首页 > 文献资料
-
CXCL12对人早孕期蜕膜基质细胞侵袭性的调节作用
正常妊娠时,独特的母-胎免疫调节对胚胎的生长、发育至关重要.母-胎界面主要组成细胞蜕膜基质细胞(dedidual stromal cells,DSCs)与滋养细胞的相互作用是母-胎免疫调节的重要环节.CXCL12/CXCR4是一对功能广泛的趋化因子配体受体对,本课题组前期研究发现人早孕期DSCs表达趋化因子受体CXCR4,而滋养细胞表达其配体CXCL12,提示CXCL12/CXCR4可能是滋养细胞-DSC相互作用的重要调节分子[1].本研究拟分析滋养细胞来源的CXCL12对DSCs增殖和侵袭功能的调节作用,以解析CXCL12/CXCR4信号通路在滋养细胞-DSC相互调控及母-胎界面免疫微环境形成中的作用.
-
人早孕蜕膜组织及蜕膜基质细胞趋化因子受体及配体的转录特征
妊娠后,蜕膜化的子宫内膜(蜕膜,decidua)和发育的滋养细胞共同构成了母-胎界面.同种异体移植物的胎儿,能够在母体内存活直至足月分娩,这其中涉及母-胎界面极为复杂的免疫调节机制.蜕膜主要由蜕膜基质细胞(decidual stromal cell,DSC)(75%)和淋巴细胞构成,能分泌多种细胞因子,具有广泛的生物学功能,是母-胎界面来自母体的重要成分[1].趋化因子是一组由70～90个氨基酸组成的小分子蛋白质,在免疫调节、器官发生和炎症反应等机体生理、病理活动中发挥重要的作用.本研究以趋化因子受体及其配体为切入点,分析了早孕期蜕膜组织及原代培养的DSC 18种趋化因子受体及相应配体mRNA转录水平,以揭示蜕膜在母-胎免疫调节机制中的作用,同时也为进一步揭示母-胎免疫调节的实质提供新思路.
-
趋化因子受体 CXCR7在人早孕期滋养细胞和蜕膜基质细胞的表达
目的研究趋化因子受体CXCR7在人早孕期母-胎界面的表达特征。方法收集人早孕期绒毛与蜕膜组织，免疫组织化学技术分析趋化因子受体CXCR7及CXCR4在母-胎界面的表达情况；分别分离培养人早孕期滋养细胞及蜕膜基质细胞，免疫细胞化学技术分析CXCR7和CXCR4在两种细胞的表达。结果人早孕期绒毛与蜕膜组织及体外分离培养的人早孕期滋养细胞、蜕膜基质细胞均可观察到特异性CXCR7和CXCR4阳性染色，但两种细胞CXCR7染色强度（平均光密度值）均略低于CXCR4，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论人早孕期滋养细胞及蜕膜基质细胞共表达趋化因子受体CXCR7和CXCR4，提示CXCR7可能在母-胎免疫微环境形成中也起重要作用。
-
母—胎界面免疫分子的相互作用以及其对妊娠结局的影响
正常妊娠的情况下,胎儿表达部分父系HLA分子,但不引发母体的明显免疫反应,是由于在母胎界面存在着复杂精细的交流机制,例如多种母体免疫细胞亚群的激活和抑制、蜕膜基质细胞分泌细胞因子参与调控等.这些机制使子宫局部形成耐受性的环境,使胎儿能正常发育.相反的,母胎交流机制障碍也可能导致母体对胎儿产生免疫排斥,从而造成异常妊娠.本文讨论在母—胎界面上发生的蜕膜NK细胞和胎儿滋养层细胞HLA分子的相互作用,解释母胎耐受的产生机制,并讨论母—胎界面免疫机制异常对妊娠结局的影响.
-
补肾益气方对人蜕膜基质细胞活性及分泌功能的影响
目的 观察补肾益气方对人早孕蜕膜基质细胞活性及其分泌白细胞介素10(IL-10)、干扰素γ(IFN-γ)及泌乳素(PRL)的影响.方法 收集孕6～10周行人工流产的正常妊娠妇女蜕膜组织,体外分离、培养蜕膜基质细胞,分别以10％,20％补肾益气方含药血清处理细胞24 h、36 h、48 h,同时设立相应培养时间相同浓度的血清对照组,未添加血清组为空白对照组.MTT法检测补肾益气方对蜕膜基质细胞活性的影响.ELISA法检测细胞培养上清中IL-10、IFN-],化学发光法检测PRL分泌,流式细胞术检测IL-10R表达.结果 36h起,20％中药组蜕膜基质细胞活性高于20％血清对照组(P＜0.05),48 h时10％,20％中药组细胞活性均高于相应血清对照组(P均＜0.05).24 h起,10％,20％中药组分泌IL-10高于各对照组(P均＜0.01);48 h时,20％中药组IL-10浓度高于10％中药组(P＜0.05)并且中药组IL-10R表达高于各对照组(P＜0.01),20％含药血清组IL-10R表达又高于10％含药血清组(P＜0.05).48h之内,中药组IFN-γ水平与血清对照组相近(P＞0.05).24 h起,10％,20％中药组分泌的PRL高于各对照组(P均＜0.01),并且20％中药组PRL水平高于10％中药组(P＜0.01);48 h时2中药组之间PRL水平无显著性差异(P＞0.05).结论 补肾益气方可能通过促进IL-10、PRL的分泌,上调IL-10受体表达,调控蜕膜基质细胞生长,达到保胎的目的.
-
吗啡对体外培养人早孕蜕膜基质细胞MORmRNA表达的影响
我国女性吸毒者数量上升,一些省区,女性吸毒所占比例达40％.女性吸毒,尤其是孕期吸毒,可对受精卵、胚胎、胎儿、新生儿及乳儿的健康产生严重影响.本实验以体外培养人早孕蜕膜基质细胞为实验对象,探讨阿片类药物吗啡直接作用于蜕膜基质细胞引起μ阿片受体(MOR)表达的影响,进一步阐明阿片类药物滥用对蜕膜组织的影响.1材料与方法1.1人早孕蜕膜组织的留取:留取2009年10月至2010年1月山西医科大学第一医院妇产科人流室提供孕6～10周人工流产蜕膜组织10例.孕妇健康无合并症,年龄20～30岁,B超证实为宫内妊娠.
-
小鼠子宫蜕膜基质细胞的分离培养
目的:蜕膜组织的细胞成分相当复杂,其中蜕膜基质细胞约占全部蜕膜细胞数的75%,其能分泌多种细胞因子,既参与蜕膜营养供应作用又能调节蜕膜局部的免疫微环境.实验拟建立良好的小鼠子宫蜕膜基质细胞培养方法,为进一步建立蜕膜细胞共培养系统将为研究病理性妊娠打下良好的基础.方法:实验于2006-09/2008-01在泰山医学院实验动物中心,SPF级实验室完成.①实验材料:8～10周龄C57BL/6雌性小鼠,由北京维通力化实验动物技术有限公司提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.②实验方法:选用孕龄6～8 d的C57BL/6小鼠蜕膜组织进行体外培养,采用胰蛋白酶、胶原酶、透明质酸酶混合消化,进行全组分蜕膜细胞培养,采用原代细胞过夜换液方法清除红细胞、淋巴细胞和不贴学的细胞成分,利用传3代方法对蜕膜基质细胞进行分离提纯.纯化后,观察蜕膜基质细胞的生长变化规律,制作细胞爬片,用催乳素免疫组织化学试剂盒检测培养细胞的成分.结果:①小鼠蜕膜基质细胞在接种24 h后大部分已贴壁,贴壁生长的细胞成纤维母细胞状,一般培养5-7 d后细胞融合成单层.原代培养的蜕膜基质细胞在含10%胎牛血清的培养液中可增生数周,四五天传代1次,传代后的细胞形态无明显变化,而传代培养极性渐不明显.②免疫组织化学显示,体外培养传代后95%阳性细胞为蜕膜基质细胞,细胞大小形状基本均一,染色特点为胞质内可见细小的棕色颗粒,且越近胞核染色越深.结论:采用复合酶消化,换液传代方法提纯蜕膜组织,方法简单、经济实用,并可获得较高纯度的蜕膜基质细胞.
-
孕酮对蜕膜基质细胞体外增殖、凋亡影响
目的:探究孕激素对人蜕膜基质细胞体外增殖、凋亡的影响.方法:原代培养蜕膜细胞,采用四甲基偶氮咗蓝(MTT)比色法及流式细胞仪检测孕酮对细胞增殖、凋亡的影响.结果:20～80μmol/L孕酮可抑制蜕膜细胞的增殖活力(P＜0.05),可引起蜕膜细胞形态变化.10～80μmol/L孕酮可提高蜕膜细胞总凋亡率(P＜0.05),但其总凋亡率仍低于6％.结论:孕酮可以抑制人早孕子宫蜕膜细胞的增殖,作用48 h时抑制率与孕酮浓度正相关;孕酮可诱导蜕膜细胞凋亡.
-
早孕期人蜕膜趋化因子CCL2及其受体CCR2的表达及意义
目的:分析人早孕蜕膜及蜕膜基质细胞趋化因子受体CCR2及其配体CCL2在人早孕蜕膜组织及蜕膜基质细胞的表达和分泌,以探讨CCR2/CCL2在母一胎界面的生物学作用.方法:收集早孕期蜕膜组织,分离蜕膜基质细胞,分别用半定量RT-PCR、免疫化学方法分析正常人早孕蜕膜组织和培养的人蜕膜基质细胞CCR2/CCL2表达;并且用流式细胞术和ELlSA法分别检测蜕膜基质细胞表面CCR2的表达和培养的蜕膜基质细胞上清中CCl2的分泌.结果:人早孕蜕膜组织和蜕膜基质细胞均高水平转录和翻译CCR2/CCl2,培养的基质细胞能分泌大量的CCL2,其分泌量呈时间依赖性.结论:早孕蜕膜高表达和分泌CCR2/CCL2可能参与早孕期母.胎免疫调节.
-
人早孕母胎界面SOCS1、SOCS2、SOCS3表达
目的:研究正常早孕绒毛及蜕膜组织细胞因子信号转导负调控因子(Suppressors of cytokine signaling,SOCS)基因和蛋白水平表达,以揭示SOCS在母胎界面生理性调节作用.方法:半定量RT-PCR检测早孕绒毛组织、蜕膜组织及原代培养早孕滋养细胞、蜕膜基质细胞SOCS1、SOCS2、SOCS3mRNA水平;Western blot检测早孕绒毛组织及蜕膜组织SOCS1、SOCS2、SOCS3蛋白表达;免疫组化定位SOCS1、SOCS2、SOCS3在早孕绒毛组织、蜕膜组织表达;ELISA检测滋养细胞、蜕膜基质细胞分泌IL-10、IFN-γ.结果:正常母胎界面见SOCS1、SOCS2、SOCS3基因表达,其中SOCS3绒毛/蜕膜阳性率73.7%/71.1%;SOCS2绒毛/蜕膜阳性率50.0%/39.5%,SOCS1少,绒毛/蜕膜阳性率34.2%/31.6%;SOCS1、SOCS2、SOCS3蛋白表达与转录水平基本一致;正常母胎界面SOCS1、SOCS2、SOCS3表达主要定位于绒毛滋养细胞和蜕膜间质;体外无血清培养滋养细胞和蜕膜基质细胞SOCS2、SOCS3低表达,SOCS1未见表达,其分泌的IL-10随时间而增高(P＜0.05).结论:正常早孕母胎界面表达SOCS1、SOCS2、SOCS3,无刺激条件下滋养细胞和蜕膜基质细胞低表达SOCS2、SOCS3,SOCS在正常妊娠Th平衡中具有重要意义.
关键词： 绒毛 蜕膜 细胞因子信号转导抑制分子 滋养细胞 蜕膜基质细胞 -
人早孕滋养细胞与蜕膜基质细胞共培养对外周NK细胞的影响
为了分析人早孕母胎界面功能细胞对外周NK细胞表型及功能的调节作用,我们模拟母-胎界面微环境,建立滋养细胞和蜕膜基质细胞共培养系统,并将此共培养体系与外周NK细胞共培养,采用流式细胞术分析NK细胞的表型和细胞因子的表达,用细胞毒检测试剂盒检测NK细胞的细胞毒活性.研究发现,母-胎界面滋养细胞与蜕膜基质细胞共培养体系能够显著上调外周NK细胞抑制型受体KIR2DL1的表达,下调外周NK细胞杀伤性受体NKp44的表达;显著上调Th2型细胞因子IL 10的表达水平,下调外周NK细胞穿孔素perforin表达及其细胞毒活性.结果表明,母-胎界面功能细胞能够诱导外周NK细胞的耐受表型及Th2型优势,下调外周及蜕膜NK细胞的细胞毒活性,从而有利于形成母-胎界面免疫耐受微环境.
-
人早孕期蜕膜基质细胞下调蜕膜NK细胞杀伤活性
通过分析人早孕期蜕膜基质细胞(decidual stromal cell,DSC)对蜕膜NK细胞(dNK)表面趋化因子受体CXCR4与细胞内颗粒酶B表达水平的影响,研究早孕蜕膜基质细胞对局部NK细胞的训导作用.收集早孕蜕膜组织,分离DSC及蜕膜免疫活性细胞,进一步通过磁珠分选蜕膜CD3- CD56bnght NK细胞,将分离的蜕膜NK细胞与DSC按1:1比例共培养24h,收集蜕膜NK细胞,流式细胞仪检测其表面趋化因子受体CXCR4和细胞内颗粒酶B(granzyme B)的表达水平.结果显示,与对照组相比,在与DSC细胞共培养之后,趋化因子受体CXCR4+ NK细胞的百分率明显上升,而蜕膜NK细胞内颗粒酶B阳性率显著下降(P＜0.05).结果表明,人早孕母-胎界面DSC细胞上调蜕膜NK细胞表面趋化因子受体CXCR4的表达,下调NK细胞内颗粒酶B的表达水平,可能抑制其杀伤活性.
-
环孢素A对人蜕膜免疫细胞分泌IL-10与IFN-γ的调控作用
探讨环孢素A(CsA)对人早孕期母胎界面主要组成细胞IL-10与IFN-γ分泌的调节作用,为反复自然流产等妊娠疾患的治疗提供新线索.收集6～10孕周行人工流产术的正常妊娠妇女绒毛和蜕膜组织;分离、培养蜕膜免疫细胞、滋养细胞与蜕膜基质细胞;ELISA法检测给予环孢素A(0 μmol/L,1 μmol/L)24、48、72 h后蜕膜免疫细胞、滋养细胞及蜕膜基质细胞培养上清中IL-10与IFN-γ分泌水平.结果显示,(1)1 μmol/L CsA可以明显促进人早孕期蜕膜免疫细胞分泌IL-10(P＜0.01),并抑制其产生IFN-γ(P＜0.01);1 μmol/L CsA不影响原代培养的人早孕期滋养细胞与蜕膜基质细胞IL-10的分泌(P＞0.05);不论是否给予CsA处理,原代培养的人早孕期滋养细胞与蜕膜基质细胞均不产生IFN-γ. 结果表明,CsA通过促进蜕膜免疫细胞分泌IL-10,并抑制其产生IFN-γ,从而有利于母胎界面形成Th2型免疫优势.
-
早孕期母-胎界面蜕膜基质细胞过表达肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82导致妊娠失败
目的 观察肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82在自然流产绒毛和蜕膜组织中的表达情况,并建立蜕膜基质细胞(decidual stromal cell,DSC)与滋养细胞共培养模型,探讨KAI1/CD82在人母—胎界面的生物学作用.方法 分别采用RT-PCR和Real-time PCR、免疫组化和Western blot技术分析KAI1/CD82在人早孕期正常妊娠和自然流产的绒毛和蜕膜组织中的转录及翻译水平.模拟体内微环境,建立了DSC和滋养细胞BeWo细胞株共培养体系,利用RNA干扰沉默DSC细胞KAI1/CD82表达,探讨DSC是否通过表达KAI1/CD82对滋养细胞侵袭性发挥调节作用.结果 自然流产母—胎界面KAI1/CD82转录水平明显高于正常妊娠(P＜0.05)；自然流产的蜕膜组织KAI1/CD82蛋白表达也明显高于正常妊娠(P＜0.05)；而绒毛组织及滋养细胞不表达KAI1/CD82蛋白.采用RNA干扰技术成功沉默DSC细胞KAI1/CD82表达；KAI1/CD82基因沉默后,与DSC细胞共培养的BeWo细胞侵袭力显著增强.结论 DSC通过表达KAI1/CD82控制滋养细胞的侵袭,而一旦DSC异常过表达KAI1/CD82将导致滋养细胞侵袭力异常降低,终可能导致自然流产的发生.
关键词： KAI1/CD82基因 蜕膜基质细胞 滋养细胞 侵袭力 自然流产 -
人类蜕膜基质细胞的体外培养
目的建立良好的人类蜕膜细胞培养方法.方法选用早孕人工流产蜕膜组织进行体外培养,采用胰蛋白酶和EDTA消化,进行全组分蜕膜细胞培养,利用传3代的方法对蜕膜基质细胞进行分离提纯.制作细胞爬片,用泌乳素(prolactin,PRL)免疫组化试剂盒检测培养细胞成分.结果免疫组化显示体外培养传代后97%蜕膜细胞为蜕膜基质细胞.结论实验方法经济实用、简单,简化了蜕膜细胞的提纯程序,获得的蜕膜基质细胞纯度高.
-
CCL28通过增强MMP-2活力促进滋养细胞浸润功能
目的:探究趋化因子CCL28对滋养细胞生物学行为的影响及其调控机制.方法:分离培养并鉴定原代人早孕蜕膜基质细胞(DSCs),ELISA法检测人DSCs与人正常绒毛膜滋养细胞系HTR8/Svneo的CCL28的分泌.采用噻唑兰(MTT)、Annexin V-FITC、Transwell方法检测人工合成的CCL28对HTR8/Svneo细胞的增殖、凋亡及浸润能力的影响.RT-PCR及明胶酶谱法阐明HTR8/Svneo细胞浸润功能改变的机制.结果:HTR8/Svneo细胞与蜕膜基质细胞均能分泌CCL28,两者共培养能促进CCL28的分泌(P<0.01).人工合成的CCL28不影响滋养细胞的增殖(P>0.05)和凋亡(P>0.05),但能增强细胞的浸润能力(P<0.01),且主要通过受体CCR10介导.RT-PCR与明胶酶谱法提示,CCL28通过提高滋养细胞内MMP-2活力来增强其浸润能力.结论:CCL28通过与受体CCR10的结合,以自分泌或旁分泌的方式增强滋养细胞MMP-2活力来促进滋养细胞的浸润功能.
-
小鼠子宫蜕膜基质细胞促进树突状细胞的增殖
目的：建立小鼠子宫蜕膜基质细胞（ DSC）和小鼠骨髓来源的树突状细胞（ DC）细胞共培养体系，探讨DSC对DC增殖的影响。方法应用白细胞介素-4（IL-4）和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）诱导小鼠骨髓细胞分化为DC，FACS检测细胞表面分子和细胞增殖，ELISA检测其分泌的细胞因子，构建DSC和DC共培养体系模型，动态观察DSC对DC增殖的影响。结果小鼠骨髓来源DC高表达CD11c，共刺激分子CD80和CD86， MHCⅡ类分子Ia和MHCⅠ类分子H-2Kb。经LPS刺激的DC分泌细胞因子IL-12（p70）、IL-6、TNF-α和IL-1β的水平明显上调（P<0.05），并能够促进抗原肽特异性T淋巴细胞增殖反应能力（P<0.05）。在DSC和DC共培养10天后观察到DSC明显促进DC增殖。结论小鼠子宫蜕膜基质细胞能够促进树突状细胞的增殖能力。
-
孕激素对人早孕蜕膜基质细胞IGF-Ⅱ基因表达的影响
目的 观察孕激素对体外培养的人早孕蜕膜基质细胞中胰岛素样生长因子(IGF)-Ⅱ基因表达的影响.方法 采用RT-PCR技术半定量检测不同浓度孕激素(0、0.05、0.1、0.2 μmol/L)作用72 h后人早孕蜕膜基质细胞中IGF-Ⅱ mRNA的表达.结果 孕激素上调IGF-Ⅱ mRNA的表达,并与浓度呈显著正相关(r=0.500,P<0.01). 结论孕激素可能通过上调人早孕蜕膜中IGF-Ⅱ mRNA的表达,增强IGF-Ⅱ的自分泌/旁分泌作用,这可能是早孕期胎-母组织生长和分化的重要调控机制之一.
关键词： 孕激素类 胰岛素样生长因子-Ⅱ 蜕膜基质细胞 -
人早孕期蜕膜基质细胞及蜕膜腺上皮细胞的分离培养方法
目的:建立一种经济、高效的人早孕期蜕膜基质细胞及蜕膜腺上皮细胞分离、培养方法.方法:胶原酶、胰酶联合消化蜕膜组织,网筛过滤、密度梯度离心及差速贴壁法纯化细胞；免疫细胞化学法鉴定细胞纯度；MTT增殖实验分析细胞体外增殖活力.结果:利用此法可成功体外培养蜕膜基质细胞及蜕膜腺上皮细胞,细胞纯度可达90％以上,并在体外呈现良好的生长状态.结论:此法经济、高效,能够同时获得纯度较高的蜕膜基质细胞及蜕膜腺上皮细胞.
-
人类蜕膜细胞体外培养研究
为了简化人类蜕膜细胞体外培养技术,采用复合消化酶改进蜕膜组织的消化过程,全组份蜕膜细胞培养加传代简化蜕膜基质细胞(decidua l stromal cell,DSC)提纯、泌乳素(prolactin,PRL)免疫组化检测培养细胞组成.所采用的消化方法具有耗时少、消化彻底、活细胞率高等优点.PRL免疫组化显示95%蜕膜细胞为 DSC.结果提示:实验方法简单、经济、实用,简化了原来复杂的DSC提纯程序.
