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他克莫司治疗肾小球疾病的研究进展
肾小球疾病是我国终末期肾病主要原因。其发病机制不明，主要涉及体液免疫和细胞免疫过程。近年，他克莫司治疗免疫性肾小球疾病在临床上取得较好疗效。本文综述了他克莫司治疗肾小球疾病的机制和治疗进展。
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他克莫司对人肾小球系膜细胞细胞周期相关蛋白表达的影响
目的 探讨他克莫司对体外培养的人肾小球系膜细胞细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin E 及p27kip1的影响及可能机制.方法 设正常对照组和他克奠司处理组,他克莫司组设为三个组(浓度分别为10 μmol/L、25 μmol/L、50μmol/L).四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测他克莫司组处理12 h后肾小球系膜细胞的增殖情况；流式细胞仪检测他克莫司组分别作用12、24、48 h后系膜细胞的上述三种蛋白质及与其结合的CDK2和CDK4的表达情况；选择有明显抑制作用的时间点(12 h),Western blot检测上述三种蛋白质的表达情况.结果 (1)作用12 h,他克莫司组均能抑制系膜细胞的增殖.(2)作用12、24、48 h,与对照组相比,浓度为10 μmol/L他克莫司对细胞周期蛋白cyclin D1、cyclin E及抑制因子p27kip1的表达无明显影响,而浓度为25、50 μmol/L时,cyclin D1及cyclin E明显降低,p27kip1表达明显升高,呈一定的剂量效应关系；且相同浓度的他克莫司在作用三个时间点后,cyclin D1、cyclinE及p27kip1的表达无明显差异.(3)作用12 h,与对照组相比,浓度为10μmol/L他克莫司对周期蛋白依赖性激酶CDK2、CDK4的表达无明显影响,而浓度为25、50 μ mol/L时,CDK2、CDK4的表达明显降低.结论 一定浓度的他克莫司可抑制系膜细胞的增殖,其作用机制至少部分与其影响细胞周期相关蛋白的表达有关.
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慢性移植物抗宿主病的预防和治疗
目的分析儿童异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后慢性移植物抗宿主病(cGVHD)的特点及甲泼尼龙(MP)、吗替麦考酚酯(MMF)与他克莫司(FK506)或环孢素A(CSA)联合免疫抑制治疗的效果,探讨有效治疗方案.方法共进行异基因造血干细胞移植45例,30例完全植入.完全植入的患儿中脐血移植(UCBT)17例,异基因外周血干细胞移植(PBSCT)13例.GVHD的预防采用CSA、MP、氨甲蝶呤及MMF等组合的方案.cGVHD患者采用MP+MMF+FK506或MMF+CSA联合治疗方案. 结果 30例完全植入的患儿中发生cGVHD者9例(30%);其中血缘相关PBSCT 13例中发生cGVHD 6例(46%);UCBT者完全植入17例,发生cGVHD 3例(18%).急性GVHD迁延者6例(67%).1例患儿经CSA+MMF联合治疗痊愈;8例采用MP+MMF+FK506"三联"治疗,cGVHD症状均得到有效控制,有效率为100%,2例分别并发巨细胞病毒间质性肺炎或败血症死亡,死亡率为22%;7例无事件生存>3年(78%).副作用有肝损害、肾损害、高血压、关节滑膜炎、心律失常,均在减药或停药、对症处理后毒副作用消失.感染是主要的合并症和死亡原因.结论 PBSCT者cGVHD发生率较UCBT者高;急性GVHD迁延是发生cGVHD的高危因素;选用包含MP、MMF、FK506(或CSA)的2～3种药物联合免疫治疗cGVHD,效果理想,患儿均能耐受,是值得推广的cGVHD治疗方案;感染是cGVHD患儿死亡的主要原因,应予以高度重视.
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抑制P-糖蛋白可加强FK506对缺血性脑损伤的保护作用
目的 探讨多药耐药蛋白(P糖蛋白,P-glycoprotein,P-gp)对FK506透过血脑屏障进入脑内浓度及其脑保护作用的影响.方法 用腔内线栓法制造小鼠脑缺血再灌注动物模型(MCAO);用甲酚紫染色法显示脑梗死区;用Western blot方法观察P-gp的表达;用ELISA法检测FK506浓度;用TUNEL法观察凋亡细胞.结果 MCAO 30 min再灌注3 h纹状体P-gp的表达开始显著升高,持续至24 h,MCAO 90 min组P-gp的表达升高幅度更大.脑缺血前后,P-gp抑制剂tariquidar(TQD)对血中FK506浓度的影响差异无统计学意义;使用TQD后,缺血侧大脑半球FK506含量显著升高.单独使用FK506时,只有较大剂量(5 mg/kg)才有抗细胞凋亡作用.单独使用TQD无抗细胞凋亡和减少脑梗死体积的作用,但当TQD与FK506合用时,FK506较低剂量(1 mg/kg)即可发挥抗细胞凋亡作用,使脑梗死体积从(113.5±11.1)mm3显著降低至(70.6±10.2)mm3(P＜0.01).结论 TQD抑制P-gp活性,增加FK506进入脑内的浓度,降低FK506脑保护作用的阈值(从5 mg/kg降低至1 mg/kg),从而加强FK506的神经保护作用.
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FK506及其纳米粒的房水药代动力学的实验研究
目的探讨FK506及其纳米粒的房水药代动力学特征.方法 42只新西兰白兔分为:(1)FK506纳米胶体液滴眼组(18只兔)和注射组(16只兔):双眼结膜囊滴入或结膜下注射10 μg FK506的纳米胶体溶液;(2)不含纳米微粒的FK506滴眼组(8只兔):再分为2个亚组,即双眼结膜囊分别滴入20 μg和40 μg FK506的滴眼液.不同时间点采集房水,酶联免疫法测定房水中FK506含量,计算药代动力学参数.结果含10 μg FK506的纳米胶体溶液结膜下注射和滴眼后房水有效药物浓度可分别维持96 h和16 h;结膜下注射后2 h房水浓度为(1.15±0.25) ng/ml、6～96 h房水浓度为(9.62±2.19 )～(2.60±0.21) ng/ml,滴眼16 h内房水浓度为(15.50±3.39)～(2.59±0.83) ng/ml;药代动力学参数分别为:达峰时间(Tmax)(64.00±13.86)h和(1.25±0.50)h,达峰浓度(Cmax)(10.16±1.37) ng/ml 和(15.52±2.37) ng/ml,曲线下面积(AUC0→t)(612.48±54.39) ng·ml-1·h-1 和(152.44±16.74)ng·ml-1·h-1,吸收速率常数(Ka)0.040±0.004和3.790±0.730,平均滞留时间(MRT) (58.53±5.42)h和(8.20±1.28)h.房水中FK506质量浓度呈一室模型.不含纳米微粒的FK506(20 μg和40 μg)液滴眼后房水有效药物浓度维持均≤4 h;其中含20 μg FK506液的Tmax为1 h,Cmax为(18.93±6.95) ng/ml;含40 μg FK506液的Tmax为2 h;Cmax 为(28.33±1.31)ng/ml. 结论采用FK506纳米粒胶体溶液行结膜下注射和滴眼时均可延长FK506药物在房水中的滞留时间,而且结膜下注射能使房水中维持的有效药物浓度相对较低和时间更长.
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他克莫司滴眼液对真菌性角膜炎PKP术后早期免疫排斥预防作用的观察
目的 观察他克莫司滴眼液对真菌性角膜炎患者穿透性角膜移植术(PKP)后早期免疫排斥反应的预防作用.方法 回顾性系列病例研究.收集2013年3月至2015年12月于山东省眼科研究所确诊为真菌性角膜炎接受PKP术后立即局部应用他克莫司滴眼液的患者26例(26只眼)及术后立即局部应用1％环孢素A滴眼液的患者24例(24只眼).所有患者术后2周若未发现真菌复发开始局部联合使用低浓度糖皮质激素滴眼液.对术后免疫排斥反应发生、真菌感染复发、眼压、用药刺激症状等进行观察.采用x2检验对免疫排斥反应发生率进行统计学分析,采用独立样本t检验对计量资料进行统计学分析.结果 手术后平均随访7个月(3～12个月).随访期内,他克莫司组免疫排斥反应发生率为15.3％(4/26),而环孢素A组为47.8％(11/24) (x2=5.510,P＜0.05).他克莫司组1例患者、环孢素A组2例患者术后发生真菌感染复发.他克莫司组2例患者、环孢素A组4例患者出现继发性青光眼.他克莫司组3例患者局部应用他克莫司滴眼液后出现轻微灼热刺激症状,环孢素A组13例患者局部应用环孢素A滴眼液后出现轻微灼热刺激症状.结论 他克莫司滴眼液可以有效防治真菌性角膜炎患者PKP术后早期免疫排斥反应发生,安全性好.
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FK506缓释系统前房植入抑制兔高危角膜移植术后的免疫排斥反应
目的探讨前房植入FK506药物缓释系统(DDS)对兔高危角膜移植术后免疫排斥反应的抑制作用和FK506房水药物浓度与免疫排斥反应的关系.方法 107只新西兰白兔中随机数字法选取73只兔进行角膜新生血管化模型的制作,其中68只兔作为受体成功建立高危角膜移植动物模型,随机数字法分为对照组、空白DDS前房植入组、环孢素A(CsA)DDS前房植入组(含CsA 1 mg)、0.1%FK506眼液滴眼组及FK506 DDS前房植入组(含FK506 0.5 mg).角膜移植术后观察各组角膜植片排斥发生的时间,移植术后1周取各组实验兔眼房水和静脉血进行FK506药物浓度检测.0.1%FK506眼液滴眼组和FK506 DDS前房植入组在移植术后的不同时间点抽取实验兔眼房水和静脉血,进行FK506药物浓度的检测.观察各组兔移植术后4周和观察期结束时角膜植片的病理变化,同时应用原位杂交的方法检测各组角膜植片内白细胞介素2受体α(IL-2Rα)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、Fas及FasL mRNA的表达.结果 FK506 DDS前房植入组角膜植片存活时间超过180 d,明显优于其他各组(F=926.37, P=0.0000),其房水和角膜组织中的FK506药物浓度明显高于FK506眼液滴眼组(T=21.00, P=0.0022).FK506 DDS前房植入组在术后24周内均能在房水中检测出FK506.术后4周对照组和空白DDS前房植入组有大量的炎性细胞浸润,并有明显的IL-2Rα和MCP-1 mRNA的表达,而CsA DDS前房植入组、FK506眼液滴眼组及FK506 DDS植入组角膜未见明显的炎性细胞浸润,未见IL-2Rα和MCP-1 mRNA的表达.各组均未见明显的Fas和FasL mRNA的表达.结论前房植入FK506 DDS可有效地抑制高危角膜移植术后免疫排斥反应的发生,房水中较高的FK506药物浓度是防治术后发生免疫排斥反应的重要因素.
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他克莫司软膏对特应性皮炎皮损角质形成细胞Toll样受体2和4表达的影响
目的:探讨Toll样受体 (Toll-like receptor,TLR) 2和 TLR4在特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)发病机制中的意义及外用他克莫司软膏(商品名,普特彼)对TLR2和 TLR4表达的影响.方法:采用免疫组织化学法检测9例中至重度AD患者急性发作期炎性皮损与正常对照皮肤角质形成细胞TLR2和 TLR4的表达, 以及外用他克莫司软膏单一疗法治疗AD 3周后TLR2和 TLR4表达的变化.结果:免疫组化检测显示在正常皮肤基底层角质形成细胞胞膜散在表达TLR2和TLR4.TLR2和TLR4在AD急性发作期炎性皮损角质形成细胞胞膜及胞浆过度表达,以细胞膜表达为主,主要定位于基底层至颗粒层;他克莫司治疗3周后改善特应性皮炎皮损角质形成细胞的TLR2和TLR4表达,主要定位于基底或基底上层角质形成细胞膜.结论:正常角质形成细胞表达的TLR2和TLR4是构成皮肤天然免疫系统的组成部分.AD角质形成细胞诱导性过度表达TLR2和TLR4与AD皮肤天然免疫炎症反应有关,外用他克莫司可通过直接或间接作用抑制角质形成细胞的TLR2和TLR4诱导性表达,从而抑制与TLR-细胞核因子κB(NFκB)信号转导和调控途径有关的AD皮肤天然免疫炎症反应.
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他罗利姆对截肢大鼠NO和H2S的活化作用
目的 观察大鼠截肢创伤应激后重要血管舒缩因子的变化及他罗利姆(FK506)对其调控作用,为截肢术后引起的远隔器官损伤的干预治疗提供依据.方法 建立大鼠左后肢截肢创伤模型,将雄性Wistar大鼠80只随机分为10组:正常对照组、截肢后1h、2h、4h、6h、12h、24h、48h、72h组、他罗利姆干预组.测定血浆H2S、AngⅡ、NO的含量,心、肺、肝、肾组织CSE活性.结果 与对照组比较,截肢创伤后1h血浆AngⅡ含量明显升高,于6h达峰值(684.497±77.515)pmol/L(P<0.05),72h恢复至正常水平;血浆NO、H2S截肢创伤后4h明显降低,6h达低,分别为(8.553±0.896)μmol/L(P<0.05)、(55.654±6.332)μmol/L(P<0.05),24h恢复正常值.他罗利姆干预后,血浆H2S、NO,心、肺、肝、肾组织CSE活性较创伤6h组明显升高(P<0.05),血浆AngⅡ含量无明显变化.结论 大鼠截肢创伤应激后血管收缩作用增强,他罗利姆主要升高血管舒张因子NO和H2S,对Ang Ⅱ无明显调控作用.
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婴幼儿肝移植术后FK506的合理应用
婴幼儿肝移植术后可应用以FK506为基础的免疫抑制剂,FK506的药物浓度在术后不同阶段应维持于何种水平,目前尚无统一标准.本研究对2006年9月-2009年11月我院行肝移植的婴幼儿13例进行回顾性分析,总结术后不同阶段FK506的用量、血药浓度水平及相关并发症情况.
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他克莫司对高糖诱导人肾小管上皮细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制研究
目的：探讨他克莫司（FK506）对高糖诱导人肾小管上皮细胞（ HK-2）增殖、凋亡及其表达相关炎性因子的影响。方法于2014年10月—2015年5月，以人HK-2为研究对象，分为空白对照组、高糖诱导组（30 mmol/ L 高糖）、甘露醇组（24.5 mmol/ L 甘露醇）、20μmol/ L FK506对照组、不同浓度 FK506干预组（30 mmol/ L 高糖+1、5、10、20μmol/ L FK506）及核因子（NF）-κB 信号通路抑制剂组（30μmol/ L Bay11-7082+30 mmol/ L 高糖），各组均培养24 h。应用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测各组HK-2 NF-κB mRNA 的表达；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测白介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达；CCK-8法测定细胞增殖；流式细胞技术检测细胞凋亡。结果各组NF-κB mRNA 表达水平比较，差异有统计学意义（P <0.001）；其中高糖诱导组NF-κB mRNA 表达水平高于空白对照组；不同浓度 FK506干预组NF-κB mRNA 表达水平低于高糖诱导组，且呈浓度依赖性；NF-κB信号通路抑制剂组NF-κB mRNA 表达水平低于空白对照组、高糖诱导组及1、5、10μmol/ L FK506干预组（P <0.05）。各组IL-6、TNF-α表达水平比较，差异均有统计学意义（P <0.001）；其中高糖诱导组IL-6、TNF-α表达水平高于空白对照组；不同浓度 FK506干预组IL-6、TNF-α表达水平高于空白对照组，低于高糖诱导组，且呈浓度依赖性；NF-κB信号通路抑制剂组IL-6、TNF-α表达水平高于空白对照组，低于高糖诱导组和1、5、10μmol/ L FK506干预组（ P <0.05）。处理方法与时间对HK-2增殖存在交互作用（F交互=16.315，P交互<0.001）；处理方法对HK-2增殖主效应显著（F组间=24.618，P组间<0.001）；时间对HK-2增殖主效应显著（F时间=16.315，P时间<0.001）。各组24 h 凋亡率比较，差异有统计学意义（P <0.001）；其中高糖诱导组24 h 凋亡率高于空白对照组；不同浓度 FK506干预组和NF-κB信号通路抑制剂组24 h 凋亡率低于高糖诱导组（P <0.05）。结论 FK506对正常人HK-2表现为毒性作用，而对高糖环境下的HK-2则表现为保护作用。高糖可通过NF-κB信号通路介导肾脏炎症，而 FK506缓解糖尿病肾病进展的机制可能与NF-κB信号通路有关。
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他罗利姆对肝脏保存再灌注损伤中氧自由基作用的影响
目的探讨氧自由基在肝脏保存再灌注损伤(HPRI)中的作用及FK506的保护作用.方法应用离体大鼠肝脏保存再灌注模型,观察肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)含量,灌注液天冬氨酸转氨酶(AST)活性,肝细胞形态学变化以及他罗利姆(FK506)对上述指标的影响.结果 HPRI时,SOD活性显著下降(P＜0.05),AST活性和MDA含量明显升高(均P＜0.05),肝细胞形态发生异常变化;使用FK506后,上述指标的异常变化均明显减轻,其差异有显著性(P＜0.05).结论氧自由基是导致HPRI的重要因素,FK506能清除氧自由基,可以减轻HPRI.
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他克莫司对创伤性脑损伤大鼠神经行为和记忆能力的影响
背景:目前他克莫司对周围神经保护作用的研究比较多,而其是否具有促进中枢神经再生和保护作用.目的:通过神经行为学观察和检测突触素的表达及细胞凋亡数量,探讨他克莫司对大鼠脑液压伤后神经行为和记忆的影响.设计:随机分组,平行对照(自我前后对照、相互对照)实验.单位:大连医科大学附属第二医院神经外科和复旦大学附属中山医院神经外科.材料:实验于2002-11在上海长征医院神经外科实验室完成.选择由复旦大学实验动物科学部提供的雄性SD大鼠24只为观察对象,体质量(200±20)g,用抽签法随机分为对照组、损伤组和治疗组,每组8只.干预:伤前24 h以20 g/L戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔麻醉,损伤组和治疗组模型制备参照美国Dixon建立的大鼠脑液压损伤模型,打击能量为151.95～172.21 kPa,相当于中度颅脑损伤,对照组只埋管不打击.治疗组伤后5 min以1 mg/kg腹腔注射他克莫司,1次/d,连续7 d.损伤组和对照组腹腔注射生理盐水.伤前、伤后3 d和伤后1周分别进行行走试验、平衡试验和记忆试验.于伤后1周全部大鼠断头取脑,分别取海马、伤灶周围额叶皮质、基底核部位进行免疫组织化学检测,图像定量分析技术检测突触素在海马各区以及伤灶周围的额叶皮质与基底节的分布,用流式细胞仪检测凋亡细胞计数.主要观察指标:①各组动物于伤前、伤后3 d和伤后1周时行走试验、平衡试验和记忆试验成绩.②各组动物皮质、海马、基底核区突触素表达定量分析结果.③各组动物皮质、海马、基底核区细胞凋亡百分率.结果:24只大鼠全部进入结果分析.①治疗组伤后3 d和伤后1周时行走试验成绩和平衡试验成绩低于损伤组[行走试验成绩:(7.5±2.5)s,(5.5±2.1)s,(10.5±2.5)s,(8.2±2.5)s.平衡试验成绩:(3.4±0.5)分,(2.5±0.2)分,(5.7±0.2)分,(5.0±0.5)分,P＜0.05～0.01],治疗组伤后3 d和伤后1周时记忆实验成绩高于损伤组[(4.9±1.7)s,(6.2±2.3)s,(4.0±1.5)s,(4.4±2.6)s,P＜0.05～0.01].②治疗组皮质、海马、基底核区突触素表达量显著高于损伤组(140.36±3.87,45.52±2.16,31.67±2.35,96.25±2.85,24.35±2.47,20.49±2.08,P＜0.01);对照组显著高于治疗组(162.24±3.52,50.58±2.31,42.69±2.53,P＜0.01).③治疗组海马、皮质、基底节的细胞凋亡率显著低于损伤组[(10.37±2.12)%,(18.39±2.87)%,(12.78±2.45)%,(21.14±4.85)%,(38.57±3.78)%,(21.18±4.59)%,P＜0.01].损伤组海马、皮质、基底核的细胞凋亡率显著高于对照组[(3.85±2.56)%,(4.96±2.15)%,(3.52±2.17)%,P＜0.01].结论:他克莫司治疗后能促进大鼠海马、皮质及基底核区突触素表达,减少海马和皮质及基底核区神经细胞凋亡,对实验动物脑损伤后神经行为和记忆的恢复有促进作用.
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他克莫司处理供者树突状细胞在诱导大鼠同种心脏移植免疫耐受中的作用
背景:诱导供者特异性免疫耐受被认为是终克服器官移植后排斥反应的有效途径,近年来关于未成熟树突状细胞在诱导免疫耐受中的重要作用日益受到关注.目的:观察他克莫司处理的供者未成熟树突状细胞对大鼠同种异体心脏移植免疫耐受的影响,分析未成熟树突状细胞诱导免疫耐受的作用途径.设计:随机对照动物实验.材料:实验于2006-04/2006-12在青岛大学医学院附属医院动物实验中心完成.以45只Wistar大鼠为供体,45只SD大鼠为受体,行颈部心脏移植45例次.按随机数字表法分为3组,每组15例次,进行不同的预处理.方法:对照组、未经他克莫司处理组及他克莫司处理组移植前7 d分别经尾静脉注射生理盐水、供者未成熟树突状细胞和他克莫司处理的未成熟树突状细胞.分别测定移植后SD大鼠与Wistat 大鼠及第3品.系Lewis大鼠的单向混合淋巴细胞反应.主要观察指标:各组受体大鼠移植心脏存活时间、心肌病理及血清白细胞介素2、白细胞介素4、白细胞介素10、Y-干扰素含量变化.结果:①未经他克莫司处理组大鼠的移植心脏存活时间较对照组明显延长(P＜0.01),他克莫司处理组大鼠的移植心脏存活时间进一步延长(P＜0.05).②混合淋巴细胞培养结果显示为供者特异性.③各组大鼠血清白细胞介素2、Y-干扰素、白细胞介素4、白细胞介素10含量差异具有显著性意义(P＜0.01).代表Th1的白细胞介素2、Y-干扰素水平明显降低,代表Th2的白细胞介素4、自细胞介素10水平明显增高.结论:未成熟树突状细胞能够诱导同种异体大鼠心脏移植免疫耐受;他克莫司处理的未成熟树突状细胞能够加强这种免疫耐受,且这种耐受是供者特异性的.其可能主要通过调节T细胞免疫应答类型(Th1至Th2的免疫偏移)、诱导调节性T细胞和诱导T细胞失能等途径来参与免疫耐受的形成.
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环孢素A和他克莫司对移植肾P-糖蛋白表达的影响:3年随访移植肾活检
目的:观察环孢素A和他克莫司对人类移植肾组织P-糖蛋白表达影响的差异,分析两种药物肾毒性差异的分子作用途径.方法:实验于2005-01/12在南京医科大学临床肾脏病学实验室完成.选择在南京医科大学第一附属医院泌尿外科肾移植中心接受肾移植的患者60例,肾移植后时间均在3年以上,根据移植后免疫抑制方案不同将其分为2组,环孢素A组32例患者采用强的松(5 mg/d)+骁悉(1.5 g/d)+环孢素A(初始剂量为5 mg/(kg·d))免疫抑制治疗;他克莫司组28例患者采用强的松+骁悉+他克莫司(初始剂量为0.1 mg/(kg·d))免疫抑制治疗,强的松、骁悉剂量同环孢素A组.①记录两组患者的一般临床资料.②移植肾活检,比较肾组织慢性移植肾排斥的班夫评分(Ⅰ级:间质浸润同时发现中度或重度动脉炎病灶;Ⅱ级:轻度或重度内膜炎或严重的动脉内膜炎并涉及＞25%的腔体;Ⅲ级:跨壁动脉内膜炎和/或动脉纤维样变和内侧平滑肌细胞坏死伴随淋巴细胞炎症)及平均慢性化病变积分(由小管萎缩、动脉病变、间质纤维化3项评分得出的均值,其中每项0～3分,依次表示＜25%,26%～50%,51%～75%和＞75%的观察视野).③免疫组织染色检测移植肾P-糖蛋白的表达并借助图像分析软件比较其在近端肾小管染色强度(半定量为0～4级,0为阴性,4为强)的差异.结果:60例患者全部进入结果分析.①环孢素A组血肌酐、尿蛋白排泄量及血脂水平显著高于他克莫司组(P＜0.05),肌酐清除率显著低于他克莫司组(P＜0.05).②肾毒性指标小管萎缩、动脉透明样变、间质纤维化的发病人数环孢素A组显著高于他克莫司组(P＜0.05),环孢素A组慢性化病变积分也显著高于他克莫司组(P＜0.05).③P-糖蛋白主要分布于肾小管顶膜、基底膜和细胞浆内.环孢素A组的染色强度显著低于他克莫司组(3.1±0.7,3.8±0.4,P＜0.01).结论:应用环孢素A进行肾移植术后免疫抑制的患者发生神经钙调蛋白抑制剂肾毒性的比率和程度均明显高于他克莫司组,其中P-糖蛋白的表达水平低下是其可能的分子作用途径.
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他罗利姆对癫痫大鼠海马氧化应激、凋亡诱导因子及神经元凋亡的影响
目的 研究免疫抑制剂他罗利姆(FK506)对癫痫持续状态(SE)大鼠海马组织一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、丙二醛(MDA)及线粒体膜电位、凋亡诱导因子(AIF)的影响.方法 (1)将126只Wistar大鼠随机分为癫痫组、FK506干预组、对照组各42只.建立氯化锂-匹鲁卡品癫痫模型,FK506干预组在注射匹鲁卡品之前24、1h2次腹腔注射FK506,采用比色法和羟胺法分别检测海马组织中NO、MDA含量、NOS活性；采用免疫组化法检测海马组织神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达；尼氏染色观察神经元形态变化.(2)24只Wistar大鼠随机分为癫痫组、FK506干预组、生理盐水干预组、对照组,每组6只.FK506干预组在注射匹鲁卡品之前24 h、lh2次腹腔注射FK506,生理盐水干预组注射等体积生理盐水；于癫痫发作24 h后处死,应用流式细胞仪测定线粒体内罗丹明123的荧光强度和线粒体的大小；Western印迹检测大鼠海马线粒体和细胞核AIF的水平.结果 与癫痫组相比,FK506干预组NO、MDA含量、NOS活性明显降低(P均＜0.01)；海马nNOS、iNOS的表达降低(P＜0.01)；线粒体膜电位升高(P＜0.05)；海马线粒体AIF水平显著增高,而细胞核AIF水平显著降低(P均＜0.05)；海马存活神经元增加.结论 FK506可能通过抑制NO引起的氧化应激损伤,稳定线粒体膜电位,抑制AIF的易位,发挥脑保护作用.
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CaN抑制剂对H2O2诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡的影响
目的:探讨过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡以及钙调神经磷酸酶(CaN)抑制剂他罗利姆(FK506)对细胞的保护作用,为心肌缺血/再灌注所致的心肌损伤及拮抗机制提供实验依据.方法:将大鼠H9c2心肌细胞株体外培养进行实验,实验分为正常对照组(n=6)和H2O2各处理组(n=6).正常对照组采用生理盐水,实验各组分别用50、100、200和400/μmol·L-1H2O2处理1、6和24 h后,用罗丹明(Rhodamme-123)荧光探针检测心肌细胞线粒体膜电位(ACmt)变化,用Annexin-V/PI双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡率;并采用100μmol·L-1H2O2处理6 h建立大鼠心肌细胞凋亡的损伤模型,给予高、低剂量FK506(0.60和0.15 μmol·L-1)干预,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率.结果:①100、200和400μmol.L-1H2O2处理组1 h时线粒体膜电位均较对照组显著升高(P<0.01),6和24 h时,200和400 μmol·L-1组△ψmt值均低于100μmol.L-1组(P<0.05),且400 μmol·L-1组低于200 μmol·L-1组(P<0.05),②200和400 μmol·L-1H2O2处理组1 h时心肌细胞凋亡率和坏死率均较对照组显著增加(P<0.05),24 h达高峰.③高、低剂量FKS06干预组与单纯100～tmol·L-1H2O2处理组比较,心肌细胞凋亡率均明显降低(P<0.01),高、低剂量组比较差异无显著性(P>0.05).结论:H2O2可损伤心肌细胞线粒体,引起线粒体膜电位下降,导致细胞凋亡.CaN抑制剂对H2O2诱导的大鼠H9e2心肌细胞凋亡具有保护作用.
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FK506促进乳鼠雪旺细胞增殖的实验研究
目的观察FK506对体外培养的乳鼠雪旺细胞增殖的影响.方法将纯化的雪旺细胞分两组,一组设为对照,另一种加含终浓度为0.5ng/ml FK506的DMEM/F12培养液培养,用MTT法检测不同时间点的OD值并绘制生长曲线,另在培养第48、72小时后用3H-胸腺嘧啶核甙测定法检测其DPM值.结果经含0.5ng/mlFK506培养液培养的雪旺细胞,其对数生长期提前出现,并且在峰值上高于对照组;接种后48h和72h,3H-胸腺嘧啶核甙检测DPM值实验组也高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 FK506有促进雪旺细胞分裂增殖的作用,可能是其促进周围神经再生的重要机制之一.
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FK506对GAP-43和Tau蛋白活性影响的实验研究
目的观察FK506缓释膜片对大鼠神经损伤后生长相关蛋白(Growth-associated protein-43,GAP-43)和Tau蛋白活性的影响.方法将FK506缓释膜片(释放速度为1mg*d,共21 d)放置于损伤坐骨神经周围为实验组,损伤坐骨神经周围不放置药物者为对照组.于术后3 d,术后1、2、3、4、6和8周共7个时间组,分别取神经缝合口近端和远端的神经段、腰段脊神经节及脊髓腰膨大,用SABC法检测GAP-43及Tau蛋白的阳性标记量.结果实验组于术后1～4周已出现GAP-43及Tau蛋白表达增强,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).结论 FK506能增加GAP-43及Tau蛋白表达,对周围神经损伤后的神经再生有一定的促进作用.
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多种免疫抑制剂对肾毒血清性肾炎大鼠肾组织中MMP-9的表达影响
目的 探讨免疫抑制剂霉酚酸酯、来氟米特和他克莫司对肾毒血清性肾炎大鼠肾组织中基质金属蛋白酶-9表达的影响.方法 制备肾毒血清性肾炎大鼠模型,并随机分为病理对照组、霉酚酸酯治疗组、来氟米特治疗组和他克莫司治疗组,每组各10只.各治疗组均给予相应药物灌胃给药每天1次,2周后观察血清总蛋白(Tp)、白蛋白(Alb)、血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)水平.应用免疫组织化学观察肾组织中基质金属蛋白酶-9的表达.结果 基质金属蛋白酶-9在病理对照组肾小球和肾小管中的表达均较正常对照组增高(P＜0.01);与病理对照组比较,霉酚酸酯、来氟米特和他克莫司治疗后可使其表达减少(P＜0.01),且来氟米特治疗组较其它两用药组下降明显(P＜0.05).各治疗组与病理对照组比较Tp、Alb增加(P＜0.01),Scr、BUN降低(P＜0.01).结论 霉酚酸酯、来氟米特和他克莫司治疗均能减少肾毒血清性肾炎大鼠肾组织中基质金属蛋白酶-9的表达,改善肾功能,其中来氟米特效果理想.
