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不同严重程度脓毒症小鼠骨髓中性粒细胞 PD-L1的表达及其机制
目的:观察不同严重程度脓毒症小鼠骨髓中性粒细胞程序性死亡配体1(PD-L1)表达的变化并探讨其初步机制.方法:1.在体实验部分:取30只雄性C57/B6小鼠按随机原则分为假手术组(n=10)、轻症盲肠结扎穿孔组(轻症CLP组,n=10)及重症盲肠结扎穿孔组(重症CLP组,n=10),术后24 h留取肝脏、肺脏组织,进行组织病理学检查;同时检测模型小鼠骨髓中性粒细胞比例及PD-L1表型;另取30只小鼠重复上述分组及实验步骤,术后连续观察72 h,进行生存率分析.2.体外实验部分:取小鼠骨髓中性粒细胞,分为正常对照组、脂多糖(1μg/mL)刺激组进行中性粒细胞趋化功能及吞噬功能检测,另外将中性粒细胞分为对照组、脂多糖组、P38 MAPK抑制剂SB 203580(10μmol/L)组、SB 203580(10μmol/L)+脂多糖组,流式细胞术检测各组中性粒细胞PD-L1表型.结果:1.在体实验:轻症CLP组和重症CLP组生存率均显著低于假手术组(P<0.05和0.01),肝脏、肺脏炎症病理评分均显著高于假手术组(均P<0.01),骨髓中性粒细胞比例均显著低于假手术组(均P<0.01);轻症CLP组中性粒细胞表达PD-L1的比例为(2.130±0.37)％,重症CLP组为(4.587±0.5012)％,均显著高于假手术组[(0.7333±0.1097)％,均P<0.01].体外实验:脂多糖组骨髓中性粒细胞的趋化距离显著低于对照组(P<0.01),而吞噬细菌的细胞阳性率[(16.310±2.6530)％]显著高于对照组[(8.463±0.8715)％,P<0.01];脂多糖组骨髓中性粒细胞PD-L1阳性表达率为(72.27±1.656)％,显著高于对照组[(1.713±0.5196)％,P<0.01],使用SB 203580后,经过脂多糖刺激,中性粒细胞PD-L1阳性率为(37.17±1.38)％,显著低于脂多糖组(P<0.01).结论:中性粒细胞向组织器官浸润及其PD-L1表达随脓毒症加重而增加,感染状态下中性粒细胞表面PD-L1的表达受P38 MAPK通路调节.
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幽门螺杆菌致病机制的研究进展
幽门螺杆菌(Hp)感染与多种消化系统疾病密切相关.许多细菌在致病过程中,首先对其合适的宿主寄生部位进行趋化和定植,后致病.此文从Hp的定向趋化黏附、定植和毒力几个方面就Hp致病机制的研究进展进行简要综述.
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人脂肪间充质干细胞对宫颈癌细胞的趋化性
目的:探讨人脂肪组织来源的间充质干细胞(hATMSC)对人宫颈癌细胞的趋化性,为将hATMSC研发成为宫颈癌的靶向治疗载体提供实验依据.方法:从剖宫产产妇的皮下脂肪中分离得到hATMSC.用成骨、成脂分化培养基诱导hATMSC,分别采用碱性磷酸酶、油红染色鉴定其多向分化能力;流式细胞仪检测其表面抗原的表达情况;qRT-PCR法分析细胞中OCT-4 mRNA的表达;Transwell实验检测hATMSC向人宫颈鳞癌细胞SiHa、MS751、C33-A、CaSki以及宫颈腺癌细胞Hela迁移的能力.结果:成骨、成脂诱导14 d后,细胞碱性磷酸酶、油红染色均呈阳性;表面抗原CD90、CD44、CD105、HLA-ABC呈阳性表达,而CD34、CD45和HLA-DR呈阴性表达;细胞中OCT-4 mRNA呈高表达;hATMSC表现出明显的向人宫颈癌细胞迁移的特性,其中向C33-A细胞迁移的能力强.结论:成功分离培养出hATMSC,细胞具有多向分化潜能的干细胞特性.hATMSC对各种人宫颈癌细胞均有明显的趋化性,提示hATMSC可作为一种潜在的细胞载体用于宫颈癌的靶向治疗.
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fliY基因在空肠弯曲菌致病性相关趋化和定植中的作用
目的:构建空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)鞭毛马达开关蛋白FliY编码基因(fliY)敲除突变株,了解FliY蛋白控制细菌鞭毛运动的作用及其与细菌趋化和定植的关系.方法:采用pBluescript-Ⅱ-SK质粒构建用于敲除空肠弯曲菌NCTC11168株fliy基因的自杀质粒.根据同源交换原理,利用自杀质粒构建空肠弯曲菌fliY基因敲除突变株(fliY-).采用PCR、PCR产物测序与Western Blot,对fliY-突变株进行鉴定.采用体外菌落迁徙试验、细菌趋化试验以及小鼠空肠定植试验,检测fliY-突变株趋化和定植能力.结果:fliY-突变株生长曲线与野生株相似,但PCR与测序及Western Blot结果显示,fliY-突变株中fliY基因已被敲除.与野生株比较,fliY-突变株半固体平板上菌落明显较小(P＜0.05),对脱氧胆酸钠和牛胆汁趋化能力显著下降(P＜0.05),在感染小鼠空肠组织标本中的细菌数(CFU)也明显减少(P＜0.05).结论:空肠弯曲菌fliY基因功能与调控鞭毛运动作用有关,从而对细菌趋化和定植过程产生重大影响.
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肾癌各期患者调节性T细胞的表达
目的 检测并比较Ⅰ期~Ⅲ期肾癌患者体内调节性T细胞(Tregs)的分布变化并探索可能的趋化机制.方法 收集30例肾癌患者血液及组织标本,其中Ⅰ期~Ⅲ期患者各10例;另选取同期6例非肾癌患者标本予以对照.应用流式细胞术及免疫组化检测外周血及组织的CD4+CD25+Foxp3+Tregs表达;应用Real time PCR检测组织中CCR4/CCL22转录水平.结果 肾癌患者外周血CD25+Foxp3+Tregs和肾癌组织中Foxp3经定量统计分析显示,Ⅰ期~Ⅲ期均高于非肿瘤对照组,差异均有统计学意义(t分别=5.33、8.30、6.14、9.85、8.29、20.14,P均＜0.05),且随肿瘤分期增高,Tregs和Foxp3水平亦呈相应上升趋势,差异均有统计学意义(t分别=2.24、8.29、2.45、5.51,P均＜0.05).实时定量PCR结果,显示肾癌组织局部趋化因子CCR4及其配体CCL22转录水平较非肿瘤对照组明显增加,差异均有统计学意义(t分别=5.68、8.97、6.68、12.98、13.28、11.98,P均＜0.05).结论 肾癌患者外周血及肿瘤组织中Tregs含量较非肿瘤患者升高,从而抑制机体抗肿瘤免疫功能.肿瘤组织高表达CCL22,从而趋化Tregs至肿瘤组织内.
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体外活细胞定向迁移研究方法的建立
目的：建立体外活细胞定向迁移的研究方法。方法把毛细管针置于视野中央，利用显微注射仪持续缓慢地释放趋化因子，实时拍摄细胞迁移情况，用Image J软件进行数据分析。结果趋化因子提高了迁移速度，促进了迁移的定向持续性，使关键信号分子发生动态的胞内重分布。结论在体外建立了活细胞定向迁移研究的方法。
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17β雌二醇在诱导骨髓间充质干细胞分化过程中趋化作用的研究
目的:探讨17β雌二醇在骨髓间充质干细胞(BMSC)向子宫内膜上皮细胞(EEC)方向分化过程中的趋化作用及相关趋化因子的检测.方法:将BMSC和子宫内膜间质细胞(ESC)共培养,并分为四组:BMSC组,BMSC+17β 雌二醇处理组,BMSC+ESC组,BMSC+ESC+17β雌二醇处理组.培养5天后,Transwell实验观察17β雌二醇的趋化作用,芯片技术分析培养液中趋化因子的表达情况.结果:迁移实验结果示,ESC可促进BMSC迁移,添加17β雌二醇后,BMSC的迁移能力增强.基因芯片检测发现,BMSC+ESC+17β雌二醇处理组中MIP-3 b、I-TAC、MIG、SDF-1 a、MDC、MIP-3 a等趋化因子表达量明显增加.基因芯片进行Go富集分析与KEGG富集分析均发现,17β雌二醇显著增加细胞因子活性和细胞因子受体结合相关基因及信号通路差异表达的基因数量,从而提高BMSC的迁移能力.结论:17β雌二醇可能通过促进ESC分泌趋化因子,促进BMSC趋化迁移,促使BMSC迁移至适宜的微环境,终定向分化为子宫内膜细胞.
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RANTES在银屑病患者角质形成细胞中的表达及其作用
目的:探讨银屑病皮损局部T淋巴细胞高度浸润的原因,并分析了趋化因子RANTES在此过程中的作用.方法:培养银屑病患者皮损处角质形成细胞,通过微孔小室实验检测其上清液对T淋巴细胞的趋化功能;通过酶联免疫吸附(ELISA)法检测上清液中RANTES的表达.结果:银屑病皮损处角质形成细胞培养上清液对T淋巴细胞的趋化能力明显强于正常对照组;其分泌的RANTES水平也高于正常人.结论:银屑病患者皮损局部T淋巴细胞的大量浸润,部分是由于角质形成细胞具有较强的趋化T淋巴细胞能力,而银屑病角质形成细胞中高表达的RANTES可能是发挥此作用趋化因子之一.
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滑膜间充质干细胞在五种不同趋化因素作用下迁移的研究
目的 观察血清、转化生长因子(TGF)-β3、血小板衍生生长因子(PDGF)-AB、骨形态发生蛋白(BMP)-2、成纤维细胞生长因子(FGF)对兔滑膜间充质干细胞(SMSCs)迁移的影响.方法 选取含浓度0.1％、0.5％、1.0％、2.0％、5.0％、10.0％、20.0％血清以及含50μg/LTGF-β3、PDG F-AB、BMP-2、FGF的低糖DMEM作用于兔SMSCs.Transwell小室检测其迁移能力.结果 血清、TGF-33、PDGF-AB、BMP-2、FGF均可趋化兔SMSCs迁移,血L清浓度为5.0％时趋化作用较其他浓度组明显,每×100倍视野下迁移细胞数为(169.00±21.74)个,4种因子叶中 PDGF-AB趋化作用较TGF-β3、BMP-2、FGF明显(219.83±11.29比84.50±10.33、146.67±17.91、99.37±12.27).结论 兔SMSCs可在TGF-β3、PDGF-AB、BMP-2、FGF作用下迁移,其中PDGF-AB趋化明显,可用于促进SMSCs迁移归巢,进行软骨原位再生的修复研究.
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RANTES-受体轴在消化道肿瘤及淋巴结中的表达与肿瘤转移的关系
目的 检测RANTES及其受体在消化道肿瘤中的表达并探讨其与消化道肿瘤转移的关系.方法 免疫组织化学方法检测35例有淋巴结转移的消化道肿瘤中RANTES及其受体CCR3、CCR5的表达以及RANTES在转移的淋巴结中的表达水平,显微镜下观察阳性率并且用图像分析系统测得吸光度进行分析.琼脂糖平板法检测RANTES对于消化道肿瘤细胞的趋化作用.结果 淋巴结转移的消化道肿瘤中RANTES及其受体CCR3、CCR5以及转移的淋巴结中RANTES的阳性表达率分别为80.0%、77.1%、68.6%、74.3%,吸光度值分别为0.1839±0.0442、0.1999±0.0444、0.1825±0.0598、0.1871±0.0371;而对照的无转移组阳性率分别为6.7%、20.0%、13.3%、20.0%,吸光度值分别为0.0502±0.0043、0.0693±0.0243、0.0648±0.0145、0.0913±0.0111.有转移组和无转移组在阳性率和吸光度方面的差异均有统计学意义(P<0.05).琼脂糖平板法检测RANTES对原代肿瘤细胞以及胃癌细胞系AGS的趋化指数分别为1.97和1.79. 结论 RANTES及其受体在有淋巴结转移的消化道肿瘤中高表达以及RANTES在有转移的淋巴结中高表达可能与肿瘤的侵袭转移相关,其机制可能为淋巴结中高表达RANTES对肿瘤细胞的趋化定向迁移有关.
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辅助性T细胞22细胞在肝癌恶性腹水中募集和分化的机制
目的 研究辅助性T细胞(Th)22细胞在恶性腹水(MA)及同源外周血中的分布及其表型特征,探讨Th22细胞分化和募集浸润至腹腔的机制.方法 流式细胞术检测Th22细胞在MA和外周血中的分布和表型.重组人细胞因子刺激MA和外周血中初始CD4+T细胞,观察其分化成Th22细胞的情况.检测外周血来源的CD4+T细胞在体外向MA上清液趋化,并加入人抗CC类趋化因子(CCL) 20、抗CCL22、抗CCL27单克隆抗体观察阻断效应.结果 MA中Th22细胞比例[(3.22±0.40)％,n =37]明显高于对应外周血[(0.79 0.20)％,n=37,P=0.006)和健康对照组[(0.63±0.11)％,n=10,P=0.002],Th17细胞在MA中比例[(3.30±0.18)％]也明显高于对应外周血[(0.79±0.15)％,n =37,P=0.008]及健康对照组[(0.67±0.12)％,n=10,P=0.001],且两种细胞比例呈正相关(P=0.002).MA和外周血中Th22细胞的CD45 RO、CC类趋化因子受体(CCR)4、CCR6和CCR10表达水平高于CD45RA、CD62L、CCR3、CCR5.CD4+T细胞向Th22细胞分化过程中,白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β起促进作用,干扰素-γ(IFN-γ)起抑制作用,且Th22细胞受IL-6的促分化作用呈现时间剂量依赖性.MA上清液对外周血Th22细胞有明显的趋化效应,加入抗CCL20、抗CCL22、抗CCL27单克隆抗体则表现为阻断此趋化作用.结论 MA中的趋化因子与炎性细胞因子在腹膜腔内共同作用使MA中Th22细胞比例明显高于外周血,Th22细胞可能参与MA的发病过程并发挥一定的免疫调节作用.
关键词： 辅助性T细胞22细胞 肝细胞癌 恶性腹水 趋化 分化 -
大鼠正畸牙移动中NF-κB通路相关差异基因的GO分析
目的:利用基因表达谱芯片对正畸加力组与正常大鼠牙齿牙周组织的基因表达谱进行对比分析,筛选差异基因并进行GO分析.方法:将6只SD大鼠随机分为加力组和对照组,加力组建立大鼠正畸牙齿移动模型.根据预实验结果,分别在0 h、12 h处死大鼠,并截取上颌第一磨牙及外周约1 mm的牙周组织,提取总RNA,进行全基因组表达谱芯片检测,对差异表达基因进行GO分析,并运用RT-qPCR对芯片结果进行验证.结果:芯片结果显示,共筛选到463条差异基因,其中实验组与对照组相比250个基因表达上调,213个基因表达下调,在差异基因中涉及到NF-κB信号通路的基因有8个,均表达上调.GO分析涉及到1189个不同的功能分类.结论:正畸加力12h后牙齿牙周组织中与炎症反应相关的基因和与中性粒细胞趋化相关的基因表达上调.
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S1P/S1PR1通路依赖的压力对破骨前体细胞趋化效应
目的:探究S1P/S1PR1通路轴在压力下对破骨前体细胞趋化影响的调节作用.方法:建立体外压力模型,通过实时荧光定量聚合酶链式反应,免疫印迹实验和细胞免疫荧光检测压力下Raw264.7细胞SPHK1和S1PR1的mRNA水平和蛋白水平.采用Transwell 24孔板通过趋化实验探究S1P/S1PR1在压力下对Raw264*7细胞的迁移能力的影响.结果:发现0.5、1.0和2.0 g/cm2压力作用下,Raw264.7细胞的SPHK1和S1PR1的表达及Raw264.7细胞的趋化显著降低.在S1PR1受体功能性激动剂FTY720作用下,压力作用下趋化能力被抑制的Raw264.7细胞趋化水平显著增加.结论:S1P/S1PR1信号轴在正畸治疗中调节破骨前体细胞迁移与功能发挥重要作用.
关键词： S1P/S1PR1通路 压力 破骨前体细胞 趋化 -
过表达Fpr2对树突状细胞成熟和趋化功能的调控作用
目的:研究过表达小鼠树突状细胞表面受体Fpr2对树突状细胞成熟和趋化功能的影响.方法:通过RVG-P靶向多肽介导质粒PEGFP-N1-Fpr2转染小鼠树突状细胞,上调表面受体Fpr2的表达.ELISA检测IL-6、IL-10,IL-12 p70及TNF-α的水平;通过流式细胞术检测细胞表面分子CD40,CD80,CD83,CD86,MHCII的表达;使用Transwell小室检测细胞迁移能力;Western blot检测MAPK通路(P38,ERK1/2,JNK)的磷酸化情况.结果:上调Fpr2后,表面分子CD83的表达水平明显升高.在细胞因子水平上,转染PEGFP-N1-Fpr2组的树突状细胞的IL-6,IL-10,TNF-α分泌量明显增多.转染质粒DNA后,细胞对CCL21的趋化减弱,但与转染空载体pEGFP-N1组相比,转染pEGFP-N1-Fpr2组的趋化细胞数明显增多.转染pEGFP-N1-Fpr2组的P38,JNK及ERK1/2磷酸化水平均显著高于转染pEGFP-N1组.结论:过表达细胞表面受体Fpr2能促进树突状细胞的成熟,并可能通过上调MAPK信号通路中的P38和JNK的磷酸化来增加其趋化能力.
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白细胞介素-18对Fractalkine表达和趋化作用的影响
背景 Fractalkine(FKN)是新近发现的CX3C类趋化因子,能够诱导单核细胞的定向迁移,参与动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的形成. 目的 观察白细胞介素-18(interleukines-18,IL-18)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达Fractalkine(FKN)和趋化作用的影响,以及辛伐他汀(Simvaatatin)的干预效应.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HEUVCs FKNmRNA的表达,应用Traswell装置观察FKN对人单核细胞THP-1的趋化作用.结果 25、50、100 μL IL-18可上调FKN mRNA表达,并明显增强对单核细胞THP-1的趋化用,与对照组相比(P<0.01).10、100 μmol/L辛伐他汀能够抑制FKN mRNA表达,并抑制FKN的趋化作用,与单纯100 μg/L IL-18相比(P<0.01). 结论 IL-18能够上调FKN的表达并增强FKN介导的趋化作用,辛伐他汀能够抑制该效应.
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C反应蛋白对外周血内皮祖细胞数量及功能的影H向
目的 研究C反应蛋白对人外周血内皮祖细胞数量及功能的影响.方法 从外周血中分离出单个核细胞,体外培养7天,在贴壁细胞中加入不同浓度的C反应蛋白(1 mg/L、2.5 mg/L和5.0 mg/L)作用不同时间(24 h、48 h和72 h),用四唑盐比色试验(MTT)和细胞集落形成单位计教的方法 评价C反应蛋白对内皮祖细胞增殖的影响;采用趋化试验评价不同浓度的C反应蛋白对血管内皮生长因子诱导的内皮祖细胞趋化能力的影响;检测细胞上清中一氧化氮的浓度变化;逆转录-聚合酶链式反应检测细胞内皮源性一氧化氮合酶表达强度变化.结果 C反应蛋白减少内皮祖细胞的集落形成单位数量及抑制内皮祖细胞的增殖能力;随着C反应蛋白浓度的增加,内皮祖细胞的趋化能力受到抑制;同样细胞分泌的一氧化氮减少.内皮源性一氧化氮合酶表达减弱.结论 C反应蛋白可能通过抑制内皮祖细胞的增殖和趋化能力促进内皮功能不全的发展.
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SDF-1α/CXCR4对THP-1的趋化活性及其Ox-LDL的干预作用
目的 探讨基质细胞衍生因子(SDF-1α)对单核细胞的趋化作用,ox-LDL对SDF-1α趋化单核细胞的影响及其对THP-1细胞表达CXCR4的影响.方法 用Transwell迁移实验来研究SDF-1α对单核细胞的趋化作用,将单核细胞或经ox-LDL处理的单核细胞加入上室,在下室加入SDF-1α孵育10h后计数各组下室迁移的细胞数.RT-PCR检测CXCR4表达变化,Western blot检测其蛋白表达变化,观察ox-LDL对THP-1细胞CXCR4表达的剂量和时间效应.结果 SDF-1α呈浓度依赖性诱导单核细胞的迁移,加入CXCR4抗体可明显抑制这种作用.经不同浓度ox-LDL处理48h后的THP-1细胞再用10 ng/mlSDF-1α进行趋化时,结果发现ox-LDL呈浓度依赖性的增加单核细胞的迁移,50 μg/ml ox-LDL组所迁移的细胞数是对照组的11倍.THP-1细胞有基础水平的CXCR4表达,50 μg/ml ox-LDL可使CXCR4的表达上调4-5倍.CXCR4上调早在6h内发生,12h达高峰.结论 SDF-1α/CXCR4参与趋化单核细胞迁移,其作用被ox-LDL加强;ox-LDL上调CXCR4表达.
关键词： SDF-1α/CXCR4 ox-LDL 趋化 单核细胞 -
轻度热应激对脾脏巨噬细胞免疫功能的影响
目的:探讨轻度热应激对脾脏巨噬细胞免疫功能的影响.方法:原代培养鼠脾脏巨噬细胞,将细胞置于41℃恒温箱中,使细胞轻度热应激,1 h后恢复到37℃,分别在应激后0 min、30 min、60 min、120 min、180 min检测巨噬细胞的吞噬功能、杀伤活性和趋化作用.结果:轻度热应激后,脾脏巨噬细胞的吞噬功能、杀伤活性和趋化作用均比应激前明显加强(P<0.05～0.01),60 min后到达高峰,随后逐渐下降.结论:轻度热应激对脾脏巨噬细胞的免疫功能有促进作用.
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全身照射大鼠骨髓提取液对真皮多能干细胞趋化作用的实验研究
目的观察5Gy γ射线全身照射后大鼠骨髓提取液对真皮多能干细胞(dermal multipotent stem cells, dMSCs)的趋化作用,并定量分析尾静脉输注的dMSCs在大鼠体内的分布.方法在Transwell培养体系中,观察骨髓提取液对dMSCs的趋化作用. 3H-TdR标记dMSCs,经尾静脉输注到大鼠体内后,液闪法测量各组织内dMSCs的含量.结果 Transwell培养体系中,照射组骨髓提取液组从上层迁移到下层的细胞明显多于不照射的正常对照组和生理盐水组(P<0.01).照射后1周始,照射组骨髓dMSCs含量明显高于正常对照组(P<0.01);伤后3周和4周,照射组单位重量骨髓dMSCs含量也明显高于同组的肺脏、肝脏等组织.结论全身照射大鼠骨髓提取液对dMSCs有很强的趋化作用,从而促进静脉输注的dMSCs偏向分布于损伤的骨髓.
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铜绿假单胞菌分泌物对中性粒细胞趋化运动的抑制功能
目的 研究铜绿假单胞菌分泌物对中性粒细胞趋化功能的影响.方法 用percoll密度梯度离心法分离小鼠骨髓中性粒细胞并用FACS检测其纯度;铜绿假单胞菌PAO1静置培养5d后涡旋并离心收集其上清;通过TAXIScan-FL检测被膜上清PAO1 d5(PAO1菌株静置培养第5天)的趋化作用;不同浓度的fMLP所引起的中性粒细胞趋化运动及PAO1 d5上清稀释50倍后的趋化作用;PAO1 d5上清对fMLP所引起的中性粒细胞趋化运动的影响.结果 分离的小鼠骨髓中性粒细胞纯度大于90％;TAXIScan-FL检测被膜上清有趋化作用,但是速度及方向上与fMLP及LTB4有明显差别(P＜0.001);高浓度的fMLP对中性粒细胞的趋化作用减弱,PAO1 d5稀释50倍后趋化作用消失;PAO1 d5上清可以抑制fMLP所引起的中性粒细胞趋化运动.结论 PAO1d5被膜上清中存在抑制中性粒细胞趋化的物质.
