首页 > 文献资料
-
妊娠期糖尿病大鼠的胎鼠肺结构和肺表面活性蛋白B、C及其调控因子表达
目的 通过对GDM大鼠胎鼠的肺组织结构及肺表面活性蛋白(surfactant proteins,SP)-B、SP-C、甲状腺转录因子(thyroid transcription factor,TTF)-1、多形性腺瘤样因子(pleiomorphic adenoma gene like,PLAGL)-2蛋白表达水平进行研究,探讨GDM大鼠胎鼠肺发育障碍的机制. 方法 清洁级健康成年Sprague-Dawley大鼠构建孕鼠GDM模型,共20只造模成功,对照组为20只正常孕鼠.于妊娠第21天检测孕鼠随机血糖,并行剖宫取胎术,胎鼠计数并称重.透射电子显微镜下观察肺泡Ⅱ型上皮细胞的超微结构.每组随机取60只胎鼠,取肺组织制作360张石蜡切片,随机取100张不连续切片,光镜下观察肺组织形态结构;随机取另外100张不连续切片,免疫组织化学法检测SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2的蛋白定位及表达.每组取9只胎鼠,蛋白质印迹技术检测胎鼠肺组织中SP-B、SP-C、TTF-l和PLAGL-2蛋白水平.每组取27只胎鼠,荧光实时定量聚合酶链反应检测胎鼠肺组织中SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2的mRNA水平.采用独立样本t检验进行统计学分析. 结果 GDM组孕鼠平均随机血糖值高于对照组[(26.8±2.8)与(4.9±0.5)mmol/L,t=-34.05,P=0.00].GDM组胎鼠平均体重高于对照组[(5.6±0.6)与(5.2±0.5)g,t=-1.97,P=o.03].GDM组与对照组肺泡个数分别为(10.1±1.6)与(12.1±1.3)个,肺泡面积分别为(986.9±5.5)与(1 257.3±5.0) μm2,GDM组均低于对照组(t值分别为9.84和27.53);肺泡间隔分别为(11.5±6.2)与(9.9±4.3)μm,GDM组高于对照组(t=-2.17),差异均有统计学意义(P值均＜ 0.05).透射电镜下,可见GDM组肺泡Ⅱ型上皮细胞表面微绒毛粗短、减少,板层小体数量减少.胎肺组织中SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2蛋白均沿胞浆呈颗粒状分布,GDM组4种蛋白表达的平均吸光度分别为1.15±0.12、1.23±0.06、0.87±0.21与1.21±0.18,对照组分别为1.22±0.05、1.31±0.14、1.12±0.09与1.33±0.07,GDM组均低于对照组,差异有统计学意义(t值分别为2.40、2.35、4.89和2.77,P值均＜0.01).GDM组胎肺组织中SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2的蛋白水平分别为0.57±0.09、0.45±0.03、1.50±0.04和1.11±0.04,对照组分别为0.81±0.03、0.66±0.04、1.69±0.05和1.46±0.07,GDM组均低于对照组,差异有统计学意义(t值分别为11.77、11.09、8.80和13.37,P值均＜0.01).GDM组胎肺组织中SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2mRNA水平分别为0.60±0.04、0.79±0.04、0.81±0.03和0.79±0.05,对照组分别为1.06±0.19、1.03±0.24、1.03±0.18和1.02±0.19,GDM组均低于对照组,差异有统计学意义(t值分别为6.80、2.98、3.54和3.54,P值均＜0.01). 结论 GDM大鼠的胎鼠肺组织中SP-B和SP-C蛋白水平均明显下降,可能由于TTF-1和/或PLAGL-2基因表达下调所致;SP-B和SP-C蛋白减少与胎肺结构的病理变化有密切关联.
-
肺透明膜病早产儿尸检肺组织肺表面活性蛋白-C及Ki67的表达
目的 探讨肺透明膜病(HMD)早产儿经机械通气/高氧或肺表面活性物质(PS)替代治疗后其尸检肺组织肺表面活性蛋白-C(SP-C)及增殖抗原Ki67表达情况,分析临床治疗与病理改变的关系.方法 临床和病理确诊为HMD的早产儿,因HMD而在生后6 h内接受机械通气及高浓度氧(FiO20.6～1.0)治疗无效死亡者30例.按接受机械通气/高氧治疗时间的长短,分1～3 d、4～8 d、9～16 d和>16 d共4组,其中13例患儿同时接受了PS治疗.以无肺部疾病的5例早产儿为对照.应用免疫组织化学方法检测尸检肺组织标本中SP-C及Ki67的表达.多组间比较采用方差分析及g检验.结果 机械通气/高氧治疗的HMD早产儿,其不同时期肺组织的病理表现符合HMD向支气管肺发育不良转变的病理特征.肺组织SP-C表达定位于Ⅱ型肺泡上皮细胞,Ki67表达主要定位于肺、支气管上皮细胞和肺成纤维细胞.机械通气/高氧治疗1～3 d,SP-C及Ki67表达的平均光度值分别为0.1576±0.0327和0.1929±0.0403,较对照组(0.1891±0.0253、0.2297±0.0380)明显降低(P均<0.05);4 d后,SP-C及Ki67表达均逐渐升高,至9～16 d左右达高峰,分别为(0.2410±0.0225、0.2987±0.0116).PS治疗组与无PS治疗组肺组织SP-C及Ki67表达差异无统计学意义(t值分别为2.007和0.458,P均>0.05).结论 SP-C及Ki67表达改变参与了HMD早产儿机械通气/高氧治疗后肺组织的病理发展过程;PS治疗对SP-C及Ki67表达无明显影响.
关键词： 透明膜病 肺表面活性物质相关蛋白质C Ki-67抗原 婴儿 早产 -
不同机械通气方式对外源性肺表面活性物质治疗大鼠呼吸机相关性肺损伤效果的影响
目的 探讨不同机械通气方式对外源性肺表面活性物质(PS)治疗大鼠呼吸机相关性肺损伤(VILI)效果的影响.方法 雄性Wistar大鼠42只,体重310～356 g,随机分为6组(n=7):CVT6组、SVT6组、CVT10组、SVT10组、CVT14组和SVT14组.VT分别为6、10、14 ml/kg,通气频率分别为75、45、32次/min.采用高气道压机械通气(HPV,气道峰压为40 cm H20,PEEP为0)制备大鼠VILI模型.于HPv前(T0,基础值)及通气15～25 min,在呼气末经气道注入4 ml/kg空气,测定气道压力,计算胸肺顺应性,当其降至基础值50%时,PEEP升高至7.5 cm H2O.吸除气道内水肿液后,SVT6组、SVT10组和SVT14组给予PS 100 mg/kg,CVT6组、CVT10组和CVT14组给予等容量空气,并按不同VT和通气频率行机械通气.于T0、HPV后5 min(T1)、给予PS后15、30、60、90及120 min(T2-6)时测定MAP,采集股动脉血样行血气分析,于T1,6时收集气道内水肿液,于T6时处死大鼠取肺组织,观察病理学结果.结果 相同机械通气方式下,给予Ps后大鼠呼吸机相关性肺损伤较对照组减轻;不同机械通气方式下,SVT10组大鼠呼吸机相关性肺损伤较其余组均减轻.SVT10组肺组织病理损伤较其余组减轻.结论 采用VT10 ml/kg、通气频率45次/min行机械通气时PS治疗大鼠VILI的效果较好.
关键词： 肺表面活性物质相关蛋白质B 肺表面活性物质相关蛋白质C 呼吸窘迫综合征 成人 呼吸 人工 -
内蒙古地区汉蒙族新生儿呼吸窘迫综合征与SP-C基因138位点多态性的相关性研究
目的 研究肺表面活性物质蛋白C(SP-C)基因多态性,以138位点为重与内蒙古地区汉族、蒙古族新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)的相关性.方法 选择151例NRDS患儿(病例组)与151例正常新生儿(对照组)作为研究对象,应用PCR及基因分析技术检测138位点,分析其多态性与NRDS的关系.结果 在内蒙古地区,不论蒙古族还是汉族,SP-C基因138位点均可检出3种基因型:即AA、AC及CC型,该位点基因多态性在蒙古族NRDS组与蒙古族对照组之间无统计学差异(x2=0.454,P=0.797),此位点基因多态性在汉族NRDS组与汉族对照组之间也无统计学差异(x2=0.744,P=0.689).结论 内蒙古地区汉族、蒙古族SP-C基因138位点多态性在不同性别、出生体质量、胎龄、生产方式等中无差异.SP-C基因138位点多态性与内蒙古地区汉蒙族NRDS无关.
关键词： 呼吸窘迫综合征 肺表面活性物质相关蛋白质C 基因多态性 新生儿 -
双重免疫荧光染色法鉴定肺组织内CCA+SP-C+细胞
目的:通过双重免疫荧光染色法鉴定不同肺组织内是否存在Clara细胞特异性抗原(Clara cell specific antigen,CCA)和肺泡表面活性蛋白C(surfactant protein C,SP-C)共表达的双阳性细胞(double positive cell,DPCs)CCA+SP-C+细胞,为后续开展肺干细胞的相关研究提供实验基础.方法:取成年鼠(小鼠、大鼠)和新生鼠(小鼠、大鼠)的正常肺组织,人的肺鳞癌、腺癌的癌组织和癌旁组织,冰冻切片,进行双重免疫荧光染色,通过激光扫描共聚焦显微镜观察肺组织内是否存在DPCs.每例标本观察时镜下随机选择4～6个视野,计数100～200个肺细胞,得出每百个细胞内DPCs百分率,采用SPSS 11.0统计软件包对数据进行分析.结果:在成年鼠和新生鼠的正常肺组织中均发现了DPCs的存在,在人的肺腺癌组织中也发现了DPCs,而在鳞癌组织中未见DPCs;在人的癌旁组织DPCs数量明显多于相对应的癌组织(P＜0.05).结论:本研究不仅证实了DPCs细胞存在的广泛性,而且在人的肺腺癌组织中发现了DPCs,同时发现癌旁组织内的DPCs明显多于癌组织,为后续进一步分离、纯化DPCs,研究正常肺干细胞和肺癌干细胞的生物学特性提供了实验基础.
-
SP-C 基因外显子5区域基因突变与早产儿呼吸窘迫综合征相关性研究
目的：探讨 SP-C 基因外显子5( exon5)区域基因突变与早产儿呼吸窘迫综合征(RDS)的相关性。方法选择2013年1月至2015年1月在我院新生儿病房住院治疗、无血缘关系的汉族 RDS 早产儿(28周≤胎龄＜37周)作为病例组,选择同时间、同民族和同群体中,无血缘关系未发生 RDS 的早产儿为对照组。采集患儿静脉血,采用基因测序方法对 SP-C 基因 exon5区域基因进行测序。结果病例组60例,检测出 SP-C 基因 exon5区域 c.715G ＞ A 位点杂合突变17例(28.3%)；对照组60例,检出 SP-C 基因 exon5区域 c.715G ＞ A 位点杂合突变8例(13.3%),组间比较差异有统计学意义(χ2=4.093,P =0.043)。病例组有、无 c.715G ＞ A 位点杂合突变患儿在 RDS 临床分度、氧疗、肺表面活性物质治疗剂量、治疗结局上比较,差异均无统计学意义(P ＞0.05)。结论 SP-C 基因 exon5区域 c.715G ＞ A 位点杂合突变可能与早产儿 RDS 发生有关。
