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HIF-1α和EMT相关蛋白在胰腺癌组织中的表达及临床意义
目的:探讨缺氧诱导因子-lα(HIF-lα)和上皮细胞间质转化(EMT)相关蛋白在胰腺导管腺癌(PDAC)组织中的表达及临床意义.方法:采用免疫组织化学法检测92例PDAC和10例正常胰腺组织中HIF-lα、Snail、Slug、E-cadherin、N-cadherin的表达,并分析其与患者临床病理特征和预后的关系.结果:HIF-1α、Snail、Slug、E-cadherin、N-cadherin在PDAC和正常胰腺组织中表达的阳性率分别为:69.57％,69.57％,58.70％,36.96％,73.91％; 10％,0％,0％,90％,0％.HIF-lα的表达与淋巴结转移有关;Snail的表达与TNM分期有关；Slug的表达与TNM分期和淋巴结转移有关;N-cadherin的表达与TNM分期、淋巴结转移和肿瘤分化程度有关.HIF-1α表达与Snail、Slug表达呈正相关(r=0.309,P=0.005;r=0.231,P=0.027); Snail表达与E-cadherin表达呈负相关(r=-0.223,P=0.033); E-cadherin表达与N-cadherin表达呈负相关(r= -0.478,P=0.000).HIF-1α、Snail和E-cadherin是患者术后独立的预后因子.结论:HIF-1α、Snail、Slug、E-cadherin、N-cadherin在PDAC的演进及预后中发挥作用.
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TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞间质转化及其机制探讨
目的 探讨转化生长因子β1 (TGF-β1)诱导的肺泡上皮细胞-间质细胞转化(EMT)过程及信号传导通路.方法 体外培养肺腺癌细胞系A549细胞,以TGF-β1进行干预;采用Western blot免疫印迹法检测干预前后细胞标志物蛋白及信号传导蛋白P-Smad2/3、Snaill、Snail2的表达;采用RT-PCR检测干预前后细胞标志物mRNA表达;采用倒置相差显微镜观察细胞形态学变化.结果 TGF-β1干预后,随着时间的延长,A549细胞上皮细胞标志物E-cad和CK19蛋白及mRNA表达下调(P＜0.05);间质细胞标志物α-SMA、Vimentin蛋白及mRNA表达上调(P＜0.05);信号传导蛋白P-Smad2/3、Snail1表达上调(P＜0.05);倒置相差显微镜观察TGF-β1干预后A549细胞由干预前的鹅卵石状变为梭形,如同肌纤维母细胞.结论 TGF-β1可诱导肺泡上皮细胞向间质细胞转化,其机制可能与P-Smad2/3、Snail1信号传导通路有关;TGF-β1可能是通过诱导肺泡上皮细胞间质转化的细胞效应,终导致肺泡上皮细胞凋亡和纤维组织形成.
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上皮细胞间质转化与miR-200及肿瘤细胞耐药机制的研究进展
目的:总结国内外上皮细胞间质转化与miR-200家族及肿瘤细胞耐药中的研究进展.方法:应用PubMed、CNKI及维普数据库以“EMT、miR-200和肿瘤耐药”为关键词,检索2000-2012年相关文献.共检索到英文文献5 789条,中文文献9条.纳入标准:1)上皮细胞间质转化的特性与功能；2)miR-200家族成员主要功能；3)EMT及miR-200与肿瘤耐药的关系；4)针对EMT及miR-200为靶点进行逆转肿瘤细胞耐药性的研究.根据纳入标准符合分析的文献共54篇.结果:EMT同诱导肿瘤细胞侵袭性改变以及获得性耐药的发生息息相关,miR-200家族在肿瘤细胞中的表达下调同样可以导致肿瘤耐药形成,且EMT与miR-200间可能存在一定联系,以EMT与miR-200为靶点逆转肿瘤细胞耐药性取得一定成效.结论:上皮细胞间质转化与miR-200在诱导肿瘤细胞耐药机制中有着重要作用,从两者入手是解决肿瘤细胞获得性耐药的可能途径.
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下调MTDH基因表达对乳腺癌细胞转移潜能影响机制研究
目的:通过观察shRNA干扰MTDH基因逆转乳腺肿瘤上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),探讨MTDH在乳腺肿瘤侵袭转移中的作用机制.方法:构建能表达针对MTDH的干扰表达载体MTDH-shR-NA和阴性对照干扰表达载体MTDH-shRNA-neg并用脂质体转染法瞬时转染MDA-MB-231细胞.转染48 h后,采用RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测MTDH、mTOR、S6K1、E-cadherin和α-SMA的表达水平;Transwell小室体迁移和外侵袭实验反映细胞迁移和侵袭转移能力的变化.结果:相对于空白对照组,实验组中MTDH基因在mRNA水平降低41.2％,t=12.655,P＜0.001;蛋白水平上降低40.3％,t=11.910,P＜0.001.与空白对照组或阴性对照组相对比,下调MTDH表达后可以促使上皮标记基因E-cadherin的表达水平升高,而间充质标记基因α-SMA、mTOR和S6K1的表达水平降低,差异有统计学意义,P＜0.05.与空白对照组相对比,转染shRNA-MTDH质粒后,细胞迁移能力降低44.3％,t=7.309,P=0.002;侵袭能力降低35.2％,t=8.812,P=0.001.结论:下调MTDH基因表达,可以抑制乳腺癌MDA-MB-231发生EMT;降低其侵袭和迁移能力.下调MTDH基因表达后,抑制mTOR/S6K1信号通路表达,MTDH基因可能通过mTOR/S6K1信号通路介导EMT的发生.
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肺泡上皮细胞间质转化对肺癌细胞转移影响的研究
目的:通过以TGF-β1诱导肺腺癌细胞系A549细胞出现上皮细胞-间质细胞转化(EMT),并探讨EMT过程的信号转导途径及肺EMT与肺癌转移之间的关系.方法:体外培养A549细胞,以TGF-β1进行干预,收集不同时段的细胞,用荧光实时定量PCR检测上皮及间质细胞标志的mRNA表达,蛋白质印迹法检测上皮及间质细胞标志的蛋白表达、信号转导蛋白P-Smad2/3、Snail1和Snail2的表达及基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达,通过倒置相差显微镜观察肺EMT过程中细胞形态学的变化.结果:TGF-β1干预后,A549细胞上皮细胞标志( E-cad、CK19)的mRNA和蛋白表达下调(P＜0.01),间质细胞标志(Vimentin、α-SMA)的mRNA和蛋白表达上调,P＜0.05；信号转导蛋白P-Smad 2/3和Snail1上调(P＜0.05),Snail2弱表达,P＞0.05；基质金属蛋白酶MMP-2上调(P＜0.05),MMP-9弱表达,P＞0.05；倒置相差显微镜观察到TGF-β1干预后A549细胞由鹅卵石状变为梭形,形态如同肌纤维母细胞.结论:在TGF-1的诱导下,肺腺癌细胞从上皮细胞向间质细胞转化,其与Smad 2/3和Snail1信号转导途径相关,同时伴随了MMP-2的表达增强,因此肺泡上皮细胞向间质细胞的转化可能通过改变细胞形态学和增加基质金属蛋白酶的表达,增强了癌细胞的侵袭性,促进肺癌的转移.而通过阻断肺癌细胞的EMT过程及其信号转导途径有可能抑制肺癌的转移.
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CD44+/CD24+宫颈癌细胞和耐辐射宫颈癌细胞特性研究
目的 探讨放疗抵抗的宫颈癌细胞特性,揭示宫颈癌复发和转移的机制.方法 用多次分割照射获得耐辐射的宫颈鳞状细胞癌Siha细胞,利用流式细胞仪从宫颈鳞癌的亲代细胞中分选获得CD44 +/CD24+宫颈鳞癌细胞.将耐辐射的宫颈鳞癌细胞和CD44 +/CD24+宫颈鳞癌细胞设为实验组,亲代宫颈鳞癌细胞设为对照组,分别进行克隆形成实验和肿瘤移植瘤实验,评估实验组细胞是否具备肿瘤干细胞特性.通过Transwell侵袭实验研究实验组及对照组细胞侵袭和转移能力的差异.利用RT-PCR和Western blot检测实验组及对照组细胞OCT-4、Survivin、ABCG2和bcl-2 mRNA的表达,以及与肿瘤转移相关的E-cadherin和vimentin蛋白表达.结果 辐射抵抗的宫颈鳞癌细胞和CD44 +/CD24+宫颈鳞癌细胞较亲代宫颈癌细胞高表达抗凋亡蛋白Bcl-2(t=205.26、198.17,P＜0.05)和凋亡抑制蛋白survivin(t=896.62、765.34,P＜0.05),并表达肿瘤干细胞相关标志物OCT-4和ABCG2(t =92.13、81.26、220.45、216.32,P＜O.05).两组细胞均具有较强的致瘤能力以及侵袭和转移能力,且表现出E-cadherin下调和vimentin蛋白上调的EMT相关的分子表型变化.结论 放射抵抗的宫颈鳞癌细胞与CD44 +/CD24+宫颈鳞癌细胞表现出相同的肿瘤干细胞特性,经历了上皮间质转化过程,放射可以富集宫颈癌干细胞.
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解整合素-金属蛋白酶17在肺泡上皮细胞间质转化中的作用研究
目的：探讨解整合素-金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloproteinase-17，ADAM 17)过表达和抑制在转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1，TGF-β1)介导的A549细胞上皮向间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition， EMT)过程中的作用，以进一步揭示肺纤维化的机制。方法将A549细胞分为空白对照组、TGF-β1组、PMA(ADAM 17激活剂)组和TNF484(ADAM 17抑制剂)组。各组细胞培养36 h后，应用倒置相差显微镜观察各组细胞形态，Real-time PCR和Western blotting分别检测ADAM 17、上皮及间质细胞标记物在mRNA和蛋白水平上的表达情况。结果镜下观察发现未诱导的A549细胞呈鹅卵石形态，排列比较紧密；经TGF-β1诱导后，细胞形态伸长，出现伪足，排列较松散，细胞与细胞之间的紧密连接消失。Real-time PCR和Western blotting检测结果均显示ADAM 17在PMA组高表达，而在TNF484组低表达，差异有统计学意义；上皮细胞标记物E-cadherin在空白对照组和TNF484组高表达，间质细胞标记物Vimentin在TGF-β1组和PMA组高表达，差异同样有统计学意义。结论 ADAM 17的过表达有助于TGF-β1介导的A549细胞EMT进程，提示ADAM 17可作为肺纤维化的标记物之一。
关键词： 上皮细胞间质转化 解整合素-金属蛋白酶17 肺纤维化 -
上皮细胞间质转化与肺纤维化的研究进展
在肺纤维化过程中，由于各种细胞因子的刺激和信号通路的激活，肺泡上皮细胞、气道上皮细胞通过间质转化终成为成纤维细胞以及肌成纤维细胞。本文以参与上皮细胞间质转化的典型标志物及信号通路与肺纤维化的研究进展作一综述。
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上皮细胞间质转化对大肠癌肝转移的早期预测和靶向治疗的研究进展
大肠癌肝转移在全世界有着很高的发病率和病死率,研究显示大肠癌肝转移都有上皮细胞间质转化的特征,而上皮细胞间质转化过程中出现的一些分子标志物对大肠癌肝转移的早期预测和指导靶向治疗有着重要的作用.很多临床医师从事这项科研,其中一些问题已经有了答案,但是更多重要的问题仍需解决.研究者们期待在不久的将来,对上皮细胞间质转化分子标志物的研究,能更准确地预测大肠癌肝转移,并实现佳的靶向治疗.
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结直肠癌中肿瘤微环境对上皮细胞间质转化的调控机制研究
上皮细胞间质转化(EMT)是指上皮细胞在一定条件下获得间质细胞表型的过程.研究表明,EMT是结直肠癌发生、发展中的关键步骤之一.肿瘤微环境在恶性肿瘤进展过程中扮演着重要角色.肿瘤微环境中的细胞因子、组织缺氧状况、肿瘤干细胞及相关的信号通路都可能参与EMT的过程.该文将上述相关因素在结直肠癌EMT启动和发展过程中的调控机制进行综述.
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整合素连接激酶与肺纤维化的研究进展
肺间质纤维化(pulmonary interstitial fibrosis,PF)是一种原因不明、发病机制尚不清楚并且缺乏确实有效治疗手段的致命性弥漫性肺间质疾病.其病理过程包括肺组织的炎性损伤、组织结构破坏及随后发生肺间质细胞积聚的组织修复过程.在这一过程中,肺炎症细胞、肺泡上皮细胞、和肺间质细胞都可以分泌细胞因子、炎性介质等生物活性物质,从而促进成纤维细胞的迁移和增生以及间质胶原的增生,亦可以增加肺上皮细胞间质转化((epithelial- mesenchymal transition,EMT)的形成和积累[1].
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β-catenin核易位遏制人甲状腺癌细胞中钠碘转运体膜定位的实验观察
目的 观察β连环素(β-catenin)核易位能否影响甲状腺癌细胞中钠碘转运体(NIS)的功能性表达.方法 分别将缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和β-catenin cDNA转染人甲状腺癌细胞株FTC133,建立两种β-catenin核易位模型.进而再分别转染pSUPER/β-catenin封闭质粒,建立两种干预模型.Western印迹、Transwell、MTT、免疫荧光染色及摄碘实验分别用于检测β-catenin核易位前后相关蛋白、细胞体外侵袭、增殖、摄碘能力的变化,以及NIS表达部位与β-catenin核易位的关系.制作重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠皮下瘤模型,观察肿瘤生长曲线、肿瘤质量及对放射性碘治疗反应等变化.结果 HIF-1α转染及β-catenin转染细胞中均出现了典型的上皮细胞间质转化的蛋白表达谱,且体外增殖和侵袭能力增强近2倍(均P＜0.05);NIS蛋白由膜表达向胞质表达转变,细胞摄碘率分别下降50.0％和37.5％(均P＜0.05),并且这种核易位变化与β-catenin Ser45、Y654以及GSK-3β Ser9位点磷酸化有关;β-catenin表达封闭后,这些变化均有效逆转.动物实验也发现,β-catenin表达封闭及131I处理均能遏制瘤体的生长能力(均P＜0.05);免疫组化染色提示,瘤体细胞显示与接种细胞一致的β-catenin核易位状态,并与NIS膜表达负相关.结论 β-catenin核易位是人甲状腺癌中NIS功能性表达的重要调控途径.
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信号通路在上皮间质细胞转化及肿瘤转移中的作用
近年来,尽管恶性肿瘤的检测和治疗手段取得了长足进步,但肿瘤转移仍是恶性肿瘤治疗失败和患者死亡的主要原因.因此,肿瘤转移成为近来研究的热点问题.这其中,上皮间质细胞转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)在肿瘤的局部浸润以及远处转移中起到了重要的作用 [1].在肿瘤演进过程中,EMT涉及到多种分子机制,构成的复杂网络.TGF-β [2]、Wnt[3]等信号通路等因素都与上皮间质细胞转化的产生有着密切的关系.本文就信号通路在上皮间质细胞转化及肿瘤转移中的作用的新研究现状加以综述.
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5-HTR2B、E-cad、α-SMA在博莱霉素致大鼠肺纤维化中的表达变化
目的:观察5-羟色胺2B受体(5-HTR2B)、E-钙粘素(E-cad)、α-平滑肌蛋白(α-SMA)在博莱霉素(BLM)致大鼠肺纤维化中的表达变化.方法:健康雄性SD大鼠45只,随机分为3组(n=15):对照组、BLM组、泼尼松+BLM组.各组分别于第7、t4和28天各处死动物5只,取肺组织,行HE、Masson染色,观察大鼠肺组织炎症和纤维化的程度;免疫组化法及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肺组织中5-HTR2B、上皮细胞标记物E-cad和间质细胞标记物(α-SMA)mRNA及蛋白的表达水平.结果:BLM组肺组织病理切片HE和Masson染色按时间顺序呈现由肺泡炎症至纤维化的动态改变.免疫组化及RT-PCR结果显示肺纤维化大鼠肺组织中5-HTR2B、α-SMA的蛋白及mR-NA表达均增加(P＜0.05),28 d时高;E-cad蛋白及mRNA表达均减弱(P＜0.05),28 d时低;泼尼松+BLM组,相应时间点5-HTR2B、α-SMA蛋白及mRNA表达有所下降(P＜0.05),E-cad蛋白及mRNA表达不同程度增强(P＜0.05).结论:5-HTR2B可促进大鼠肺纤维化发生,机制可能与减弱E-cad,促进α-SMA表达,诱导上皮细胞间质转化(EMT)有关.
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胶质瘤细胞U87中JMJD3表达对上皮细胞间质转化及细胞迁移的影响
[目的]明确组蛋白去甲基化酶JMJD3表达对神经胶质瘤细胞上皮细胞间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程及细胞迁移能力的影响.[方法]构建U87细胞中JMJD3过表达和沉默表达的转染体系,采用Real-time PCR、Western blotting和划痕等检测手段从mRNA、蛋白和细胞功能3个层面明确JMJD3表达对神经胶质瘤U87细胞上皮和间质标志分子表达及细胞迁移能力的影响.[结果]在U87细胞中过表达JMJD3能够显著抑制上皮标志分子E-纤黏蛋白(E-cadherin),促进间质标志分子:E-纤黏蛋白、纤黏蛋白、波形蛋白(N-cadherin/Fibronectin/Vimentin)mRNA和蛋白的表达,促进胶质瘤细胞发生EMT,同时过表达JMJD3能够有效提高细胞的迁移能力;而沉默表达JMJD3表达能够有效抑制EMT过程同时降低细胞迁移能力.[结论]JMJD3表达能够促进神经胶质瘤细胞EMT过程从而提高细胞迁移能力.
关键词： 组蛋白去甲基化酶JMJD3 神经胶质瘤 上皮细胞间质转化 细胞迁移 -
内质网应激与肺泡上皮细胞-间质转化在肺纤维化中的作用
肺纤维化是一种常见的肺间质疾病,其发病机制至今仍然不清,目前很多证据表明肺泡上皮细胞-间质转化过程得到的间质细胞成为成纤维细胞和肌纤维母细胞的重要来源.近来研究表明表面活性蛋白C突变体L88Q SFTPC和衣霉素诱导的内质网应激与肺泡上皮细胞-间质转化有关,本文综述内质网应激与肺泡上皮细胞间质转化在肺纤维化中的作用.
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百草枯诱导A549细胞间质转化及四氢吡咯二硫代氨基甲酸酯的干预作用
目的 探讨体外培养的人肺腺癌细胞(A549)在百草枯(PQ)诱导下能否发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及四氢吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)的干预作用和可能机制.方法 体外培养A549细胞,实验分为对照A549细胞组(Control)、PQ诱导A549细胞组(PQ)、PDTC 3个浓度干预组(PQ+PDTC1,2,3;终浓度分别为10,20,40 μmol/L).用噻唑蓝(MTT)测定细胞毒性;活性氧荧光定量法(DCFH-DA)测定细胞内活性氧(ROS)水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定转化生长因子β1(TGF-β1)表达水平;实时定量RCR (Real Time,RT-PCR)测定EMT相关标志物上皮细胞钙粘蛋白(E-cad)、紧密连接蛋白(ZO-1)、N-钙粘蛋白(N-cad)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) mRNA表达.结果 与对照组比较,PQ(600 μmol/L)作用A549细胞24 h后,细胞存活率降低,细胞内ROS水平明显升高,TGF-β1表达水平明显升高,上皮细胞标志物E-cad、ZO-1基因表达下调,间质细胞标志物N-cad、α-SMA基因表达明显上调(P＜0.05);PDTC干预组能够降低PQ诱导的A549细胞毒性,明显抑制上述作用,其中对TGF-β1表达、E-cad、N-cad基因表达的干预作用呈剂量依赖方式(P＜0.05).结论 PQ诱导A549细胞过度表达TGF-β1,继而导致上皮细胞向间质细胞转化,这可能是PQ致肺纤维化的重要机制之一;PDTC的有效干预可能基于其抗氧化和核因子-kappaB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)抑制作用.
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Runt相关转录因子家族在肿瘤发生发展中的作用
Runt相关转录因子(Runt-related transcription factor,RUNX)作为细胞信号传导的一类重要的转录因子,在发育、细胞增殖分化以及凋亡中起着关键的作用.近年的研究表明,RUNX与肿瘤的发生发展过程密切相关,不同的RUNX蛋白具有不同的组织表达特异性,能在不同的细胞环境中通过与不同的关键信号途径相互作用,发挥独特的生物学功能.深入了解RUNX在肿瘤中的表达和作用机制,探究其在肿瘤发生发展中的作用,将为肿瘤的早期诊断、治疗和预后提供可靠的依据.本文综述了RUNX的结构和活性调节,重点分析了近年来RUNX异常表达与肿瘤的关系,对RUNX相关的致癌信号通路,及其在肿瘤缺氧微环境中的作用的研究进展进行了总结.
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低糖下调HSF1抑制肝癌细胞EMT及相关转移
目的 分析低糖(LG)对肝癌细胞上皮间质转化(EMT)相关转移的影响以及热休克因子1(HSF1)在其中的作用.方法 分别用LG和对照高糖(Control)培养基培养肝癌细胞;用Transwell迁移试验检测细胞的迁移能力;利用shRNA干扰HSF1,并采用HSF1基因回补(shRES)策略,检测HSF1在低糖抑制肝癌细胞EMT及转移中的作用.结果 LG抑制肝癌细胞的EMT样的形态学改变,抑制其“钙黏着蛋白转换”和迁移能力;此外,葡萄糖限制还可引起HSF1下调,导致E-钙黏蛋白(E-Cadherin)表达增高,N-钙黏蛋白(N-Cadherin)表达降低;LG培养时,敲减HSF1后肝癌细胞的迁移能力增强(P＜0.05),E-Cadherin降低,N-Cadherin增高,EMT作用增强,而Control培养时无此现象;HSF1基因回补(shRES)后肝癌细胞EMT及迁移能力再次被抑制.结论 LG可下调HSF1,抑制肝癌细胞的EMT及迁移能力,为肝癌治疗提供新的策略.
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两种不同前列腺癌上皮细胞间质转化模型转录调控因子的比较及意义
目的:初步筛选、对比决定两种不同前列腺癌上皮细胞间质转化(EMT)模型(LNCaP/HIF1α细胞模型、ARCaP细胞模型)表型的转录因子,为利用这两个模型深入研究前列腺癌转移机制奠定基础. 方法:分别体外培养LNCaP/HIF1α细胞模型中的LNCaP细胞、稳定高表达缺氧诱导因子HIF1α的LNCaP细胞和ARCaP细胞模型中的IF11细胞、IA8细胞,提取总RNA行RT-PCR,检测目前发现的决定EMT表型的5种转录因子(Snail、Slug、ZEB1、SIP1、Twist1),对比两种模型的差异. 结果:LNCaP/HIF1α细胞模型中的两种细胞均不同程度地表达5种转录因子,其中Slug、Twist1有差异,表型转化后Slug表达升高,而Twist1表达降低(P<0.05);ARCaP细胞模型中的两种细胞均不同程度地表达Snail、Slug、ZEB1、SIP1,不表达Twist1,其中ZEB1、Slug有差异,表型转化后ZEB1、Slug表达升高(P<0.05). 结论:决定不同来源的前列腺癌EMT模型表型转化的转录调控机制各不相同,Slug可能是决定HIF1 α诱导LNCaP细胞EMT表型转化的关键转录因子,而ZEB1、Slug则可能在ARCaP细胞EMT表型转化中起决定作用.
关键词： 前列腺癌 LNCaP/HIF1α模型 ARCaP模型 上皮细胞间质转化 转录因子
