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辛伐他汀逆转KRAS基因突变结肠癌细胞西妥昔单抗耐药研究
目的 鼠类肉瘤病毒癌基因(kirsten ratsarcoma viral oncogene,KRAS)突变型结直肠癌患者对西妥昔单抗治疗耐药,为了使更多患者获益,本实验旨在研究辛伐他汀能否逆转KRAS基因突变所致结肠癌细胞对西妥昔单抗的耐药.方法 将KRAS突变型结肠癌DLD-1随机分为正常组、西妥昔单抗(150μg/mL)组、辛伐他汀(0.2μg/mL)组和两药联合组4组,采用MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞法检测细胞凋亡率,平板克隆形成法检测细胞克隆能力,Transwell小室法检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测BRAF、p-ERK1/2、Bcl-xl、Bad和Caspase-3的表达.结果 MTT结果显示,正常组、西妥昔单抗组、辛伐他汀组和两药联合组细胞增殖率分别为(100.00±0.00)％、(90.70±1.30)％、(88.00±0.60)％和(72.00±1.20)％,两药联合处理组的细胞增殖率明显下降,两者存在明显的交互作用,F=22.39,P<0.001.克隆形成结果显示,两药联合组的克隆形成率相对于西妥昔单抗组由(87.05±2.47)％下降至(52.28±1.51)％,克隆形成受到抑制,F=197.86,P<0.001.流式结果显示,两药联合组相对于西妥昔单抗单药组的细胞凋亡率由(9.36±0.33)％ 上升至(26.16±2.91)％,诱导凋亡,F=63.97,P<0.001.Transwell小室结果显示,两药联合组的细胞侵袭率相对于单用西妥昔单抗组由(127.45±17.06)％下降至(42.22±4.78)％,F=37.59,P<0.001.蛋白质印迹结果显示,BRAF及p-ERK1/2表达降低,MAPK信号通路受到抑制、抗凋亡蛋白Bcl-xl表达下降,凋亡前蛋白Bad表达升高,凋亡相关蛋白Procaspase-3表达下降,Cleaved caspase-3表达升高.结论 辛伐他汀与西妥昔单抗联合应用可以抑制DLD-1增殖、克隆、侵袭,可能是通过抑制MAPK通路,活化凋亡相关蛋白,诱导细胞凋亡,从而有效逆转其耐药.
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结直肠癌组织中Syndecan-1与EGFR表达及KRAS突变的关系
目的 探讨结直肠癌患者中多配体蛋白聚糖-1(Syndecan-1)与表皮生长因子受体(EGFR)表达及鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)突变的关系.方法 选择原发性结直肠癌标本160例,结肠部肿瘤112例,直肠部肿瘤48例;病理类型为腺癌156例,其它病理类型4例.利用免疫组化法检测组织标本中Syndecan-1和EGFR的表达情况,运用直接测序法检测组织标本中KRAS基因外显子2第12、第13位密码子的突变状态.采用Spearman相关分析Syndecan-1的表达与EGFR表达及KRAS基因突变的关系.结果 肿瘤标本中Syndecan-1表达阳性41例,主要位于细胞膜20例,主要位于细胞浆16例,细胞膜与细胞浆同时表达5例.EGFR在结直肠癌中的阳性表达率69.4％,所有结直肠癌患者中发生KRAS突变率为37.5％.Syndecan-1的表达在肿瘤区域淋巴结有无转移、有无远处转移中差异均无统计学意义(均P ＞0.05).Syndecan-1的表达与EGFR表达呈显著相关(r=1.488,P＜0.01),而与KRAS状态无相关性(r=9.278,P＞0.05).结论 Syndecan-1的表达可能对结直肠癌患者的进展及预后判断有一定价值.
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表皮生长因子受体和鼠类肉瘤病毒癌基因在非小细胞肺癌淋巴结转移中的表达及临床意义
目的 观察鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)和表皮生长因子受体(EGFR)在非小细胞肺癌(NSCLC)原发病灶和转移淋巴结中的表达,探讨KRAS和EGFR在NSCLC淋巴结转移中的作用.方法 收集经手术切除且病理证实的186例NSCLC患者,记录其性别、年龄、肿瘤性质、浸润程度、淋巴结转移情况及TNM分期等各项临床相关资料.将肿瘤标本行免疫组织化学染色,并提取肿瘤细胞DNA行聚合酶链反应(PCR)扩增和测序,观察EGFR和KRAS在NSCLC原发病灶和转移淋巴结中的表达及变异.结果 (1)EGFR蛋白在NSCLC组织中表达阳性率为34.41％(64例),KRAS在NSCLC组织中表达阳性率为36.56％(68例).EGFR和KRAS阳性表达与淋巴结转移明显相关(P＜0.05).(2)原发病灶与淋巴结转移病灶间KRAS基因突变率差异有统计学意义(P＜0.05),EGFR突变率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 EGFR和KRAS在NSCLC组织中高表达,且其表达与变异与NSCLC淋巴结转移密切相关.
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被转化生长因子β活化的长链非编码RNA对人淋巴瘤Raji细胞增殖、周期及凋亡的影响
目的 研究被转化生长因子β活化的长链非编码RNA(LncRNA-ATB)对人淋巴瘤Raji细胞增殖、凋亡和周期的影响及其潜在机制.方法 通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LncRNA-ATB短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)和miR-200c模拟物(miR-200c mimics)效果,以及LncRNA-ATB、miR-200c和鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)的表达;噻唑蓝(MTT)法检测沉默LncRNA-ATB对Raji细胞增殖的影响;流式细胞术检测LncRNA-ATB对Raji细胞凋亡和周期的影响;荧光素酶报告基因(Luciferase)实验检测KRAS是否为miR-200c的直接靶基因.结果 LncRNA-ATB-shRNA可有效沉默Raji细胞中LncRNA-ATB的表达,沉默LncRNA-ATB的表达可抑制Raji细胞的增殖能力,促进Raji细胞的凋亡能力,并使Raji细胞的周期阻滞于G1期.进一步研究显示LncRNA-ATB可作为ceRNA与miR-200c竞争性地调控miR-200c直接靶分子KRAS的表达而促进肿瘤细胞增殖.结论 LncRNA-ATB可通过上调KRAS的表达而在淋巴瘤细胞的增殖、凋亡和周期过程中发挥着重要的作用.
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鼠类肉瘤病毒癌基因状态对晚期肺腺癌患者近远期预后及化疗不良反应发生率的影响
目的 探讨鼠类肉瘤病毒癌基因(Kras)状态对晚期肺腺癌近远期疗效及化疗不良反应发生率的影响.方法 选取晚期肺腺癌的患者88例,按照Kras基因状态分为突变型组20例和野生型组68例.比较两组患者在使用一线化疗方案后的近期疗效、不良反应发生率和无疾病进展生存期.结果 两组患者的客观缓解率、疾病控制率及化疗不良反应发生率比较,差异均无统计学意义(均P>0.05).野生型组的无疾病进展生存期长于突变型组(P<0.05).结论 Kras基因状态对晚期肺腺癌患者化疗短期疗效和不良反应发生率均无影响,但Kras基因突变者远期预后较差.
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西妥昔单抗联合化疗药物对比单用化疗药物治疗转移性结直肠癌疗效的Meta分析
目的:系统评价西妥昔单抗联合化疗药物对比单用化疗药物治疗转移性结直肠癌的疗效,以为临床治疗提供循征参考.方法:计算机检索Medline、PubMed、EMBase、中国期刊全文数据库、中文科技期刊数据库、万方数据库和Cochrane图书馆,收集西妥昔单抗联合化疗药物(试验组)对比单用化疗药物(对照组)治疗转移性结直肠癌疗效的随机对照试验(RCT),对符合纳入标准的临床研究进行资料提取和质量评价后,采用Rev Man 5.2统计软件进行Meta分析.结果:共纳入12项RCT,合计8 514例患者.Meta分析结果显示,试验组患者的无进展生存期显著长于对照组,差异有统计学意义[HR=0.87,95%CI(0.79,0.95),P=0.002];试验组患者的疾病控制率[OR=1.06,95%CI(0.88,1.27),P=0.54]、总生存率[HR=0.92,95%CI(0.85,1.00),P=0.05]与对照组比较,差异无统计学意义;亚组分析结果显示,西妥昔单抗能显著延长KRAS野生型患者的无进展生存期,两组比较差异有统计学意义[HR=0.80,95%CI(0.66,0.98),P=0.03].结论:与单用化疗药物比较,联合西妥昔单抗可显著延长转移性结直肠癌患者的总生存期.受纳入研究质量和样本量限制,该结论有待更多设计严格、长期随访的大样本RCT加以验证.
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左、右半结肠癌KRAS基因和VEGF表达水平及其临床意义
目的 探讨左半结肠癌(LCC)、右半结肠癌(RCC)鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的差异性及其临床意义.方法 选择2004年1月至2011年12月该院收治的218例结肠癌患者.采用PCR技术检测KRAS基因突变和免疫组织化学技术检测VEGF在LCC、RCC癌组织中的表达,比较LCC、RCC中KRAS和VEGF表达的差异性及其与临床病理特征的相关性.多因素Logistic回归分析影响LCC、RCC肝转移的因素.结果 LCC、RCC的KRAS基因突变率分别为29.41％、42.24％,二者比较差异有统计学意义(P＜0.05).RCC发病年龄超过60岁、低分化、原发肿瘤大于5 cm、脉管及神经侵犯、Ⅳ期病例数、初诊时合并肝转移等构成比均高于LCC(P＜0.05),但是初诊时合并肠梗阻和可切除肝转移比例LCC高于RCC(20.58％ vs.11.21％和26.27％ vs.16.67％,P＜0.05).LCC、RCC的VEGF阳性表达率分别为64.71％、80.17％,二者比较差异有统计学意义(P＜0.01).多因素Logistic回归分析结果显示,肿瘤部位、大小、分化程度、脉管侵犯、KRAS基因突变率和VEGF阳性表达率均是结肠癌肝转移的危险因素.LCC、RCC总5年生存率分别是71.61％、59.53％,二者比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 LCC、RCC的生物学特性存在较大差异性,KRAS基因突变率和VEGF阳性表达率均是结肠癌肝转移的危险因素.
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山东地区非小细胞肺癌分子靶向治疗驱动基因表达情况及临床特征分析
背景与目的分子生物学靶向治疗已逐渐成为非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）的一个重要治疗手段，本研究通过分析山东地区NSCLC多种驱动基因表达情况及临床病理特征，为筛选分子靶向治疗目标人群提供理论依据。方法采用荧光探针PCR法检测表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）、棘皮动物微管相关蛋白4-间变性淋巴瘤激酶（echinoderm microtubule-associated protein-like 4-anaplastic lymphoma kinase, EML4-ALK）、肉瘤致癌因子-受体酪氨酸激酶（ROS proto-oncogene 1, receptor tyrosine kinase, ROS1）、鼠类肉瘤病毒癌基因（Kirsten rat sarcoma viral oncgene, KARS）基因表达情况，回顾性分析阳性病例的临床病理特征。结果 EGFR基因突变阳性率为36.70%，主要为19、21外显子突变，突变人群主要为女性、腺癌、不吸烟患者，组间差异有统计学意义。EML4-ALK融合基因重排阳性率为9.37%。人群特征主要为60岁以下不吸烟人群，组间差异有统计学意义，基因突变与病理类型和性别间无明显差异。ROS1融合基因重排阳性率为3.67%，均为60岁以下患者，组间差异有统计学意义。23份病例标本开展KRAS基因检测，阳性标本数2例，阳性率为8.70%。2份阳性标本均为60岁以上病例，男女各占1例，病理类型均为腺癌，均无吸烟史。此外，未发现有两种基因同时突变的病例。结论 EGFR、EML4-ALK、ROS1、KARS基因在NSCLC患者中存在较高的突变率，且具有不同的人群特征，在选择靶向治疗人群中具有重要意义。
