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甲状腺乳头状癌组织中CRNDE的表达变化及对甲状腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响
目的 观察甲状腺乳头状癌(PTC)组织中lncRNA结直肠肿瘤差异表达基因(CRNDE)的表达变化,及CRNDE对甲状腺癌细胞TPC-1增殖、迁移、侵袭能力的影响.方法 采用荧光定量PCR法检测30例PTC组织及其相应癌旁正常组织中的CRNDE.培养TPC-1细胞并分为敲低组、阴性对照组、空白对照组.合成3个CRNDE-siRNA序列即CRNDE-siRNA-1/2/3.敲低组转染CRNDE-siRNA-1/2/3并筛选敲低效果好的CRNDE-siRNA序列进入下一步实验;阴性对照组转染NC-siRNA;空白对照组不做特殊处理.分别于转染后0、12、24、48、72 h检测细胞增殖能力.转染48 h后检测细胞迁移、侵袭能力.转染72 h后检测各组细胞中的上皮间充质转化(EMT)相关蛋白.结果 PTC组织与癌旁正常组织中CRNDE相对表达量分别为31.99 ±38.05、4.33 ±3.30,两组相比,P<0.05.转染后24、36、48、60、72 h敲低组细胞增殖能力低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05).敲低组迁移细胞数、侵袭细胞数均少于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05).敲低组上皮细胞标志物E-cadherin蛋白相对表达量高于阴性对照组和空白对照组,间质细胞标志物N-cadherin蛋白、Vimentin蛋白相对表达量低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05).结论 CRNDE在PTC癌组织中呈高表达.敲低CRNDE后,TPC-1细胞的增殖、迁移、侵袭能力减弱,EMT相关蛋白表达发生变化.CRNDE表达异常可能与PTC的发生发展有关,其机制可能涉及调节肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力及EMT特性.
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下调LSINCT5对人脑胶质瘤细胞系U251增殖、迁移和放疗敏感性的影响
目的 观察下调LSINCT5对人脑胶质瘤细胞系U251增殖、迁移能力和放疗敏感性的影响.方法 采用慢病毒转染法构建稳定干扰LSINCT5的细胞株(U251 sh LSINCT5细胞),得到干扰效率高的sh LSINCT51#组、sh LSINCT53#组和转染GV248的对照组细胞进行后续实验.采用噻唑蓝比色法(MTS)观察细胞培养0、24、48、72 h时增殖能力变化,划痕修复实验观察细胞迁移能力的变化,Western blotting法检测细胞中细胞黏附分子(E-cad-herin)、紧密连接蛋白-1(Zo-1)、细胞骨架蛋白(Vimentin)表达,MTS法观察X射线仪下分别照射0、2、4、8 Gy后细胞增殖能力.结果 sh LSINCT51#组、sh LSINCT53#组培养48、72 h时细胞增殖能力均较对照组低(P均<0.05).sh LSINCT51#组、sh LSINCT53#组细胞的修复距离均较对照组短,P均<0.05.与对照组相比,sh LSINCT51#组、sh LSINCT53#组E-cadherin、Zo-1表达高,Vimentin表达低(P均<0.05).sh LSINCT51#组、sh LSINCT53#组在2、4 Gy剂量照射时细胞增殖能力均较对照组低(P均<0.05).结论 下调人胶质瘤细胞系U251中LSINCT5的表达,能抑制细胞增殖、转移,并增强细胞放疗敏感性.
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缓激肽对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导视网膜色素上皮细胞发生上皮间充质转化的影响
目的 制作增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)细胞模型,研究缓激肽(bradykinin,BK)对视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞发生EMT的影响,并探讨BK对PVR的影响机制.方法 体外培养人RPE细胞株ARPE-19细胞,采用不同浓度转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)分别作用于ARPE-19细胞24 h、48 h,于倒置显微镜下观察细胞形态变化;采用CCK-8检测细胞增殖情况,确定TGF-β1浓度及作用时间;利用Western blot和细胞免疫荧光检测EMT标志蛋白E-钙黏素、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和波形蛋白(Viminten)表达情况;细胞划痕实验、Transwell实验检测细胞迁移能力.同时采用Western blot检测TGF/Smad通路下游pSmad3和Smad7的表达.结果 TGF-β1刺激ARPE-19细胞后可以成功诱导EMT体外细胞模型.当TGF-β1浓度为10 μg·L-1、作用时间为48 h时,细胞增殖明显.BK在TGF-β1诱导的EMT中可以降低α-SMA、Viminten的表达,升高E-钙黏素的表达并且降低细胞迁移能力.这些影响能被BK-2受体拮抗剂HOE-140逆转.TGF-β1诱导ARPE-19细胞发生EMT时,pSmad3表达量升高;TGF-β1刺激前给予BK刺激,pSmad3表达量减少;加入BK前预敷HOE-140,然后给予TGF-β1刺激,BK作用减弱,pSmad3表达量升高.Smad7表达趋势与pSmad3表达趋势相反.结论 10 μg·L-1 TGF-β1可导致ARPE-19细胞发生EMT.BK通过TGF-/Smad信号通路上调Smad 7的表达、下调pSmad 3的表达,从而逆转TGF-β1诱导的EMT.提示BK可能是一种新的、有效的治疗PVR的方法.
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上皮间充质转化在增生性玻璃体视网膜病变发病机制中的潜在作用
增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)是一种以纤维化为特点具有潜在致盲性的眼科并发症,其病理改变是产生视网膜前膜(epiretinal membranes, ERMs).ERMs是一种纤维增殖膜,在视网膜前后表面及玻璃体内形成,当其收缩后导致PVR的发生,终形成视网膜皱褶和牵引视网膜脱离(tractional retinal detachment,TRD).多种细胞类型在ERMs中已被确定,视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)在PVR的病理生理学中至关重要.大量的临床和实验证据研究表明,RPE细胞采用了成纤维细胞表型发生了上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),并且还涉及大量的细胞因子、转录因子. EMT的特点是细胞间黏附和顶面-底侧细胞极性的缺失,这增加了细胞的移行性.由此产生的细胞能够通过细胞外基质迁移和转移.细胞间黏附由连接复合体维系着,它们在维护RPE细胞表型方面起重要作用,其通过激活一些信号通路及转录因子破坏这些连接复合体并导致EMT的发生.经过EMT过程后,转化生长因子-β使RPE细胞进一步分化为肌成纤维细胞.源自RPE细胞的成纤维细胞和肌成纤维细胞可以通过细胞迁移、增殖,导致ERMs的形成,这在PVR的病程发展中起着关键性作用.
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硫化氢对TGF-β1诱导的HK-2细胞上皮间充质转化的抑制作用
目的:观察硫化氢(H2S)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人近端肾小管上皮细胞转分化的影响,并初步探讨其作用的可能机制.方法:以体外培养的HK-2细胞为研究对象,分别用10 μg/L TGF-β1、100 μmol/L NaHS(H2S的供体)及2者联合作用进行干预,以正常培养的细胞作正常对照.孵育0、15、30及60 min后,Western blot检测4组细胞磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)和Smad2蛋白的表达;孵育48 h后,观察细胞形态变化,Western blot检测4组细胞E-cadherin、α-SMA蛋白的表达.结果:与正常对照组比较,TGF-β1组细胞发生梭形变,E-cadherin蛋白表达下降(F=1 262.535,P<0.001,α-SMA蛋白表达上调(F=1456.030,P<0.001);NaHS+TGF-β1组细胞发生梭形变的程度较TGF-β1组明显减轻,E-cadherin蛋白表达增加(F=65.330,P<0.001,α-SMA蛋白表达下降(F=288.300,P<0.001).TGF-β1组细胞在15、30及60 min时p-Smad2/3表达均较正常对照组增加,而NaHS+TGF-β1组细胞p-Smad2/3的表达较TGF-β1组降低(P<0.05).结论:H2S可抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞转分化,该作用可能部分通过影响Smad2/3磷酸化程度来完成.
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TET1蛋白对人乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖和侵袭能力的影响及其相关机制
目的 探讨TET1对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、转移、侵袭等生物学行为的影响,并初步探究其相关分子机制.方法 应用慢病毒载体建立TET1过表达稳转细胞株(MDA-MB-231-TETl)及阴性对照组稳转细胞株(MDA-MB-231-NC),Real-time PCR及Western blot法检测TET1的表达情况.CCK-8法、流式细胞术检测细胞的增殖及细胞周期分布,细胞划痕实验及Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力;Western blot及免疫荧光实验检测EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、β-catenin)分子的表达.结果 成功构建过表达TET1细胞株(P=0.03) 相较于阴性对照组和空白对照组细胞,MDA-MB-231-TETl组细胞增殖、迁移及侵袭明显受到抑制(P＜0.001),G2/M期细胞周期阻滞(P=0.002);同时,伴随E-cadherin表达升高(P＜0.001),N-cadherin(P=0.003)、Vimentin(P=0.041)表达降低,β-catenin(P＜0.001)表达降低,并且TET1可抑制β-catenin向细胞核内转移,进而抑制EMT的发生. 结论 TET1可抑制MDA-MB-231细胞增殖,并能抑制其迁移及侵袭,其机制可能与通过Wnt/β-catenin通路抑制EMT的发生相关.
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SOX2在口腔鳞癌中的表达及其与EMT的相关性
目的:探讨SOX2在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达水平及其与E-cad和Vim的相互关系.方法:采用免疫组化SP法检测50例OSCC与13例正常口腔上皮中SOX2、E-cad和Vim的表达信号.采用SPSS19.0软件包进行计数资料方差分析和spearman等级相关分析.结果:在正常口腔上皮中,SOX2不表达;在OSCC中,SOX2的表达随着组织分型的降低而升高(P＜0.05).在正常口腔上皮中,E-cad强阳性表达;在OSCC中,E-cad的表达随着组织分型的降低而降低(P＜0.05).在正常口腔上皮中Vim不表达;在OSCC中,Vim的表达随着组织分型的降低而升高(P＜0.05).在OSCC中,SOX2和E-cad的表达呈负性相关(P＜0.05);SOX2和Vim的表达呈正性相关(P＜0.05);E-cad和Vim的表达呈负性相关(P＜0.05).结论:SOX2表达水平与OSCC的分化程度密切相关,同时与上皮间充质转化标记物E-cad和Vim分别存在负性与正性相关.
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microRNA-145对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞上皮间充质转化的影响
目的 研究microRNA-145(miR-145)对转化生长因子(TGF)-β1诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)上皮间充质转化(EMT)的影响.方法 人工合成miR-145基因序列,构建真核重组质粒pCMV-miR-145.以未处理HK-2细胞为对照组;以TGF-β1处理HK-2细胞为TGF-β1组;以pCMV-myc空白质粒转染后经TGF-β1处理HK-2细胞为TGF-β1空白质粒组;以pCMV-miR-145质粒转染后经TGF-β1处理HK-2细胞为TGF-β1+miR-145组.采用实时荧光定量PCR检测miR-145表达.采用Western blot检测TGF-β/Smad信号传导蛋白TGF-β1、Smad3、Smad2/3、p-Smad2/3,以及EMT生物标记物蛋白 α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)和I型胶原蛋白(ColⅠ)的表达水平.采用ELISA法检测培养细胞上清液中FN和Col I的含量.结果miR-145表达质粒构建成功,重组质粒有效转染TGF-β1诱导HK-2细胞.与对照组比较,TGF-β1+miR-145组细胞中miR-145表达上调(P<0.01);与对照组和TGF-β1+miR-145组比较,TGF-β1组和TGF-β1空白质粒组细胞中miR-145表达均下降(P<0.01).与TGF-β1组和TGF-β1空白质粒组比较,TGF-β1+miR-145组细胞内TGF-β1、Smad3、Smad2/3和p-Smad2/3蛋白表达量减少(P<0.05);α-SMA、FN、ColⅠ蛋白表达亦明显减少(P<0.05);TGF-β1+miR-145组培养液上清中FN、ColⅠ含量减少(P<0.05).结论 miR-145 参与TGF-β1 处理 HK-2 细胞 EMT 的调控.miR-145 可能通过抑制 TGF-β 依赖的 Smad 信号通路活性,从而抑制肾小管 EMT.
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L-NAME调控EMT抑制卵巢癌细胞迁移
目的 探讨一氧化氮合酶泛抑制剂左旋硝基精氨酸甲基酯(L-NAME)对卵巢癌SKOV3细胞体外增殖、迁移以及对上皮间充质转化(EMT)标志物的影响.方法 利用L-NAME抑制卵巢癌SKOV3中一氧化氮合酶(NOS)功能,以L-NAME处理组为实验组,二甲基亚砜(DMSO)组为对照组,采用CCK8增殖实验、平板克隆形成试验、划痕试验和Transwell小室迁移实验检测L-NAME对卵巢癌SKOV3细胞增殖和迁移功能的影响;并利用荧光定量PCR和Western blot检测卵巢癌细胞上皮细胞标志物E-cadherin和间充质细胞标志物N-cadherin、Vimentin和Fibronectin的表达,观察L-NAME对卵巢癌SKOV3细胞EMT标志物的调控作用.结果 CCK8增殖实验和平板克隆形成实验显示L-NAME抑制SKOV3细胞增殖功能(P＜0.05);划痕实验和Transwell小室实验显示L-NAME抑制SKOV3细胞迁移功能(P＜0.05);荧光定量PCR和Western blot结果显示L-NAME上调E-cadherin的表达,下调N-cadherin、Vimentin和Fibronectin的表达(P＜0.05).结论 L-NAME抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移功能,调节EMT标志物变化.
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肾小管上皮间充质转化与肾脏纤维化
肾脏纤维化是所有慢性肾脏疾病（ chronic kid-ney disease， CKD），包括原发性、继发性肾小球疾病，肾小管间质和血管疾病以及肾移植慢性排斥性病变发展至终末期肾脏病共同的终通路。目前认为，肾脏纤维化是不可逆的进行性病变，终需透析治疗或肾移植，对患者、家庭及社会造成沉重的负担。尽管世界各国肾脏病学者做了大量的工作，但目前对肾脏纤维化的发病机制仍缺乏全面认识，严重阻碍了临床抗纤维化治疗的有效进行。近年来，研究表明：在肾脏损伤过程中，多种因子可诱导上皮细胞转化为成纤维细胞／肌成纤维细胞，引起肾小管缺失与细胞外基质蛋白沉积，这一过程被称为上皮间充质转化（ epithelial-mesenchymal transition， EMT）［1-2］。本文就近年来肾小管上皮细胞EMT在肾脏纤维化的作用及机制研究进展进行综述。
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高尔基体基质蛋白130通过诱导上皮间充质转化促进甲状腺乳头状癌细胞TPC-1的侵袭和迁移
目的 探究高尔基体基质蛋白130(Golgi Matrix Protein 130,GM130)对甲状腺乳头状癌细胞侵袭和迁移能力的作用及机制.方法 RT-PCR检测人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1及甲状腺乳头状癌细胞BCPAP、K1、TPC-1中的GM130 mRNA水平.将细胞分为Control、scramble siRNA (si-scramble)、GM130 siRNA(si-GM130)3组.CCK8检测各组细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭,Western Blot检测GM130、Ki67、增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、基质金属蛋白酶-4(Matrix metalloproteinase-4,MMP-4)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、钙依赖性粘附蛋白E(Calcium-dependent adhesion proteinE,E-cadherin)、Snail、钙依赖性粘附蛋白N(N-cadherin)及波形蛋白Vinmentin的表达,同时利用免疫荧光检测Vimentin的表达.结果 GM130在TPC-1细胞中的mRNA水平高,故利用TPC-1细胞进行后续实验.与Control组比较,si-GM130组中GM130表达显著下调,细胞增殖速率及Ki67、PCNA表达显著降低,细胞划痕闭合率显著下降,侵袭细胞数及MMP-4、MMP-9表达显著减少.此外,与Control组比较,si-GM130组中E-cadherin表达显著升高,Snail、N-cadherin及Vimentin表达显著降低.同时Vimentin荧光值在si-GM130组中显著降低.结论 GM130可通过诱导上皮间充质转化促进甲状腺乳头状癌细胞TPC-1的侵袭和迁移.
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血管内皮生长因子抑制肾小管上皮间充质转化及其与结缔组织生长因子和PI3K-Akt信号通路的关系
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮间充质转化(EMT)的作用,及其与结缔组织生长因子(CTGF)、PI3K-Akt信号通路的关系.方法 (1)将体外培养的HK2细胞分为止常对照组、TGF-β1(5 μg/L,下同)组、VEGF组(100 μg/L,下同)、TGF-β1+VEGF组.HK2细胞体外培养48 h,用免疫组化双染方法检测肾小管上皮细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E钙黏蛋白的表达.(2)将体外培养的HK2细胞分为正常对照组、TGF-β1组、VEGF组、TGF-β1+VEGF组、PI3K-Akt信号通路阻断剂LY294002组(25 μmol/L,下同)、TGF-β1+LY294002组、VEGF+LY294002组、TGF-β1+VEGF+LY294002组.HK2细胞体外培养48 h,用Western印迹和RT-PCR方法检测α-SMA和CTGF的表达;用ELISA方法检测培养上清中纤连蛋白(FN)和Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)的表达.结果 免疫组化结果显示,TGF-β1组α-SMA表达比正常对照组增强,而E钙黏蛋白表达减弱;TGF-β1+VEGF组α-SMA表达比TGF-β1组显著减弱,而E钙黏蛋白表达增强.TGF-β1组α-SMA、CTGF蛋自和mRNA及FN、Col Ⅰ表达比正常对照组显著增强(均P<0.05);TGF-β1+VEGF组α-SMA、CTGF蛋白和mRNA及FN、Col Ⅰ表达比TGF-β1组显著减弱(均P<0.05);TGF-β1+VEGF+LY294002组α-SMA、CTGF蛋白和mRNA及FN、Col Ⅰ表达比TGF-β1+VEGF组显著增强(均P<0.05).结论 VEGF能抑制TCF-β1诱导的体外培养的HK2细胞发生EMT,其机制可能与VEGF下调HK2细胞CTGF表达及减少细胞外FN、Col Ⅰ合成有关.VEGF的这种作用可能部分通过PI3K-Akt信号转导通路实现,其确切机制有待进一步研究.
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姜黄素抗肿瘤复发和转移作用研究进展
姜黄素是从姜科植物根茎中提取的一种植物多酚,近年来其抗肿瘤侵袭、 复发和转移作用受到广泛关注.肿瘤复发、 转移是一个复杂的、 多因素调控的动态过程.研究表明,姜黄素能够抑制部分恶性肿瘤干细胞(Cancer stem cell,CSC)、 上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)、 血管生成和血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)等作用,有望为肿瘤复发和转移的防治提供新策略和发现新靶点.本文就其相关作用和机制作一综述,为深入研究姜黄素的抗肿瘤作用提供新方向.
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敲低MSX2对胰腺癌PANC-1细胞上皮-间充质转化的影响
目的：研究MSX2基因在胰腺癌PANC-1细胞的上皮-间充质转化（EMT）/间充质-上皮转化（MET）转变中的作用。方法通过脂质体2000将含有MSX2干扰序列的质粒（共3种，分别命名为shMSX2-1、shMSX2-2和shMSX2-3，转染空质粒的阴性对照组NC）转染PANC-1细胞，利用Real-time RT-PCR、Western blot等技术检测MSX2在基因和蛋白水平的表达，检测干扰效率，并选取干扰效率高的一组用于后续试验；进而检测EMT相关上皮标志分子E-cadherin、间质标志分子Vimentin在基因和蛋白水平的表达变化；采用CCK-8法检测干扰前后细胞的增殖能力变化，Transwell和划痕试验比较细胞的侵袭转移能力变化。结果3组干扰质粒中shMSX2-1的干扰效率高，CCK-8试验结果显示敲低MSX2可明显抑制PANC-1细胞增殖能力，与对照组相比差异有显著性（P<0.05）；敲低MSX2可明显抑制PANC-1细胞的侵袭转移，差异有统计学意义（P<0.05）；EMT相关分子E-cadherin表达升高，而Vimentin表达降低，且与对照组相比均有统计学意义（P<0.05）；倒置显微镜下观察敲低MSX2后细胞形态由松散的长梭形变成紧密连接的椭圆形。RT-PCR发现敲低MSX2后转录因子twist和snail表达降低（P<0.05），而slug和zeb1表达变化无差异（P>0.05）。结论敲低MSX2可抑制胰腺癌PANC1细胞的增殖、侵袭转移能力，并且上皮标志分子E-cadherin表达升高，间质标志分子Vimentin表达降低，有发生MET的趋势，MSX2可能通过twist、snail发挥其抑制作用。
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CTHRC1在结直肠癌中的表达及作用机制
目的：检测胶原三股螺旋重叠蛋白（CTHRC1）在结直肠癌组织及细胞中的表达，探讨CTHRC1对结直肠癌细胞生物学特性的影响和作用机制。方法应用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测CTHRC1在结直肠癌组织和5株结直肠癌细胞的表达；将靶向作用于CTHRC1的shRNA和NC转染进LOVO细胞；CCK-8、Transwell、平板克隆检测细胞的增殖、迁移、侵袭、克隆形成能力。Western blotting检测转染后CTHRC1、ERK1/2、P-ERK1/2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、β-catenin表达的变化。结果与正常黏膜组织相比，20例癌组织中的CTHRC1 mRNA的平均表达量为0.0411±0.054，显著高于正常黏膜组织P=0.016，蛋白水平的结果与之一致；同时，CTHRC1在SW620和LOVO细胞里的表达（mRNA水平和蛋白水平）均显著高于HT29细胞株；较之对照组，CTHRC1敲低组抑制了LOVO细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆形成能力，差异均具有统计学意义P<0.05。当CTHRC1在mRNA和蛋白水平的表达均被明显抑制时，总ERK1/2在保持基本不变的的前提下，P-ERK1/2明显降低，EMT出现逆转（即MET，E-cadherin升高，N-cadherin、Vimentin、β-catenin降低）。结论 CTHRC1在结直肠癌组织及高转移潜能的人结直肠癌细胞株SW620和LOVO中高表达。敲低CTHRC1抑制了结直肠癌细胞株LOVO的增殖、迁移、侵袭、克隆形成能力。CTHRC1通过增强ERK1/2的磷酸化所介导的EMT促进结直肠癌的侵袭转移。
关键词： 结直肠癌 胶原三股螺旋重叠蛋白 短发卡RNA 上皮间充质转化 ERK1/2 -
七氟醚对前列腺癌细胞比卡鲁胺抵抗的影响及其机制
目的 研究七氟醚在体外对前列腺癌细胞比卡鲁胺抵抗的影响及其可能的相关机制.方法 培养人前列腺癌细胞株LNCaP并通过比卡鲁胺诱导构建抵抗比卡鲁胺的LNCaP细胞株(LNCaP-RB),0％、1.7％、3.4％及5.1％气体浓度的七氟醚处理LNCaP(分别为对照组、低浓度组、中浓度组及高浓度组)及LNCaP-RB细胞(分别为对照抵抗组、低浓度抵抗组、中浓度抵抗组及高浓度抵抗组)6 h,CCK-8实验检测不同浓度七氟醚处理后LNCaP及LNCaP-RB细胞的比卡鲁胺半抑制浓度(IC50),实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)检测各组细胞中微小RNA-216a(miR-216a)的表达水平,免疫印迹实验(Western blot)检测各组细胞中E-cadherin及Snail的表达.结果 与对照组相比,高浓度组比卡鲁胺IC50显著降低,中浓度组及高浓度组miR-216a及Snail表达显著降低,且E-cadherin表达显著升高;与对照抵抗组相比,中浓度抵抗组及高浓度抵抗组比卡鲁胺IC50均显著降低,且Snail表达显著降低,中浓度抵抗组及高浓度抵抗组E-cadherin表达显著升高,低浓度抵抗组、中浓度抵抗组及高浓度抵抗组miR-216a表达显著降低,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 七氟醚可下调前列腺癌细胞miR-216a的表达并抑制上皮间充质转化(EMT)进程,增强细胞比卡鲁胺的敏感性.
关键词： 前列腺癌 七氟醚 比卡鲁胺 微小RNA-216a 上皮间充质转化 -
RNAi干扰WT1和Pax2表达对逆转肾小管上皮间充质转化的作用
[目的]探讨抑制肾小管上皮间充质转化(EMT)过程中胚胎发育关键基因WT1和Pax2的表达对EMT的逆转作用.[方法]采用RNAi技术分别抑制WT1和Pax2.分别构建pshRNA-WT1和pshRNA-Pax2表达载体,采用脂质体转染技术,使质粒瞬时转染NEK52E细胞后用10 ng/mLIL-1α刺激细胞,分别提取不同时间点细胞的RNA和蛋白质,采用RT-PCR 和Western blot检测细胞WT1、Pax2、Snail、上皮细胞标志E-cadherin和间充质标志α-SMA的mRNA和蛋白质的表达,并观察NRK52E细胞的形态.[结果]构建的pshRNA-WT1和pshRNA-Pax2表达载体可在转染细胞内发挥RNAi作用抑制WT1和Pax2基因的表达,抑制率分别为80.4％和82.7％.分别抑制WT1和Pax2基因后EMT过程受阻,α-SMA和Snail的表达显著减少,E-cadherin的表达无显著性变化,细胞形态未发生明显的成纤维化样改变.[结论]WT1和Pax2基因是EMT中的关键基因,分别抑制胚胎发育关键基因WT1和Pax2均可使EMT受阻.阻断WT1和Pax2的表达有望中止EMT及肾纤维化的发生.
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乌司他丁负向调控EMT过程对大鼠晚期放射性肺损伤的影响
目的 观察乌司他丁对大鼠晚期放射性肺损伤的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 根据随机数字表法将48只健康雌性SD大鼠分为对照组、模型组和乌司他丁组,每组16只.模型组和乌司他丁组均接受全胸6MV-X射线单次照射20 Gy,制造放射性肺损伤模型,对照组不做处理.照射后第1天,分别开始对3组大鼠进行药物干预.乌司他丁组乌司他丁尾静脉注射(10万U/kg,1次/d),对照组和模型组同等体积生理盐水尾静脉注射(1次/d). 8周后留取肺组织,Masson染色观察肺组织胶原纤维增生情况,碱水法测定大鼠肺组织羟脯氨酸含量,qRT-PCR和Western blot测定转化生长因子β1( TGF-β1)及上皮间充质转化(EMT)相关表型如E-钙黏蛋白(E-cadherin)、β-链蛋白(β-catenin)、波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和锌指转录因子( Snail)的表达水平.结果 Masson染色结果示乌司他丁组大鼠肺胶原纤维含量较模型组显著减轻,肺组织羟脯氨酸含量明显降低( P＜0.05).与模型组相比,乌司他丁组肺组织TGF-β1表达水平显著降低(P＜0.05),上皮细胞表型E-cadherin和β-catenin显著上升(P＜0.05),间质细胞表型Vimentin、α-SMA和Snail表达水平降低(P＜0.05);乌司他丁组与对照组相关基因表达无明显差异(P＞0.05).结论 乌司他丁可通过干扰TGF-β1的表达抑制EMT过程的发生,延缓胸部放射性损伤后大鼠肺组织纤维化改变,为临床防治晚期放射性肺损伤提供一定的理论基础.
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移植肾间质纤维化和小管萎缩与肾小管上皮间充质转化的关系
目的:观察移植肾间质纤维化和小管萎缩病变与肾小管上皮间充质转化的关系.方法:选择38例同种异体肾移植术后9个月的患者,检测肾功能,移植肾行穿刺活检,按照Banff 1997慢性评分标准分为2组:第1组和第2组.然后取病理切片进行各项免疫组化检测,观察间质内细胞角蛋白、波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白的表达情况,并行比较分析.结果:第1组有22例患者,第2组有16例.两组的一般临床资料差异无显著性;第2组血肌酐高于第1组,但差异无显著性(P＞0.05).第1组中细胞角蛋白阳性表达率高于第2组;而第2组中波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白表达率高于第1组,差异均有显著性(P＜0.05).结论:在移植肾间质纤维化和小管萎缩过程中,上皮间充质转化与其有明显的相关性;同时出现较高表达的波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋白,提示纤维化程度较重.
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MiR-124对鼻咽癌细胞株上皮间充质转化和放疗敏感性的影响
目的：研究miR-124对鼻咽癌细胞株上皮间充质转化（epithelial- mesenchymal transitions， EMT）和放疗敏感性的影响。方法：转染miR-124 mimic 或inhibitor入鼻咽癌细胞株，划痕实验检测miR-124对鼻咽癌EMT 影响；细胞转染成功24 h 后 X 线照射，检测细胞株中 Caspase-3活性及凋亡细胞比例；EdU 方法检测放疗后细胞增殖能力；Western blot检测信号通路蛋白。结果：划痕实验结果显示 miR-124能抑制鼻咽癌细胞株EMT。 Caspase-3活性检测结果提示，miR-124过表达细胞株接受放疗后 Caspase-3活性显著上升（P ＜0．01）。流式细胞仪结果显示，miR-124能增加细胞株放疗后凋亡。EdU结果显示，miR-124能抑制放疗后细胞的增殖。 Western blot 结果表明过表达 miR-124的细胞株接受放疗后，p-Akt 含量显著下降。结论：miR-124可能通过Akt信号通路抑制鼻咽癌细胞株EMT，增加其放疗敏感性。这为鼻咽放疗增敏提供了新的可行的研究方向。
