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自噬对口腔鳞癌上皮间充质转化的调节作用的观察
目的:利用CQ(chloroquine,CQ)及雷帕霉素(rapamycin,RAPA)诱导Cal-27细胞,探讨自噬在口腔鳞癌上皮间充质转化(Epithelial mesenchymal transition,EM T)中的作用和机制.方法 :应用TGF-β(transforming growth factor,TGF-β)诱导Cal-27细胞发生EM T.同时应用RAPA增强细胞自噬水平,应用CQ抑制细胞自噬水平.应用细胞划痕实验分布检测诱导后细胞迁移能力的改变;Tran-swell小室实验分别检测诱导后细胞的迁移能力.Western blot检测诱导3 d后ZO-1,vimentin,FN1等EM T相关蛋白水平的变化;统计软件进行分析.结果 :以5 ng/mLTGF-β 诱导Cal-27细胞3 d,E-cadherin明显下降,Vimentin明显上升,说明建立EM T模型成功.与空白组相比较,以5 ng/mLTGF-β 诱导Cal-27细胞3 d后,划痕愈合率明显上升(P<0.05),穿模细胞数明显增多(P<0.05);继而分别以100 ng/mLRAPA和100 ng/mLCQ与5 ng/mLTGF-β 共同诱导Cal-27细胞3 d,与TGF-β 组相比较,RAPA共诱导组划痕愈合率明显下降(P<0.05),穿膜细胞数明显减少(P<0.05);与TGF-β 组相比较,CQ共诱导组划痕愈合率明显升高(P<0.05),穿膜细胞数明显增多(P<0.05);与空白组相比较,以5 ng/mLTGF-β 诱导Cal-27细胞3 d后,FN1、Vimentin表达量升高,ZO-1表达量降低;继而分别以100 ng/mL RAPA和100 ng/mLCQ与5 ng/mLTGF-β 共同诱导Cal-27细胞3 d,与TGF-β 组相比较,RAPA共诱导组FN1、Vimentin表达量降低,ZO-1表达量升高;与TGF-β 组相比较,CQ共诱导组FN1、Vimentin表达量升高,ZO-1表达量降低.结论 :TGF-β 可以诱导Cal-27细胞建立EM T模型.在EM T模型中,促进自噬可以抑制EM T转化,抑制自噬可以促进EM T转化.
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转化生长因子β和信号转导和转录激活因子3在肝纤维化发生中的相互作用
肝纤维化是慢性肝损伤中常见的病理反应.在肝损伤的病理过程中,不同细胞因子通过与肝纤维化有关的信号传导途径分泌,介导肝细胞的修复、增生以及肝脏的纤维化.在这些途径中,转化生长因子β (TGFβ)和信号转导和转录激活因子3(STAT3)在肝星状细胞(HSCs)的增殖和活化中起关键作用,并促进上皮间充质转化反应发生,这在肝纤维化过程中起到了至关重要的作用,其中还包含胶原和细胞外基质分子增生以及向肌成纤维细胞转化.TGFβ和STAT3分子相关信号通路介导成熟上皮细胞失去上皮表型和基因表达,使其转变为间充质细胞,并有对肝细胞产生抗凋亡和促进HSCs增殖作用.然而,STAT3和TGFβ分子对肝纤维化发生和进展相关机制尚未明确.拟通过综述了解有关TGFβ和STAT3分子介导潜在的肝纤维化机制,并探讨它们在促进HSCs生成和上皮间充质转化反应过程中的关系和相互作用.
关键词： 肝硬化 转化生长因子β 信号转导和转录激活因子3 肝星状细胞 上皮间充质转化 -
MicroRNA-199a通过缺氧诱导因子1α抑制胃癌细胞上皮间充质转化
目的 探讨微小RNA-199a(miR-199a)调节缺氧诱导因子-1a(HIF-1α)表达对缺氧状态下胃癌细胞上皮间充质转化(EMT)的影响及可能的机制.方法 低氧处理胃癌细胞24 h,通过转染si-HIF-1α和miR-199a mimic,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测miR-199a的表达水平,蛋白质印迹法(Western blotting)检测HIF-1α及相关EMT蛋白的变化,镜下观察胃癌细胞形态.结果 低氧处理后,能下调miR-199a mRNA表达,上调HIF-1α和间叶细胞标志蛋白表达,下调E-钙黏隶(E-cad-herin)蛋白表达.转染miR-199a mimic后能抑制HIF-1α的蛋白表达,转染si-HIF-1α和miR-199a mimic后能部分逆转低氧的作用,抑制EMT过程的发展.结论 miR-199a可能通过降低HIF-1a的表达抑制缺氧状态下胃癌细胞的EMT过程的发生.
关键词： 微小RNA-199a 缺氧诱导因子-1α 缺氧 上皮间充质转化 -
E-cadherin表达对Ⅰ期非小细胞肺癌预后影响的Meta分析
目的 系统评价E-cadherin表达与Ⅰ期非小细胞肺癌患者预后的关系.方法 计算机检索PubMed、EMbase、The Cochrane Library(2015年1期)、CNKI、CBM和WanFang Data数据库,搜集E-cadherin表达与肺癌预后相关性的队列研究,检索时限均为建库至2015年5月.由2位评价员独立筛选文献、提取资料并评价纳入研究的偏倚风险后,采用RevMan 5.3软件进行Meta分析.结果 共纳入9个队列研究,共1028例患者.Meta分析结果显示:E-cadherin低表达组的非小细胞肺癌患者总生存率明显低于高表达组[HR=1.74,95％CI(1.36,2.24),P＜0.000 01].但两组在无病生存率方面差异无统计学意义[HR=2.08,95％CI (0.80,5.40),P=0.13].进一步的亚组分析结果显示,E-cadherin低表达组患者在不同截断值、不同检测部位及国家的总生存期率均明显低于高表达组(P均＜0.05).结论 现有证据表明,E-cadherin在肿瘤组织中的表达水平对Ⅰ期非小细胞肺癌患者的预后具有预测价值.受纳入研究数量和质量限制,上述结论尚需开展更多高质量研究予以验证.
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炮制前后延胡索对TGF-β1介导上皮细胞-间充质转化作用的影响
目的:研究炮制前后延胡索对转化生长因子(TGF-β1)介导的人膀胱上皮细胞ECV304上皮细胞-间充质转化(EMT)作用的影响.方法:以ECV304为实验对象,使用TGF-β1诱导细胞发生EMT,通过MTT法、细胞划痕、Western-blot、RT-PCR等实验考察延胡索对EMT的影响.结果:实验使用TGF-β1成功诱导ECV304细胞发生EMT;生延胡索6μg/L干预可恢复ECV304的细胞形态,并可显著抑制ECV304细胞的迁移能力,上调E-cadherin和下调Fibronectin蛋白表达,还能显著上调CDH1和下调FN1的mR-NA表达,炮制后作用减弱.结论:延胡索对TGF-β1介导的EMT有抑制作用,生品抑制作用强,作用机制与改变E-cadherin蛋白和Fibronectin蛋白的表达,及CDH1和FN1的mRNA表达有关.
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埃兹蛋白在转化生长因子-β诱导的支气管上皮细胞间充质转化中的作用
目的 探讨埃兹蛋白(ezrin)在支气管上皮细胞(16HBE)间充质转化(EMT)中的作用.方法 建立转化生长因子-β (TGF-β)诱导的16HBE的EMT模型;RT-PCR和Westernblot法检测16HBE中ezrin mRNA和蛋白表达;通过慢病毒shRNA抑制ezrin表达,观察细胞形态,检测细胞EMT的生物标志分子上皮钙黏着蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和α-平滑肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)的mRNA和蛋白表达水平;加入外源性ezrin蛋白,细胞免疫荧光、RT-PCR及Western blot法检测其对EMT标志物的影响.结果 TGF-β能下调16HBE中ezrin的mRNA和蛋白表达.经ezrin敲减后,同TGF-β刺激表现相同,16HBE也由典型的铺路石样变为梭形,同时其E-cadherin表达下降,vimentin和α-SMA表达增加;加入重组蛋白ezrin后,16HBE的E-cadherin表达增多,vimentin和α-SMA表达下降.结论 TGF-β可能通过下调ezrin表达促进16HBE发生EMT.
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涎腺腺样囊性癌中上皮间充质转化分子调控机制的研究进展
涎腺腺样囊性癌（SACC）是常见的涎腺恶性肿瘤之一，具有嗜神经侵袭和肺高转移特性，虽然生长缓慢，但其侵袭性强，预后差。近年来国内外学者对SACC发生上皮间充质转化（EMT）进行了大量的研究，以期探讨SACC发生发展、侵袭和远处转移的机制，启发临床治疗新思路。本文就SACC中EMT发生机制的研究进展作一综述。
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足突蛋白在上皮间充质转化中的作用和影响因素
在肿瘤侵袭的过程中，上皮细胞的极性和细胞间黏附以及细胞表面的上皮钙黏着蛋白等特异性标志物丧失，细胞骨架重建，进而获得间充质样细胞表型的过程，称为上皮间充质转化（EMT）。足突蛋白（podoplanin）具有增强胚胎细胞迁移和促进肿瘤细胞浸润的能力，可能具有诱发EMT的作用。本文就足突蛋白表达、足突蛋白在EMT中的作用和足突蛋白诱导EMT的影响因素等研究进展作一综述。
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MEG3对鼻咽癌细胞转移能力的影响及相关机制的初步探究
目的 探究长链非编码RNA母系表达基因3(maternally expressed gene3,MEG3)对鼻咽癌细胞侵袭迁移能力的影响及相关机制.方法 慢病毒转染法在人鼻咽癌细胞CNE1中构建过表达MEG3的实验组细胞及转染空白载体的对照组细胞,荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)技术检测两组细胞MEG3表达水平,Transwell实验检测两组细胞侵袭迁移能力变化,免疫印迹技术(Western Blot)检测两组细胞上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及β-链蛋白(β-catenin)表达水平.结果 实验组细胞MEG3表达显著高于对照组细胞,差异具有统计学意义(P＜0.01).Transwell侵袭实验结果示实验组细胞穿透基底膜的细胞数显著低于对照组细胞,Transwell迁移实验结果示实验组细胞迁出小孔细胞数显著低于对照组细胞,差异具有统计学意义(P＜0.05);Western Blot实验结果示实验组相比对照组细胞E-cadherin表达水平显著上调,而Vimentin及β-catenin表达水平显著下调,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 MEG3可下调人鼻咽癌细胞CNE1的侵袭迁移能力,其机制与抑制细胞EMT进程有关.
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中药干预肿瘤及纤维化疾病上皮间充质转化的研究进展
Greenburg等[1]于1982年发现晶状体上皮细胞在胶原凝胶中可变为间质样细胞,从而提出上皮间充质转化(Epithelialmesenchymal transitions,EMT)的概念.EMT的重要特征是细胞极性消失、细胞间黏附丧失、间叶细胞标志物重新表达等[2].EMT不仅在胚胎发育、创伤愈合及组织重建等生理过程中发挥重要作用,而且与慢性炎症引起的纤维化形成以及上皮性肿瘤的发生、侵袭、转移等病理状态密切相关[3].EMT已成为肿瘤及器官纤维化等严重疾病治疗的靶点.
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TGF-β信号通路与肿瘤耐药相关性研究进展
肿瘤对化疗药耐药是目前影响患者预后的重要因素,近年文献报道TGF-β 信号通路与化疗耐药有关,并可通过调控TGF-β信号通路抑制耐药.本文就TGF-β信号通路与肿瘤耐药相关机制作一综述.
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上皮细胞膜蛋白2在甲状腺乳头状癌中的表达及其对细胞侵袭迁移能力的影响
目的:探究上皮细胞膜蛋白2(EMP2)在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及其对细胞侵袭迁移能力的影响.方法:收集我院2013年6月至2016年12月收治的120例行手术治疗的PTC患者肿瘤组织及相应癌旁组织,另收集16例PTC转移灶组织,荧光定量PCR(qPCR)及免疫组织化学(IHC)技术分别检测不同组织中EMP2 mRNA及蛋白表达情况.体外采用慢病毒转染针对EMP2的小干扰RNA载体,干扰人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1中EMP2的表达作为实验组细胞,转染空白对照载体作为对照组细胞,Western Blot检测两组细胞EMP2蛋白、上皮间充质转化(EMT)分子表达的差异,包括E-钙黏蛋白(E-cadherin)及波形蛋白(Vimentin),Transwell侵袭及迁移实验检测两组细胞侵袭迁移能力的差异.结果:EMP2 mRNA在PTC组织中表达显著高于癌旁组织,且转移灶组织表达显著高于非转移灶组织,差异存在统计学意义(P<0.05).EMP2蛋白在PTC组织中表达阳性率显著高于癌旁组织,且转移灶组织阳性率显著高于非转移灶组织,差异存在统计学意义(P<0.05).实验组细胞EMP2及Vimentin蛋白表达水平相比对照组细胞显著下调,差异存在统计学意义(P<0.05);而实验组细胞E-cadherin蛋白表达水平相比对照组细胞显著上调,差异存在统计学意义(P<0.05).实验组穿透基质胶细胞数显著少于对照组细胞,差异存在统计学意义(P<0.01);实验组穿过小室孔的细胞数显著少于对照组细胞,差异存在统计学意义(P<0.01).结论:EMP2在PTC组织中高表达,且在转移灶中相比非转移灶表达上调,干扰PTC细胞EMP2表达后其侵袭迁移能力显著下调,可能与抑制细胞EMT进程有关.
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MIIP 对膀胱癌 T24细胞增殖和迁移侵袭能力的抑制作用及其机制
目的：探讨迁移侵袭抑制蛋白（migration invasion inhibitory protein，MIIP）对膀胱癌 T24细胞增殖和迁移侵袭能力的影响及作用机制。方法：设计并合成 MIIP 过表达质粒，并利用脂质体转染方法上调 T24细胞系中 MIIP 的表达。Western blot 及实时定量聚合酶链反应（Real －time PCR）检测过表达 MIIP 的效果，四甲基偶氮唑蓝法（MTT）及平板克隆法观察 MIIP 过表达对 T24细胞增殖能力的影响，划痕及 Transwell 实验检验 MIIP过表达对 T24细胞迁移侵袭能力的影响。Western blot 及 Real －time PCR 检测过表达 MIIP 后其上皮间充质转化（epithelial －mesenchymal transition，EMT）过程相关标志物钙黏蛋白 E（E －cadherin）、钙连蛋白 N（N －cadherin）、转录因子 Snail 蛋白和 mRNA 变化情况。结果：过表达质粒能有效上调 T24细胞系中 MIIP 蛋白及mRNA 的表达，上调 MIIP 表达后 T24细胞增殖能力明显下降，克隆形成能力下降，迁移侵袭能力减弱；上调MIIP 表达后 E －cadherin 表达增加，N －cadherin 及转录因子 Snail 表达减少。结论：过表达 MIIP 可能通过降解转录因子 Snail，从而抑制 EMT 进程降低膀胱癌 T24细胞的增殖及迁移侵袭能力。
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抑制视网膜色素上皮细胞发生上皮-间充质转化的研究进展
视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)的上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是增殖性玻璃体视网膜疾病(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的主要发病机制,也是治疗脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)时,造成抗血管内皮生长因子(anti-vascular endothelial growth factor,anti-VEGF)疗效降低的重要因素.除此之外,随着细胞替代治疗作为年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,ARMD)的新型治疗方式而兴起,人类胚胎干细胞(hESC-RPE)、体细胞诱导多能干细胞(iPSC-RPE)定向诱导分化的RPE细胞以及来自于流产胎儿的胎儿视网膜色素上皮细胞(fetal RPE,fRPE)逐渐受到了研究者们的关注.为了发挥好的治疗效果,保证治疗用细胞的稳定增殖及高效分化是极其重要的.但是在传代扩增的过程中,由于上皮间充质转化的存在,导致这些细胞出现增殖困难以及再分化能力下降,从而影响治疗效果并阻碍了治疗人群的普及,使细胞替代治疗难以推广.所以,鉴于上皮间充质转化在视网膜疾病的发生和治疗中都造成了重要影响,抑制视网膜色素上皮细胞发生上皮间充质转化就显得尤为重要,为此,我们将阻止上皮间充质转化研究的新进展综述如下.
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七氟醚对卵巢癌干细胞特性及增殖、侵袭迁移能力的影响
目的 探究七氟醚对卵巢癌细胞SKOV3干细胞特性及增殖、侵袭迁移能力的影响.方法 常规培养人卵巢癌细胞SKOV3于培养瓶中,分为七氟醚组及对照组,七氟醚组以5％ CO2和1％七氟醚培养24 h,对照组仅以5％ CO2培养24 h,MTT法检测两组细胞增殖能力的变化,Transwell侵袭及迁移实验检测细胞侵袭及迁移能力,Western blotting检测两组细胞干细胞特性相关分子(Oct4及Sox2)及上皮间充质转化(EMT)相关分子(E-cadhefin、Vimentin)的表达差异.结果 七氟醚组细胞72、96 h时间点增殖能力显著低于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05).七氟醚组穿透Matrigel基质胶的细胞数、迁出Transwell上小室的细胞数均明显少于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05).七氟醚组Oct4、Sox2、Vimentin表达均显著低于对照组,E-cadhefin表达显著高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 七氟醚可通过减轻卵巢癌细胞EMT进程及干细胞特性,抑制细胞增殖及侵袭迁移能力.
