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STAR 蛋白及其成员QKI的结构及功能
STAR即信号转导与RNA活化蛋白,这是一类集信号转导特性与RNA激活功能于一身的蛋白质.STAR蛋白家族都含有一个标志性的STAR功能区.STAR蛋白在胚胎发生、组织器官的发育,以及调节蛋白质的合成和表达等方面都发挥着重要作用.目前已鉴定出30多种STAR蛋白,根据氨基酸序列的差异分为三个亚家族,其中QKI蛋白对神经髓鞘形成和胚胎发育有至关重要的作用.尽管越来越多的STAR蛋白被发现,但是至今仍然存在许多难点和疑点,这些都有待于进一步研究.
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胎儿性RNA结合蛋白p62在肝细胞癌中表达的意义
目的探讨表达p62的肝癌组织的病理形态学特点,以及p62与癌细胞增殖和转移等生物学特性的关系.方法用免疫组织化学方法检测40例原发性肝细胞肝癌p62和Ki-67的表达.结果 p62阳性率是67.5%(27/40),其中p62强阳性表达的12例中9例为肝癌病理学分级为Ⅲ级的病例.p62表达强阳性的癌组织往往间质有大量的纤维组织或有大片坏死癌细胞,其增殖活性也高,Ki-67标记指数为28.3%±15.1%,与p62表达阴性组(7.5%±9.8%)比较,差异具有显著性意义(t=3.087,P=0.005);5例有肺转移或腹腔淋巴结转移的病例,其中3例p62表达强阳性.结论 p62的表达与癌细胞的增殖和转移有一定的关系,和间质纤维组织较多的微环境有关.
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冷诱导RNA结合蛋白在亚低温下的神经保护作用研究
目的 研究亚低温下冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)对受损海马神经元的保护作用机制.方法 将原代培养的海马神经元分为3组:对照组、损伤组和治疗组.氧糖剥夺55 min制作海马神经元损伤模型,损伤组和治疗组在氧糖剥夺55 min后分别置于37℃和32℃培养24 h.收集各组细胞,MTT检测各组细胞的存活率,荧光定量PCR和Western blot检测CIRP的mRNA和蛋白的表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3蛋白表达水平.结果 与对照组比较,损伤组细胞生存率明显下降[(43.3±8.1)％ vs (100.0±12.7)％,P＜0.05],治疗组细胞生存率明显升高[(71.8±13.6)％ vs (43.3±8.1)％,P＜0.05],与损伤组比较,治疗组细胞凋亡率下降[(19.5±0.6)％ vs (30.7±2.5)％],CIRP的mRNA蛋白表达明显升高,Caspase-3蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 亚低温下CIRP表达水平升高,通过抑制细胞凋亡发挥神经元保护作用,是亚低温脑保护作用途径之一.
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微小RNA-21表达在卵巢癌细胞生长和凋亡过程中的作用
目的；探讨微小RNA-21( miR-21)在卵巢癌细胞生长、凋亡中的作用及调节机制。方法构建表达miR-21的重组干扰载体pSIREN-miR-21质粒，采用酶切鉴定和测序法证实。实验分为3组，即转染组：卵巢癌细胞株OVCAR3细胞转染重组干扰载体pSIREN-miR-21质粒；阴性对照组：OVCAR3细胞转染阴性对照pSIREN-miR-21-Neg质粒；空白对照组：OVCAR3细胞不转染质粒。采用茎环实时荧光定量逆转录(RT)-PCR技术检测3组细胞中miR-21的表达，蛋白印迹法检测3组细胞中程序性细胞死亡因子4( PDCD4)蛋白的表达，四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪检测3组细胞的增殖及凋亡情况。结果成功构建了表达miR-21的重组干扰载体pSIREN-niR-21质粒，并经酶切鉴定和测序法证实。转染组、阴性对照组和空白对照组OVCAR3细胞中niR-21的表达水平分别为0.26±0.08、1.26±0.21和1.00，转染组明显低于阴性对照组和空白对照组，差异有统计学意义(P＜0.01)。转染组、阴性对照组和空白对照组OVCAR3细胞中PDCD4蛋白的灰度值分别为1443 ±33、858±19和846±16，转染组明显高于阴性对照组和空白对照组，差异有统计学意义(P＜0.01)。转染组、阴性对照组和空白对照组OVCAP3细胞增殖的A值分别为0.661±0.015、0.848±0.150、0.935±0.133，转染组明显低于阴性对照组和空白对照组，差异有统计学意义(P＜0.01)。转染48 h后，转染组细胞的早期凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组[分别为(25.821±0.763)％、(0.010 ±0.003)％、(0.238±0.023)％；P ＜0.01]；转染72 h后，转染组细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率均明显高于阴性对照组和空白对照组[早期凋亡率分别为( 30.480±0.821)％、(7.792±0.312)％、(7.033±0.257)％，P＜0.01；晚期凋亡率分别为(3.558±0.211)％、(1.557±0.067)％、(1.049±0.028)％，P＜0.05]。结论miR-21参与调节卵巢癌细胞的生长和凋亡过程，可能通过调控PDCD4蛋白的表达而发挥作用。
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宫内生长受限大鼠肝组织胰岛素样生长因子-2与过氧化物酶体增殖物激活受体-γ辅激活因子-1α表达的相关性
目的 探讨胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR)仔鼠生后追赶生长导致成年期代谢综合征的发生机制.方法 孕Sprague Dawley大鼠随机分为正常饮食组和限制饮食组,各10只.限制饮食组孕鼠摄食量为正常饮食组孕鼠摄食量的30％,建立FGR仔鼠模型.限制饮食组和正常饮食组孕鼠妊娠19d时,取胎盘和胎鼠肝组织.限制饮食组新生仔鼠体重低于正常饮食组仔鼠体重平均值2个标准差者定义为FGR仔鼠.取新生仔鼠、4及8周龄完成追赶生长的仔鼠的肝组织,采用实时荧光定量-聚合酶链反应及Western印迹技术检测胎盘及不同周龄仔鼠肝组织胰岛素样生长因子-2(insulin-like growth factor-2,IGF-2)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3-K)、蛋白激酶(serine/threonine protein kinases,AKT2)、磷酸化AKT2 (phosphorylation of AKT2,AKT2-P)和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ辅激活因子-1α(peroxisome proliferator-activated receptor-γ coactivator 1α,PGC-1α)mRNA及蛋白表达水平.测定8周龄完成追赶生长的FGR仔鼠和对照组仔鼠血浆甘油三酯浓度,并取新鲜肝组织,HE染色和油红O染色观察肝组织病理改变.采用t检验和Pearson直线相关分析进行统计学分析.结果 FGR仔鼠胎盘、胎肝、新生肝、4周肝组织中IGF 2 mRNA的表达水平分别为0.665±0.210、7.855±0.354、6.714±0.744和(4.510±0.490)×10-4,均低于对照组[分别为1.608±0.464、9.548±0.416、13.053±1.415和(22.800±0.060)×101](t分别为4.535、7.175、9.713和4.580,P均＜0.01).FGR仔鼠胎盘、胎肝、新生肝组织中PI3-K、AKT2、AKT2 P和PGC-1α的蛋白表达水平均分别较对照组显著降低(P均＜0.01).8周龄仔鼠肝组织内IGF-2 mRNA表达检测不出,但PI3-K、AKT2、PGC hα mRNA的表达水平分别为0.380±0.150、1.020±0.019和0.280±0.160,均显著低于对照组(分别为1.510±0.220、2.360±0.360和0.680±0.350)(t分别为14.700、12.876和3.750,P均＜0.01);8周龄完成追赶生长的FGR仔鼠肝组织中PI3-K、AKT2、AKT2-P、PGC-1α蛋白的表达水平分别为0.660±0.044、1.110±0.120、0.360±0.087和0.170±0.071,均显著低于对照组(分别为0.900±0.046、1.970±0.200、0.740±0.064和0.470±0.110)(t分别为13.061、12.773、12.188和7.938,P均＜0.01).8周龄时,完成追赶生长的FGR仔鼠肝组织有轻度脂肪变性,血浆甘油三酯浓度为(0.321±0.110) mmol/L,明显高于对照组仔鼠[(0.189±0.038) mmol/L](t=3.790,P＜0.05).在FGR组,胎盘、胎肝和新生肝组织中PGC-1α蛋白与IGF-2 mRNA的表达量均呈正相关(r分别为0.991、0.935和0.873,P均＜0.05);8周龄完成追赶生长的FGR仔鼠肝组织PGC 1α蛋白与血浆甘油三酯的表达量呈负相关(y=-0.827,P＜0.05).结论 IGF-2可能通过PI3-K/AKT2通路调控FGR大鼠PGC-1α的表达,影响糖脂代谢,参与追赶生长大鼠成年后代谢综合征的发生.
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妊娠期糖尿病大鼠的胎鼠肺结构和肺表面活性蛋白B、C及其调控因子表达
目的 通过对GDM大鼠胎鼠的肺组织结构及肺表面活性蛋白(surfactant proteins,SP)-B、SP-C、甲状腺转录因子(thyroid transcription factor,TTF)-1、多形性腺瘤样因子(pleiomorphic adenoma gene like,PLAGL)-2蛋白表达水平进行研究,探讨GDM大鼠胎鼠肺发育障碍的机制. 方法 清洁级健康成年Sprague-Dawley大鼠构建孕鼠GDM模型,共20只造模成功,对照组为20只正常孕鼠.于妊娠第21天检测孕鼠随机血糖,并行剖宫取胎术,胎鼠计数并称重.透射电子显微镜下观察肺泡Ⅱ型上皮细胞的超微结构.每组随机取60只胎鼠,取肺组织制作360张石蜡切片,随机取100张不连续切片,光镜下观察肺组织形态结构;随机取另外100张不连续切片,免疫组织化学法检测SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2的蛋白定位及表达.每组取9只胎鼠,蛋白质印迹技术检测胎鼠肺组织中SP-B、SP-C、TTF-l和PLAGL-2蛋白水平.每组取27只胎鼠,荧光实时定量聚合酶链反应检测胎鼠肺组织中SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2的mRNA水平.采用独立样本t检验进行统计学分析. 结果 GDM组孕鼠平均随机血糖值高于对照组[(26.8±2.8)与(4.9±0.5)mmol/L,t=-34.05,P=0.00].GDM组胎鼠平均体重高于对照组[(5.6±0.6)与(5.2±0.5)g,t=-1.97,P=o.03].GDM组与对照组肺泡个数分别为(10.1±1.6)与(12.1±1.3)个,肺泡面积分别为(986.9±5.5)与(1 257.3±5.0) μm2,GDM组均低于对照组(t值分别为9.84和27.53);肺泡间隔分别为(11.5±6.2)与(9.9±4.3)μm,GDM组高于对照组(t=-2.17),差异均有统计学意义(P值均＜ 0.05).透射电镜下,可见GDM组肺泡Ⅱ型上皮细胞表面微绒毛粗短、减少,板层小体数量减少.胎肺组织中SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2蛋白均沿胞浆呈颗粒状分布,GDM组4种蛋白表达的平均吸光度分别为1.15±0.12、1.23±0.06、0.87±0.21与1.21±0.18,对照组分别为1.22±0.05、1.31±0.14、1.12±0.09与1.33±0.07,GDM组均低于对照组,差异有统计学意义(t值分别为2.40、2.35、4.89和2.77,P值均＜0.01).GDM组胎肺组织中SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2的蛋白水平分别为0.57±0.09、0.45±0.03、1.50±0.04和1.11±0.04,对照组分别为0.81±0.03、0.66±0.04、1.69±0.05和1.46±0.07,GDM组均低于对照组,差异有统计学意义(t值分别为11.77、11.09、8.80和13.37,P值均＜0.01).GDM组胎肺组织中SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2mRNA水平分别为0.60±0.04、0.79±0.04、0.81±0.03和0.79±0.05,对照组分别为1.06±0.19、1.03±0.24、1.03±0.18和1.02±0.19,GDM组均低于对照组,差异有统计学意义(t值分别为6.80、2.98、3.54和3.54,P值均＜0.01). 结论 GDM大鼠的胎鼠肺组织中SP-B和SP-C蛋白水平均明显下降,可能由于TTF-1和/或PLAGL-2基因表达下调所致;SP-B和SP-C蛋白减少与胎肺结构的病理变化有密切关联.
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脊髓性肌萎缩症运动神经元生存基因2拷贝数与临床表型的关系
目的探讨运动神经元生存基因2(SMN2)拷贝数与临床表型的关系,进一步阐明脊髓性肌萎缩症(SMA)的发病机制.方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术特异性扩增50名健康人、51例临床确诊SMA患者SMN2基因7号外显子及其邻近区域,并以已确定只有3个拷贝的SMN2样品作为标准对照.结果 50名健康人中有2名SMN2拷贝数为0;51例患者中SMN2拷贝数为1、2、3、4的例数分别为8、22、16、5例;患者两性之间SMN2拷贝数差异无统计学意义;SMN2拷贝数与病情严重程度之间呈负相关(r=0.682,P=0.000);24例死亡患者中,具有1及2个拷贝SMN2患者的平均生存时间分别为13.8及22.7个月,两组间生存时间及生存率的差异具有统计学意义(P<0.01).结论对于SMA患者,SMN2可能对SMN1基因缺失起到一定的代偿作用,SMN2拷贝数可作为判断患者预后的一个指标.对患者SMN2拷贝数的研究也为基于增加SMN2全长功能蛋白表达的基因治疗策略提供了理论依据.
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散发性肌萎缩侧索硬化与运动神经元生存基因缺失的关系
目的 探讨我国散发性肌萎缩侧索硬化(SALS)与运动神经元生存基因(SMN)缺失之间的关系.方法 收集141例SALS患者和134名健康对照的外周静脉血并抽提DNA,应用聚合酶链反应.限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)进行SMN基因缺失筛查.缺失频率的比较采用卡方检验分析.结果 4例SALS患者和3名健康对照分别检出SMN2基因第7、8号外显子纯合缺失,缺失频率分别为2.84%(4/141)和2.24%(3/134),差异无统计学意义(χ2=0.0001,P=1.000).此外,所有研究对象均未检出SMN1基因纯合缺失.结论 SMN基因纯合缺失与我国SALS患者之间无明显相关性.
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运动神经元生存蛋白多克隆抗体的制备及该蛋白在脊髓性肌萎缩症患者骨骼肌中的表达
目的 制备运动神经元生存(SMN)蛋白多克隆抗体,探讨SMN蛋白在细胞内的定位及在脊髓性肌萎缩症(SMA)患者骨骼肌中的表达情况.方法 构建pET-28a(+)/SMN原核表达质粒,诱导表达SMN-His融合蛋白,免疫新西兰大白兔制备SMN多克隆抗体.构建pcDNA3.1/myc-HisB-SMN真核表达质粒并转染中国仓鼠卵母(CHO)细胞.收集骨折患者以及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型SMA患者的骨骼肌组织各3份.分别采用免疫印迹及免疫荧光染色技术进行CHO细胞及骨骼肌组织的SMN蛋白表达研究.结果 成功制备了兔抗人全长SMN多克隆抗体,经鉴定其特异性及敏感性均较高.免疫荧光染色显示SMN蛋白在细胞质及细胞核中呈斑片状或颗粒状分布,以核周较为明显.免疫印迹结果显示骨折患者骨骼肌组织SMN与内参照磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)条带密度比值(SMN/GAPDH)平均为0.619,Ⅲ、Ⅱ型SMA患者SMN/GAPDH比值较低,均值分别为0.347和0.340,而Ⅰ型SMA患者骨骼肌中SMN/GAPDH比值显著降低,均值仅为0.079.结论 高质量的兔抗人全长SMN多克隆抗体的制备为SMA的蛋白功能及发病机制研究奠定了基础,SMA患者骨骼肌中SMN蛋白表达量可能与疾病的严重程度相关.
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CLIP相关技术的研究进展
在真核生物基因表达的转录后调节中，RNA结合蛋白（ RBP）起着关键作用，很多RBP的异常与人类疾病的发生密切相关。自2000年的RNA免疫沉淀和芯片分析方法（ RNA immunoprecipitation with differential display or microarray analysis ， RIP-ChIP）出现以来，人们开始就RBP与RNA相互作用进行了系统而广泛的研究。经过改良和发展，基于体内实时紫外交联免疫沉淀法（ ultraviolet crosslinking and immunoprecipitation ， CLIP ）、交联免疫沉淀cDNA文库高通量测序法（ high-throughput sequencing of CLIP cDNA library ， HITS-CLIP）、光催化核糖核苷增强交联和免疫沉淀法（ photoactivatable-ribonucleoside-enhanced crosslinking and immunprecipitation ， PAR-CLIP）以及提高个别核苷酸分辨率交联和免疫共沉淀法（ individual nucleotide resolution CLIP ， iCLIP）等RIP-ChIP衍生方法相继产生，使用这些方法，可以解析RBP的RNA识别特异性，而且通过与高通量测序技术结合，可以实现转录组尺度的RBP的靶序列的鉴定，分辨率也得到极大提高。该文就RNA与蛋白的相互作用的基本原理及其研究进展、相关技术存在的问题以及发展趋势进行简要综述。
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PCBP1:一种在多水平上参与基因表达调控的蛋白因子
多聚胞嘧啶结合蛋白1 (poly C binding protein-1,PCBP1),属于RNA结合蛋白亚家族,因其具有同RNA的多聚胞嘧啶(poly C)区域特异的结合活性而得名.目前该亚家族共有5个成员:hnRNP K(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K)、PCBP1、PCBP2、PCBP3和PCBP4.PCBP1蛋白在多个水平参与基因的表达调控,如转录、mRNA加工、mRNA的转运、mRNA稳定以及翻译水平调控等.本文对PCBP1基因的结构和生物学功能进行了综述.
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子宫内膜癌中肿瘤干细胞的研究进展
子宫内膜癌是妇科常见的三大恶性肿瘤之一,严重影响女性的生活和健康.现行的治疗手段主要包括手术、放射治疗(放疗)和化学治疗(化疗),但对放疗或化疗后复发病例的治疗,仍是极大的挑战.肿瘤干细胞是一类存在于肿瘤组织中具有自我更新能力和多向分化潜能的肿瘤细胞亚群,目前肿瘤干细胞的研究方兴未艾.在子宫内膜癌发病机制的研究中,大量研究证实具有干细胞潜能的稀有的子宫内膜癌肿瘤细胞在疾病发生、发展、转移和复发中起关键作用.就肿瘤干细胞的性质、来源做一总结,并对子宫内膜癌中肿瘤干细胞存在的证据及其标记物的研究进展作一综述.
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siRNA沉默p62基因对人肝癌细胞Hep3B的生物学影响
目的:探讨siRNA沉默人肝癌细胞Hep3B中p62基因对人肝癌细胞的生物学影响.方法:人肝癌细胞Hep3B为靶细胞,siRNA通过Lipofectamine 2000转染Hep3B.首先从3条siRNA序列中筛选出1条沉默p62的佳序列,然后将细胞分为空白对照组、siRNA组、Ncontrol(NC)组及脂质体(Lip)组.分别用RT-PCR和Western blot法检测各组细胞中p62、XPD、p53以及cyclinD1的mRNA和蛋白质的表达量,并用MTY法检测各组细胞的增殖能力.结果:siRNA组中p62、XPD、p53的mRNA表达较其他3组显著下调(P<0.01),而siRNA组中cyclinD1的mRNA表达较其他3组明显七调(P<0.01).Western blot检测结果显示各组细胞中p62、XPD、p53及cyclinD1的蛋白表达变化趋势与其mRNA变化趋势相一致.MTT检测显示siRNA沉默p62后,细胞增殖能力增强.结论:p62基因可能通过影响XPD、p53及cyclinD1从而抑制癌细胞生长,并且可能通过DNA损伤检控点来调控细胞增殖.
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心跳骤停复苏大鼠海马冷诱导RNA结合蛋白表达的变化
目的 评价心跳骤停复苏大鼠海马冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)表达的变化.方法 健康雄性SD大鼠85只,体重280～ 320 g,3月龄,采用随机数字表法,将其分为3组:正常对照组(C组,n=15)、假手术组(S组,n=15)和心跳骤停复苏组(CPR组,n=55).CPR组采用经食管心脏起搏诱发室颤的方法制备心跳骤停模型,随后进行复苏,分别于复苏后6h、12h、1d、3d和7d时取海马组织,采用RT-PCR法检测CIRP mRNA表达,采用Western blot法检测CIRP表达.复苏后3d取脑组织,采用组织化学染色法检测海马CA1区CIRP表达.结果 与C组比较,CPR组复苏后1、3、7d时海马CIRP mRNA表达上调,复苏后1、3d时海马CIRP表达上调(P＜0.05),S组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与复苏后3d时比较,CPR组其它时点海马CIRP mRNA表达下调,复苏后6h、12h、7d时海马CIRP表达下调(P＜0.05).CIRP主要表达于海马CA1区锥体细胞的细胞核.结论 心跳骤停复苏大鼠海马CIRP表达上调是抑制脑组织细胞凋亡的内源性机制之一.
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肠上皮干细胞标志分子在小鼠放射性肠炎中的表达
目的 探讨肠上皮干细胞标志分子Msil及Hesl在小鼠急性放射性肠炎(radiation enteritis,RE)模型中的表达情况.方法 40只雌性BALB/c小鼠采用β射线进行以300 cGy/min的速率一次性全腹部照射.选取30只小鼠于照射前(0 d)及照射后第3、5、7、14天每天处死6只,分离小肠,截取小肠中段进行定量PCR、Western印迹及免疫组织化学法测定Msil及Hesl的表达,比较两者的表达差异.结果 成功建立小鼠急性RE模型.定量PCR的结果显示,Msil和Hesl在第5天时表达的相对ΔCt值分别为15.17±0.47及15.83±0.24,Western印迹检测结果显示,Msil及Hesl于第5天表达的相对灰度分别为0.443±0.055和0.301±0.047,在RNA及蛋白质水平上两者均显著高于其他时间点(P值均＜0.05).免疫组织化学检测结果显示,Msil和Hesl于第5、7天时在肠隐窝中大量表达.结论 Msil及Hesl在RE的损伤修复前表达上调,提示肠干细胞的增殖与肠上皮修复有关.
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SR蛋白研究进展
在真核生物众多拼接因子中,SR蛋白家族是一类重要的成员,它们与一些特定的RNA序列结合,帮助识别并选择正确的5′及3′拼接位点,与其它的拼接因子共同完成拼接任务,在决定组织细胞的特异性及个体发育的阶段性方面发挥着关键作用.本文就近10年来有关SR蛋白的结构和功能的研究进展作一综述.
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双向负反馈环路lin28-let-7与肿瘤
let-7家族是重要的肿瘤抑制因子,在干细胞分化和肿瘤抑制中起重要作用.RNA结合蛋白lin28是重要的干细胞因子,能维持细胞干性,促进细胞恶性转化.lin28可与let-7前体结合,阻断let-7成熟；而let-7可结合至lin28 mRNA的3’-非翻译区(UTR),抑制lin28表达.lin28-let-7形成一个双向负反馈环路,参与干细胞分化、肿瘤发生、侵袭转移、耐药复发等生物过程,可作为肿瘤治疗新靶点.
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锌指蛋白A20 RNAi腺病毒的制备及其对人脑胶质瘤细胞系U87细胞功能的影响
目的:进一步探讨A20与促进脑胶质瘤恶性增殖和抗细胞凋亡之间的关系,尝试今后在动物体内进行脑胶质瘤基因治疗的研究,通过构建针对A20基因的重组腺病毒干涉载体感染U87细胞系,观察其对细胞生存状态的影响.方法:在前期预实验的基础上构建对A20干涉效果好的腺病毒干涉表达载体pSilencerTM adeno 1.0-CMV-A20R1,通过HEK-293细胞的包装后收获腺病毒并进行纯化,后用此腺病毒再次感染人脑胶质母细胞瘤细胞U87,经RT-PCR、Western blot确认干涉效果;通过流式细胞术(FCM)观察A20表达抑制对U87细胞周期和细胞凋亡的影响.结果:完成了重组腺病毒干涉表达载体pSilencerTM adeno 1.0-CMV-A20R1在HEK-293细胞内的包装;对病毒进行纯化后获得了高滴度(1.1×1011 pfu/mL)的感染病毒,将其感染U87细胞系后,RT-PCR和Western blot结果证实U87细胞中A20 mRNA和蛋白的表达均受到明显抑制;FCM结果也证实U87-A20R1细胞内凋亡细胞明显增多.结论:重组A20腺病毒干涉载体可很好地抑制U87细胞内A20的表达且能导致细胞凋亡,该研究结果为临床上用新思路治疗脑胶质瘤提供了实验依据.
