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  • 骨髓移植后肺部弥漫性病变纤维支气管镜诊断

    作者:王恒湘;张波;刘静;段连宁;丁丽;薛梅;朱玲;闫洪敏;陈惠仁;纪树荃

    为了评估骨髓移植术后肺部弥漫性病变诊断中纤维支气管镜检(fibroptic bronchoscopy,FB)的应用价值,对2003年11月-2006年3月间18例骨髓移植术后出现肺部弥漫性病变、短期经验治疗效果欠佳的患者行FB,并做支气管肺泡灌洗(BAL)及刷检涂片,其中3例条件许可者加支气管镜肺活检(TBLB).结果发现,18例骨髓移植术后患者10例为肺部感染,8例为非感染性肺部并发症.10例肺部感染患者9例通过FB明确诊断,包括细菌性肺炎3例,真菌感染2例,卡氏肺囊虫3例,病毒性肺炎1例.1例修稿2次BAL,无阳性结果,开胸肺活检确诊为结核.8例非感染性肺部并发症患者中2例通过TBLB明确诊断.结论:FB特别是BAL是一种安全、有效的检查方法,对白血病骨髓移植后肺部并发症尤其感染性肺部并发症的诊断率高;条件许可者应尽可能行TBLB,以提高移植后非感染并发症诊断,减少开胸肺活检.

  • G-CSF动员的异基因外周血干细胞和骨髓联合移植治疗白血病

    作者:鹿全意;牛小青;郭勇;张鹏;曾晓新;付肖凡;周娟娟

    为了探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员的异基因外周血干细胞和骨髓联合移植治疗白血病的疗效,给予供者G-CSF 8-10μg/(kg·d),皮下连续注射5天,以动员外周血和骨髓干细胞,在第4,5天采集外周血干细胞,第7天采集骨髓;预处理采用氟达拉宾,白消安和环磷酰胺组成的新方案.结果表明,12例全部成功植入,中性粒细胞>0.5×109/L的时间为10.2(9-12)天,血小板>20×109/L的时间为12.5(12-14)天.移植后观察100天,4例(33.3%)发生Ⅱ度急性移植物抗宿主病(aGVHD),10例出现慢性移植物抗宿主病(cGVHD),中位随访时间5个月,2例死亡,余10健康生存.结论:G-CSF动员的和外周血造血干细胞骨髓联合移植是安全有效的治疗方法,可以获得长期稳定的植活并不增加aGVHD和cGVHD等并发症.

  • 非亲缘HLA相合骨髓移植治疗一例骨髓增生异常综合征

    作者:高春记;达万明;张伯龙;韩晓萍;朱海燕;靳海杰;靖彧;黄文荣

    为了探讨非亲缘HLA相合供者骨髓移植(UD-BMT)治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的可行治疗方案和疗效,采用HLA配型相合的非亲缘骨髓移植治疗1例骨髓增生异常综合征-难治性血细胞减少伴多系病态造血(MDS-RCMD)男性患者,31岁.预处理方案为马利兰、环磷酰胺、阿糖胞苷、甲基环己亚硝脲和抗胸腺细胞球蛋白.以霉酚酸酯、环孢菌素A加短疗程的甲氨喋呤预防移植物抗宿主病(GVHD).结果显示,移植后10天中性粒细胞(0.5×109/L,20天血小板升至58×109/L,3个月血红蛋白升至114 g/L,无GVHD发生;移植后无病存活时间已达9个月.结论:非血缘HLA相舍骨髓移植治疗骨髓增生异常综合征是可行而且有效的.

  • 异基因骨髓移植后嵌合状态的研究进展

    作者:任雅丽;朱平

    骨髓移植是许多血液系统疾病和免疫缺陷性疾病的有效治疗措施,移植成功与否与供者细胞在受者体内的植入状况即嵌合状态的形成有关.由于造血干细胞输入量、供者和受者T细胞量、预处理方案以及移植时患者病情等因素的影响,可以形成不同形式的嵌合状态.如果受者的骨髓或外周血中完全是供者的细胞,则形成完全的供者嵌合状态(CC);当检测到供者和受者两种细胞成分时,则为混合嵌合状态(MC).不同形式的嵌合状态,以及嵌合状态形式的不同演变趋势,其临床意义各不相同.检测嵌合状态的方法有多种,包括微卫星检测、染色体核型分析、血型转换、红细胞抗原、限制性片段长度多态性、可变数目串联重复序列以及现在常用的PCR法.本文从上述几个方面对嵌合状态研究的进展进行了综述.

  • 造血系统的人类疱疹病毒潜伏感染

    作者:吴克复;马小彤;郑国光;宋玉华

    随着造血干细胞移植和器官移植的广泛开展,人类疱疹病毒潜伏感染引起的移植失败和并发症的报道日益增多,受到了广泛的关注.细胞因子风暴早是作为移植物抗宿主病的发病机制提出的,近年来在炎症的发病学研究中也广为运用,在严重的病毒感染中起重要作用.本文就人类疱疹病毒潜伏感染导致骨髓或干细胞移植失败或引起并发症,以及在难治性白血病中的可能作用进行了讨论,以探讨人类疱疹病毒潜伏感染及其引起的细胞因子风暴的作用和意义.

  • 川芎嗪对BMT后小鼠骨髓基质细胞bFGF表达水平的影响

    作者:吴宁;周登锋;齐洁琳;张锡芹;步兵;刘蒲香;王明玉;孙汉英;刘文励

    本研究探讨川芎嗪对骨髓移植(BMT)后小鼠骨髓基质细胞bFGF表达水平的影响及其促进骨髓造血重建的机制.取健康BALB/c小鼠,随机分为3组:正常组(不做处理),BMT+生理盐水组(简称生理盐水组)和BMT+川芎嗪治疗组(简称川芎嗪组).生理盐水组和川芎嗪组分别胃饲生理盐水0.2毫升/只和川芎嗪注射液每次2毫克/只,2次/天,直至处死为止.在BMT后第7、14、21、28天处死小鼠,用RT-PCR和Western blot方法检测骨髓基质细胞bFGF mRNA及其蛋白表达水平.结果表明:BMT后第7、14、21天川芎嗪组和生理盐水组骨髓基质细胞bFGF mRNA及其蛋白的表达均明显低于正常组(P<0.01或P<0.05),但川芎嗪组明显高于生理盐水组(P<0.01或P<0.05),到第28天,川芎嗪组bFGF mRNA及其蛋白的表达已恢复正常,而生理盐水组仍未恢复正常,两组之间有显著性差异(P<0.01).结论:川芎嗪可能通过增加bFGF的表达水平而促进骨髓微环境的修复,加速BMT后骨髓的造血重建.

  • 单倍相合骨髓移植术后中枢神经系统并发症

    作者:王恒湘;纪树荃;朱玲;刘静;薛梅;丁丽;段连宁;阎洪敏;陈惠仁

    为了探讨单倍体骨髓移植术后神经系统并发症的发生情况,对10例单倍相合骨髓移植术后神经系统并发症的发生时间、病因、治疗措施及预后等临床资料进行了总结分析.结果表明:74例接受单倍体相合骨髓移植病人中10例发生并发症,其中3例病人出现脑出血,感染3例(真菌感染,CMV脑炎,单纯疱疹病毒性脑炎各l例),癫痫、格林-巴利综合征、脑病和精神分裂症各1例,因神经系统并发症直接导致死亡的患者4例.结论:神经系统并发症是单倍相合骨髓移植术后常见的严重并发症之一,并导致较高的死亡率,尤其是脑出血对病人的威胁较大;单倍相合骨髓移植术后免疫重建缓慢,对相关感染并发症和周围神经的病变应引起重视.

  • NK细胞对异基因骨髓移植中移植排斥和造血及免疫重建的影响

    作者:杨志刚;熊丹;曾耀英;梁亮;李庆华;吴国才

    本研究探讨自然杀伤(NK)细胞在小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)中对移植排斥、造血及免疫重建的影响.以C57BL/6(H-2b)小鼠为供鼠、BALB/c(H-2d)小鼠为受鼠,分别在致死剂量和非致死剂量(≤7.0 Gy)全身照射(TBI)的预处理条件下进行allo-BMT,移植同时输注供鼠外周T细胞和(或)NK细胞,移植后不同时间检测受鼠外周血白细胞、骨髓CD34+细胞数和外周血淋巴细胞中CD3+细胞、CD19+细胞及供鼠来源的H-2Kb+细胞表达的百分率,并对不同移植组的存活率、植入与排斥、造血及免疫重建进行比较.结果表明:在致死刑量TBI预处理的移植中,输注NK细胞与不输注NK细胞的移植组比较,存活率显著增高(60天存活率为70% vs 0.0%);白细胞数、CD19+ 细胞表达及骨髓CD34+ 细胞数恢复快;H-2Kb+细胞的表达水平高[(86.68±4.45)% vs (4.68±0.32)%].移植后28天输注NK细胞组CD3+细胞表达水平明显低于不输注NK细胞组[(33.69±3.36)% vs (50.40±5.06)%,P<0.01],移植后印天两组比较差异无显著性(P>0.05).在非致死剂量TBI预处理的移植中,移植后30天,异基因骨髓移植组H-2Kb+细胞表达率明显下降,移植后60天已下降至移植前水平;而输注高浓度和低浓度NK细胞的两组在移植后60天仍能检测到80%以上的H-2b+细胞表达.结论:在小鼠allo-BMT中,同种异基因反应性NK细胞可以抑制移植排斥,提高造血干细胞的植入水平,促进造血及免疫重建并增加移植受鼠的生存率.

  • 抗CD25单克隆抗体治疗耐激素的急性移植物抗宿主病疗效分析

    作者:刘静;王恒湘;段连宁;阎洪敏;薛梅;朱玲;丁丽;王志东

    本研究探讨抗CD25单克隆抗体在单倍体相合骨髓移植术(hiBMT)后耐激素的急性移植物抗宿主病(aGVHD)治疗中的作用.对15例单倍体相合BMT后出现耐激素的Ⅱ-Ⅳ度aGVHD的患者给予巴利昔单克隆抗体20 mg,第1、4天静脉点滴,未达到疗效的病人间隔1周后重复本治疗.结果显示:完全有效8例(53.33%),其中4例无病生存,2例生存伴局限性cGVHD,2例死于肺部感染;3例部分有效(20%),其中1例无病生存,1例死于aGVHD及感染,1例死于肺部感染;4例无效(26.67%)死亡,死亡原因有GVHD、肺部感染、心力衰竭.总有效率73.33%,总生存率46.67%.该药应用安全,未发现输注相关的毒副作用.结论:抗CD25单克隆抗体对单倍体相合BMT后耐激素的Ⅱ一Ⅳ度aGVHD具有较好的疗效,但总的生存率仍然较低,感染仍然是导致该类患者死亡的主要原因,因此加强环境保护,预防感染极为重要.

  • 骨髓移植小鼠骨髓基质细胞内皮抑制素(endostatin)及血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达相关性研究

    作者:吴宁;齐洁琳;张锡芹;周登锋;杨锡贵;王明玉;刘蒲香;孙汉英;刘文励

    本研究探讨内皮抑制素(endostatin)及血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)在骨髓移植(BMT)小鼠骨髓基质细胞中表达的相关性及川芎嗪对其表达的影响.取健康BALB/c小鼠,随机分为3组:正常组(不做处理),骨髓移植对照组(简称生理盐水组)和骨髓移植+川芎嗪治疗组(简称川芎嗪组).生理盐水组和川芎嗪组分别胃饲生理盐水0.2毫升/只和川芎嗪注射液每次2毫克/只,2次/天.在BMT后第7、14、21、28天处死小鼠,用间接免疫荧光法和RT-PCR法检测骨髓基质细胞endostatin mRNA及其蛋白、VCAM-1 mRNA及其蛋白的表达情况,并探讨二者表达的相关性.结果表明: endostatin蛋白主要表达于骨髓基质细胞核内,VCAM-1蛋白主要表达于细胞浆内.BMT后第7、14、21天川芎嗪组和生理盐水组endostatin mRNA和蛋白的表达水平显著低于正常组(P<0.01或P<0.05),且川芎嗪组低于生理盐水组(P<0.01或P<0.05);到第28天生理盐水组已基本恢复正常,而川芎嗪组仍未恢复正常水平.BMT后第7、14、21天川芎嗪组和生理盐水组VCAM-1 mRNA和蛋白的表达均明显低于正常组(P<0.01或P<0.05),且川芎嗪组明显高于生理盐水组(P<0.01或P<0.05),到第28天,川芎嗪组VCAM-1的表达已基本恢复正常,而生理盐水组仍未恢复正常,两组之间有显著性差异(P<0.01).相关分析显示,生理盐水组骨髓基质细胞endostatin和VCAM-1 mRNA及其蛋白表达呈负相关(P<0.01或P<0.05),而川芎嗪组endostatin和VCAM-1 mRNA及其蛋白表达呈正相关(P<0.01或P<0.05). 结论: 内皮抑制素可通过影响骨髓基质细胞表面VCAM-1的表达水平,阻碍基质细胞与造血细胞之间和细胞外基质与造血细胞之间的联系而影响骨髓造血;川芎嗪能提高BMT小鼠骨髓基质细胞表面黏附分子的表达,加快BMT后HSPC的归巢及在骨髓中的增殖,并通过反馈调节BMT小鼠骨髓基质细胞新血管生成抑制因子内皮抑制素的表达,促进骨髓微环境的修复,加速移植后骨髓的造血重建.

  • 致敏动物模型的建立及其对造血干细胞植入的影响

    作者:许吕宏;方建培;徐宏贵;翁文骏;陈凤英;郭芬芬

    本研究目的是建立致敏的动物模型,探索致敏动物体内免疫功能的改变,并探讨致敏对造血干细胞植入的影响.经尾静脉分别输注不同数量的C57BL/6脾细胞(1×105、1×106、1×106,连续注射2次,间隔7天)于BALB/c 小鼠,通过补体依赖淋巴细胞毒性实验、混合淋巴细胞反应和ELISA等方法检测致敏模型的免疫功能.致敏BALB/c 模型经8 Gy 60 Coγ-线照射后通过尾静脉或骨髓腔移植1×107 C57BL/6骨髓细胞,观察移植后生存情况.结果表明:致敏BALB/c模型均产生不同强度的供者反应性抗体,1×106 及1×106 连续注射2次,间隔1周的致敏组脾细胞体外增殖均明显高于正常小鼠.各组致敏模型小鼠经尾静脉注射C57BL/6骨髓细胞后,均于移植后第9-15天死亡,1×106 连续注射2次,间隔1周的致敏BALB/c模型经骨髓腔注射骨髓细胞后亦于2周内死亡.结论:通过同种异基因的脾细胞输注建立不同致敏程度的动物模型,该致敏模型小鼠体内免疫功能的变化与致敏程度有关.脾细胞输注致敏使受者对供者造血干细胞产生排斥作用,而骨髓腔注射方法并不能改善植入.

  • MDS铁过载小鼠模型建立及鉴定

    作者:金鑫;隋松男;徐萍;邢艺;曹小立;王露桥;孟娟霞;卢文艺;崔蕊;赵明峰

    目的:建立一种MDS铁过载小鼠模型,研究铁过载对MDS的影响.方法:通过逆转录病毒,将外源突变基因RUNX1-S291fs插入小鼠骨髓单个核细胞基因组,然后移植给经60Co γ射线照射的C57 BL/6小鼠.8周后,腹腔注射铁剂,建立MDS铁过载小鼠模型.移植24周后,取小鼠外周血、骨髓、股骨、肝脏和脾脏进行鉴定:对外周血和骨髓细胞行瑞氏染色观察形态特征;对股骨、肝脏和脾脏组织行HE染色检测病理变化;对肝脏、脾脏和骨髓行普鲁士蓝染色观察铁沉积情况;应用流式细胞术检测小鼠骨髓细胞抗原表达情况;对骨髓单个核细胞和脾组织蛋白行免疫印迹实验,确认RUNX1-S291fs基因转入并表达蛋白.移植后对小鼠定期监测血常规指标和移植细胞嵌合率.结果:相比空白质粒对照小鼠,RUNX1-S291fs突变小鼠外周血白细胞计数、血红蛋白水平和血小板计数均降低;外周血和骨髓细胞显示病态造血;肝脏和脾脏明显增大;在股骨、肝脏和脾脏可见组织结构异常;骨髓细胞表面抗原表达异常;骨髓细胞和脾组织有RUNX1-S291 fs蛋白表达.相比生理盐水对照小鼠,铁剂注射小鼠普鲁士蓝染色可见骨髓、肝脏和脾脏组织有明显铁沉积.结论:注射铁剂的RUNX1-S291fs突变组小鼠合并有MDS和铁过载的病理特征,成功构建了MDS铁过载小鼠模型,为研究铁过载对MDS的影响奠定了基础.

  • 同一供者外周血单个核细胞输注治疗单倍相合骨髓移植后白血病复发

    作者:

    本研究探讨同一供者外周血单个核细胞输注(DMNCI)治疗单倍相合骨髓移植后白血病复发的疗效和安全性.3例单倍相合骨髓移植后白血病复发患者接受G-CSF动员的DMNCI治疗,其中例1和例2骨髓移植前分别为ph+急性淋巴细胞性白血病伴中枢神经系统侵犯部分缓解及慢性粒细胞性白血病急性变部分缓解,在骨髓移植后这两例均血液学复发,各接受单次DMNCI,单个核细胞剂量分别为8.25×108/kg和5.24×108/kg;CD3+细胞剂量分别为1.87×108/kg和1.14×108/kg.第3例骨髓移植前为CML急性变,治疗后并达缓解.移植后分子水平复发,接受逐渐提高单次细胞数量的分次输注,首次DMNCI剂量为2.0×107/kg,CD3+细胞剂量为1.1×107/kg.同时观察3例患者输注后白血病缓解情况及并发症.结果显示,3例患者均出现不同疗效,2例血液学复发患者骨髓均暂时缓解,但分别于DMNCI后41、48天死于严重移植物抗宿主病(GVHD)、复发及衰竭.分子水平复发患者分次接受DMNCI,输注2次后达分子水平缓解,STR-PCR测定证实为供者基因型.3例均发生急性GVHD,2例接受单次剂量输注者发生Ⅳ度以上GVHD,1例接受分次输注患者发生Ⅰ度GVHD.3例均未发生明显骨髓抑制,分子水平缓解者随访半年无病生存.结论:DMNCI可能具有抗白血病作用,可用于单倍相合骨髓移植后白血病复发的治疗,对分子水平复发者的疗效较对血液学复发者好;输注MNC为×108/kg后GVHD严重.DMNCI起始剂量×107/kg并逐渐提高单次剂量的分次输注方法更为安全.

  • 小剂量抗胸腺细胞球蛋白治疗HLA单倍相合骨髓移植后重度急性移植物抗宿主病

    作者:

    本研究观察小剂量抗胸腺细胞球蛋白(ATG)在对激素耐药的重度急性移植物抗宿主病(aGVHD)治疗中的作用.对6例单倍相合骨髓移植后出现激素耐药的重度aGVHD的患者给予小剂量ATG 1.25 mg/kg治疗,隔日1次,共3-5剂.结果显示,完全缓解3例,其中2例无病生存,1例死于白血病复发;另3例中1例部分缓解,2例病情恶化,这3例患者均死于GVHD.应用小剂量ATG治疗的总有效率66.67%,长期生存率33.33%,感染是其主要并发症.结论:小剂量ATG对部分激素耐药的重度aGVHD有一定疗效,且无严重毒副作用,加强洁净环境保护以预防感染也颇为重要.

  • 同胞脐血和同供者骨髓联合移植治疗儿童重型β-地中海贫血

    作者:孙新;郝文革;刘莎;夏婷;李焱;廖灿

    为了研究同胞脐血和骨髓联合移植治疗儿童重型β-地中海贫血的疗效,用HLA全相合同胞脐血+骨髓移植治疗3例重型β-地中海贫血.供给3例受者的有核细胞细胞数分别为19.5×107/kg、20.8×107/kg和23.3×107/kg.移植的预处理方案:采用马利兰+环磷酰胺+抗胸腺细胞球蛋白方案.结果表明:3例患儿均获得长期稳定植入,中性粒细胞0.5×109/L的时间分别为16、18、17天,血小板50×109/L的时间分别为48、50、49天,造血重建速度较单纯脐血移植快.3例患儿现已脱离了地中海贫血状态生活了1.5、2.0、2.1年,血红蛋白一直维持在正常水平.3例患儿均发生Ⅰ度急性移植物抗宿主病(aGVHD).结论:同胞脐血和骨髓联合移植可能作为一种安全和有效的移植方式用于治疗儿童地中海贫血.

  • α-GalCer改变供者T细胞迁移减轻急性移植物抗宿主病

    作者:刘景华;周凡;刘洋;张晓琳;李敏燕;刘彦琴;王吉刚;白颖

    目的:本研究探讨NKT细胞激活剂α-Galactosyleramide (α-GalCer)减轻急性移植物抗宿主病的新机制.方法:建立同种异基因小鼠骨髓移植aGVHD模型,移植后实验组及对照组小鼠分别腹腔注射α-GalCer及其溶剂DMSO,从生存期、aGVHD临床评分及病理改变来评估两组小鼠aGVHD严重程度的不同.并通过体外迁移及体内迁移检测分析α-GalCer减轻aGVHD的机制.结果:α-GalCer降低同种异基因小鼠骨髓移植后aGVHD死亡率和临床评分,并减轻脏器aGVHD病理改变;α-GalCer通过改变供者T细胞的迁移—T细胞聚集于外周淋巴结,减少在脾脏、胸腺、外周血的潴留而减轻aGVHD.结论:同种异基因小鼠骨髓移植后α-GalCer通过改变供者T细胞迁移而减轻aGVHD.

  • 美国血液与骨髓移植学会(ASBMT)有关自体脐血的采集和保存的论点

    作者:吴洁莹;黄以宁;廖灿

    <中国实验血液学杂志>编者按从1988年法国成功进行了第1例异基因脐血移植以来,迄今已经20周年了.近年来发达国家的脐血异基因移植事业正蓬勃发展,除了中国大陆外,全世界所有脐血库积存的脐血已逾26万份,临床用异基因脐血移植治疗的病人已累计1万例以上.

  • 霉酚酸对小鼠树突状细胞体外成熟和免疫功能的影响

    作者:黄文烨;蔡真;孙文佶;陆国华

    霉酚酸酯(mycophenolate mofetil,MMF)是一种新型免疫抑制剂,目前已被临床上广泛应用于异基因骨髓移植.本研究的目的是观察其免疫活性成分霉酚酸(mycophenolic acid,MPA)对小鼠树突状细胞(dendritic cell,DC)体外成熟和免疫学功能的影响,以期进一步探讨MPA防治移植物抗宿主病(graft versus host disease,GVHD)免疫抑制作用的机理.在小鼠DC体外培养时加入两种剂量(0.01 μ/L和0.1μmol/L)的MPA处理,观察DC 的生成情况,以流式细胞仪分析各处理组细胞的免疫表型,以3H-TdR掺入值来反映DC的抗原呈递功能,并作体外混合淋巴细胞反应观察其对同种T细胞的刺激增殖能力,用ELISA方法测定其分泌的IL-12水平及与同种T细胞共同培养时IL-2,IFN-γ,IL-4和IL-10等细胞因子水平.结果表明:经MPA培养后,DC的生成和形态没有影响,表达低水平的共刺激分子CD40,CD80和CD86,其分泌的IL-12水平明显下降,DC的抗原呈递功能和刺激同种T 细胞的功能显著下降,并促使T细胞分泌的Th1细胞因子IL-2和IFN-γ下降,而Th2细胞因子IL-4,IL-10上升.结论:霉酚酸能使小鼠骨髓来源的树突状细胞停留在未成熟状态,对其免疫学功能起负性调节作用,并促使Th1细胞因子向Th2细胞因子转移.

  • 重组腺病毒AdEGFP/hVEGF165快速构建及在骨髓移植小鼠体内的分布和表达效率

    作者:仲照东;邹萍;游泳;黄士昂

    目的研究增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的人血管内皮细胞生长因子165(hVEGF165)重组腺病毒载体的快速构建及在骨髓移植后小鼠体内的分布和表达效率.方法利用细菌内质粒间同源重组法快速构建EGFP标记的重组腺病毒Ad-EGFP/hVEGF165;通过体外试验观察病毒的形态、滴度和安全性;经尾静脉注射3×108PFU的重组腺病毒给同基因骨髓移植BALB/c小鼠,在不同时间检测重组腺病毒在小鼠体内分布和hVEGF165的表达.结果通过细菌内质粒间同源重组法在短期内成功构建了复制缺陷型重组腺病毒载体Ad-EGFP/hVEGF165;纯化的病毒颗粒在电镜下成分均一,滴度可达1010~1011PFU/ml.Hela细胞感染病毒后经多次传代未见细胞病变.借助于荧光显微镜在不同时期观测到小鼠心、肺、肝、脾、肾、小肠组织EGFP;RT-PCR分析和免疫组化染色显示脏器内有显著VEGF表达.各脏器未见明显毒性反应.ELISA法检测小鼠血浆中VEGF水平升高可达(866.67±97.13)pg/ml.结论本研究结果证实细菌内同源重组法构建腺病毒载体具有高效、省时、省力的特点,并成功介导了hVEGF165基因在骨髓移植小鼠体内的安全、稳定表达,为今后在骨髓移植过程中开展基因治疗奠定了基础.

  • HLA高分辨等位基因与骨髓移植受者HCMV抗原血症研究

    作者:马亚丹;李敏环;孟雪芹;黄雅萍;胡建华;陈晓明;范骏;马伟杭

    目的 分析HLA高分辨等位基因与骨髓移植术后HCMVpp65抗原血症的相关性.方法 选取2009年2月至2010年10月在我院行骨髓移植术患者48例;采用免疫组化方法检测患者HCMVpp65,采用直接测序分型方法(PCR-SBT)检测患者HLA-A*1101、HLA-A*0201、HLA-A*2402、HLA-B*4001、HLA-DRB1*0901五个高分辨等位基因.结果 ①48例骨髓移植术后患者HCMV感染率100%;②HLA-A*1101、HLA-A*0201、HLA-A*2402、HLA-B* 4001等位基因阳性率在pp65抗原血症12例低感染组和36例高感染组中比较没有统计学意义(P>0.05),其阳性率HLA-A*1101为33.3% (8/24)和20.8% (15/72)、HLA-A*0201为4.2% (1/24)和13.9% (10/72)、HLA-A* 2402为12.5% (3/24)和19.4% (14/72)、HLA-B* 4001 16.7% (4/24)和12.5% (9/72);③HLA-DRB1*0901等位基因阳性率在pp65抗原血症12例低感染组和36例高感染组中比较有统计学意义(P =0.048),其阳性率为4.2% (1/24)和19.4% (14/72);④HLA-DRB1*0901组患者pp65抗原血症高于HLA-A*2402组(P =0.007)和HLA-A*1101组患者(P=0.028),HLA-A*0201组患者pp65抗原血症高于HLA-A*2402组患者(P=0.02),其他高分辨等位基因组之间pp65抗原血症差异没有统计学意义(P>0.05).结论 HLA-DRB1*0901等位基因可能与骨髓移植术后患者发生高HCMVpp65抗原血症有关;HLA-A*2402等位基因可能与骨髓移植术后患者发生低HCMVpp65抗原血症有关.

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