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saRNA调控NIS基因介导131I对肝癌HepG2细胞体外抑制作用的实验研究
目的 探索通过小激活RNA(saRNA)调控钠碘转运体(NIS)基因特异性表达介导肝癌核素显像和治疗的可行性,为RNA激活(RNAa)技术介导核素基因治疗肿瘤的应用提供实验依据.方法 saRNA的设计合成:通过基因BLAST比对,设计与合成三条针对NIS基因的saRNA序列;细胞转染:以LipofectaminTM 2000为saRNA载体,将saRNA转染到肝癌HepG2细胞后72h,采用Western blotting分析NIS蛋白的表达水平,筛选出RNAa效率高的saRNA,并进一步分析saRNA转染后不同时相NIS的表达水平,以及saRNA浓度-NIS表达水平的浓度-效应关系;体外核素摄取实验:体外培养条件下,评价转染肝癌HepG2细胞对125I的摄取;细胞生长增殖抑制实验:体外培养条件下,评价131 I对转染肝癌细胞的生长抑制率.结果 saRNA可上调NIS基因表达水平,其中saRNA482序列上调NIS表达水平高;saRNA上调NIS的峰值出现在转染后72h,NIS维持高表达水平在10d以上;且NIS上调水平随saRNA浓度增高而增高.体外培养条件下,转染细胞与未转染细胞的摄碘水平差别明显,其中高者摄碘较对照细胞高出64倍.体外培养条件下,相对未转染组肝癌细胞,131I对转染组HepG2细胞的生长抑制率为60.7％.结论 本研究设计合成的靶向NIS基因的saRNA可上调肝癌细胞NIS的表达水平,增强肝癌细胞摄取放射性碘的能力,研究还证实,通过RNAa调控NIS基因表达可介导131I治疗肝癌的潜力.
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钠碘转运体与分化型甲状腺癌
钠碘转运体(NIS)是甲状腺滤泡细胞基底膜上的一种糖蛋白,具有选择性和主动性转运碘(I-)到甲状腺滤泡细胞内的功能.NIS不仅存在于甲状腺,也存在于腮腺、胃黏膜、乳腺等多种组织.有报道,将NIS基因转染到NIS低表达的甲状腺癌细胞和其他类型的肿瘤细胞内,肿瘤细胞表达NIS,增加了131I的摄取.在分化型甲状腺癌(DTC)和其他肿瘤,131I治疗展现了良好的前景.
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急性碘过量对大鼠甲状腺钠碘转运体表达的影响
目的 观察单次大剂量碘对大鼠甲状腺内钠碘转运体(NIS)蛋白表达量的影响,探讨应用99m TcO4-进行甲状腺扫描前是否应对碘的摄入进行限制.方法 将SD大鼠分成给碘后1d处死组、给碘后7d处死组和对照组,每组8只;将2000 ug碘化钠(NaI)溶于0.5 ml生理盐水注入前两组大鼠腹腔内,对照组注射等量生理盐水.各组大鼠处死后,取其甲状腺,应用Western免疫印迹方法探测NIS蛋白含量,通过光密度分析方法对信号强度进行半定量分析.结果 给碘后1 d处死组大鼠甲状腺内NIS蛋白含量明显低于对照组和给碘后7 d处死组(P均<0.001),而给碘后7 d处死组与对照组间NIS蛋白表达量的差异无统计学意义(P>0.05).结论 单次大剂量碘摄入可降低甲状腺内NIS蛋白的表达量,此效应在给碘1 d后明显,7 d后可恢复至正常水平.
关键词： 钠碘转运体 Western免疫印迹 放射性核素显像 -
分化型甲状腺癌钠碘转运体的表达及其与甲状腺超声表现关系的研究
目的：探讨分化型甲状腺癌（DTC）不同病理类型[乳头状癌（PTC）和滤泡状癌（FTC）]癌组织的钠碘转运体（NIS）表达、甲状腺超声表现差异及 NIS表达与甲状腺超声表现的关系。方法采用免疫组织化学染色技术检测结节性甲状腺肿和DTC组织NIS 的表达，比较结节性甲状腺肿、PTC及FTC患者的癌组织NIS表达差异，分别分析PTC组和FTC组NIS表达与甲状腺超声表现的关系。结果 PTC组和FTC组NIS的表达均显著高于结节组（P＜0.05）；PTC组与FTC组癌组织NIS表达IHS评分存在统计学差异（P＜0.05），NIS表达阳性率差异无统计学意义（P＞0.05）；甲状腺超声表现中，PTC组与FTC组结节在直径、回声、形态、边界、钙化、血流方面的表现存在统计学差异（P＜0.05）；所有PTC中，NIS阳性组与阴性组结节血流信号存在统计学差异（P＜0.05）；所有 FTC 中，NIS 阳性组与阴性组甲状腺超声表现无统计学差异（P＞0.05）。结论 PTC 与 FTC癌组织的NIS表达IHS评分和部分甲状腺超声表现均存在差异；PTC癌组织NIS阳性表达者较阴性表达者血流信号丰富。
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全反式维甲酸通过遏制β－catenin 转录活性增强甲状腺未分化癌同位素敏感性的实验观察
目的：观察全反式维甲酸（ATRA）能否通过遏制β－catenin转录活性影响甲状腺癌的同位素敏感性。方法分别建立3组细胞模型：以1％的无水乙醇处理未分化甲状腺癌细胞株SW1736（阴性对照组），以1μmol／L ATRA处理SW1736（ATRA组），pSUPER／β－catenin封闭质粒转染SW1736（阳性对照组）。 Western印迹法检测钠碘转运体（ NIS）、β－catenin信号通路关键调节蛋白的表达变化、上皮细胞间质转化（ EMT ）属性蛋白和转移侵袭相关功能蛋白的表达变化。 Transwell和MTT法对比各组细胞的体外侵袭和增殖能力的差异。摄碘试验进一步评价各组细胞体外摄碘能力的变化。制作重症联合免疫缺陷（ SCID）小鼠皮下瘤模型，观察肿瘤生长曲线、肿瘤质量以及对放射碘剂的治疗反应等方面的差异。结果与阴性对照组细胞模型相比，经ATRA 处理后，β－catenin Ser45、Y654以及GSK－3βSer9位点磷酸化水平均显著下降，遏制了β－catenin由胞质“入核”的效率，且上皮表型蛋白[包括E－钙黏素（E－cadherin）和细胞角蛋白（CK）18]表达转阳，而间质属性蛋白[包括波形蛋白（ Vimentin ）、尿激酶型纤溶酶原激活因子（ uPA ）及其受体 uPAR、纤维连接蛋白（ Fibronectin）]则表达转阴，钠碘转运体（ NIS）表达水平显著上升，ATRA处理后72 h，体外增殖和侵袭能力分别下降39％和37％（均P＜0．05），细胞摄碘能力增强3．5倍（P＝0．007），这些变化趋势与阳性对照组细胞模型一致。 ATRA组小鼠较阴性对照组小鼠对131 I治疗更加敏感，肿瘤体积增长趋势被显著抑制（P＝0．004），并显示与阳性对照组小鼠相似的131 I治疗趋势，ATRA组小鼠的平均瘤体质量也比阴性对照组减少47．8％（P＝0．035），并与阳性对照组接近（P＝0．091）。结论 ATRA能够通过遏制β－catenin核易位效率并降低其转录活性，增高NIS表达水平，改善未分化甲状腺癌同位素敏感性。
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β-catenin核易位遏制人甲状腺癌细胞中钠碘转运体膜定位的实验观察
目的 观察β连环素(β-catenin)核易位能否影响甲状腺癌细胞中钠碘转运体(NIS)的功能性表达.方法 分别将缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和β-catenin cDNA转染人甲状腺癌细胞株FTC133,建立两种β-catenin核易位模型.进而再分别转染pSUPER/β-catenin封闭质粒,建立两种干预模型.Western印迹、Transwell、MTT、免疫荧光染色及摄碘实验分别用于检测β-catenin核易位前后相关蛋白、细胞体外侵袭、增殖、摄碘能力的变化,以及NIS表达部位与β-catenin核易位的关系.制作重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠皮下瘤模型,观察肿瘤生长曲线、肿瘤质量及对放射性碘治疗反应等变化.结果 HIF-1α转染及β-catenin转染细胞中均出现了典型的上皮细胞间质转化的蛋白表达谱,且体外增殖和侵袭能力增强近2倍(均P＜0.05);NIS蛋白由膜表达向胞质表达转变,细胞摄碘率分别下降50.0％和37.5％(均P＜0.05),并且这种核易位变化与β-catenin Ser45、Y654以及GSK-3β Ser9位点磷酸化有关;β-catenin表达封闭后,这些变化均有效逆转.动物实验也发现,β-catenin表达封闭及131I处理均能遏制瘤体的生长能力(均P＜0.05);免疫组化染色提示,瘤体细胞显示与接种细胞一致的β-catenin核易位状态,并与NIS膜表达负相关.结论 β-catenin核易位是人甲状腺癌中NIS功能性表达的重要调控途径.
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甲状腺滤泡细胞源性肿瘤及病变中钠碘转运体mRNA和甲状腺过氧化物酶 mRNA的表达
甲状腺滤泡细胞的主要功能是合成、分泌甲状腺激素. 1996年"碘泵"-钠碘转运体(sodium/iodide symporter ,NIS)的确认,使得从甲状腺激素合成通路中寻找肿瘤标志物成为研究的热点.NIS和甲状腺过氧化物酶(thyroid peroxidase,TPO)是甲状腺激素合成通路中的重要物质,在甲状腺疾病的联合表达尚不清楚,国内的相关报道较少见.本实验应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测NIS mRNA和TPO mRNA在滤泡源性甲状腺肿瘤及病变的表达.
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不同碘摄入量对大鼠甲状腺和肝肾组织碘分布影响
目的 研究不同碘摄入量对大鼠甲状腺、肝、肾组织碘含量以及钠碘转运体(NIS)表达的影响.方法 将断乳后1个月的SPF/VAF级健康Wistar大鼠按体重随机分为低碘组(LI,碘摄入量约为0.6μg/d),正常碘组(NI,碘摄入量约为6.0 μg/d),高碘组(HI,碘摄入量约为600.0 μg/d),每组10只,雌雄各半.饲养3个月后,收集尿液,采用过硫酸铵消化-砷铈催化分光光度法测定尿碘含量.采用碱灰化-砷铈催化分光光度法测定甲状腺、肝脏、肾脏组织碘含量,并采用免疫组化技术检测NIS蛋白的分布与表达.结果 LI、NI、HI组尿碘中位数分别为8.1、344.7、25 404.3 μg/L,尿碘中位数随着饮食中碘含量的增加而增加.LI组三种组织碘含量均低于NI组,HI组均高于NI组(均P＜0.05).LI组肾脏、甲状腺碘含量高于肝脏(P＜0.05),肾脏与甲状腺的碘含量差异无统计学意义(P＞0.05); NI组肝脏、肾脏、甲状腺碘含量依次增加,三者之间差异均具有统计学意义(F=46.443,P＜0.05)；HI组甲状腺碘含量低于肾脏、肝脏(P＜0.05),肾脏与肝脏比,碘含量有增高趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).与NI组比较,NIS在LI组甲状腺滤泡上皮细胞基底膜强表达,而在HI组表达较弱；肾脏组织中,HI组肾小管上皮细胞基底膜和胞浆均有较强表达,而LI组表达相对较弱；肝脏组织中,不同组大鼠NIS的表达均不明显.结论 碘摄入量不同时大鼠体内甲状腺、肝脏、肾脏的碘分布存在差异,这与组织中NIS蛋白的表达不同有关.
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钠碘转运体基因显像及治疗新进展
钠碘转运体(NIS)是一种位于甲状腺滤泡细胞膜上的糖蛋白,负责介导碘进入甲状腺滤泡细胞内.因为NIS的运碘特性,所以临床上有巨大的应用价值.目前,NIS基因可以作为报告基因进行显像,还可以通过NIS基因介导放射性核素治疗癌症.但是将这种方法应用于临床还面临很多问题,细胞中碘的有效半衰期较短就是其中之一.对此,已有的解决方法,一是,使用NIS介导更强的放射性核素;再是,进行甲状腺过氧化物酶基因(TPO)的共转染.
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钠碘转运体在治疗甲状腺恶性肿瘤中的作用
大多数恶性甲状腺肿瘤摄取碘的能力显著降低.钠碘转运体(NIS)是一种能介导碘向细胞内转运的膜蛋白,可以配合放射性碘来治疗肿瘤.目前已经利用转基因技术使不表达或低表达NIS的甲状腺恶性肿瘤细胞表达NIS蛋白.同时发现甲状腺肿瘤细胞摄碘能力的下降不仅与NIS合成的量有关,而且与NIS是否能正确锚着密切相关.另外,当前研究努力的方向除促进NIS的表达和锚着,还要探索如何使肿瘤细胞摄入的碘能够在细胞内滞留足够长的时间以达到杀伤肿瘤的目的.
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钠碘转运体基因介导的肿瘤放射性核素治疗研究
钠碘转运体(NIS)是一种跨膜糖蛋白,介导碘的主动摄取,使得放射性碘用于治疗不摄碘的肿瘤成为可能.目前NIS基因已被成功转入多种肿瘤并表达出有功能的NIS蛋白,但治疗的效果并不令人满意.为此,研究者们应用不同的方法进行了改进,并收到较好的效果.
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131I治疗神经胶质瘤的疗效分析
目的 构建裸鼠神经胶质瘤动物模型,观察放射性核素131I治疗神经胶质瘤效果.方法 将构建好的人端粒酶逆转录酶(hTERT)核心启动子引导钠碘转运体(NIS)基因的重组腺病毒Ad-hTERT-NIS转染到建好的裸鼠肿瘤组织内,作为观察组;未转染重组腺病毒的作为对照组,分别行单光子发射计算机断层显像(SPECT)检查和放射性碘治疗.通过观察肿瘤的摄碘情况、肿瘤形态及病理的变化,分析治疗效果.结果 成功构建神经胶质瘤的裸鼠模型,实验组肿瘤组织影像学检查呈阳性,差异有统计学意义(P<0.05);放射性碘治疗后肿瘤体积缩小,病理图片可见肿瘤细胞核固缩、裂解,细胞组织坏死.结论 放射性131I能够诱导神经胶质瘤细胞凋亡,治疗动物水平的神经胶质瘤.
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ATRA对甲状腺鳞癌SW579细胞株NIS表达的影响
目的 观察全反式维甲酸体外诱导甲状腺鳞癌细胞株SW579形态学和NIS表达的变化.方法 分别以终浓度为2×10-5 mol/L、4×10-5 mol/L、6×10-5 mol/L、8×10-5 mol/L的维甲酸作用SW579细胞株,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;利用RT-PCR的方法观察钠碘转运体表达的变化.结果 ATRA作用48小时后,可见细胞形态改变;但NIS mRNA表达水平未见明显变化(P＞0.05).结论 不同浓度的ATRA可诱导SW579细胞形态学变化,但不能提高NIS的表达.
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碘摄入量对大鼠肝脏组织中碘含量及钠碘转运体表达的影响
目的 研究碘摄入量对大鼠肝脏组织中碘含量及钠碘转运体(NIS)表达的影响.方法 选择健康的Wistar大鼠45只,随机分为高碘组、低碘组、对照组,各15只.高碘组每日碘摄入量为500μg左右,低碘组每日碘摄入量为0.5μg左右,对照组每日碘摄入量为5μg左右.3个月后,测定三组尿碘含量、肝脏组织中碘含量及钠碘转运体表达情况并进行比较分析.结果 饲养3个月后,高碘组的尿碘含量、肾脏、肝脏、甲状腺组织中的碘含量较对照组均明显较高,低碘组较对照组均明显较低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 碘摄入量的不同,对大鼠肝脏组织中碘含量与NIS蛋白表达有一定影响.
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高碘对哺乳期甲状腺疾病患者外周血促甲状腺激素受体和蛋白激酶A及钠碘同向转运体mRNA表达的影响
目的 观察高碘对哺乳期甲状腺疾病患者外周血促甲状腺激素受体(TSHR)和蛋白激酶A(PKA)及钠碘同向转运体(NIS)mRNA表达的影响.方法 在山西省适碘和高碘地区,抽取99名哺乳妇女作为观察对象,并按照是否患有甲状腺疾病分为病例组和对照组(高碘地区病例组21名、高碘地区对照组19名、适碘地区病例组30名、适碘地区对照组29名).采集所有观察对象外周血,采用实时荧光定量PCR法检测TSHR、PKA、NIS mRNA表达.结果 高碘地区病例组[中位数(M):0.099、0.994]和对照组(M:0.240、0.738)分别与适碘地区病例组(M:3.087、1.127)和对照组(M:1.823、0.842)比较,TSHR mRNA表达明显降低(Z=-5.034、-4.010,P均＜ 0.01),PKA mRNA表达有降低趋势,但差异无统计学意义(Z=2.895、-0.343,P均＞0.05).高碘地区病例组NIS mRNA表达(M:0.485)明显低于适碘地区病例组(M:2.680,Z=-3.311,P＜ 0.01),而高碘地区对照组(M:0.470)与适碘地区对照组(M:0.835)比较,差异无统计学意义(Z=-1.882,P＞0.05).NIS、TSHR mRNA表达呈正相关[相关系数(r)=0.741,P＜ 0.01];NIS、PKA mRNA表达也呈正相关(r=0.293,P＜ 0.01);但TSHR、PKA mRNA表达未见统计学相关性(r=-0.081,P＞0.05).结论 哺乳期妇女可能通过促甲状腺激素(TSH)-TSHR-环磷酸腺苷(cAMP)-PKA信号通路调控机体的摄碘水平来达到保护自身及子代的目的.
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不同碘营养水平对哺乳期大鼠甲状腺和乳腺钠碘转运体mRNA表达的影响
目的 观察不同碘营养水平对哺乳期大鼠甲状腺和乳腺钠碘转运体(NIS)mRNA表达水平的影响.方法 Wistar大鼠30只,体质量40～60 g.按体质量将大鼠随机分成3组:低碘组(去离子水),适碘组(含碘150 μg/L的去离子水),高碘组(含碘3000μg/L的去离子水),3组均喂合成饲料.喂养3个月后,与雄鼠合笼交配,待母鼠哺乳5 d后处死,取母鼠乳腺、甲状腺及血清.采用温和酸消化法测定血清碘,放射免疫分析法测定血清T_3、T_4水平,实时荧光定量PCR法检测乳腺和甲状腺NIS mRNA表达.结果 哺乳期大鼠血清碘、T_3、T_4、NIS mRNA表达,组间比较差异有统计学意义(F值分别为499.94、16.67、8.49,H=7.58,P均<0.05).血清碘适碘组[(43.42±692)μg/L]高于低碘组[(17.38±3.27)μg/L,P<0.05],高碘组[(350.10±38.46)μg/L]高于适碘组(P<0.05).血清T_3水平,低碘组、高碘组[(1.11±0.25)、(1.61±0.33)μg/L]低于适碘组[(2.18±0.46)μg/L,P均<0.05].血清T_4水平,低碘组[(33.40±11.11)μg/L]低于高碘组[(56.54±10.38)μg/L,P<0.05].甲状腺NIS mRNA表达水平低碘组(0.280±0.030)高于适碘组(0.240±0.030,P<0.05).高碘组(0.069±0.037)低于适碘组(P<0.05).哺乳期乳腺NIS mRNA表达水平高碘组(0.027±0.007)低于适碘组(0.051±0.019,P<0.05).结论 轻度低碘能够提高甲状腺NIS mRNA表达,保护母体免受低碘的危害,但对下一代的保护作用不明显或没有保护作用;高碘抑制甲状腺和乳腺NIS mRNA表达,保护母体及下一代免受高碘的危害.
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促甲状腺激素、雌二醇、催乳素对不同碘营养水平哺乳期小鼠乳腺细胞钠碘转运体mRNA表达的影响
目的 观察不同碘营养水平哺乳期小鼠乳腺细胞钠碘转运体(NIS)mRNA的表达及促甲状腺激素(TSH)、雌二醇(E2)、催乳素(PRL)对哺乳期小鼠乳腺细胞NIS mRNA表达的影响.方法 将体外培养哺乳期小鼠乳腺细胞分为5组,分别用含0、5、50(对照)、3 000、10 000 μg/L碘水平的培养液(碘酸钾配制)刺激24h.每组细胞在原有碘水平条件下,进行4种方式培养:单纯碘、碘+ TSH(10 μg/L)、碘+E2(100 μg/L)、碘+PRL(100 μg/L),24 h后收集细胞.采用实时荧光定量PCR法检测各组乳腺细胞NIS mRNA表达.结果 单纯碘(0、5 μg/L)组乳腺细胞NIS mRNA表达(0.016 5±0.001 6、0.015 8±0.002 7)明显高于单纯碘(50 μg/L)组(0.011 9±0.001 0,P均＜0.01);碘(0μg/L)+ TSH组乳腺细胞NIS mRNA表达(0.021 6±0.002 4)明显高于单纯碘(0 μg/L)组(0.016 5±0.001 6,P＜0.01);碘(0、5、50、3 000、10 000 μg/L)+E2组NIS mRNA表达(0.023 4±0.004 5、0.018 8±0.001 2、0.015 3±0.001 4、0.013 0±0.001 3、0.012 4±0.000 6)明显高于相应碘水平的单纯碘组(0.016 5±0.001 6、0.015 8±0.002 7、0.011 9±0.001 0、0.009 8±0.001 0、0.010 6±0.000 7,P均＜ 0.05);碘(0、50、3 000 μg/L)+PRL组NIS mRNA表达(0.019 0±0.001 2、0.014 7±0.001 3、0.011 8±0.001 2)明显高于相应碘水平的单纯碘组(0.016 5±0.001 6、0.011 9±0.001 0、0.009 8±0.001 0,P均＜0.05).结论 在重度碘缺乏时TSH对乳腺细胞NIS mRNA表达有上调作用;在不同碘营养水平时E2、PRL对乳腺细胞NIS mRNA表达同样有上调作用.
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磷脂酰肌醇-3激酶-蛋白激酶B信号通路在哺乳期乳腺细胞钠碘转运体表达中的作用
目的 探讨磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)-蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路在调节哺乳期乳腺细胞钠碘转运体(Na+-I-symporter,NIS)表达中的作用,以及不同碘水平对该通路的影响.方法 将原代培养的小鼠哺乳期乳腺细胞分为3组:①对照组[0 μmol/PI3K抑制剂LY294002+0 μg/L胰岛素样生长因子Ⅰ(insulin-like growth factor Ⅰ,IGF-Ⅰ)];②刺激组(50 μg/L IGF-Ⅰ);③抑制组(40 Iμmol/L LY294002+ 50 μg/L IGF-Ⅰ).此外,将原代培养的小鼠哺乳期乳腺细胞按不同碘水平(0、5、50、1 000、3 000 μg/L)处理分为低碘1、2组,适碘组,高碘1、2组,并加入IGF-Ⅰ(50μg/L)刺激.采用实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法检测上述各组细胞中AKT、NIS mRNA及蛋白表达水平.结果 刺激组AKT mRNA表达水平(1.497±0.550)高于抑制组(0.777±0.108,P＜0.05),而刺激组NIS mRNA及蛋白表达水平(0.783±0.187、0.618±0.103)均低于抑制组(2.430±1.423、1.417±0.250,P均＜0.05).随着碘水平的增加,除高碘1组(1.090±0.356)外,低碘1、2组,适碘组,高碘2组AKT mRNA表达水平(1.758±0.893、1.320±0.538、1.003±0.006、0.745±0.307)为逐渐下降趋势;低碘1、2组,适碘组,高碘1、2组NIS mRNA (2.259±0.682、1.823±0.332、1.409±0.366、1.321±0.405、1.150±0.454)及总AKT蛋白(0.640±0.106、0.601±0.081、0.583±0.089、0.555±0.097、0.532±0.023)表达水平均呈下降趋势;除低碘2组(0.484±0.179)外,NIS蛋白表达水平(0.556±0.199、0.502±0.179、0.455±0.126、0.435±0.138)呈下降趋势;除低碘2组(0.076±0.045)外,p-AKT蛋白表达水平(0.078±0.049、0.079±0.040、0.085±0.055、0.095±0.051)呈上升趋势.结论 PI3K-AKT信号通路在调节哺乳期乳腺细胞NIS表达方面起抑制作用.
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甲基乙基酮-细胞外信号调节蛋白激酶信号传导通路在哺乳期乳腺摄碘中的作用
目的：观察不同浓度17β-雌二醇(17β-estradiol，E2)或甲基乙基酮(MEK)信号通路抑制剂U0126对小鼠哺乳期乳腺细胞MEK、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)和钠/碘同向转运体(NIS)mRNA和蛋白表达，探讨MEK-ERK信号传导通路在哺乳期乳腺细胞摄碘中的作用。方法采用细胞体外培养的方法，对Balb/C小鼠哺乳期乳腺细胞进行传代培养，观察不同含量(0.0008、0.0040、0.0200、0.1000、0.5000 mg/L)E2刺激后，小鼠哺乳期乳腺细胞MEK、ERK和NIS mRNA表达；细胞分组为U0126+ E2组[加入MEK的抑制剂U0126(20μmmol/L)30 min后，再加入E2(0.1 mg/L)]、E2组和对照组，培养24 h后，收集样本。用实时荧光定量PCR方法检测小鼠乳腺原代细胞中MEK、ERK和NIS mRNA表达；蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测小鼠乳腺原代细胞总ERK、磷酸化ERK和NIS蛋白表达。结果在E2刺激试验中，随着E2含量的不断升高，哺乳期乳腺细胞ERK、NIS mRNA的表达量逐渐增加(F=28.23、18.37，P均<0.05)。在MEK抑制实验中，E2组NIS mRNA的表达量(1.90±1.36)较U0126+E2组(0.90±0.39)和对照组(0.76±0.18)高，组间比较差异均有统计学意义(t=3.218、2.737，P均<0.05)；在总ERK蛋白表达中，E2组(1.62±0.30)高，与U0126+E2组(1.19±0.32)和对照组(1.25±0.27)比较，差异均有统计学意义(t=2.401、2.246，P均<0.05)；ERK磷酸化后，E2组磷酸化ERK蛋白表达(0.97±0.02)比U0126+E2组(0.76±0.18)高，组间比较差异有统计学意义(t=-2.840，P<0.05)；E2组NIS蛋白表达(0.49±0.08)比U0126+ E2抑制组(0.37±0.04)和对照组(0.41±0.03)高，组间比较差异均有统计学意义(t =3.286、2.294，P均<0.05)。结论 E2激活MEK-ERK信号通路，上调哺乳期乳腺细胞ERK、NIS mRNA及蛋白的表达。抑制该通路后，ERK、NIS mRNA与蛋白表达均呈明显降低的趋势；MEK-ERK可能是哺乳期乳腺摄碘的一条重要信号传导通路。
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哺乳期大鼠乳腺组织磷脂酰肌醇-3激酶-蛋白激酶B信号通路对摄碘功能的影响
目的 观察不同碘营养水平下大鼠乳腺组织磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、钠碘转运体(NIS)mRNA和蛋白的表达,以及血清胰岛素样生长因子I(IGF-1)的变化,探讨该通路在哺乳期乳腺摄碘过程中所起到的作用.方法 Wistar大鼠130只(雌鼠100只,雄鼠30只),按体质量采用随机数字表法将雌鼠分为5组:①对照组(NI组),普通饲料+含碘50 μg/L去离子水;②低碘1组(LI1组),低碘饲料+去离子水;③低碘2组(LI2组),低碘饲料+含碘5μg/L去离子水;④高碘1组(HI1组),普通饲料+含碘3 000μg/L去离子水;⑤高碘2组(HI2组),普通饲料+含碘10 000 μg/L去离子水.每组20只,饲养3个月后,将雌鼠与雄鼠合笼,交配后,取出雄鼠,每只雌鼠单独喂养,在产后10d时,采集尿样,测定哺乳期大鼠尿碘,处死后取哺乳期大鼠的血液、乳腺组织.酶联免疫吸附法测定哺乳期大鼠血清IGF-1水平;实时荧光定量PCR法检测乳腺PI3K、AKT、NIS mRNA表达;蛋白印迹法检测乳腺PI3K、总AKT、磷酸化AKT(p-AKT)和NIS蛋白表达.结果 LI1、LI2组哺乳期大鼠尿碘中位数(3.16、6.36 μg/L)明显低于NI组(162.59 μg/L),HI1、HI2组(2 356.27、11 507.29 μg/L)明显高于NI组,差异均有统计学意义(P均＜0.01).与NI组[(8.84±2.12) μg/L]比较,LI1、LI2组哺乳期大鼠血清IGF-1含量[(13.30±2.37)、(10.90±1.92) μg/L]明显升高(P均＜0.01).实时荧光定量PCR法检测结果显示,哺乳期大鼠乳腺组织NIS、AKT、PI3K mRNA表达组间比较差异有统计学意义(F=14.916、36.477、14.994,P均＜0.01).其中NIS mRNA表达在LI1、LI2组(0.75±0.40、0.89±0.51)明显高于NI组(0.53±0.31),HI2组(0.30±0.24)明显低于NI组(P＜0.05或＜0.01);AKT mRNA表达在LI1、LI2组(0.90±0.19、0.64±0.22)均明显高于NI组(0.43±0.22),HI2组(0.29±0.15)明显低于NI组(P＜ 0.05或＜0.01);PI3K mRNA表达在LI1组(0.85±0.42)明显高于NI组(0.50±0.24),HI2组(0.28±0.10)明显低于NI组(P均＜ 0.01).蛋白印迹法检测结果显示,哺乳期大鼠乳腺NIS蛋白表达组间比较差异有统计学意义(F=4.510,P＜ 0.01),其中LI1组(1.67±0.97)明显高于NI组(0.87±0.43,P＜0.05);p-AKT蛋白表达组间比较差异有统计学意义(F=3.528,P＜0.05),其中HI2组(1.10±0.30)明显高于NI组(0.75±0.23,P＜0.05);总AKT、PI3K蛋白表达组间比较差异无统计学意义(F=0.558、1.319,P均＞0.05).结论 PI3K-AKT信号通路对乳腺NIS表达的抑制作用弱于碘摄入量本身的作用,而功能性p-AKT表达量随着碘浓度的逐渐增加呈上升趋势,表现出抑制哺乳期乳腺NIS表达的作用.
关键词： 磷脂酰肌醇-3激酶-蛋白激酶B信号通路 钠碘转运体 哺乳期大鼠 乳腺 碘
