90 min后再灌注 ,缺血后3 h高压氧治疗(3个标准大气压,1 h),缺血后24 h分别取缺血核心区和半暗区脑组织,差速离心提取线粒体,进行超氧阴离子自由基(O2()/(·) )生成速率、H2O2含量、丙二醛(MDA)含量测定,以及线粒体超氧化歧 化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量测定. 结果:脑缺血再灌注24 h后缺血半暗区和核心区线粒体的H2O2、O2()/( ·)、MDA的含量较正常对照组明显增加,而SOD、GSH-PX活性以及GSH的含量较正常 对照组明显下降(P<0.05).经HBO治疗后,缺血半暗区线粒体O2(含量增加(P<0.05),SOD活性提高(P<0.05),而MDA含量减少( P<0.05);缺血核心区线粒体O2()/(·)含量增加(P<0. 05),SOD活性提高(P<0.05),但MDA含量不变.HBO治疗对脑缺血区的H2O 2、GSH-PX和GSH作用无影响.结论:在脑缺血时间窗内,HBO治疗能增 加脑缺血区线粒体自由基生成,提高线粒体抗自由基酶活性;能抑制脑缺血半暗区线粒体的 脂质过氧化损伤,但对核心区作用不明显.提示线粒体的功能状态在HBO治疗后的自由基反应中起重要作用.
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大鼠全脑缺血后脑内肥大细胞的变化
目的:研究大鼠全脑缺血再灌注损伤后脑内肥大细胞的变化.方法:采用大鼠4血管结扎法建立全脑缺血再灌注损伤的模型,在手术不同时间后予以心脏灌流、取脑、冰冻切片、甲苯胺兰染色,观察肥大细胞的形态并记数.结果:肥大细胞主要位于丘脑.脑缺血再灌注损伤后1 h、7 d,丘脑内肥大细胞数量出现2次明显的下降,而肥大细胞脱颗粒的比例出现2次明显增加.结论:脑内肥大细胞在大鼠全脑缺血再灌注损伤后出现明显的脱颗粒,其可能参与了脑缺血再灌注损伤的病理过程.
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PeriCam PSI血流灌注成像系统在脑缺血再灌注动物模型中的应用及评价
目的:研究PeriCam PSI血流灌注成像系统指导大鼠脑缺血再灌注损伤模型构建的可行性和效果.方法:成年Sprague-Dawley雄性大鼠70只随机分为手术对照组(n=6)、PSI监测组(n=34)和传统方法组(n=30).参照改良Zea-Longa栓线法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,建模后,手术对照组和PSI监测组(缺血2 h、再灌注24 h)分别用PSI对脑部血流进行实时监测,记录观察结果.恢复再灌24 h后处死大鼠,取脑组织进行2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色和HE染色.结果:PSI监测组大鼠的存活率和建模成功率均高于传统方法组(均P<0.05).手术对照组大鼠脑血流灌注图像可以清晰地观察到脑部血流灌注情况和血管分布,各项数据正常.PSI监测组缺血2 h,右侧大脑中动脉血流出现中断,中动脉供血区血流灌注量较手术对照组下降(P<0.05);恢复再灌注24 h,右侧大脑中动脉恢复血流灌注,但是仍然有部分区域的血流灌注量下降,无法恢复到正常水平.TTC染色结果显示,PSI监测组大鼠右侧脑组织存在明显的梗死灶,且脑梗死区域较传统方法组稳定.HE病理染色结果显示,手术对照组脑组织结构正常,神经细胞形态规则,无明显异常;PSI监测组大鼠缺血侧脑组织可见皮质区和缺血半暗带区,神经细胞变性、坏死、胶质纤维崩解、液化,缺血中心区淡染、呈筛网状,部分区域呈灶性坏死.结论:PeriCam PSI血流灌注成像系统可以指导缺血再灌注模型的构建,提高建模的成功率和稳定性.
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自发活动实验在小鼠全脑缺血后功能损伤评价中的应用
目的:了解自发活动实验在小鼠全脑缺血后功能损伤评价中的意义.方法:采用双侧颈总动脉阻断30 min建立C57BL/6小鼠全脑缺血模型,缺血对照组和米诺环素组术后腹腔注射生理盐水或米诺环素(45 mg/kg),每天1次,持续到缺血后第6天.术后第6天进行开场实验,记录1h内小鼠的自发活动.以自发活动总路程、中央路程、周边路程、中央路程比值、周边路程比值、中央时间和周边时间为指标,评价C57BL/6小鼠全脑缺血后自发活动行为的变化特点.采用尼氏染色检测小鼠海马CA1区、皮层和纹状体区神经元存活情况.结果:C57 BL/6小鼠全脑缺血后在开场实验中的总路程、中央路程和中央时间均较假手术组增高(P＜0.05),周边时间较假手术组减少(P＜0.05);米诺环素可缩短小鼠的中央路程和中央时间,增加周边时间(P＜0.05).小鼠全脑缺血后海马CA1区、皮层和纹状体区神经细胞损伤明显,米诺环素可显著改善海马CA1区和纹状体区神经细胞损伤(P ＜0.001和P＜0.05).结论:自发活动实验可作为客观评价小鼠全脑缺血后功能损伤的行为学实验方法,其中央路程和中央时间可作为定量评价指标.
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乌司他丁对在体兔肺缺血/再灌注损伤影响的实验研究
[目的]探讨乌司他丁对兔肺缺血/再灌注损伤的影响.[方法]建立在体兔肺缺血/再灌注模型,随机分成三组:A组为假手术组、 B组为缺血/再灌注组、C组为缺血/再灌注+乌司他丁处理组,每组10只.在再灌注60 min行肺组织湿干比(W/D)值、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量测定和肺组织病理学检查.[结果]再灌注60 min后C组肺组织W/D值、MDA含量较B组均明显降低(P＜0.05), 而SOD含量较B组明显升高(P＜0.05);肺组织病理学检查示B、C组兔肺均有部分肺泡结构破坏,不同程度的炎症反应,其中C组炎症积分显著低于B组(P＜0.01).[结论]乌司他丁预处理 ,可减轻随后的缺血再灌注损伤.
关键词： 肺/病理学 再灌注损伤/病理学 胰蛋白酶抑制剂/药理学 动物实验 -
大鼠肢体缺血/再灌注后NO/ET-1平衡与脑组织氧化损伤关系的研究
目的:研究一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)在大鼠肢体缺血/再灌注(LI/R)后脑氧化损伤中的作用,探讨NO/ET-1平衡关系的变化对脑损伤的影响.方法:在大鼠LI/R损伤模型上,观察血浆NO,ET-1,MDA,XOD,SOD,LDH,CK及脑组织tNOS,iNOS,cNOS,NO,ET-1,MDA,XOD,MPO,SOD,W/D的变化.结果:LI/R后血浆LDH,CK,MDA,XOD和脑组织MDA,XOD,MPO,W/D较对照组升高,自由基清除酶SOD活性下降,在再灌注4h脑组织损伤为严重.再灌后,脑组织tNOS和iNOS活性升高,而cNOS活性降低,血浆及脑组织中NO,ET-1增加,NO/ET-1比值降低,在再灌注4h降低为明显.结论:大鼠LI/R后脑损伤的发生可能与机体自由基产生增多,清除酶活性下降以及NO/ET-1失平衡有关.
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大鼠小肠缺血再灌注后多器官组织超微结构改变的实验研究
目的:研究小肠缺血再灌注后肺、肝、心、肾组织的次级损伤.方法:阻断大鼠肠系膜上动脉,建立小肠缺血再灌注模型,分对照组,再灌注后0min、30min,1h、2h,1d、3d、7d共8组,在电镜下观察各组织的超微结构改变.结果:大鼠小肠缺血再灌注后电镜观察发现:肺组织中肺泡Ⅱ型细胞变性坏死及明显的炎症反应.肾小球基膜不规则增厚,肾小管基底膜破裂,上皮坏死脱落.肝脏细胞和心脏细胞中细胞染色质边集、固缩等改变.结论:大鼠小肠缺血再灌注后可引起远隔器官的次级损伤.
