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二氧化硅活化巨噬细胞中核转录因子早期生长反应基因-1的表达
目的研究二氧化硅(SiO2)刺激的巨噬细胞中核转录因子早期生长反应基因-1(early growth response gene-1,Egr-1)表达和定位分布的动态变化,探讨Egr-1在硅沉着病发病机制中的作用.方法用免疫组织化学方法观察大鼠实验性硅沉着病组织中肺巨噬细胞Egr-1表达的动态变化;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western 印迹和免疫荧光方法分别检测体外SiO2刺激的巨噬细胞系RAW264.7中Egr-1 mRNA、蛋白表达及其定位.结果大鼠实验性硅沉着病中肺巨噬细胞Egr-1表达明显上调,阳性反应强度在14 d时达到高峰.体外SiO2作用RAW264.7细胞15～240 min, Egr-1 mRNA表达均明显增高,峰值位于15 min,480 min时仅微量表达.Egr-1蛋白于60 min时核移位明显,持续至120 min,随后减少;在60～120 min时间内,Egr-1核蛋白及总蛋白的表达量亦达峰值,其后开始下降.结论 SiO2能激活巨噬细胞中核转录因子Egr-1,提示Egr-1可能在硅沉着病的发生发展中起重要的调控作用.
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急性胰腺炎大鼠肺组织与肺泡巨噬细胞早期生长反应基因-1的表达
目的:研究观察早期生长反应基因-1(EGR-1)在急性胰腺炎(AP)大鼠肺组织与原代培养肺泡巨噬细胞(AM)中表达的作用.方法:将♂Wistar大鼠40只,随机均分为4组,分别于胆总管内逆行注入生理盐水或不同浓度牛磺胆酸钠溶液.3 h后处死动物,取血分离血清,并剪取胰腺及肺组织.检测血清TNF-α和IL-1β水平,胰腺组织病理评分,肺组织湿质量/干质量比,并对肺组织进行EGR-1免疫组化染色.原代培养AM分成4组,分别采用不同浓度胰弹性蛋白酶进行刺激,免疫细胞化学染色法检测EGR-1在AM的表达,并检测培养液中TNF-α和IL-1 β浓度.RT-PCR分别检测AM,EGR-1,TNF-α,IL-1 β mRNA表达.结果:肺组织EGR-1表达随AP病情加重而呈增强趋势,并与血清TNF-α和IL-1β水平、胰腺组织病理评分、肺组织湿质量/干质量比均呈显著正相关(r=0.63,0.58,0.59,0.61,P＜0.01)AM中EGR-1蛋白.mRNA表达程度与TNF-α和IL-1β蛋白(r=0.64、0.51,P＜0.01)以及mRNA水平均呈显著正相关(r=0.62,0.59,P＜0.01).结论:EGR-1可能在AP并发肺损伤中起重要作用,其机制可能与其介导炎性细胞因子生成有关.
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早期生长反应基因-1在自体移植静脉中的表达研究
目的研究自体静脉移植后早期生长反应基因-1(Egr-1)表达的动态变化,探讨其在内膜增生(IH)中的作用.方法Wistar大鼠90只,建立自体静脉移植模型.术后分为1、2、6、24 h,3、7、14、28、42 d组,取正常静脉作为对照.应用原位杂交和RT-PCR方法检测Egr-1 mRNA的表达,联合应用Western blot蛋白印迹和免疫组织化学方法检测Egr-1的蛋白表达.结果自体静脉移植后,Egr-1mRNA和Egr-1蛋白的表达具有双相变化.移植后1 h,Egr-1mRNA基因表达值为2.21±0.85.6～24 h时下降,7 d时重新升高,28 d达高峰为3.16±1.14.移植早期2 h Egr-1蛋白的表达阳性率为31%±6%,24 h至3 d下降,28 d达高峰为41%±8%.免疫组化显示:移植早期Egr-1蛋白阳性表达主要位于中膜血管平滑肌细胞(VSMCs)和单核细胞/巨噬细胞;移植后期Egr-1蛋白阳性表达主要位于新生内膜和中膜的VSMCs,同时部分内皮细胞也有表达.结论移植静脉内膜增生与Egr-1的激活及表达关系密切,因而与移植静脉内膜增生及狭窄有关.
关键词： 移植 自体 静脉 早期生长反应基因-1 -
早期生长反应基因-1在大鼠急性胰腺炎合并肺损伤中的作用
目的 探讨早期生长反应基因-1(EGR-1)在急性胰腺炎(AP)合并肺损伤中的作用.方法 将24只雄性Wistar大鼠随机均分为4组,分别于胆管内逆行注入生理盐水或不同浓度牛磺胆酸钠溶液,3h后处死动物,留取血清、胰腺及肺组织.检测血清TNF-α、IL-1β水平,进行胰腺组织病理评分,测定肺组织湿重/干重比,并对肺组织进行EGR-1免疫组化染色.另将原代培养的肺泡巨噬细胞(AM)分别采用不同浓度胰弹性蛋白酶进行刺激,通过免疫细胞化学染色检测EGR-1在AM的表达,并检测培养液中TNF-α、IL-1β的浓度.结果 肺组织免疫组化染色显示,EGR-1表达随AP病情加重而增强,并与TNF-α、IL-1β、胰腺组织病理评分及肺组织湿重/干重比均呈显著正相关,且表达细胞类型也有所不同.AM表达EGR-1程度与培养液TNF-α、IL-1β水平呈显著正相关,EGR-1在AM中的表达有ERK1/2信号途径的参与.结论 EGR-1可能在AP合并肺损伤中起重要作用,其机制可能与其介导炎性细胞因子生成有关.
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肾上腺髓质素对局灶性脑缺血/再灌注损伤大鼠神经元凋亡及早期生长反应基因-1的影响
目的 探讨肾上腺髓质素(ADM)对局灶性脑缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠神经元凋亡、梗死体积及早期生长反应基因-1(Egr-1)mRNA表达的影响,进一步研究ADM在局灶性脑I/R损伤中的作用.方法 将54只SD大鼠随机分为假手术组、I/R损伤组以及ADM股静脉组、颈内动脉组和侧脑室组.采用线栓法制备大鼠大脑中动脉(MCA)I/R损伤模型,于阻断血流2 h后分别经股静脉、颈内动脉和侧脑室3条途径注射ADM进行干预后再灌注22 h.应用氯化三苯四唑(TTC)染色法测定梗死体积,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测神经元凋亡,用原位杂交法检测Egr-1 mRNA阳性细胞表达.结果 大鼠局灶性脑I/R损伤并经股静脉、颈内动脉、侧脑室注射ADM后,脑梗死体积显著小于I/R损伤组;且颈内动脉和侧脑室注射ADM在减少脑梗死体积方面明显优于股静脉注射ADM(P均＜0.05).I/R损伤组大鼠缺血侧大脑皮质、海马CA1区凋亡阳性细胞数明显多于假手术组(P均＜0.01),给予ADM后阳性细胞数显著少于I/R损伤组,以ADM颈内动脉组和侧脑室组更为明显(P均＜0.01).假手术组大鼠大脑皮质有少量Egr-1 mRNA阳性细胞表达,I/R损伤后缺血侧大脑皮质、海马CA1区Egr-1 mRNA阳性细胞表达多于假手术组(P均＜0.01),应用ADM的3组大鼠大脑皮质、海马CA1区Egr-1 mRNA阳性细胞的表达明显多于I/R损伤组(P均＜0.01),但颈内动脉和侧脑室给予ADM组的Egr-1 mRNA阳性细胞表达增高为明显(P均＜0.01).结论 股静脉、侧脑室和颈内动脉给予外源性ADM能减少神经元凋亡和梗死体积,激活Egr-1 mRNA,对局灶性脑I/R损伤可能有治疗作用.
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大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后早期生长反应基因-1 mRNA的表达
采用大鼠可逆性大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,应用原位杂交和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察大鼠局灶性脑缺血/再灌注(I/R)损伤后早期生长反应基因1(Egr-1)mRNA动态变化,旨在探讨缺血损伤后Egr-1 mRNA表达的细胞种类及规律,为脑I/R损伤的病理生理机制提供实验依据.
关键词： 缺血/再灌注损伤 脑 早期生长反应基因-1 原位杂交 基因表达 -
早期生长反应基因-1与肿瘤的关系
早期生长反应基因-1属即刻早期基因家族,是一种重要的转录因子,至少调控着30种基因的转录,直接或间接地参与细胞的生长、分化、凋亡、免疫应答、损伤和修复.大量研究表明,早期生长反应基因-1在肿瘤细胞中表达消失,外源性早期生长反应基因-1的导入有抑制肿瘤细胞生长的作用.另有研究表明早期生长反应基因-1具有辐射诱导性,其在肿瘤放射治疗中具有潜在的临床应用前景.
关键词： 早期生长反应基因-1 肿瘤 -
Egr-1与肺纤维化
异常的细胞外基质的沉积破坏了正常的肺结构是肺纤维化的特征.Egr-1被发现与肺纤维化有关,据研究其作用大多是通过TGF-β1实现的.Egr-1能诱导TGF-β1的表达,而TGF-β1又能诱导Egr-1表达.Egr-1影响成纤维细胞增殖、向肌成纤维细胞分化,并且与肺泡上皮细胞、内皮细胞凋亡,肺泡、气道炎症以及细胞外基质形成有关.血管紧张素转换酶系统对肺纤维化的作用亦与Egr-1有关.但Egr-1对肺纤维化的具体作用还不完全明了,需要作深入研究.
关键词： 早期生长反应基因-1 肌成纤维细胞 成纤维细胞 转化生长因子-β1 肺纤维化 -
神经生长因子对儿童难治性癫(癎)脑神经细胞及早期生长反应基因1表达的影响
目的 探讨外源性神经生长因子(NGF)对儿童难治性癫(癎)脑(癎)性放电区神经细胞及早期生长反应基因1(Egr-1)表达的影响.方法 采用解离细胞即刻培养技术,将术中取下脑海马(癎)性放电区组织块解离后进行培养,设立对照组和NGF 12.5、50、100 ng/ml 3个不同浓度的加药组,孵育4 h后将其固定;通过免疫荧光细胞化学法,以双苯酰亚胺(Bb)染核,联合细胞特异性标志蛋白GFAP、MAP2标记星形胶质细胞、神经元,计算各组神经细胞总数,并利用RT-PCR技术半定量分析细胞中Egr-1mRNA表达情况.结果 外源性NGF作用4 h后,海马区存活的神经细胞总数及GFAP(+)的星形胶质细胞、MAP2(+)的神经元数较空白对照组升高,且与NGF剂量呈量效关系,随NGF浓度增高而增加(P<0.05);与此同时,神经细胞表达Egr-1mRNA也随NGF浓度增高而表达量增加,即A_(Egr-1)/A_(β-actin)值与NGF剂量呈量效关系(P<0.01);且存活的神经细胞数与其表达的Egr-1mRNA量呈正相关(r=0.780,P<0.01).结论 外源性NGF对(癎)性放电区损伤神经细胞有保护作用,其作用可能通过促进Egr-1基因的表达来实现.
关键词： 神经生长因子 癫(癎) 早期生长反应基因-1 神经细胞 儿童 -
早期生长反应基因-1参与学习记忆过程的研究进展
背景早期生长反应基因-1(the early growth response gene-1,Egr-1)参与长时程增强、促进神经元发生过程,其蛋白表达与突触可塑性及长期记忆的巩固、再巩固和消除密切相关.目的 以Egr-1基因的表达变化为切入点,为术后认知功能障碍的发生机制及防治手段提供更多研究靶点.内容全面阐述Egr-1的结构特点、分布、表达及其对学习记忆不同阶段的影响.趋向Egr-1基因在学习记忆的不同阶段发挥不同作用,但具体的分子信号通路及其在术后认知功能障碍中的作用尚有待进一步研究.
关键词： 早期生长反应基因-1 信号通路 学习记忆 -
Egr-1启动子调控hNIS基因的重组质粒构建及转染细胞株的建立
目的 构建早期生长反应基因-1(Egr-1)启动子调控人钠碘转运体(hNIS)基因的重组质粒并稳定转染人宫颈癌细胞株Hela,评价Egr-1启动子对hNIS蛋白功能的辐射诱导作用.方法 以Egr-1/pMR18T为模板PCR扩增Egr-1启动子序列,亚克隆至真核表达载体FL*-hNIS/pcDNA3,构成重组质粒Egr-1-hNIS/pcDNA3,酶切电泳鉴定,通过FuGENE HD转染入Hela细胞,G418筛选抗性克隆,获取单克隆Hela-Egr-1-hNIS.分别采用流式细胞仪、RT-PCR检测Hela-Egr-1-hNIS细胞系中NIS基因和NIS蛋白的表达.动态摄取碘-125实验观察Hela-Egr-1-hNIS细胞和前期研究所得细胞株Hela-NIS(+)给予不同剂量的X线辐照前后的摄碘功能.未转染的Hela细胞作为阴性对照组.结果 成功构建重组质粒Egr-1-hNIS/pcDNA3,转染Hela细胞后获得了稳定表达细胞系Hela-Egr-1-hNIS,流式细胞仪测得NIS表达效率为11.2％；RT-PCR检测到Hela-Egr-1-hNIS有NIS mRNA的转录,而对照组无NIS蛋白表达.动态摄碘实验提示Hela-Egr-1-hNIS细胞摄碘能力比阴性对照Hela细胞提高了13倍；辐照后摄碘能力增强,在0～6 Gy范围内与辐射剂量成正相关(r=0.960,P＜0.05)；而Hela-NIS(+)组辐照后摄碘功能下降,与辐射剂量无相关性(r=-0.770,P＞O.05).结论 成功构建Egr-1启动子调控的稳定表达hNIS蛋白的Hela-Egr-1-hNIS细胞系,该细胞系具有较强的摄碘功能及辐射诱导作用,有望在体内治疗中获得更好的治疗效果.
关键词： 早期生长反应基因-1 钠碘转运体 宫颈肿瘤 放射性核素 -
人肝癌及相关组织中Egr-1基因的转录表达及其意义
目的：探讨Egr-1在肝癌癌变过程中的作用。方法：采用原位杂交和免疫组化技术，检测了肝癌及相关组织中Egr-1的mRNA转录水平和蛋白表达，以人乳腺和小鼠肝及大脑组织为对照。结果：在肝癌组织和正常肝组织中，Egr-1的转录水平明显减低或无转录信号；癌旁组织如肝癌癌旁的异型增生(LCD)和"萎缩样肝索"中Egr-1的转录水平明显增高。Egr-l基因在肝癌组织的表达与mRNA检测结果基本一致。在乳腺及小鼠脑组织Egr-1的表达明显增高。结论：Egr-1在肝癌中的缺失表达可能在其癌变过程中正常生长失调方面起作用；Egr-1在正常肝、乳腺及脑细胞中的表达差异可能与这些细胞的增殖、分化状态及细胞类型特异性有关。
关键词： 肝肿瘤 早期生长反应基因-1 抑癌基因 原位杂交 免疫组织化学 -
碘化N-正丁基氟哌啶醇抑制机械损伤诱导的血管平滑肌细胞增殖的作用及机制
目的 探讨碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对机械损伤所致血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的抑制作用及其机制.方法 原代培养大鼠胸主动脉VSMCs,体外建立机械划伤致VSMCs增殖模型,采用Cell Counting Kit-8 (CCK-8)法检测细胞增殖情况;流式细胞术法测定细胞周期;Western blot法检测p-MEK,p-ERK,Egr-1蛋白表达;Real Time RT-PCR检测MEK和Egr-1 mRNA表达.结果 F2剂量依赖地抑制机械损伤所致VSMCs增殖,降低损伤刺激下VSMCs的生存率和DNA合成,使G0/G1期细胞比例升高,G2/M期细胞百分比下降,并且抑制损伤后VSMCs中MEK/ERK的活化,使p-MEK / ERK蛋白表达降低,同时下调损伤后MEK和Egr-1的高表达.结论 F2对机械损伤所致血管平滑肌细胞增殖有明显抑制作用,其机制可能与影响MEK / ERK / Egr-1信号途径有关.
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钙拮抗剂对缺氧/复氧心肌细胞早期生长反应基因的作用及抗损伤的研究
目的 观察钙离子拮抗剂维拉帕米、地尔硫卓和硝苯地平对大鼠缺氧/复氧心肌细胞早期生长反应基因(Egr-1)及抗细胞损伤的作用.方法 取生长d 5~6的大鼠心肌细胞分为对照组、缺氧/复氧(H/R)组、DMSO组、维拉帕米(2 μmol·L-1)组、地尔硫卓(10 μmol·L-1)组和硝苯地平(10 μmol·L-1)组,除对照组外其他组制作心肌细胞H/R 损伤模型.测定肌酸激酶、乳酸脱氢酶、超氧化物歧化酶及丙二醛的变化,观察心肌细胞损伤情况;RT-PCR方法检测培养心肌细胞中Egr-1mRNA表达水平;Western blot方法检测培养心肌细胞中Egr-1蛋白的表达水平.结果 与H/R组相比,维拉帕米组、地尔硫卓组和硝苯地平组Egr-1mRNA及蛋白表达明显减少(P<0.05),心肌细胞损伤程度明显减弱(P<0.01).结论 维拉帕米、地尔硫卓和硝苯地平均可抑制Egr-1的表达,减轻H/R心肌细胞的损伤,这可能是钙离子拮抗剂保护心肌细胞H/R损伤的共同机制之一.
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外源性Egr-1基因表达对食管癌细胞株Eca109细胞生长的影响
目的检测Egr-1蛋白在食管癌细胞株Eca109中的表达.方法采用免疫细胞化学法检测Egr-1蛋白在Eca109细胞中的表达,用脂质体基因转染法将真核表达载体PCMV-Egr-1质粒导入Eca109细胞,经Western blot和免疫细胞化学检测,Egr-1蛋白在转染的Eca109细胞中呈高表达.结果Eca109细胞的Egr-1蛋白表达阴性,当导入外源性Egr-1基因后,Egr-1蛋白表达阳性,表达Egr-1蛋白的Eca109细胞在形态上发生明显的变化,表现为细胞变扁,呈散在生长.结论Egr-1蛋白的表达在一定程度上能抑制Eca109细胞生长.
关键词： 早期生长反应基因-1 食管癌 基因转染 蛋白表达 肿瘤抑制 -
水杨酸盐诱发大鼠听皮层中Egr-1基因表达的改变
目的 通过观察慢性水杨酸盐诱导的大鼠耳鸣模型听皮层早期生长反应基因-1(early growth response gene-1,Egr-1)的表达,了解其是否出现皮层中枢可塑性的变化,探讨耳鸣产生的中枢机制.方法将84只8周龄SPF级健康雄性SD大鼠按水杨酸盐的给药时间随机分为7组,分别为:正常对照组、急性注射2小时组、慢性注射3天组、慢性注射7天组、慢性注射14天组、停药后恢复14天组、停药后恢复28天组.在完成急、慢性水杨酸肌肉注射成功建立大鼠耳鸣动物模型后,于上述各时间点将各组大鼠断头处死后迅速分离出听皮层,采用SYBR Green实时荧光定量PCR(real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction,real-time RT-PCR)及Western blot(蛋白质印迹)方法,检测各组大鼠听皮层Egr-1 mRNA及其蛋白的表达,比较各组间的差异.结果慢性注射3天组、慢性注射7天组、慢性注射14天组大鼠听皮层的Egr-1 mRNA 及其蛋白表达水平较正常对照组低,差异有统计学意义(P＜0.05);急性注射2小时组、停药后恢复14天组、停药后恢复28天组大鼠听皮层Egr-1 mRNA 及其蛋白表达水平与正常对照组无明显差异(P>0.05).结论 长期注射水杨酸盐导致耳鸣的大鼠听皮层中与中枢可塑性密切相关的Egr-1基因表达可逆性下调,表明听皮层神经元发生了可塑性改变,推测听皮层神经元可塑性改变可能参与了耳鸣的形成和发展.
关键词： 耳鸣 早期生长反应基因-1 水杨酸盐 听皮层 大鼠 -
大鼠局灶性脑缺血再灌注后早期生长反应基因-1 mRNA的表达
目的 探讨早期生长反应基因-1(early growth response gene-1,Egr-1)mRNA在大鼠局灶性脑缺血再灌注后的表达情况.方法 取10只健康雄性SD大鼠,体重200～250 g,应用原位杂交和RT-PCR方法检测大鼠局灶性脑缺血再灌注后Egr-1 mRNA的表达情况.结果 (1)原位杂交结果:假手术组神经元及胶质细胞为轻度阳性表达.缺血2 h再灌注2 h后,缺血侧Egr-1 mRNA细胞阳性表达明显增强.再灌注4 h时Egr-1 mRNA细胞阳性表达高,再灌注22 h Egr-1 mRNA细胞阳性表达下降,至166 h时下降更加明显,但仍显著高于假手术组.(2)RT-PCR结果:大鼠脑缺血再灌注后缺血侧Egr-1 mRNA的表达明显高于假手术组,P＜0 01.动态观察发现,脑缺血2h再灌注2 h后,Egr-1 mRNA即高表达,缺血 2 h再灌注4 h达高峰,再灌注46 h已明显下降,但仍高于假手术组,P＜0.01,随缺血再灌注时间延长,Egr-1 mRNA表达又逐渐增多,至再灌注166 h其表达亦明显高于假手术组,P＜0.01.结论 缺血再灌注后Egr-1 mRNA有规律性表达.
关键词： 脑缺血再灌注 早期生长反应基因-1 原位杂交 RT-PCR -
早期生长反应基因-1与肿瘤关系的研究进展
早期生长反应基因-1(Early growth response gene-1, Egr-1)是一种能在多种刺激因子的作用下诱导其快速短暂表达、对细胞生长起调节作用的基因,属即刻早期基因家族.这一家族主要包括Egr-1、Egr-2、Egr-3、Egr-4、WT-1、c-jun和c-fos等,其中 c-jun与c-fos属癌基因;WT-1是肾母细胞瘤的抑癌基因;研究表明Egr-1在多种恶性肿瘤中表达缺失,外源性Egr-1的导入有抑制肿瘤细胞生长的作用,可能作为一种抑癌基因;Egr-1还参与细胞的多种辐射生物学效应,其正常表达有助于提高肿瘤细胞的辐射敏感性.
关键词： 早期生长反应基因-1 肿瘤 抑癌基因 辐射 细胞凋亡 -
维拉帕米对大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用
目的 观察维拉帕米对培养大鼠心肌细胞缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)所致损伤的作用及其机制.方法 制作心肌细胞H/R损伤模型.倒置显微镜和透射电子显微镜下观察心肌细胞形态和结构的变化；双抗体夹心光化学法检测心肌细胞培养上清液中肌钙蛋白(cardiac troponin Ⅰ,cTnI)的浓度;ELISA方法检测上清液中TNF-α的含量；Western-blot及Northern-blot方法分别检测培养心肌细胞中早期生长反应基因-1(early growth response gene-1,Egr-1)基因和蛋白的表达水平.结果 缺氧及复氧过程中给予维拉帕米能改善H/R所致心肌细胞形态结构的损伤,减轻H/R所致cTnI和TNF-α的漏出或分泌,抑制H/R所致的心肌细胞Egr-1基因和蛋白过量表达.结论 维拉帕米对培养心肌细胞H/R损伤具有多重保护作用,其机制与其抑制gr-1基因及蛋白过量表达有关.
关键词： 维拉帕米 心肌细胞 缺氧复氧 早期生长反应基因-1 -
胃癌Egr-1 mRNA表达水平与临床病理的关系
目的:探讨胃癌组织中Egr-1 mRNA表达水平与临床病理关系.方法:用RT-PCR方法,测定本科35例胃癌患者中胃癌、切缘正常胃组织Egr-1 mRNA的表达水平.病理检查确定胃癌组织病理类型、分化程度及淋巴结转移情况.分析Egr-1 mRNA表达水平与临床病理关系.结果:胃癌组织中Egr-1 mRNA表达水平明显高于正常胃组织(P<0.01);低分化胃癌中Egr-1 mRNA表达水平高于高分化胃癌(P<0.01);有淋巴结转移组表达水平高于无淋巴结转移组(P<0.01).结论:Egr-1基因表达与胃癌发生发展及转移有密切相关.
关键词： 胃癌 早期生长反应基因-1 RT-PCR 抑癌基因
