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温血连续灌注供心全程不停跳保存和移植的实验研究
目的：研究长时间温血连续灌注供心全程不停跳保存和移植的心肌保护效果。
方法：采用广西巴马小型猪作为实验对象。①首先建立温血连续灌注供心全程不停跳保存模型。右颈内动脉至右头臂动脉插入10号主动脉灌注管，连接Y型三叉接头。结扎上腔静脉，剪断下腔静脉和右肺静脉，心脏跳动10~15次后于左侧头臂动脉远端阻断主动脉，开始主动脉灌注。回收胸腔内血液，去白细胞后保存，以备移植时体外循环膜肺预充。在连续温血灌注心脏不停跳下迅速切取供心，放置于专用存储装置内进行温血不停跳离体保存8小时。保存期间的灌注流量为每分钟100~120 ml；灌注压调节在45-55 mmHg之间；灌注温度37℃。按照双房标准原位心脏移植的方法在受体猪建立体外循环，修剪供心，保留部分右心房和部分左心房。心脏移植吻合顺序为左心房全部，1/2右心房，2/3肺动脉干，主动脉全部，剩余的右心房和肺动脉干。移植过程中需将主动脉灌注管的位置由右侧头臂静脉调到供心主动脉的根部。②对比研究：32只巴马小型猪随机分为两组：A组（心不停跳），8对，分别为供体和受体，供心采用常温血连续灌注不停跳保存8小时，然后供心在不停跳状态下进行心脏移植；B组（冷保存组），8对，分别为供体和受体，应用HTK保存液灌停供心后放入4℃HTK液中保存8小时，然后供心在低温停搏下行移植。记录心律失常的发生例数、移植吻合和体外循环的时间，以及移植后血管活性药物的应用剂量；检测供心保存期0.5小时，4小时和8小时的心肌氧摄取率、血清CK-MB和cTn-I变化；移植3小时后供心左心室血流动力学、心肌含水量、心肌组织光镜下改变、心肌丙二醛和ATP含量、心肌细胞原位凋亡和流式细胞学变化。 -
诱导性心室纤颤与晶体停搏液灌注具有相同的胎儿心肌保护作用
研究背景 处于宫内发育期间的胎儿如果患有先天性心脏畸形,心脏畸形可能逐渐加重,因此胎儿心脏外科干预治疗具有潜在的发展空间.怀孕期间实施畸形纠治可能预防由于病理性的血流方式所导致的心腔或大血管发育不良.但是,对佳的胎儿心肌保护研究策略尚未进行深入研究.本研究应用胎儿双心室工作模型,对诱导性心室纤颤和晶体停搏液灌注的心肌保护效果进行对比评估.方法实验用心脏取自孕龄115～125天的胎羊.使用Krebs-Henseleit溶液灌注离体心脏.在动脉导管以远结扎降主动脉,肺动脉侧枝均结扎以模拟胎儿循环.1组离体心脏采用常温诱导性心室纤颤(n=8),另外1组采用低温晶体停搏液灌注使得心脏停搏(n=8).之后均恢复Krebs-Henseleit溶液灌注.通过压力直径关系曲线测定心脏停搏前的心功能基础值以及停搏后的心功能指数.结果停搏后的心脏收缩功能指数检测显示,诱导性心室纤颤与晶体停搏液具有相同的心肌保护效果(停搏后左心室收缩指数分别为70%±5%vs68%±15%,P=0.52;右心室收缩指数分别为68% ±4.5%vs65%±4.5%,P=0.26).对于预防舒张期室壁张力的增加,两者的作用相似(左心室分别为32%±5.3%vs38%±11%,P=0.24;右心室分别为25%±3.3vs27%±2.1%,P=0.46).采用两种方法停搏后的心肌含水量均没有显著变化(84%±1.5%vs83.7%±0.9%,P=0.71).结论对于胎儿心肌,常温心室纤颤与低温晶体停搏液灌注能够提供相同的保护效果.由于胎儿心肌储备能力差,现阶段对于胎儿周围组织的温度控制方法有限,因此对于一些需要在宫内实施胎儿心脏畸形矫治的手术,采用常温心室纤颤保护心肌可能更为有利.
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异丙肾上腺素预适应诱导热休克蛋白72改善兔心保存
缺血预适应的心肌保护作用已在众多动物实验，甚至临床试验中得到证实〔1〕，但将其应用于长期供心保存方面的报道还甚少。我们利用异丙肾上腺素制造预适应模型，观察其对长期供心的保存效果，现报道如下。 材料与方法 1.实验模型：20只健康成年新西兰白兔，随机分为对照组和实验组，每组10只。实验组用异丙肾上腺素(上海市天丰药厂)1 mg/kg，耳缘静脉缓慢静脉推注，自然恢复24 h后，采用改良Langendorff离体兔心灌注模型，工作心稳定15 min后测各项血流动力学指标；心脏停跳，4℃保存6 h后放入Langendorff装置上复跳，工作心稳定15 min后再记录各项血流动力学指标。 2.观察指标：保存前、后工作心记录期末心率(HR)、冠状动脉流量(CF)、左室收缩末期压(LVESP)、左室舒张末期压(LVEDP)，计算心功能恢复率。取心尖前壁心肌0.5 g，加1.5 ml 生理盐水匀浆，取0.5 ml匀浆测定心肌酶学及一氧化氮（NO)，剩余1 ml匀浆多次离心后取10 μl点滴NCM膜。干燥好的NCM膜经50 nmol/L左旋咪唑处理5 min后，依次加一抗［抗热休克蛋白72(HSP72)单克隆抗体(美国Grace公司，1∶500］、二抗［兔抗鼠IgG－碱性磷酸酶复合物、四唑盐(NBT)/5-溴-4-氯3-吲哚磷酸(BCIP)］底物显色至适当反应深度后水冲终止。岛津薄层扫描仪（波长560 nm）对斑点印迹信号进行扫描，行HSP72定量。取适量左室前壁心肌，常规石蜡包埋，切片，免疫组织化学方法显色、摄片，行HSP72定位。利用荧光分析法测定NO含量；测定心肌组织肌酸激酶同功酶（CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH ）、脂质过氧化物（LPO）、超氧化物歧化酶（SOD）含量；测定心肌含水量。
