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  • 人滑膜间充质干细胞的分离培养与鉴定

    作者:陈松;符培亮;丛锐军;吴海山;许震宇

    背景:软骨一旦损伤将很难自我修复,组织工程学修复损伤软骨是目前的研究热点。组织工程学中找到合适的“种子细胞”至关重要。滑膜间充质干细胞(SMSCs)因较其他来源的间充质干细胞成软骨能力、增殖能力更强,且细胞容易获取、对机体损伤小等优点,越来越受到研究者的青睐。
      目的:探讨人SMSCs体外分离、培养的方法与步骤,探索对SMSCs进行鉴定的新方法。
      方法:关节镜下获取11例行关节镜手术患者的滑膜组织,按照Pei等[6]的方法分离培养滑膜干细胞;从细胞形态学观察、细胞生长曲线分析、CCK-8测定增殖活力、流式细胞仪检测细胞周期和细胞表面抗原、对SMSCs进行成脂/成骨/成软骨诱导、免疫细胞荧光染色以及RT-PCR检测成脂/成骨/成软骨相关基因的表达等方面对SMSCs进行鉴定。
      结果与结论:按照Pei等的方法可以成功地从人滑膜组织中分离出干细胞,分离出的干细胞具有间充质干细胞特异性表型和多向分化潜能。

  • 滑膜间充质干细胞在软骨修复组织工程中的研究进展

    作者:陈松;符培亮;吴海山

    关节软骨一旦损伤将很难修复,运用自体软骨细胞移植治疗软骨损伤,愈后较好,但由于细胞来源不足以及供体部位病变等缺点,使其运用受到了限制,因此运用间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)来修复软骨损伤具有很好的应用前景.理想的MSCs应具有强大的成软骨能力,且不易向肥大细胞分化.本综述将归纳相关文献,通过比较滑膜和软骨的解剖位置和功能结构,对比滑膜间充质干细胞(synovial mesenchymal stem cells, SMSCs)和其他MSCs的生长特性及成软骨能力,评估SMSCs在再生医学中的应用以及探讨其未来发展趋势,从而证明SMSCs是具有很强的软骨分化潜能的组织特异性干细胞,在软骨损伤修复中具有很好的运用前景.

  • 关节软骨组织再生修复技术新进展

    作者:郭学彦

    关节软骨损伤的修复是一个长期困扰的医学难题,生物移植和组织工程技术的发展为软骨再生修复带来新的希望,利用负载生长因子的特殊可降解软骨支架材料调动内源干细胞来实现软骨组织再生修复的新技术,易于实现产业化操作,也预示着软骨缺损的再生修复治疗一个全新时代的到来.

  • 一种新的种子细胞——滑膜间充质干细胞

    作者:常利民;曹德君;董佳生

    滑膜间充质干细胞作为一种新的间充质干细胞在组织工程中有着广阔的应用前景.滑膜间充质干细胞能够分化为软骨、骨、脂肪、骨骼肌,具有取材方便,供区并发症少等优点.因此,滑膜间充质干细胞是软骨、骨、脂肪及骨骼肌的种子细胞的理想来源.介绍了滑膜间充质干细胞的分离、获取以及其生物学特性,并对其在组织工程中应用的研究进展做一回顾.

  • 滑膜间充质干细胞与软骨细胞移植修复膝关节软骨缺损

    作者:胡鑫;尹小朋;龚忠诚;邵博;凌彬;刘慧;克热木?阿巴斯;王冰;胡露露;王玥;林兆全

    背景:膝关节软骨损伤后修复较困难.有研究发现将关节软骨细胞和滑膜间充质干细胞混合培养接种于壳聚糖支架材料中,均可以形成软骨基质.目的:观察滑膜间充质干细胞与软骨细胞与壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料对膝关节软骨缺损的修复情况.方法:将大鼠膝关节滑膜间充质干细胞及软骨细胞按1:2比例共培养于壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料中,将此复合材料移植于膝关节软骨缺损模型大鼠膝关节缺损处进行修复.结果与结论:①组织学变化:苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色及番红O染色显示,植入后4,8,12周,大鼠膝关节软骨细胞逐渐增多;②软骨样组织标记物Ⅱ型胶原表达:免疫组织化学染色显示,移植后4,8,12周,大鼠膝关节软骨组织细胞及细胞基质可见Ⅱ型胶原阳性表达.③结果证实,滑膜间充质干细胞与软骨细胞混合培养于壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料中,在体内环境下能够形成软骨样组织,有利于损伤膝关节软骨缺损的修复.

  • 长链非编码RNA DANCR促进滑膜间充质干细胞向软骨细胞的增殖与分化

    作者:杨超;张雷;周利武;赵建宁

    背景:多项研究表明,长链非编码RNA DANCR可通过Wnt/β-catenin信号通路在多种病理生理过程中发挥重要作用.目的:探究长链非编码RNA DANCR在滑膜间充质干细胞向软骨细胞增殖与分化过程中的作用.方法:取第3代人滑膜间充质干细胞,分别以pcDNA3.1-GP质粒和pcDNA3.1-GP(DANCR Homo)质粒转染滑膜间充质干细胞,分别设为对照组和实验组,培养7 d内,检测两组细胞增殖曲线;培养14 d后,组织学观察两组细胞成软骨能力;qRT-PCR检测两组成软骨分化后细胞的软骨特异性基因表达.结果与结论:①细胞增殖曲线:两组细胞增殖曲线大致呈"S"型,一二天内细胞处于相对停滞期,从第3天开始细胞进入快速增殖时期,实验组细胞增殖速度明显快于对照组;②组织学观察:两组细胞外基质均呈蓝色,符合软骨细胞特征,实验组细胞外基质蓝染强于对照组;③qRT-PCR检测:成软骨诱导14 d后,实验组软骨特异性基因Ⅱ型胶原、蛋白多糖、Sox9基因表达显著高于对照组(P<0.05);④结果表明:长链非编码RNA DANCR可促进滑膜间充质干细胞向软骨细胞的增殖与分化,并加强软骨特异性基因的表达.

  • 降钙素基因相关肽调节滑膜间充质干细胞的增殖与成骨分化

    作者:邓睿;潘富文;韩耀光

    背景:已有研究证实降钙素基因相关肽可促进滑膜间充质干细胞的增殖与成骨分化,但是涉及其具体作用机制的研究较少.目的:观察降钙素基因相关肽干预对滑膜间充质干细胞增殖与成骨分化的影响,同时探讨Wnt/β-catenin信号通路在此过程中的作用.方法:采用胰蛋白酶联合Ⅰ型胶原酶消化法从兔膝关节滑膜组织中分离培养滑膜间充质干细胞.选择第3代滑膜间充质干细胞悬液,分4组培养:空白对照组常规培养,不进行任何干预;实验组加入10s mol/L的降钙素基因相关肽;抑制剂组加入10-8 mol/L的Wnt信号通路抑制剂DKK-1;联合干预组加入10-8 mol/L的Wnt信号通路抑制剂DKK-1与10-8 mol/L的降钙素基因相关肽,干预14d后进行相关指标检测.结果与结论:①抑制剂组β-catenin蛋白表达低于空白对照组(P<0.05),实验组β-catenin蛋白表达高于空白对照组(P<0.05),联合干预组β-catenin蛋白表达高于抑制剂组(P<0.05);②培养第3-9天,抑制剂组细胞增殖慢于其余3组(P<0.05);培养第5-9天,实验组细胞增殖始终快于空白对照组、联合干预组(P<0.05);③实验组碱性磷酸酶活性、矿化结节面积以及骨形态发生蛋白2、Runx2、碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原基因表达高于其余3组(P<0.05),抑制剂组碱性磷酸酶活性、矿化结节面积以及骨形态发生蛋白2、Runx2、碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原基因表达低于空白对照组(P<0.05),联合干预组碱性磷酸酶活性、矿化结节面积以及骨形态发生蛋白2、Runx2、碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原基因表达高于抑制剂组(P<0.05);④实验证实降钙素基因相关肽能促进滑膜间充质干细胞的增殖与成骨分化,且Wnt/β-catenin信号通路与其增殖与成骨分化调控密切相关.

  • 滑膜间充质干细胞与软骨细胞三维条件下混合培养向软骨细胞的分化

    作者:宁晓婷;邵博;龚忠诚;刘慧;凌彬;克热木?阿巴斯;林兆全;杨萌;尹小朋;胡露露

    背景:软骨细胞通过自分泌及旁分泌的作用可以为滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化提供所需的生长因子及微环境,三维条件下更有利于细胞的黏附增殖与分化。
      目的:观察滑膜间充质干细胞与软骨细胞混合培养于壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料中向成软骨细胞分化的能力。方法:取SD大鼠滑膜组织及软骨组织,用酶消化法获得滑膜间充质干细胞及软骨细胞分别进行培养。取第3代滑膜间充质干细胞及第2代软骨细胞,将二者以1∶2的比例混合培养负载于壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料21 d,进行激光共聚焦扫描及免疫组织化学检测。
      结果与结论:培养72 h后,扫描电镜观察细胞黏附于支架材料表面,并可见细胞分泌大量基质成分。培养21 d后,激光共聚焦扫描可见细胞在支架表面分布均匀,逐层扫描后细胞逐渐减少。免疫组织化学检测可见基质能被Ⅱ型胶原染色,细胞染色呈现棕黄色。结果表明壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料提供三维生长空间,利用软骨细胞分泌生长因子及细胞间的相互作用可以诱导滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化。

  • 软骨细胞上清液诱导滑膜间充质干细胞微团培养成软骨

    作者:邵博;龚忠诚;刘慧;凌彬;克热木;尹小朋;胡露露;王冰;宁晓婷;林兆全

    背景:滑膜间充质干细胞在体外具有多向分化的能力,有望成为软骨组织工程中治疗软骨缺损的种子细胞,在其向软骨细胞分化过程中,合适的生长因子起了重要作用。
      目的:利用富含生长因子的软骨细胞上清液诱导滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化,并对其鉴定。
      方法:采用消化法分别获得 SD 大鼠滑膜间充质干细胞、软骨细胞。收集软骨细胞上清液离心、过滤冻存备用。培养滑膜间充质干细胞至第3代后离心成微团,并用软骨细胞上清液进行成软骨诱导分化,通过形态学观察、免疫组织化学法、RT-PCR检测进行鉴定。
      结果与结论:滑膜间充质干细胞使用软骨细胞上清液成软骨诱导21 d后,微团可见似软骨样组织。免疫组化法进行Ⅱ型胶原鉴定,基质能被Ⅱ型胶原染色,细胞染色呈现棕黄色。RT-PCR 结果显示诱导后的微团表达软骨特异性基因Ⅱ型胶原和蛋白聚糖。证实软骨细胞分泌的可溶性因子可以诱导大鼠滑膜间充质干细胞向软骨方向分化。

  • 软基质力学特性对滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化的干预作用

    作者:崔爽爽;余兆镇;于顺禄;赵文君;赵丽坤;邢国胜;段小圆

    背景:课题组前期研究表明,较软的培养基质对大鼠骨髓间充质干细胞的形态及细胞骨架有明显的影响。
      目的:探讨不同弹性模量的聚丙烯酰胺凝胶软基质对人滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化的影响。
      方法:无菌条件下获取骨关节炎患者滑膜组织,有限稀释法获得原代人滑膜间充质干细胞,流式细胞术进行细胞表面标记物鉴定,多向诱导分化实验进行功能鉴定。用丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺制备0.4,6,30 kPa 3个弹性模量的聚丙烯酰胺凝胶软基质作为培养人滑膜间充质干细胞的基底,在转化生长因子β1存在的情况下分别培养7 d和14 d,RT-PCR方法检测软骨形成相关基因COL2A1、CRTAC1 mRNA的表达,以6孔细胞培养板作为对照组。
      结果与结论:在不同弹性模量上生长的人滑膜间充质干细胞表现出不同的细胞形态;软基质的弹性模量及培养时间对人滑膜间充质干细胞成软骨基因COL2A1、CRTAC1的表达有交互作用:7 d时,CRTAC1 mRNA在6 kPa弹性模量聚丙烯酰胺凝胶上表达量高(F=44.350,P=0.000);7 d时,COL2A1 mRNA在0.4 kPa弹性模量聚丙烯酰胺软基质上的表达量高(F=6.384,P=0.005)。较低弹性模量的聚丙烯酰胺凝胶软基质比常规细胞培养板更具有促进滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化的作用。

  • 小肠黏膜下层与滑膜间充质干细胞的组织相容性

    作者:符培亮;张雷;吴宇黎;吴海山;丛锐军;陈松;丁喆如;周琦

    背景:小肠黏膜下层有抗微生物活性、良好的生物相容性及生物力学性能,能在体内快速降解,与半月板纤维软骨细胞的胞外基质相近。
      目的:观察小肠黏膜下层与滑膜间充质干细胞是否有良好的组织相容性。
      方法:先后采用物理方法与化学方法处理猪小肠黏膜下层,并进行苏木精-伊红染色和扫描电镜观察。制备小肠黏膜下层浸提液,行以下实验:①热源实验:在新西兰大白兔耳缘静脉注射小肠黏膜下层浸提液。②皮肤致敏实验:在新西兰大白兔背部皮内分别注射小肠黏膜下层浸提液、多聚甲醛溶液及生理盐水。③全身毒性实验:在新西兰大白兔耳缘静脉分别注射小肠黏膜下层浸提液与生理盐水。将小肠黏膜下层与成骨诱导的兔滑膜间充质干细胞共培养,以小肠黏膜下层单独培养为对照。
      结果与结论:经物理处理过的小肠黏膜下层表面仍然存在小肠黏膜上皮细胞、脂肪细胞和一些其他细胞黏附;经化学方法处理后其残留的细胞数量明显减少,但主要结构和成分未被改变。小肠黏膜下层黏膜面较肌层面光滑,无细胞残留,表面纤维组织交错形成疏松的三维网状立体结构,孔隙率为80%。小肠黏膜下层是一种无毒、无刺激、无免疫原性,生物相容性很好的生物材料,与兔滑膜间充质干细胞具有良好的组织相容性。

  • 大鼠来源滑膜间充质干细胞的成软骨分化

    作者:邵博;龚忠诚;刘慧;凌彬;克热木·阿巴斯;尹小朋;胡露露;王冰;宁晓婷;杨萌;林兆全

    背景:相比其他组织来源的间充质干细胞,滑膜间充质干细胞有着较强的成软骨特性和克隆能力,因此将是软骨组织工程中有前景的种子细胞之一。
      目的:培养及体外扩增 SD 大鼠滑膜间充质干细胞,鉴定其多向分化潜能及在添加生长因子后三维立体培养条件下的成软骨能力。
      方法:无菌条件下获取SD大鼠滑膜组织,Ⅰ型胶原酶消化法分离大鼠滑膜间充质干细胞。体外扩增、培养,取第3代滑膜间充质干细胞进行吉姆萨、生长曲线测定、成脂诱导、成骨诱导和三维条件下成软骨诱导,成软骨诱导21 d后通过甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色及RT-PCR对成软骨诱导后产物进行检测。
      结果与结论:获取的大鼠滑膜细胞具有间充质干细胞的特性,滑膜间充质干细胞在体外培养呈成纤维样形态,并维持着多向分化的能力。使用生长因子诱导软骨细胞21 d后,可见软骨样组织,蛋白聚糖和Ⅱ型胶原可以在甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色后被检测到。RT-PCR 检测结果显示软骨诱导分化后细胞中Ⅱ型胶原和蛋白聚糖mRNA呈阳性表达。提示大鼠来源的滑膜间充质干细胞具有成软骨能力。

  • 滑膜间充质干细胞分离纯化后的生物学特性

    作者:符培亮;张雷;吴宇黎;吴海山;丛锐军;陈松;丁喆如;周琦

    背景:大量的研究报道证明滑膜间充质干细胞在细胞形态、免疫表型、集落形成能力和分化潜能等方面与骨髓间充质干细胞相似,但在向软骨分化的能力上,滑膜间充质干细胞明显优于骨髓间充质干细胞。目的:探讨滑膜间充质干细胞作为半月板软骨组织工程种子细胞的可行性。方法:通过有限稀释单克隆培养法将滑膜间充质干细胞从兔滑膜组织中分离出来并加以纯化,在体外培养条件下对其形态学、超微结构、分子表型、增殖动力学、核型以及致瘤性等进行分析。结果与结论:从兔滑膜细胞中分离纯化出滑膜间充质干细胞,体外单层培养具有极强的增殖能力,在第6天时达到生长的高峰,倍增时间为(30.2±2.4) h。流式细胞术检测滑膜间充质干细胞表达间充质干细胞一些分子标记CD44、CD90。DNA含量检测、染色体核型分析、荷瘤实验结果表明,分离纯化的滑膜间充质干细胞是正常的二倍体细胞,无致瘤性,因此可作为半月板组织工程的种子细胞。

  • 三维环境下软骨细胞诱导滑膜间充质干细胞向软骨样细胞的分化

    作者:杨萌;邵博;龚忠诚;宁晓婷;刘慧;克热木?阿巴斯;凌彬;尹小朋;王冰;胡露露;王玥;胡鑫;林兆全

    背景:体外环境下软骨细胞与滑膜间充质干细胞共培养能够使滑膜间充质干细胞向软骨分化,关于体内环境下细胞共培养诱导干细胞分化的研究很少。
      目的:拟将滑膜间充质干细胞/软骨细胞与壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料植入大鼠背部皮下,了解细胞复合支架在体内向软骨分化的情况。
      方法:取SD大鼠膝关节滑膜组织及软骨组织,用酶消化法获得滑膜间充质干细胞及软骨细胞分别进行培养。实验设单纯软骨细胞组,单纯滑膜间充质干细胞组,滑膜间充质干细胞︰软骨细胞为1︰2组,无细胞材料组,取第3代滑膜间充质干细胞及第2代软骨细胞培养于壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料中移植于SD大鼠皮下,4,8周时取材进行苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色和免疫组织化学检测。
      结果与结论:植入4,8周后,细胞支架材料保持圆盘状,单纯软骨细胞组、滑膜间充质干细胞︰软骨细胞为1︰2组可见细胞及细胞基质Ⅱ型胶原阳性表达,单纯软骨细胞组、滑膜间充质干细胞︰软骨细胞为1︰2组蛋白聚糖阳性表达,结果表明两种细胞混合培养于壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料中,在体内环境下能够形成软骨样组织。

  • 人脂肪间充质干细胞和滑膜间充质干细胞协同抑制炎性软骨细胞的退变

    作者:宋卓悦;王洋;连晓磊;丁康;李广恒

    背景:将具有目的功能的细胞通过注射的方法注入关节腔内来改变病变的微环境,作用于早期骨性关节炎的炎性软骨细胞,通过发挥植入细胞本身的特性来影响疾病的进程.目的:探讨联合应用人膝关节脂肪来源间充质干细胞及滑膜来源间充质干细胞对炎性软骨细胞的退变是否具有协同抑制作用.方法:原代培养脂肪来源间充质干细胞、滑膜来源间充质干细胞和炎性软骨细胞.体外二维培养条件下,采用MTS细胞增殖实验检测3种细胞的增殖情况,定量PCR及免疫荧光分析3种贴壁细胞成软骨标志物基因水平及蛋白水平的差异.体外3D混合培养条件下分3组:脂肪来源间充质干细胞+炎性软骨细胞组(A+C组),滑膜来源间充质干细胞+炎性软骨细胞组(S+C组),脂肪来源间充质干细胞+滑膜来源间充质干细胞+炎性软骨细胞组(A+S+C组).收集3组混合培养的细胞团块,进行阿尔新蓝染色、番红O染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色,并做定量分析.采用定量PCR检测成软骨分化标志物的基因水平差异.收集培养液上清通过酶联免疫吸附技术检测促炎因子及抗炎因子的分泌情况.结果与结论:①体外二维培养条件下,脂肪来源间充质干细胞的增殖速率高于炎性软骨细胞和滑膜来源间充质干细胞,差异有显著性意义(P < 0.05);炎性软骨细胞的成软骨标志物Ⅱ型胶原、蛋白聚糖 mRNA表达量以及Ⅱ型胶原蛋白表达量明显高于脂肪来源间充质干细胞和滑膜来源间充质干细胞(P < 0.01);②体外3D混合培养条件下,A+S+C 组的成软骨分化特异性染色阳性区域面积百分比均明显高于 S+C 组和 A+C 组(P <0.05);A+S+C组成软骨分化标志物蛋白聚糖及Ⅱ型胶原表达量明显高于S+C组和A+C组(P < 0.05);S+C组促炎因子白细胞介素1、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平明显高于A+C组及A+S+C组(P < 0.05),A+C组及A+S+C组抗炎因子白细胞介素10水平明显高于S+C组(P < 0.05);③结果表明,联合应用脂肪来源间充质干细胞及滑膜来源间充质干细胞对炎性软骨细胞退变具有协同抑制作用.

  • 滑膜间充质干细胞修复膝关节软骨损伤的应用与进展

    作者:陈琦;廖文波

    背景:膝关节软骨损伤后很难愈合,是临床上亟需解决的重要课题。目的:总结滑膜间充质干细胞在膝关节软骨损伤治疗上的优越性。
      方法:用英文主题词“Knee Joint, Cartilage, Synovial Membrane, Tissues, Injuries, Repair”在PubMed数据库中检索2005年8月至2015年8月文献总共625篇。采纳并分析滑膜间充质干细胞治疗膝关节软骨损伤文献48篇。排除其他非滑膜间充质干细胞及非膝关节软骨损伤治疗的相关文章,保留35篇文章进行综述。结果与结论:应用滑膜间充质干细胞治疗膝关节软骨损伤,能够获得更加理想的治疗效果,损伤组织本身固有的间充质干细胞是修复损伤组织的佳种子细胞。

  • 滑膜间充质干细胞关节腔内注射治疗关节软骨损伤

    作者:袁小龙;毕声荣;余方圆

    背景:研究显示,在众多的种子细胞中滑膜间充质干细胞对关节软骨损伤再生修复具有许多独特的优势。目的:对滑膜间充质干细胞的研究进展及其关节腔内注射治疗关节软骨损伤的应用进行综述。
      方法:第一作者通过计算机检索PubMed和CNKI数据库2004年1月至2014年12月的相关文献,检索关键词为“滑膜间充质干细胞、注射治疗、软骨修复;Synovial mesenchymal stem cel s;Intra-articular injection;Cartilage repair”,纳入57篇文献进行分析。
      结果与结论:滑膜间充质干细胞分离培养方法简便,在软骨损伤修复方面具有很大的优势,通过将其注射于关节腔内治疗关节软骨损伤具有一定的可行性和安全性,作为一种潜在的治疗方式,有望给软骨损伤患者带来曙光,但仍然存在诸多问题,还需要进一步深入研究。

  • 骨性关节炎滑膜间充质干细胞分化能力研究

    作者:崔岩;马承斌;孙楠;张治宇;朱佳俊;倪胜辉

    目的:探讨从骨性关节炎( OA)滑膜组织分离、培养滑膜间充质干细胞( SDSCs)的可行性,并分析其细胞增殖能力及成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞分化能力。方法选取临床中因膝关节OA行关节置换的患者,提取手术中正常切除的滑膜组织,进行SMSCs的分离和培养。然后,对其进行成脂诱导、成骨诱导和成软骨诱导。结果来源于OA关节的滑膜组织,同样可以分离出SDSCs,进行传代培养,并向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞分化。结论 OA关节的滑膜组织中提取的SD-SCs具有良好的增殖和多向分化能力。

  • IL-34对类风湿关节炎滑膜间充质干细胞色素上皮衍生因子表达的作用研究

    作者:李寒;欧阳寻丽;汤亚微;张彦;李霞;王冰

    初步研究IL-34对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜间充质干细胞(synovial mesenchymal stem cell,SMSC)色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)表达的影响.选取6例RA患者,分离并培养其SMSC,加入PE标记的抗CD73、CD90、CD105抗体和APC标记的抗CD14、CD34、CD45抗体及同型对照,采用流式细胞术检测SMSC表型.而后加入IL-34(100 ng/mL)刺激0h、6h、24 h、48 h以及72 h、信号通路抑制剂(10 μmol/L)刺激1 h/IL-34(100 ng/mL)刺激24 h,通过ELISA检测SMSC培养上清中PEDF蛋白的表达,RT-PCR检测SMSC PEDF的转录水平.组间比较采用独立样本t检验.对培养细胞克隆进行鉴定,结果显示细胞表面阳性表达CD73、CD90、CD105,阴性表达CD14、CD34、CD45.PCR结果显示,与对照组相比,IL-34刺激6h的PEDF mRNA水平明显降低.同时ELISA表明,IL-34刺激24 h、48 h以及72 h后的PEDF蛋白水平与对照组相比,也明显降低(P<0.05).在细胞培养体系中加入NF-κB、p38MAPK信号通路抑制剂后,RA SMSC产生的PEDF水平明显升高(P<0.05).以上结果显示,实验中分离纯化的RA SMSC高表达CD73、CD90、CD105,不表达CD14、CD34、CD45,符合SMSC表型特点.IL-34介导的抑制RA SMSC分泌PEDF可能通过激活p38 MAPK和NF-κB信号通路实现.

  • 长链非编码 RNA DANCR 促滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化作用的研究进展

    作者:杨超;张雷(综述);周利武;赵建宁(审校)

    长链非编码RNA( long non-coding RNA, lncRNA)是一类转录本长度大于200 nt,不具有翻译成蛋白质能力的RNA。 lncRNA DANCR是一种近年来在肝细胞癌中发现的特异性高表达的长链非编码RNA,具有高度调控细胞分化的作用。新研究表明, lncRNA DANCR在关节软骨损伤修复中也起着重要的调控作用,并有望成为促进滑膜间充质干细胞( synovi-um-derived mesenchymal stem cells,SMSCs)向软骨细胞增殖和分化的关键调控位点。文中就近年来DANCR促进SMSCs向软骨细胞增殖和分化过程中的作用及未来可能的研究热点进行综述。

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